姜黄素诱导人肝癌细胞系Huh7自噬和凋亡

目的 探讨姜黄素诱导人肝癌细胞Huh7自噬和凋亡的作用,以及抑制自噬对姜黄素诱导凋亡的影响。方法 将姜黄素（5、10、20、40 μmol/L）加入人肝癌细胞系Huh7的培养液中,用CCK-8检测细胞增殖水平变化。Huh7细胞用5~40 μmol/L姜黄素培养48 h,通过蛋白质印迹法检测自噬微管相关蛋白1轻链3（LC3）-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值,免疫荧光法检测自噬小体的形成,评估Huh7细胞自噬水平的变化。通过流式细胞术检测Huh7细胞凋亡情况。加入5 mmol/L自噬抑制剂3-甲基嘌呤（3-MA）和20 μmol/L姜黄素培养Huh7细胞,检测Huh7细胞凋亡水平和自噬水平的变化。结果 CCK-8检测显示姜黄素能抑制Huh7细胞的增殖（P<0.05,P<0.01）,且细胞凋亡率随着姜黄素浓度的升高而上升;蛋白质印迹检测显示加入姜黄素后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值上升（P<0.05,P<0.01）,免疫荧光检测显示加入20 μmol/L姜黄素后自噬小体增多。与单独使用20 μmol/L姜黄素培养的Huh7细胞相比,姜黄素联用3-MA培养的Huh7细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值下降（P<0.01）,自噬小体减少。流式细胞术检测发现5~40 μmol/L姜黄素促进了Huh7细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）,而联用3-MA后与单独使用20 μmol/L姜黄素培养相比引起的Huh7细胞凋亡减少（P<0.05）。结论 姜黄素能诱导Huh7细胞凋亡、抑制细胞增殖并促进细胞自噬,抑制自噬能减弱姜黄素对Huh7细胞的诱导凋亡效应。     

GW4064激活法尼酯X受体抑制结肠癌细胞生长浸润及基质细胞衍生因子1的表达

目的 探讨法尼酯X受体（FXR）特异性激动剂GW4064抑制结肠癌细胞生长浸润的机制。方法 体外培养人结肠癌细胞系HT-29,用浓度为0、0.1、1、3、5、7、10 μmol/L的GW4064分别处理HT-29细胞72 h,采用MTT法检测细胞活力;用浓度为0、1、5 μmol/L的GW4064分别处理HT-29细胞24 h,用相差显微镜观察细胞形态;用浓度为0、1 μmol/L的GW4064分别处理HT-29细胞24 h,采用细胞划痕实验检测细胞浸润的变化;用浓度为0、1、5 μmol/L的GW4064分别处理HT-29细胞24 h,采用PCR检测FXR mRNA和基质细胞衍生因子1（SDF-1）mRNA表达的变化;用浓度为0、1、5、7 μmol/L的GW4064分别处理24 h,采用ELISA法检测细胞培养上清液中SDF-1表达的变化。于裸鼠皮下接种HT-29细胞建立裸鼠成瘤模型,灌胃给予GW4064或溶剂DMSO,16 d后检测肿瘤生长情况及瘤体中FXR与SDF-1 mRNA的表达。结果 GW4064处理HT-29细胞后,细胞生长受到抑制,且呈剂量依赖性,1、3、5、7、10 μmol/L GW4064组HT-29细胞的生长活力与对照组（0 μmol/L）相比差异均有统计学意义（P均<0.05）。用相差显微镜观察可见GW4064处理HT-29细胞后,细胞收缩变圆,从瘦长的细胞向表皮样细胞改变。细胞划痕实验结果显示GW4064处理HT-29细胞后,细胞迁移距离变短,与对照组（0 μmol/L）相比差异有统计学意义（P<0.05）。PCR检测结果显示GW4064处理后FXR mRNA表达呈剂量依赖性增加,而SDF-1 mRNA表达则相反。ELISA检测结果显示细胞培养上清液中SDF-1的表达量随着GW4064浓度的增加而逐渐下降,1、5、7 μmol/L GW4064组与对照组（0 μmol/L）相比差异均有统计学意义（P均<0.05）。给予GW4064后,荷瘤小鼠肿瘤体积变小,与对照组（给予DMSO）相比差异有统计学意义（P<0.05）,并且瘤体内FXR mRNA表达增加、SDF-1 mRNA表达减少。结论 FXR激活后抑制了结肠癌细胞生长浸润,同时抑制了结肠癌细胞SDF-1的表达分泌。     

莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的：探讨莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法：采用CCK-8法检测不同浓度（5、10、25、50、100 μmol/L）莪术醇,0 μmol/L莪术醇为对照组,干预SKOV3细胞24 h、48 h的增殖抑制率,并计算IC50值;划痕实验和Transwell小室法分别检测细胞的迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测莪术醇及PI3K/AKT通路阻断剂LY294002对细胞PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达的影响。结果：莪术醇对SKOV3细胞的增殖有明显抑制作用,呈浓度依赖性但不呈现时间依赖性,IC50值为48 μmol/L;莪术醇能明显抑制SKOV3细胞的迁移与侵袭,促进其凋亡（均P＜0.01）,降低细胞PI3K、AKT总蛋白表达（均P＜0.05）,显著降低其活化形式p-PI3K、p-AKT的表达（均P＜0.01）;莪术醇与LY294002联用后表现出良好的协同作用,较单独用莪术醇时下调p-PI3K、p-AKT蛋白更为显著（P＜0.05）。结论：莪术醇能抑制SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭,并诱导其凋亡,其作用机制与抑制PI3K/AKT通路有关。     

蝎毒多肽提取物对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及血管内皮生长因子、凝血酶敏感蛋白表达的影响

目的 观察蝎毒多肽提取物（简称蝎毒多肽）对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及血管内皮生长因子（VEGF）、凝血酶敏感蛋白（TSP-1）表达的影响,进一步探讨蝎毒多肽的抗肿瘤作用机制。方法 MTT法检测蝎毒多肽对SKOV3细胞增殖的影响;免疫细胞化学法及Western boltting测定蝎毒多肽对SKOV3细胞VEGF、TSP-1蛋白表达的影响。结果 蝎毒多肽12.5～200 μg/mL对SKOV3细胞增殖有抑制作用,且呈明显的质量浓度相关性,质量浓度大于50 μg/mL时细胞增殖抑制作用显著（P＜0.01）。随着蝎毒多肽质量浓度的增加,SKOV3细胞TSP-1蛋白表达增加,VEGF蛋白表达下降（P＜0.01）。结论 蝎毒多肽能显著抑制VEGF的表达,促进TSP-1的表达,其抗肿瘤作用机制可能是通过抑制肿瘤细胞增殖、影响肿瘤细胞血管生成过程中关键因子的表达来实现的。     

白藜芦醇对银屑病细胞生长的影响及其作用机制的探讨

目的 探讨白藜芦醇对银屑病细胞生长的影响及其作用机制。方法 不同浓度的角质细胞生长因子（KGF）诱导人永生角质形成细胞（HaCaT），显微镜观察及四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测HaCaT细胞增殖。选出最佳浓度作用HaCaT细胞复制银屑病模型，采用不同浓度白藜芦醇作用HaCaT细胞，计算半抑制浓度（IC50），根据IC50选出后续实验白藜芦醇的浓度；将银屑病模型细胞分为阴性对照组（30 μg/L生理盐水），2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、7.5 μmol/L白藜芦醇组，阳性对照组（5.0 μg/mL维A酸）及空白对照组（未加任何药物），MTT法检测各组银屑病模型细胞的增殖，流式细胞术检测各组银屑病模型细胞的凋亡率，Western blotting检测各组银屑病模型细胞Caspase-3、p-ERK1/2、p-P38蛋白的表达。结果 不同KGF浓度组HaCaT细胞0 h、12 h、24 h、48 h的OD值比较，采用重复测量设计的方差分析，结果 ①不同时间点的OD值有差异（P <0.05）；②不同浓度组的OD值有差异（P <0.05），40 ng/mL KGF组的OD值高于其他浓度组；③不同浓度组OD值的变化趋势有差异（P <0.05），40 ng/mL KGF组的OD值从24 h开始明显高于其他浓度组。0 μmol/L、0.5 μmol/L、1.0 μmol/L、2.0 μmol/L、4.0 μmol/L白藜芦醇作用HaCaT细胞24 h后的OD值比较，差异有统计学意义（P <0.05），白藜芦醇浓度升高OD值降低，白藜芦醇可抑制HaCaT细胞增殖，IC50值约5.3 μmol/L。空白对照组、阴性对照组、2.5 μmol/L白藜芦醇组、5.0 μmol/L白藜芦醇组、7.5 μmol/L白藜芦醇组、阳性对照组银屑病模型细胞24 h、48 h、72 h的OD值比较，采用重复测量设计的方差分析，结果 ①不同时间点的OD值有差异（P <0.05）；②各组OD值有差异（P <0.05），③各组OD值的变化趋势有差异（P <0.05），从48 h开始，5.0 μmol/L、7.5 μmol/L白藜芦醇对银屑病模型细胞具有一定的抑制增殖作用。空白对照组、阴性对照组、2.5 μmol/L白藜芦醇组、5.0 μmol/L白藜芦醇组、7.5 μmol/L白藜芦醇组、阳性对照组银屑病模型细胞的凋亡率比较，差异有统计学意义（P <0.05），5.0 μmol/L、7.5 μmol/L的白藜芦醇对银屑病模型细胞有促凋亡作用。5.0 μmol/L白藜芦醇组、7.5 μmol/L白藜芦醇组、阳性对照组与阴性对照组和空白对照组比较，Caspase-3蛋白相对表达量升高（P <0.05），p-ERK1/2、p-P38蛋白相对表达量降低（P <0.05）。结论 白藜芦醇可能是通过抑制ERK/MAPK和/或P38/MAPK通路发挥作用进而抑制银屑病细胞增殖并促进其凋亡，具体作用机制还有待更深入研究。     

花旗松素通过PI3K/AKT/mTOR通路对宫颈癌SiHa细胞自噬、凋亡和衰老的影响

[目的] 观察花旗松素（Taxifolin）对宫颈癌SiHa细胞自噬,凋亡和衰老的影响。[方法] 采用0、5、10、20μmol/LTaxifolin处理宫颈癌SiHa细胞。CCK-8法检测细胞细胞增殖倍数;蛋白免疫印迹检测Beclin1、p62、LC3II/LC3I蛋白表达水平;免疫荧光检测LC3+含量;流式细胞仪检测细胞凋亡;流式分选检测线粒体膜电位;蛋白免疫印迹检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、cleavedCaspase-3、Caspase-9、cleavedCaspase-9、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、pPI3K、蛋白激酶B（AKT）、p-AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、p-mTOR蛋白表达水平,加入AKT激活剂SC79进行验证。[结果] 与Taxifolin0μmol/L组相比较,Taxifolin10、20μmol/L组细胞增殖倍数显著降低（P<0.05）,p62蛋白水平显著降低（P<0.05）,Beclin1、LC3II/LC3I蛋白水平显著升高（P<0.05）,LC3+含量显著升高（P<0.05）,凋亡率显著升高（P<0.05）,线粒体膜电位显著升高（P<0.05）,Bcl-2/Bax比值显著降低（P<0.05）,cleavedCaspase-3/Caspase-3、cleavedCaspase-9/Caspase-9比值升高（P<0.05）,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低（P<0.05）。加入PI3K/AKT信号通路激活剂SC79可逆转花旗松素对SiHa细胞凋亡、自噬及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达的影响。[结论] Taxifolin通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路的活化诱导宫颈癌SiHa细胞自噬,凋亡和衰老。     

TRB3在非诺贝特抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖中的作用及其机制

目的探讨TRB3在非诺贝特抑制高糖诱导下肾小球系膜细胞增殖中的作用及作用其机制。方法将细胞分为正常对照
组（N,5.5 mmol/L 葡萄糖）、高糖组（H,25 mmom/L 葡萄糖）、高糖+不同浓度的非诺贝特组（FN,10、50、100 μmol/L）。采用
CCK-8法检测细胞增殖率,Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学改变,流式细胞术检测细胞周期改变,免疫细胞化学染色观
察TRB3表达,Western Blot检测细胞中TRB3、P-AKT蛋白的表达。结果高糖能够诱导肾小球系膜细胞增殖（P<0.001）;非诺贝
特能够抑制肾小球系膜细胞增殖（P<0.001）,且具有浓度依赖性。非诺贝特干预后细胞出现凋亡形态学改变;非诺贝特可以使
系膜细胞发生G1/S期阻滞;正常组、高糖组胞浆有少量TRB3蛋白表达,但高糖不能促进TRB3表达增多,随着非诺贝特浓度的
增加TRB3表达量增多,P-AKT表达逐渐降低。结论非诺贝特可以促进TRB3的表达;TRB3可能通过抑制AKt的磷酸化使肾
小球系膜细胞发生G1/S期阻滞从而抑制其增殖。
     

γ分泌酶抑制剂阻断Notch信号通路对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察γ分泌酶抑制剂 （DAPT）对人宫颈癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 不同浓度DAPT对SKOV3细胞作用后,采用CCK-8法检测对SKOV3细胞的增殖抑制作用,吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）荧光双染色法及流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR、Western blot检测SKOV3细胞Notch1 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 与空白对照组相比,5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L浓度的DAPT对SKOV3细胞均有一定的增殖抑制作用（P<0.05),且其抑制作用呈剂量依耐性增加（P<0.05),24 h抑制率分别为19.87%、28.38%、46.67%。与空白对照组相比,不同浓度的DAPT作用SKOV3细胞24 h后凋亡率增加（P<0.05),且随DAPT浓度增加,凋亡细胞逐渐从早期凋亡过渡至晚期凋亡;Notch1 mRNA和蛋白表达抑制,其抑制率分别为 （10.23%、20.50％、38.83％）和 （12.89%、27.47％、49.84％）。结论 γ分泌酶抑制剂DAPT可阻断Notch信号通路,能抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调Notch1表达有关。     

吉马酮调控JAK2/STAT3信号通路对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭的影响

背景 卵巢癌死亡率居于女性生殖系统恶性肿瘤的首位,仍需不断探索新的药物来改善其预后,近年来许多研究报道了吉马酮有抗肿瘤细胞作用.目的 探讨吉马酮对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响及其作用机制.方法 培养人卵巢癌SKOV3细胞,分别用0 μmol/L、70 μmol/L、140 μmol/L、210 μmol/L、280 μmol/L、350 μmol/L吉马酮作用于卵巢癌SKOV3细胞24 h、48 h、72 h,采用CCK-8法检测吉马酮对卵巢癌SKOV3细胞增殖能力的影响;采用细胞划痕实验及Transwell实验观察吉马酮对卵巢癌细胞迁移、侵袭能力的影响;Western blot法检测各组细胞JAK2/STAT3信号通路相关蛋白及肿瘤侵袭转移相关蛋白MMP2、MMP9的表达.结果 CCK-8实验结果提示吉马酮可以抑制人卵巢SKOV3细胞的增殖,并存在时间及浓度依赖性;细胞划痕实验显示0 μmol/L、140 μmol/L、280 μmol/L吉马酮组划痕愈合率分别为69.00％ ± 6.76％、40.33％ ± 5.21％、13.79％ ± 9.23％ (P<0.05);Transwell迁移实验显示0 μmol/L、140 μmol/L、280 μmol/L吉马酮组穿过小室细胞个数分别为466.5 ± 47.7、319.4 ± 41.2、149.7 ± 26.3(P<0.05);Transwell侵袭实验显示0 μmol/L、140 μmol/L、280 μmol/L吉马酮组穿过小室细胞个数分别为278.6 ± 71.8、161.0 ± 35.4、70.1 ± 24.9.与对照组相比,药物组对细胞迁移及侵袭有明显的抑制作用(P<0.05),并具有浓度依赖性;Western blot结果提示吉马酮可浓度依赖性下调p-JAK2、p-STAT3蛋白表达,降低p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3,还可浓度依赖性下调MMP2、MMP9蛋白表达(P<0.05).结论 吉马酮可明显抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移、侵袭能力,其机制可能与下调JAK2/STAT3信号通路活性、下调MMP2、MMP9蛋白表达有关.     

高良姜素对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和凋亡影响的机制研究

目的 探讨高良姜素(Galangin, GLA)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响。方法 用不同浓度的GLA(0μmol/mL、10μmol/mL、20μmol/mL、40μmol/mL)处理卵巢癌SKOV3细胞24 h,通过CCK8法和划痕实验来检测GLA对SKOV3细胞增殖和迁移的影响；通过TUNEL实验和流式细胞术检测GLA对SKOV3细胞凋亡的影响；通过Western Blot实验检测B细胞淋巴瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2-Associated X蛋白(Bcl-2-Associated X,Bax)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)和磷酸化蛋白激酶B(phosphor-protein kinase B,p-AKT)蛋白表达水平。结果 CCK8和划痕实验的结果显示，GLA能够抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和迁移能力(P<0.05),且呈剂量依赖性；TUNEL实验和流式细胞术检测结果显示，GLA以剂量依赖的方式诱导了卵巢癌细胞的凋亡(P<0.05);Western Blot实验结果显示GL...     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。