全反式维甲酸对高糖环境下HK-2细胞转分化的影响及其可能机制

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA）对高糖环境下正常人肾小管上皮 HK‐2细胞株转分化的影响及其可能机制。方法将体外培养的 HK‐2细胞按随机数字表法分为以下7组：空白组、高糖组、高渗组、高糖＋低浓度ATRA组、高糖＋中浓度ATRA组、高糖＋高浓度ATRA组、Rho激酶抑制剂Y27632干预组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT‐PCR）检测各组细胞RhoA及ROCK1 mRNA表达水平,采用细胞免疫荧光检测高糖环境下 HK‐2细胞α‐平滑肌肌动蛋白（α‐SMA）及E‐钙黏蛋白的表达变化。结果 RT‐PCR结果显示：空白组与高渗组RhoA及ROCK1 mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）;高糖组RhoA及ROCK1 mRNA表达水平较空白组、高渗组高,差异均有统计学意义（P＜0．05）;予以ATRA或Y27632干预后, RhoA及ROCK1 mRNA表达较高糖组减少,差异均有统计学意义（P＜0．05）,且呈现ATRA浓度依赖性。相关性分析示,高糖组及各ATRA干预组RhoA mRNA与ROCK1 mRNA表达水平呈正相关（P＜0．05）。细胞免疫荧光检测结果显示：空白组与高渗组α‐SMA及E‐钙黏蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义（P＞0．05）;高糖组α‐SMA表达水平较空白组高,E‐钙黏蛋白表达水平较空白组低,差异均有统计学意义（P＜0．05）;予以ATRA或Y27632干预后,α‐SMA表达明显减少,E‐钙黏蛋白表达明显增多,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论 ATRA可部分逆转高糖环境下 HK‐2细胞转分化的过程,其机制可能与抑制RhoA／ROCK信号通路有关。     

17β-雌二醇促进甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及三叶草因子1分泌

目的 研究17β-雌二醇(estradiol,E2)刺激甲状腺乳头状癌K-1细胞增殖、迁移及生长因子类似物人三叶草因子1(trefoil factor family 1,TFF1)分泌及分子机制.方法 ELISA检测E2、ERβ激动剂(propylpyrazoletriol,PPT)、ERβ激动剂(diarylpropionitrile,DPN)对K-1细胞TFF1分泌的影响,Western blot检测细胞中雌激素受体ERα、ERβ的表达量;设计合成ERα siRNA、ERβ siRNA后,转染K-1细胞,采用ELISA观察其对E2诱导的TFF1分泌的影响.染色体免疫共沉淀检测ERα、ERβ与TFF1基因启动子的相互作用;MTT检测E2对K-1细胞增殖的影响;Transwell检测E2对K-1细胞迁移的作用.结果 E2处理后K-1细胞上清TFF1含量逐渐升高,24 h达到峰值,随后降低;PPT处理K-1细胞后TFF1含量增多,而DPN处理降低TFF1含量;转染ERα siRNA后细胞TFF1分泌量减少;而转染ERβsiRNA后分泌量升高.Western blot检测结果显示,K-1细胞中雌激素受体ERα表达高于ERβ.染色体免疫共沉淀结果显示,ERα能与TFF1基因启动子区域结合;MTT结果显示,E2处理促进K-1细胞增殖;Transwell检测结果显示,E2处理增强K-1细胞迁移.结论 E2可以通过ERα促进K-1细胞中TFF1的表达及分泌,促进细胞增殖和迁移.     

Rho／Rho激酶在COPD大鼠气道的表达及其对气道重塑的影响

目的探讨Rho／Rho激酶信号通路在慢性阻塞性肺疾病大鼠气道中的表达及其对气道的影响。方法清洁级相同重量级Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组、COPD组、Y-27632干预组,每组20只。分析各组大鼠的支气管壁厚度（War）和平滑肌厚度（Warn）,以及RhoA,ROCKlImRNA的表达。结果与对照组相比,COPD组大鼠RhoA,ROCK1ImRNA表达明显增高,wat、wam也明显增加（P〈0．05）;与C（）PD组相比,Y-27632干预组大鼠RhoA,ROCKIImRNA的表达明显降低,Wat、wam也明显降低（P〈0．05）。结论COPD组大鼠RhoA,ROCKⅡmRNA表达明显增高;应用ROCKⅡ特异性拈抗剂Y一27632能够明显控制RhoA,ROCKⅡmRNA的表达,从而抑制慢性阻塞性肺疾病大鼠的气管壁增厚和平滑肌增殖。     

Rho／Rho激酶在哮喘小鼠气道的表达及其对气道重塑的影响

目的研究Rho／Rho激酶（ROCK）信号通路在哮喘小鼠气道中的表达及其对气道重塑的作用。方法清洁级BALB／c雄性小鼠39只,随机分为对照组、哮喘组、Y-27632干预组、地塞米松干预组,每组10只（其中对照组9只）。建立哮喘小鼠模型,并应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632进行干预,光镜观察肺组织结构,Image—proplus图像分析软件测量支气管壁厚度（Wat）和平滑肌厚度（Wam）,免疫组化法测定肺组织ROCKⅡ蛋白含量,RT—PCR法测定RhoA、ROCKⅡ mRNA含量。结果（1）哮喘组小鼠RhoA、ROCKⅡ表达明显增高,应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达。（2）Y-27632干预组小鼠Wat和Wam均明显低于哮喘组小鼠。结论哮喘小鼠肺组织RhoA及ROCKⅡ表达增多,ROCKll受体拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达,明显抑制哮喘小鼠Wat和Wam。     

鳖甲煎丸通过RhoA/ROCK信号通路抑制肝癌细胞血管形成拟态的生成

目的观察鳖甲煎丸对肝癌细胞血管生成拟态（VM）形成的作用及其对RhoA/ROCK通路信号分子和VE-cadherin、PI3K 表达的影响,探讨鳖甲煎丸抑制肝细胞肝癌（HCC）转移侵袭的分子机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为4组,分别以鳖甲 煎丸高（H）、中（M）、低剂量（L）及生理盐水（N）灌胃,4 d后采血,制备药物血清。肝癌HepG2细胞体外Matrigel三维培养,药物 血清及RhoA/ROCK抑制剂Y-27632（P）干预24 h后,应用图像采集和分析系统检测各组VM形成情况,采用Western blotting技 术检测各组细胞RhoA和ROCK1的表达水平,ELISA法检测各组细胞培养上清中VE-cadherin、PI3K的含量。结果鳖甲煎丸 可显著抑制HepG2 细胞VM的生成,且VM管径显著高于阴性对照组（P<0.01）,Y-27632 完全抑制了HepG2 细胞VM的生成 （P<0.01）;同时,鳖甲煎丸和Y-27632 都能够抑制HepG2 细胞中RhoA、ROCK1 的表达（P<0.05）,降低细胞培养上清中VEcadherin 、PI3K的表达水平（P<0.05）。结论鳖甲煎丸可抑制肝癌细胞VM的形成,其作用机制可能与其能抑制三维培养的 HepG2细胞中RhoA/ROCK通路信号分子及VE-cadherin、PI3K的表达有关。     

SK3表达在雌二醇介导的大鼠结肠平滑肌收缩中的作用

目的：探讨小电导钙激活钾通道3（SK3）表达在17β?雌二醇（E2）介导的大鼠结肠平滑肌收缩中的作用及机制。方法：将24只雄性SD大鼠随机分为4组。30 mm硅胶管皮下植入大鼠背部,内含不同溶液。分为对照组（C）,内含溶剂;生理剂量组（EP）内含E2 0.3 mg/mL,使大鼠血清雌激素在生理浓度;超剂量组（ES）内含E2 0.9 mg/mL,使大鼠血清雌激素超生理浓度;ER抑制剂+E2组（EI）内含相同摩尔浓度E2和雌激素受体抑制剂（ICI 182780）。各组干预14 d后处理,免疫荧光及Western blot检测结肠平滑肌组织SK3分布及表达;MPA分析系统记录肌条收缩张力及对卡巴胆碱（Cch）刺激反应。E2孵育结肠平滑肌细胞（SMC）24 h后及过表达SK3后,激光共聚焦显微镜下动态观察Cch刺激后SMC内Ca2+变化。结果：Cch刺激后,EP组及ES组肌条收缩明显低于其他各组（P < 0.05）。 EP组及ES组平滑肌组织SK3表达高于C组及EI组,其中ES组有统计学意义（P < 0.05）。Cch刺激后,E2孵育组及过表达SK3组胞内Ca2+上升幅度较相应对照组显著降低（P < 0.05）。结论：E2可能通过促进SK3表达,减少Ca2+内流从而抑制结肠收缩。     

硼替佐米通过下调Smurf1拮抗大鼠慢性移植肾间质纤维化

目的：通过观察硼替佐米（bortezomib）对于smad泛素化调节因子1（Smurf1）的表达及肾小管上皮细胞?间充质转分化（epithelial?mesenchymal transition,EMT）的影响,探讨硼替佐米抗移植肾纤维化的分子机制。方法：构建大鼠移植肾间质纤维化模型,并用硼替佐米进行干预。通过马松三色（Masson）染色观察硼替佐米对各组大鼠移植肾纤维化程度的影响。通过免疫组化检测硼替佐米对于肿瘤坏死因子?α（TNF?α）、Smurf1、上皮细胞钙黏蛋白（E?cadherin）及α?平滑肌蛋白（α?SMA）表达的影响。以肾小管上皮细胞（HK?2）为对象,以TNF?α作为刺激因子,通过Western blot检测Smurf1、E?cadherin和α?SMA的表达变化。通过慢病毒转染的方式敲低Smurf1在HK?2细胞中的表达,通过Western blot检测TNF?α刺激后E?cadherin和α?SMA的表达变化。将细胞分为对照组、TNF?α组、硼替佐米组及实验组,Western blot检测Smurf1、E?cadherin和α?SMA的表达变化。结果：硼替佐米治疗组大鼠移植肾间质纤维化明显且α?SMA与Smurf1的表达显著低于生理盐水治疗组（P < 0.05）,同时E?cadherin的表达显著高于生理盐水治疗组（P < 0.05）。50 ng/mL TNF?α刺激HK?2细胞24 h后Smurf1和α?SMA的表达明显高于0 h组（P < 0.05）,E?cadherin的表达则明显低于0 h组（P < 0.05）。 敲低Smurf1的表达后,sh?Smurf1组细胞在TNF?α刺激后的E?cadherin表达明显高于sh?con组细胞（P < 0.05）,而α?SMA则明显降低（P < 0.05）。硼替佐米干预后,实验组细胞的E?cadherin的表达明显高于TNF?α组（P < 0.05）,α?SMA的表达则明显低于TNF?α组（P < 0.05）。结论：硼替佐米可以通过抑制Smurf1的表达从而抑制TNF?α诱导的肾小管上皮细胞EMT现象,进而抑制移植肾间质纤维化。     

雌二醇对非小细胞肺癌A549细胞迁移及侵袭能力的影响

目的 观察雌二醇(17β-estradiol,E2)激动雌激素受体ERα和ERβ后,对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞A549和H1299迁移和侵袭能力的影响.方法 分别用E2、雌激素α受体激动剂PPT(ERαagonist)和雌激素β受体激动剂DPN(ERβago-nist)处理A549细胞和H1299细胞24 h和4...     

BKca下调RhoA/ROCK信号通路改善糖尿病大鼠阴茎勃起功能

目的：观察大电导钙激活钾通道（big conductance Ca2+-activated K+ channel,BKca）对糖尿病勃起功能障碍（diabetes mellitus-induced erectile dysfunction,DMED）大鼠阴茎海绵体平滑肌RhoA/ROCK信号通路的影响。方法：实验大鼠分为空白对照组8只,DMED组8只,NS1619组（DMED治疗组）7只,NS1619组大鼠采用特异性BKca激活剂（NS1619）阴茎海绵体注入2周。观察各组勃起行为,并电刺激检测阴茎海绵体内压（intracavernous pressure,ICP）/平均动脉压（mean arterial pressure,MAP）,取各组阴茎海绵体平滑肌检测肌张力,采用Western blot和定量PCR（real-time PCR）方法检测RhoA、ROCK1、ROCK2表达,反应RhoA/ROCK信号通路差异,同时检测MYPT-1表达反应肌球蛋白轻链磷酸酶（myosin light chain phosphatase,MLCP）磷酸化程度。结果：成功构建DMED大鼠模型,NS1619组大鼠与DMED组大鼠比较,勃起次数和ICP/MAP明显改善（P=0.025、0.024）,阴茎海绵体平滑肌舒缩顺应性提高（P=0.031、0.024）并且RhoA、ROCK2以及肌球蛋白磷酸酶靶向结合亚基（myosin phosphatase target subunit,MYPT）-1蛋白和mRNA表达水平下调（P=0.029、0.003、0.002）,但仍未达到正常对照组大鼠水平（P=0.018、0.040、0.003）,ROCK1表达无明显差异（P=0.533）。结论：DMED大鼠因RhoA/ROCK信号通路上调和MLCP磷酸化增强导致阴茎海绵体平滑肌舒缩顺应性降低以致勃起功能障碍发生,激活BKca可以通过下调RhoA/ROCK信号通路和抑制MLCP磷酸化,改善勃起功能。     

UHRF1调控雌激素受体表达对甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

  目的  观察泛素样含PDH和环指域1 (UHRF1)对雌激素受体（ER）α和ERβ表达比率的影响,探讨UHRF1影响甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移的机制。  方法  应用Western blot、实时荧光定量（qRT）-PCR检测正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1和甲状腺乳头状癌细胞BCPAP中UHRF1、ERα和ERβ的蛋白及mRNA表达。分别用Scrambled siRNA、UHRF1 siRNA处理BCPAP细胞,qRT-PCR检测各组细胞中ERα和ERβ的mRNA表达;MTT、Transwell分别检测各组细胞增殖、侵袭和迁移。  结果  与Nthy-ori3-1细胞相比,BCPAP细胞中UHRF1和ERα蛋白及mRNA表达水平上调（P<0.05）,而ERβ蛋白和mRNA表达水平下调（P<0.05）。与空白对照组和Scrambled siRNA组相比,转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞中ERα mRNA表达降低（P<0.05）,ERβ mRNA表达升高（P<0.05）;转染UHRF1 siRNA的BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移降低（P<0.05）。  结论  UHRF1可上调ERα/ERβ的表达比率,促进甲状腺乳头状癌BCPAP细胞增殖、侵袭和迁移。     

RhoA/ROCK通路调控前列腺增生细胞上皮间质转化

目的:通过研究RhoA/ROCK通路对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的良性前列腺增生(BPH)上皮细胞发生的上皮-间质转化(EMT)的影响,提示BPH的可能发生机制,为治疗BPH提供新的靶点。方法:TGF-β处理BPH上皮细胞系(BPH-1),检测EMT相关分子和RhoA的mRNA表达。随后用ROCK抑制剂Y-27632和TGF-β共处理BPH-1,检测EMT相关分子和RhoA的mRNA和蛋白表达。结果:TGF-β诱导BPH-1细胞发生EMT,上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达降低,神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达升高,同时BPH-1细胞RhoA的mRNA表达上调。Y-27632能够逆转TGF-β诱导的BPH-1细胞E-cadherin、N-cadherin、vimentin的mRNA表达和E-cadherin、N-cadherin蛋白表达改变,差异具有统计学意义。结论:EMT在BPH的发生过程中可能有着重要作用,而RhoA/ROCK通路参与了TGF-β诱导的EMT的调控。     

RhoGDI1在TNF-α诱导内皮细胞损伤中的作用研究*

目的：阐明Rho特异鸟苷酸解离抑制因子1（RhoGDI1）和Rho/ROCK信号通路在肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导内皮细胞损伤中的作用机制。方法：采用siRNA技术干扰人脐静脉内皮细胞RhoGDI1表达,实验分为正常对照组,10μg·L-1 TNF-α处理组和RhoGDI1干扰组。MTT法检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测RhoGDI1、RhoA、ROCK表达及活化。结果：TNF-α处理和RhoGDI1干扰均显著降低内皮细胞存活率,提高内皮细胞的凋亡。TNF-α处理后RhoGDI1表达显著下降,TNF-α处理和RhoGDI1干扰均可显著提高RhoA表达以及ROCK活化。结论：TNF-α可能通过抑制RhoGDI1促进Rho/ROCK信号通路的活化,最终引起内皮细胞凋亡。     

RREB1对TGF⁃β1诱导系膜细胞增殖的影响

目的：探讨ras反应元件结合蛋白1（ras responsive element binding protein 1, RREB1）对转化生长因子?β1（transforming growth factor?β1,TGF?β1）诱导大鼠系膜细胞增殖的影响。方法：用TGF?β1及RREB1?siRNA转染干预系膜细胞,CCK?8法检测系膜细胞增殖活力,RT?PCR法检测细胞增殖核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）、平滑肌肌动蛋白α（α?smooth muscle actin,α?SMA）及RREB1 mRNA水平,Western blot法检测PCNA、α?SMA及RREB1蛋白的表达,流式细胞术检测系膜细胞周期。结果：与对照组相比较,TGF?β1干预后CCK?8法检测系膜细胞增殖活力增加（P < 0.01）,PCNA、α?SMA及RREB1 mRNA和蛋白水平增加（P < 0.01）,细胞周期检测提示S期细胞百分率增多,G1期细胞百分率减少（P < 0.01）;与TGF?β1组相比较,RREB1?siRNA转染+TGF?β1干预后的系膜细胞增殖活力下降（P < 0.01）,PCNA、α?SMA及RREB1 mRNA和蛋白水平下降（P < 0.01）,细胞周期提示S期细胞百分率降低,G1期细胞百分率升高（P < 0.01）。结论：TGF?β1通过上调RREB1的表达诱导系膜细胞增殖。     

促红细胞生成素对高糖环境下系膜细胞凋亡的影响及其可能机制

目的探究促红细胞生成素（EPO）在高糖环境下对正常人肾小球系膜细胞凋亡的影响及其可能机制,为延缓糖尿病肾病（DN）进展寻找新的治疗方法。方法体外培养正常人肾小球系膜细胞。将培养后的正常人肾小球系膜细胞随机分为8组:空白对照（A）组（未加任何刺激物）,高糖（B）组(D-葡萄糖30 mmol·L-1),高渗（C）组(甘露醇25 mmol·L-1),EPO（D）组(EPO 20 U·mL-1),低浓度EPO干预（E）组(D-葡萄糖30 mmol·L-1+EPO 5 U·mL-1),中浓度EPO干预（F）组(D-葡萄糖30 mmol·L-1+EPO 10 U·mL-1),高浓度EPO干预（G）组(D-葡萄糖30mmol·L-1+EPO 20 U·mL-1),Y27632（H）组(D-葡萄糖30 mmol·L-1+Rho激酶抑制剂10μmol·L-1)。各组细胞均培养24 h。RT-PCR检测各组RhoA mRNA、ROCK1 mRNA的表达水平,流式细胞术检测各组的细胞凋亡。结果C、D、E 3组系膜细胞凋亡率与A组比较差异无统计学意义（P>0.05）。与B组比较,C、D、E、F、G 5组系膜细胞凋亡率、RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达水平均降低,H组系膜细胞凋亡率、ROCK1 mRNA表达水平均降低（均P<0.05）;与E组比较,F、G、H 3组系膜细胞凋亡率均升高,RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达水平均降低（均P<0.05）;与F组比较,G、H 2组系膜细胞凋亡率、ROCK1 mRNA表达水平均降低,G组RhoA mRNA表达水平降低、H组RhoA mRNA表达水平升高（均P<0.05）。Pearson相关性分析结果显示,B组及E、F、G 3组RhoA mRNA表达与ROCK1 mRNA表达均呈正相关（r=0.829、0.898、0.831、0.861,均P<0.05）。结论 EPO可抑制高糖诱导的正常人肾小球系膜细胞的凋亡,其作用机制可能与阻断RhoA/ROCK信号通路有关。     

红细胞生成素对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响及其可能机制

目的：肾间质纤维化（ renal interstital fibrosia , RIF）的核心是肾小管上皮细胞转分化。探讨促红细胞生成素（Erythropoietin, EPO）对高糖诱导的正常人肾小管上皮细胞（human kidney cells, HK-2）转分化的影响及其可能机制。方法体外培养HK-2细胞,按随机数字表法分为空白对照组、高糖诱导组（高糖终浓度30 mmol/L）、甘露醇对照组（甘露醇浓度24．5 mmol/L）、EPO对照组（ EPO终浓度为20 U/mL）、5 U/mL EPO干预组、10 U/mL EPO干预组、20 U/mL EPO干预组及ROCK抑制剂（ Y27632）组（ Y27632终浓度为30μmol/L,加入Y2763230 min后加高糖,高糖终浓度为30 mmol/L）,各组均刺激24 h。应用RT-PCR法检测细胞 RhoA mRNA、ROCK1 mRNA 的水平;细胞免疫荧光法检测细胞 E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白（αsmoothmuscleactin,α-SMA）的表达;ELISA法检测上清液纤维连接蛋白（fibronectin, FN）的表达。结果 RT-PCR结果显示高糖诱导组RhoA mRNA及ROCK1 mRNA表达较空白对照组显著升高（1．400±0．022 vs 0．945±0．132,1．913±0．011 vs 1．007±0．002,P＜0．05）;5、10、20 U/mL EPO干预组,RhoA mRNA的表达水平（0．278±0．006、0．770±0．005、0．334±0．009）均较空白对照组（0．945±0．131）减少（P＜0．05）,ROCK1 mRNA的表达水平（1．418±0．006、0．919±0．004、0．477±0．002）较空白对照组（51．007±0．002）减少（P＜0．05）;ELISA及细胞免疫荧光结果显示高糖诱导组FN、α-SMA蛋白的表达较空白对照组明显增加[（14545．53±317．27）ng/mL vs （2582．50±87．20）ng/mL,0．335±0．006 vs 0．224±0．006,P＜0．05];直线相关性分析,高糖诱导组,5、10、20 U/mL EPO干预组RhoA mRNA与ROCK1 mRNA表达均呈正相关（P＜0．05）。高糖诱导组α-SMA较空白对照组上升,E-钙黏蛋白较空白对照组下降（P＜0．05）;EPO干预组及ROCK抑制剂组E-钙黏蛋白表达较高糖诱导组增加,而α-SMA表达下降（P＜0．05）;ELISA结果显示,EPO干预组ROCK抑制剂组FN表达较高糖诱导组下降（P＜0．05）,且下降程度与EPO浓度相关。结论 EPO可抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化,从而延缓肾间质纤维化,其机制可能与RhoA/ROCK信号通路有关。     

Rho/ROCK激酶信号通路在大鼠宫腔粘连中的作用

目的 复制宫腔粘连大鼠模型,探讨Rho/ROCK信号通路相关蛋白的表达及其在宫腔粘连中的作用机制。方法 SD大鼠宫腔注入0.5?ml 95%乙醇,复制宫腔粘连模型;对照组注入等量生理盐水。术后15?d观察两组子宫内膜形态学变化,免疫组织化学法检测子宫内膜角蛋白、波形蛋白、Rho（RhoA、RhoB、RhoC）、Rho激酶（ROCKI、ROCKII）及TGF-β1表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠子宫内膜厚度变 薄（P?<0.05）;两组腺体数目比较,模型组腺体数目减少（P?<0.05）;两组角蛋白比较,模型组表达下降（P?<0.05）;两组波形蛋白比较,差异无统计学意义（P?>0.05）;两组大鼠子宫内膜RhoA、RhoB、RhoC、ROCKI、ROCKII的表达比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,模型组均高于对照组;模型组大鼠子宫内膜TGF-β1的表达高于对照组（P?<0.05）。结论 注射无水乙醇可复制稳定的大鼠宫腔粘连动物模型,其Rho/ROCK信号通路处于激活状态,TGF-β1通过激活Rho/ROCK信号通路促使子宫内膜损伤后组织纤维化,参与宫腔粘连的发生、发展。     

利拉鲁肽对博来霉素诱导大鼠肺纤维化的作用及其机制研究

目的：研究利拉鲁肽（liraglutide,Li）对博来霉素（bleomycin,BLM）诱导大鼠肺纤维化的影响及其机制。方法：将SD大鼠随机分为4组：对照组（Con）、BLM组、BLM+Li组、Li组。气管内一次性注入BLM（4 U/kg）后,BLM+Li组、Li组大鼠予以每日皮下注射Li（0.2 mg/kg）。28 d后处死大鼠,采用HE、Masson三色染色法评估肺组织病理情况;甲苯胺蓝染色法评估肥大细胞浸润情况;碱水解法测定肺组织羟脯胺酸水平;RTq PCR法检测肺组织I型胶原蛋白α1、Ⅱ型胶原蛋白α1、Ⅲ型胶原蛋白α1、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）?α、白介素（interleukin,IL）?6、IL?1β、转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF?β1）mRNA水平;ELISA法检测肺组织TNF?α、IL?6、IL?1β含量;免疫荧光法检测上皮细胞钙连蛋白（E?cadherin）、α?平滑肌肌动蛋白（α?smooth muscle actin,α?SMA）的表达;Western blot法检测E?cadherin、紧密连接蛋白1（zonaoccluden?1,ZO?1）、闭合蛋白（Occludin）、α?SMA、TGF?β1的表达。结果：与BLM组相比,BLM+Li组肺组织炎症细胞浸润、肺泡结构破坏及纤维化程度减轻,羟脯胺酸及胶原含量显著降低。Li能抑制BLM诱导的肺组织TNF?α、IL?6、IL?1β、TGF?β1表达上调,并抑制上皮细胞标志物E?cadherin、ZO?1、Occludin下调及间质细胞标志物α?SMA的上调。结论：Li可减轻BLM诱导的大鼠肺纤维化,这种保护作用与其减轻肺内炎症反应、降低TGF?β1的表达及抑制上皮细胞间质转化有关。Li有望成为未来治疗肺纤维化的候选药物之一。     

当归芍药散含药血清抑制内皮素-1介导的肝星状细胞收缩的机制研究

目的 探讨当归芍药散（Danggui Shaoyao San,DSS）含药血清对内皮素-1（endothelin,ET-1）介导的肝星状细胞内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS）和RhoA/ROCKⅡ蛋白表达的影响。方法 将实验动物分为空白组和给药组,分别提取血清,－20 ℃冻存备用。细胞实验分为6组：空白组,模型组,DSS含药血清高、中、低剂量组,Y-27632抑制剂组。肝星状细胞培养24 h后,采用Western blot法检测细胞内RhoA、ROCK Ⅱ、eNOS蛋白的表达水平。结果 与空白组比较,模型组RhoA、ROCK Ⅱ蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）,细胞内eNOS蛋白表达水平明显下降（P<0.05）;与模型组比较,DSS含药血清各剂量组RhoA、ROCKⅡ蛋白表达水平减少（P<0.05）,DSS含药血清高、中剂量组细胞内eNOS蛋白表达水平增多（P<0.05）。结论 DSS可通过抑制肝星状细胞RhoA、ROCK蛋白的表达,上调eNOS蛋白的表达,抑制ET-1诱导的肝星状细胞收缩。     

基于RhoA/ROCK/NF-κB信号通路探究益肾活血化痰方对动脉粥样硬化小鼠炎症反应的影响

目的 探讨益肾活血化痰方对动脉粥样硬化(AS)小鼠炎症反应的影响及机制。方法 采用高脂饲养法制备AS模型。将小鼠分为对照组、模型组、药物组(303 mg/kg益肾活血化痰方灌胃给药)、抑制剂组(仅给予5 mg/kg的ROCK抑制剂Y-27632腹腔注射)、阳性药物组(3.03 mg/kg的阿托伐他汀灌胃给药),每组10只。油红O染色观察小鼠主动脉组织斑块形成。ELISA法检测血清炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)水平,自动生化分析仪检测血脂(TG、TC、LDL-C、HDL-C)水平,免疫组化法检测主动脉组织IL-1β表达。Western blot法检测主动脉组织RhoA、ROCK蛋白表达及NF-κB p65磷酸化水平。结果 与对照组比较,模型组小鼠血清TG、TC、LDL-C、TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高(P<0.05),HDL-C水平显著降低(P<0.05),主动脉斑块面积增大(P<0.05),主动脉组织IL-1β、RhoA、ROCK蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著升高(P<0.05)。与模型组比较,药物组、抑制...     

骨松灵合剂对去卵巢大鼠骨组织雌激素受体表达的影响

目的探讨骨松灵合剂对去卵巢大鼠骨组织雌激素受体（ER）表达的影响。方法本实验采用免疫组织化学方法检测雌性大鼠去卵巢后骨组织中ER的变化,以及骨松灵合剂、雌激素治疗后对其产生的影响。结果椎体松质骨中ERα、ERB主要分布于骨小梁周围的成骨细胞、破骨细胞及骨髓基质细胞中,阳性颗粒为棕黄色,胞浆胞核均有表达,但胞核着色较深,与假手术组（sham组）（ERα：140．6±5．7;ERB：118．6±6．5）比较,去卵巢对照组（OVX组）（ERα：119．2±7．1;ERβ：80．8±3．7）大鼠骨小梁周围及骨髓中阳性细胞灰度明显降低（P〈0．01）,而中药组（ERα：137．5±4．9;ERβ：113．8±7．4）、E2组（ERα：143．8±6．2;ERβ：116．6±4．8）阳性细胞灰度与OVX组相比显著增加（P〈0．01）,中药组与E2组相比较差异无明显统计学意义（P〉0．05）。结论骨松灵合剂可以上调大鼠去卵巢后骨组织中ERα、ERβ表达,促进骨形成,可能是治疗骨质疏松症的重要机制。