Nrf2激活对新生大鼠高氧致肺损伤的保护作用

目的 观察NF-E2相关因子2（Nrf2）激动剂对高氧致新生大鼠肺组织细胞凋亡的影响,探讨Nrf2激活是否对高氧致新生大鼠肺损伤具有保护作用。方法 将足月顺产SD 新生大鼠90只随机分为空气对照组( N组)、高氧组( O 组)和Nrf2组,每组各30只。O 组和Nrf2组新生鼠于出生后第1 d、第2 d分别腹腔注射生理盐水0.2 mL或Nrf2激动剂莱菔硫烷0.2 mL（30 mg/kg）,N组不予任何干预。O组和Nrf2组新生大鼠于第1次注射后置入氧体积分数>95%的高氧环境中持续饲养4 d,N组则持续于空气中饲养。3组新生大鼠麻醉后取肺组织,采用TUNEL染色比较3组新生大鼠肺泡细胞的凋亡指数(AI),采用免疫组化染色检测Nfr2在肺组织中的表达。结果 O组新生大鼠肺泡细胞AI值〔(28.8±3.0)%〕高于N组〔(0.7±0.6)%〕和Nrf2组〔(7.2±0.8)%〕,差异有统计学意义（P<0.01）。O组(926.80±130.51)和Nrf2组(1 038.40±151.12)肺组织Nrf2表达差异无统计学意义（P>0.05),但与N组(30.03±9.99)比较均明显增高,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 Nrf2激动剂可减少高氧致新生大鼠肺泡细胞凋亡,对高氧引起的肺损伤具有一定的保护作用。     

安宫牛黄丸对脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织Nrf2蛋白表达的影响

目的 探讨安宫牛黄丸对脂多糖引起的急性肺损伤的保护机制.方法 将40只SD大鼠按随机数字表法分为对照组(Control组,n=10)、脂多糖组(LPS组,n=10)、脂多糖+安宫牛黄丸组(LPS+AG组,n=10)和安宫牛黄丸组(AG组,n=10).采用一次性腹腔注射脂多糖30 mg/kg建立大鼠急性肺损伤模型.分别检测各组大鼠肺湿重/干重比、支气管肺泡灌洗液蛋白浓度和白细胞计数、肺组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量、肺组织内转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)水平.结果 LPS+AG组肺组织SOD活性为(325.67±7.85)kU/g,明显高于LPS组的(298.75±6.25)kU/g,差异有统计学意义(P<0.05).MDA、INF-α含量分别为(1.89±0.35)μmol/L、(35.21±3.12)ng/g,均低于LPS组的(2.78±0.41)μmol/L、(41.52±4.87)ng/g,差异均有统计学意义(P<0.05).LPS+AG组肺组织Nrf2蛋白表达为(0.87±0.19),明显高于LPS组的(0.34±0.11),差异有统计学意义(P<0.05).结论 安宫牛黄丸对脂多糖诱发的急性肺损伤具有保护作用,可能与其能激活肺组织Nrf2表达有关.     

高氧致CLD新生大鼠肺组织中MMP-8和TIMP-2表达的动态改变及其对纤维化形成作用的研究

目的探讨MMP-8（基质金属蛋白酶-8）和TIMP-2（基质金属蛋白酶抑制物-2）的表达在高氧致CLD新生大鼠肺组织中的动态变化及其对CLD最终纤维化形成的作用。方法足月新生鼠生后12h内分别持续吸入90%-95％的高氧和空气，于1、3．7、14、21d，取肺组织Masson染色和Gomori银染色，图像定量分析，计算胶原及网状纤雏阳性面积百分比，以评估纤维沉积；应用免疫组化和RT—PCR技术检测肺组织中MMP-8和TIMP-2蛋白和mRNA表达的动态变化。结果7d开始高氧组的胶原和网状纤维在肺间隔和间质沉积，14和21d阳性面积高于空气组。高氧组MMP-8蛋白和mRNA表达在7d后低于空气组，两组TIMP-2的表达在各时间点上无差异。结论新生大鼠随着吸入高氧时间的延长，肺组织MMP-8表达降低，而TIMP-2表达不变。MMP-8／TIMP-2的平衡状态遭到破坏，胶原降解减少，从而促进了胶原在肺间质的沉积。     

L-NAME对新生大鼠高氧肺损伤的影响

研究 Nω-硝基 - L -精氨酸甲酯 (Nω- nitro- L - arginine methyl ester,L - NAME)对新生大鼠高氧肺损伤的影响 ,以探求内源性一氧化氮在新生大鼠高氧肺损伤中的作用。生后 3d的新生大鼠随机分为 : .高氧对照组 , .高氧 L- NAME组 , .空气对照组 , .空气 L- NAME组。检测暴露 3d及 7d时各组的肺湿重 /干重比值 (W/ D) ,支气管肺泡灌洗液中总蛋白、丙二醛 (malondialdehyde,MDA)含量及肺组织病理学变化。结果显示 ,3d时 , 组的总蛋白和 W/ D值高于 组和 组 (均为 P<0 .0 1) ;7d时 , 组的 W/ D、总蛋白和 MDA均较 组增加 (P<0 .0 5、 0 .0 1和 0 .0 1) ,总蛋白含量显著高于 I组 (P<0 .0 1)。 组与 组的肺组织病理改变类似 ,但 7d时无明显增生反应 ; 、 组无明显病理变化。结果表明 ,L - NAME加重新生鼠高氧诱导的肺水肿及呼吸膜通透性 ,提示内源性一氧化氮在机体对抗高氧诱导的肺损伤过程中可能发挥了积极作用。     

Nrf2对肝癌及癌前病变的作用研究进展

<正>随着社会的进步,人类的生活方式也发生了改变.在消化系统疾病中,肝癌的发病率呈增高趋势,并严重影响着人类的身体健康.肝癌的发生是多过程、多阶段的分子生物学过程,在肝癌的发生过程中,重要的几个促癌因素有乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、黄曲霉毒素及化学致癌物质等,而具体     

左卡尼汀对肾脏缺血再灌注损伤中Nrf2和γ-GCS表达影响

目的研究左卡尼汀对大鼠肾脏缺血再灌注损伤中核因子相关因子2(Nrf2)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组及治疗组。缺血再灌注组及治疗组建立肾脏缺血再灌注损伤模型,治疗组在缺血再灌注损伤模型建立前后尾静脉注射左卡尼汀2mL。假手术组不行缺血再灌注处理。再灌注6h后处死大鼠,取血检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及胱抑素C(Cys C)的水平,并测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。应用RT-PCR及Western-blot方法检测肾组织中Nrf2和γ-GCS的表达水平。结果治疗组Cr、BUN、Cys C及MDA水平显著低于缺血再灌注组,SOD活性显著高于缺血再灌注组(F=8.58～57.42,q=4.06～11.26,P<0.05);与假手术组相比,缺血再灌注组肾组织中Nrf2、γ-GCSmRNA及蛋白表达水平显著升高,而治疗组肾组织中上述指标较缺血再灌注组显著增高(F=143.53～241.64,q=3.76～13.51,P<0.05)。结论左卡尼汀可减轻肾脏缺血再灌注损伤,其机制可能为通过激活Nrf2-ARE通路进而诱导γ-GCS的表达而实现的。     

雌激素对新生大鼠高氧肺损伤的影响

[目的]探讨雌激素对高氧所诱发新生大鼠肺损伤的影响.[方法]选用生后2d、体重为5～10g的新生Wistar大鼠,雌雄不拘,随机分为空气对照组、高氧模型组及雌激素治疗组.将空气对照组新生大鼠暴露在室内空气中,其他各组新生大鼠暴露在90%(体积分数)氧中共14d,雌激素治疗组新生大鼠每日分别腹腔内注射给予雌激素2mg/kg,空气对照组和高氧模型组腹腔内注射给予生理盐水.实验开始第3,7,14天时间点记录各组新生大鼠自然死亡数目,计算死亡率;每组处死10只,取肺组织,在光学显微镜下观察肺组织的病理变化,采用免疫组织化学染色方法观察肺组织中γ干扰素(IFN-γ)的表达.[结果]随着高氧暴露时间的延长,高氧模型组及雌激素治疗组死亡率均呈增高趋势,高氧模型组暴露7 d后开始死亡率迅速升高,而雌激素治疗组死亡率明显降低,相比较差异具有统计学意义(P<0.05).空气对照组IFN-γ无阳性表达,而高氧模型组中的阳性表达在第7天时达到高峰,第14天时明显下降,但仍高于空气对照组;雌激素治疗组中的IFN-γ表达强度在各时间段均明显低于高氧模型组(P<0.01).[结论]雌激素对新生大鼠高氧肺损伤有保护作用.     

Nrf2及P62在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨Nrf2及P62在卵巢癌及相应的正常组织中的阳性表达情况,为卵巢恶性肿瘤恶性程度及预后的判断提供理论参考。方法:收集70例卵巢癌组织及正常组织,采用RTPCR检测组织中Nrf2mRNA与P62mRNA的表达情况;免疫组化法检测组织中P62和Nrf2蛋白的表达情况。结果:在卵巢癌组织中,Nrf2与P62蛋白及mRNA的表达量均明显高于正常组织(P<0.05)。Nrf2蛋白阳性表达和肿瘤的MDACC分型(P=0.003)、IFGO分期(P=0.036)、大网膜转移(P=0.036)密切相关;而P62蛋白的阳性表达和MDACC分型(P=0.008)、组织学分级(P=0.021)、IFGO分期(P=0.018)相关。Nrf2和P62的表达在卵巢癌组织中呈明显的相关性(r=0.274,P<0.05)。而Nrf2~+/P62~+分组中位生存时间28个月,相较于其他分组的患者预后更差。结论:Nrf2和P62的异常表达与卵巢癌的进展密切相关,两者在卵巢癌的发生发展中存在协同作用,Nrf2和P62的共表达往往预示着卵巢癌患者的不良预后。     

白藜芦醇通过转录因子Nrf2对感染性休克小鼠肝损伤保护作用的研究

目的 探讨白藜芦醇(RES)能否通过上调转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2),起到抗炎和抗氧化应激作用,从而减轻感染性休克小鼠肝损伤.方法 采用随机数字表法将40只小鼠分为对照组、感染性休克模型组(模型组)、RES溶剂对照组(溶剂组)、RES干预组(RES组)4组,每组10只.模型组、溶剂组和RES组腹腔注射脂多糖...     

大鼠液压冲击脑损伤Nrf2、HO-1和NQO-1动态表达变化及意义

目的 探讨大鼠液压冲击伤后水肿脑组织核因子2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1(NADPH quinineoxidoreductase-1,NQO-1)的表达变化及其意义.方法 成年雄性SD大鼠56只制作液压冲击颅脑损伤模型,术后1h、6h、12 h、24 h、3d、7d用干湿质量法测定脑组织含水量,Westernblot测定Nrf2胞浆、胞核蛋白以及HO-1、NQO-1蛋白;用实时荧光定量PCR测定Nrf2 mRNA表达.结果 自冲击伤后6h,脑组织含水量开始增加,24h达高峰,持续至3d,然后开始下降(P＜0.05).组织学观察印证了脑水肿趋势.Western blot检测结果显示胞浆Nrf2蛋白于伤后12 h开始持续降低,而胞核Nrf2蛋白则于1h开始升高,24 h达到高峰,3d时降低,7d后明显降低,但仍高于NC组(P＜0.05).HO-1和NQO-1蛋白表达与胞核Nrf2蛋白趋势一致.实时荧光定量PCR显示TBI组术后各时间点Nrf2 mRNA表达水平无明显变化(P＞0.05).结论 液压冲击伤后出现核因子Nrf2转位激活,可能通过上调HO-1、NQO-1蛋白表达发挥神经保护作用.     

肢体缺血后处理通过Nrf2/ARE通路对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨肢体缺血后处理通过核转录因子红细胞系相关因子-2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路对大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的影响.方法 45只大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、肢体缺血后处理组(LpostC组)3组,每组15只.分别建立I/R组、LpostC组的脑缺血再灌注模型,在该基础上建立LpostC组的肢体缺血后处理模型.于造模后24 h分别比较三组的神经功能缺损评分、脑梗死体积、脑组织病理形态学、Nrf2和超氧化物歧化酶(SOD)1蛋白表达.结果 S组大鼠无神经功能缺损、脑梗死,LpostC组神经功能缺损评分和脑梗死体积低于I/R组(均P<0.05);S组脑组织无病理学改变,I/R组呈急性缺血性改变,LpostC组病理学改变轻于I/R组;I/R组、LpostC组的Nrf2和SOD1蛋白表达均高于S组,且LpostC组高于I/R组(均P<0.05).结论 肢体缺血后处理上调大鼠Nrf2和SOD1蛋白表达,通过激活Nrf2/ARE信号通路减轻CIRI.     

基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9在新生兔高氧机械通气肺损伤中的表达

目的观察基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)在新生兔机械通气肺损伤中的表达和变化规律,研究肺损伤的分子机制。方法将60只日龄1～5d的新生兔随机分为高吸气峰压组(高压组)、中吸气峰压组(中压组)、低吸气峰压组(低压组)进行高氧机械通气并与未通气组对照,分别于通气后1h、3h、6h3个时间点活杀取肺,病理切片MMP-2、MMP-9免疫组织化学染色,ELISA法检测肺组织匀浆中MMP-2、MMP-9的水平,RT-PCR检测肺组织MMP-2、MMP-9 mRNA的表达。结果3种方法均发现:(1)高压、中压、低压通气均能使MMP-2的含量增加,mRNA表达增强。(2)高氧机械通气MMP-9的表达先下调,含量降低,随着通气的继续,渐上调到正常水平,不同的吸气峰压对MMP-9的影响变化不大(F=0.083,P>0.05)。(3)MMP-2水平:高压组通气后3h与低压组通气后1h、低压组通气后3h、正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05),中压组通气后6h与低压组通气后1h、正常组比较差异亦均有统计学意义(P<0.05)。MMP-9水平:高压组通气后3h与高压组通气后1h、中压组通气后1h、低压组通气后1h比较差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)MMP-2与MMP-9之间呈正相关,与肺组织湿干比、灌洗液细胞总数呈正相关。结论新生兔机械通气6h内,高水平的氧通气能使MMP-2上调,使MMP-9下调,通气时机械拉伸上调MMP-2。机械通气影响MMPs的合成,MMPs在新生兔机械通气肺损伤中发挥重要作用。     

新生鼠高浓度氧肺损伤临界值的初步研究

目的探讨持续吸入常压下不同浓度氧引起新生鼠肺损伤的临界时间。方法4组新生鼠分别暴露于>95%O2、60%O2、40%O2和正常空气(21%O2)中,取暴露12、24、48和72h的肺组织,在光镜下和透射电镜下观察其病理改变。结果新生鼠吸入>95%O212h、60%O248h或40%O272h后,均出现肺组织的病理改变,光镜下可见微血管扩张、充血,肺间隔增宽,肺泡内有蛋白渗出,炎症细胞浸润,出血,肺组织结构紊乱,肺大泡数量增多等;透射电镜下可见内皮细胞线粒体肿胀,内质网肿胀、破坏,吞饮小泡增多,Ⅱ型肺泡上皮细胞脱落等;随着吸氧浓度的增高和时间的延长,肺损伤程度加重。结论吸入95%以上O212h,60%O248h,或40%O272h均可能引起新生鼠肺损伤,适当控制吸氧浓度和时间有助于减少肺损伤的发生,减轻肺损伤的程度。     

胆总管结扎所致肝损伤中Nrf2对细胞信号传导和基因表达的影响

目的 研究核因子相关因子 2（Nrf2）在胆汁淤积中的作用。方法 野生鼠（WT）和Nrf2基因敲除小鼠(KO)给予胆总管结扎手术,应用蛋白杂交技术观察丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号传导途径的变化;应用RNA酶保护测定（RPA）技术测定基因变化。结果 在BDL组血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）显著升高;纤维粘连蛋白的表达在KO鼠明显增多;p-JNK、p-stat3、p-AKT、p-p38在WT鼠的BDL组的活化强度较大。Nrf2的靶基因NQO1,谷胱甘肽S 转移酶(GST)的同工酶（GST-Ya,GST-pa）在WT鼠的BDL组明显上调,而在KO鼠中则被抑制。TGF-β1、TIMP-1、胶原蛋白1在KO鼠的BDL组上调幅度较大。结论 在胆总管结扎后胆汁淤积所致肝损伤中,Nrf2对MAPK信号传导和炎症、纤维化过程均有影响,部分通过上调抗氧化基因的表达起到细胞保护作用。     

新生大鼠高氧动物模型肠道AKT的变化

目的 研究高氧对新生大鼠肠道AKT信号通路的影响.方法 将新生大鼠分为高氧组和空气组,采用电镜观察2组大鼠肠组织结构的变化;应用免疫组化染色(SP法)和Western blot检测肠组织AKT和p-AKT蛋白的表达;应用实时PCR检测肠组织AKTmRNA的表达.结果 电镜显示空气组肠黏膜形态完整;高氧组可见上皮表面绒毛有部分缺失,核形不规则,胞质内疑有凋亡小体.免疫组化结果显示,空气组AKT蛋白表达随生长发育逐渐增加;与空气组比较,高氧组AKT表达第7天升高,第10天反而下降(P＜0.05).空气组p-AKT蛋白表达亦随生长发育逐渐增加,与空气组比较高氧组p-AKT表达第7天明显升高(P＜0.05),但第10天表达减少.Western blot结果显示,与空气组比较,高氧组AKT表达第7天显著升高(P＜0.05),但第10天下降.p-AKT表达亦升高,但差异无统计学意义(P＞0.05).实时PCR结果显示,与空气组比较,高氧组AKTmRNA表达第5天和第7天显著升高(P＜0.05),但在第10天表达下降(P＜0.05).结论 高氧刺激使肠道黏膜细胞结构发生改变,肠道黏膜细胞可能通过AKT的磷酸化来对抗高氧刺激进而保护肠道黏膜.     

BMP-7在大鼠肝纤维化组织中的动态表达和意义

目的探讨大鼠肝纤维化组织中骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)的表达趋势及意义。方法采用腹腔内注射二甲基亚硝胺(DMN)构建大鼠肝纤维化模型,造模后4天、1、2、4、6、8周分别检测血清ALT、AST、ALB的变化,同时取肝组织用半定量RT-PCR方法检测BMP-7 mRNA的表达。采用HE染色及Masson三色染色,光学显微镜下观察肝组织损伤情况。采用单因素方差分析进行多组均数间的比较。结果肝纤维化模型组血清ALT、AST明显升高,ALB明显下降。BMP-7 mRNA在对照组大鼠和肝纤维化模型组大鼠肝组织中均有表达。与对照组相比,肝纤维化模型组4天时BMP-7mRNA表达显著减少(P<0.05)。1～2周与对照组差别无显著性(P均>0.05),1周与4天比较差异无显著性(P>0.05),2周与4天比较显著升高(P<0.05)。4周较对照组显著升高,达高峰(P<0.05)。6周较对照组显著升高(P<0.05),较4周下降(P<0.05)。8周较6周有显著下降(P<0.05),与对照组无显著差异(P>0.05)。结论 BMP-7 mRNA在正常SD大鼠肝脏有表达,在肝纤维化大鼠肝组织中的表达呈动态改变,在炎症早期表达减少,随着肝纤维化进展,表达增加,在肝纤维化后期表达减少,提示BMP-7参与肝纤维化的发生、发展过程。     

苦参碱对肺纤维化大鼠核因子E2相关因子2、血红素氧合酶-1的作用研究影响

目的观察博来霉素诱导的大鼠肺纤维化中核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）的表达,探讨苦参碱对肺纤维化的作用及Nrf2、HO-1表达的影响。方法 SD大鼠120只,随机分为五组：正常对照组（C）、模型组（M）、泼尼松处理组（P）、苦参碱50处理组（M50）、苦参碱100处理组（M100）。计算肺系数,病理学检查肺组织,免疫组化法（SP）分析每组肺组织中的Nrf2、HO-1蛋白水平,RT-PCR检测大鼠肺组织中Nrf2、HO-1 mRNA表达。结果造模后M、P、M50、M100组的Nrf2、HO-1表达高于C组（P〈0.05）。第7、14天时M组Nrf2、HO-1 mRNA表达比P、M50、M100组低（P〈0.05）;第28天M、P、M50、M100组Nrf2、HO-1 mRNA表达比第7、14天的表达偏低,第7天表达最高（P〈0.05）。直线相关分析显示Nrf2 mRNA表达与HO-1 mRNA呈正相关（P〈0.05）。结论苦参碱有抑制博来霉素诱导的肺纤维化的作用,其机制可能与早期上调Nrf2、HO-1表达、抑制氧化应激反应有关。     

A LD H2在白藜芦醇改善大鼠慢性酒精性肝损伤中的机制

目的：探讨酒精代谢酶乙醇脱氢酶（ADH）和乙醛脱氢酶2（ALDH2）在白藜芦醇（resveratrol ,Res）改善大鼠慢性酒精性肝损伤中的机制。方法采用含酒精的Lieber‐DeCarli液体饲料喂养大鼠19周,建立慢性酒精性肝损伤模型。42只SD大鼠随机分成正常对照组,低、中、高剂量酒精组,Res对照组,高剂量酒精＋ Res组。采用苏木精‐伊红（HE）和油红O染色,观察肝组织形态学改变;采用试剂盒测定肝组织中ADH、ALDH2的活性;Western blot检测肝组织中ADH与ALDH2的蛋白表达。结果各剂量酒精组大鼠肝组织脂肪变性和炎症浸润明显,体重和能量摄入量与正常对照组相比下降,差异具有统计学意义（P＜0.05或 P＜0.01）;且肝组织ADH活性与蛋白表达略有升高,而肝组织ALDH2活性与蛋白表达显著下降。Res干预后大鼠肝组织脂肪变性和炎症浸润均较高剂量酒精组显著减轻,体重与能量摄入量增加,显著提升了肝组织中ALDH2的活性与蛋白表达（P＜0.05）。结论 Res可能通过对大鼠肝脏ALDH2的调节来改善慢性酒精摄入引起的肝脏损伤。