对呼吸道合胞病毒亚单位疫苗局部免疫的体液、粘膜和细胞免疫应答

本文用霍乱毒素B链(CTB)作为佐剂在小鼠体内评价了呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)蛋白局部免疫作用.免疫4周龄CD1小鼠、每组4～6只,亚单位疫苗鼻内接种(inl)10μl(含F蛋白2μg和CTB5～10μg),肌肉接种(im)100μl(只含F蛋白2μg),在0和4周各免疫1次,活病毒疫苗inl 50μl[含5×10~5蚀斑形成单位(pfu)],只免疫1次.最后一次免疫后4周用RSV10~6pfu inl攻击,取攻击前的血清检测抗体,攻击后5天的鼻洗液(NW)和支气管肺泡灌洗液(BAL)滴定病毒效价和抗体.     

DNA免疫能保护小鼠抵抗2型单纯疱疹病毒阴道内攻击

本文报道已构建的1型单纯疱疹病毒(HSV-1)糖蛋白D(gD1)基因表达质粒pK-TS 153在小鼠中的免疫原性和对HSV-2粘膜攻击的抵抗作用.将DNA疫苗间隔3周肌肉接种体重为18～21g的雌性小鼠3次,每次接种含gDl质粒DNA 200μg的无菌盐水0.1ml,取第3次接种后3周的血清和用PBS冲洗的阴道分泌物,用ELISA测定抗体.对照组为年龄配对的未处理小鼠.结果从免疫的两组Swiss Webster小鼠和一组BALB/c小鼠的血清中均测到HSV特异性IgG,平均滴度为3.5～3.6log_(10).9只Swiss Webster小鼠中有7只阴道分泌物中测到HSV IgG,3组平均滴度分别为1.9、1.6和2.8log_(10).未从3     

用加入脂质体的病毒亚单位疫苗肺部免疫雌鼠后能诱导泌尿生殖道产生分泌型IgA应答

作者将流感病毒血凝素(HA)亚单位疫苗〔由甲型流感病毒NIB26(H3N2)制备〕与脂质体(蛋黄卵磷脂:胆固醇:三十二烷磷酸盐=4:5:1)混合,经下呼吸道免疫雌性小鼠,能诱导泌尿生殖道产生分泌型IgA抗体。 实验分4组进行。每组5只8～10周龄的雌性Balb/c小鼠。第1组于麻醉状态下鼻腔滴注50μl脂质体疫苗(全呼吸道免疫);第2组于未麻醉状态下鼻腔滴入20μl脂质体疫苗(上呼吸道免疫);第3组于麻醉状态下作气管切口,直接将50μl脂质体疫苗注入肺中;第4组肌肉注射或口服50μl疫苗作为对照组。肌肉或鼻腔接种的HA抗原均为5μg,脂质体剂量为1mg。免疫后4周,收集支气管洗液。连续三天以PBS冲洗阴道,收集洗液,合并每只小鼠的冲洗物。最后一次冲洗后,处死小鼠采血。用ELISA检测血清中抗HA特异性     

鼠疫组分疫苗免疫后小鼠血清抗体滴度检测与豚鼠效力观察

目的 根据对小鼠血清抗体滴度检测和对豚鼠的保护力观察,评估鼠疫组分疫苗的免疫效果.方法 通过氢氧化铝佐剂吸附15μg F1、15μg rV、15μg F1+15μg rV抗原,分别制成鼠疫单组分疫苗和双组分疫苗.采用2剂(0、2周)皮下接种途径,分别免疫NIH小鼠和豚鼠.以皮上划痕人用鼠疫活疫苗1剂免疫作为对照.免疫6周后,采用间接ELISA法检测小鼠血清IgG滴度,采用t检验作组间比较.与此同时,使用强毒鼠疫杆菌141株对豚鼠进行皮下攻击,以观察疫苗效力.结果 小鼠血清抗体检测结果表明,鼠疫组分疫苗组血清F1抗体或/和rV抗体滴度均高于鼠疫活疫苗组,差异有统计学意义(t=3.041、3.472、15.958、16.264,P值均＜0.01).豚鼠攻击试验结果显示,F1+rV组的存活率可达到90%(9/10),而F1组和rV组分别为50%(5/10)和20%(2/10).结论 鼠疫F1+rV双组分疫苗是有效的抗鼠疫疫苗,而单组分F1或rV鼠疫疫苗不能有效防御鼠疫杆菌攻击.     

H9N2禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶DNA疫苗对小鼠的免疫保护研究

目的 检测H9N2禽流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)DNA疫苗保护小鼠抵抗致死量同源病毒感染的能力.方法 通过小鼠肺对肺传代,建立禽流感病毒A/chicken/Jiangsu/07/2002(H9N2)小鼠适应株.同时,构建病毒HA和NA DNA疫苗,以不同剂量电击法免疫小鼠1或2次,在初次免疫后4周或加强免疫后1周用致死量(40 LD50)鼠适应型病毒攻击小鼠.通过测定小鼠血清抗体滴度、小鼠存活率和肺部病毒滴度来评价疫占的效果.结果 HA或NADNA 10μg免疫1次或3μg免疫2次均可保护小鼠抵抗致死昔H9N2病毒的感染.结论 低剂量HA或NA DNA可为抗H9N2禽流感病毒感染提供有效的免疫保护.     

流感血凝素DNA疫苗诱导体液免疫应答的检定

作者向小鼠股四头肌注射流感病毒A/PR/8/34株的血凝素(HA)DNA10ng～100μg,共1～3次,每次间隔3周.用血凝抑制(HI)试验和ELISA检测免疫后小鼠体内抗HA抗体水平.两项试验结果都显示HA DNA注射剂量和注射次数与产生的抗体水平直接相关.注射lμg HA DNA三次或一次注射10～100μg HA DNA的小鼠体内均可测到抗体,而100μg HA DNA诱导的抗体水平至少与感染活流感病毒(A/PR/8/34)后产生的抗体水平相仿.免疫后抗体水平至少可维持18个月.注射次数对抗体水平影响不大.     

通过无针头粉末接种技术进行表皮免疫:流感疫苗的免疫原性和对小鼠的保护作用

本文介绍一种新的表皮免疫 ( EI)技术 ,即通过氦动力装置将粉末疫苗有效接种入有活力的表皮的无针头粉末接种技术。　　为了比较 EI与肌肉、皮下、腹腔等途径针头注射的效果 ,作者用福尔马林灭活的Aichi/6 8流感疫苗免疫 BAL B/c小鼠 (每组8只 )。 EI组接种的粉末疫苗是用疫苗和海藻糖制成的直径为 2 0～ 53μm的微粒粉末 ,经氦动力粉末注射装置将含 5μg疫苗 (全病毒蛋白 )的 1 mg粉末接种于小鼠刮毛后的腹部皮肤。ELISA测定表明 ,EI组的血清 Ig G抗体明显高于肌肉和皮下注射组。EI加强免疫使血清抗体滴度升高 1 2 0 0 0 %。对加…     

志愿者接种不同剂量的三价流感病毒表面抗原疫苗后的抗体应答及持久性

作者使用3种不同剂量的三价流感病毒表面抗原疫苗和安慰剂,用双盲法深部皮下免疫132名志愿者,用单相辐射溶血(SRH)试验检测结果.本试验使用市售亚单位裂解疫苗,含A/曼谷/1/79(H3N2)、A/巴西/11/78(H1N1)和B/里昂/1847/79毒株.应用3种不同剂量的疫苗,第一种含各毒株血凝素(HA)24μg,其余两种各毒株HA含量分别为12μg和6μg.安慰剂为0.85%盐水.     

日本血吸虫脂肪酸结合蛋白DNA联合白细胞介素-12的免疫保护作用

目的探讨白细胞介素-12(IL-12)对日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(Sj14FABP)DNA疫苗的辅佐作用。方法大量制备pVIVO2、pVIVO2 IL-12、pVIVO2-Sj14FABP质粒DNA。48只雄性Balb/c小鼠随机分为A、B、C、D组，每组各12只，每只小鼠于免疫前1 d在右后腿股四头肌肌内注射075%盐酸布比卡因30 μL。A组给予0.9%氯化钠注射液100 μL，im；B组给予pVIVO2质粒DNA 100 μg，im； C组给予pVIVO2-Sj14FABP质粒DNA 100 μg，im；D组给予pVIVO2-Sj14FABP质粒DNA 50 μg 和pVIVO2-IL-12质粒DNA 50 μg，im。免疫30 d后，每只小鼠以(40±2)条尾蚴感染，感染45 d后，计数成虫及肝内虫卵；用ELISA法检测小鼠血清中IgG抗体水平。结果C、D组的减虫率分别为24.11%和38.83%,减卵率为27.20%和40.27%，差异有显著性（P＜0.05）；免疫30 d后小鼠血清IgG水平无明显升高，各组间差异无显著性 (P＞005)。结论pVIVO2-Sj14FABP能够诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力，IL-12是一种有效的血吸虫病DNA疫苗佐剂。     

鼻内接种的病毒体流感亚单位疫苗在雪貂动物模型中诱导强的局部和全身性保护性免疫[英]

最近的研究表明,病毒体颗粒作为疫苗传送系统能够在动物和人类诱生强的免疫应答。雪貂对流感病毒感染的敏感性和临床反应与人类十分相似,是研究流感疫苗的很好模型。英国伦敦大学Lambkin等对雪貂鼻内和肌肉接种病毒体疫苗,比较两种疫苗防止流感、减轻症状的效果以及免疫雪貂鼻内分泌物中流感病毒的排泄情况。试验疫苗含有三株流感病毒〔类A/北京/262/95(H1N1)、A/悉尼/5/97(H3N2)和B/哈尔滨/7/94〕血凝素各15μg,鼻内接种疫苗另含4μg大肠杆菌不耐热毒素作为黏膜佐剂。将雪貂分为3组,第1组分别于第0和第7天用专用喷雾器鼻内接种200μl试…     

用呼吸道合胞病毒亚单位疫苗粘膜免疫接种小鼠

作者评价了用纯化的呼吸道合胞病毒（RSV）融合(F）蛋白和霍乱毒素（CT）佐剂疫苗粘膜免疫接种小鼠的保护效力。 取4周龄小鼠进行实验。用于鼻内接种的10μl疫苗中含CT2.5μg、F蛋白3μg;肌肉接种的0.1ml明矾疫苗中含F蛋白3μg,用PBS作安慰剂。活病毒疫苗为2.5μl中含2×10~6空斑形成单位（PFU）病毒。在0和4周各免疫1次,8周时用RSV Long株5×10~6PFU攻击。病毒攻击后4天杀死小鼠,取血清,用酶免疫试验测定抗F蛋白和CT的IgG抗体,并作微量中和试验。无菌取鼻洗液,一部分立刻用HEp-2细胞滴定病毒滴度,一部分测定IgA。 动物共分9组,每组6只。实验结果表明,鼻内接种活RSV组血清中有高滴度抗F特异IgG具有强的中和力,鼻洗液中有IgA,病毒攻击后,所有小鼠均未检出病毒。鼻内和肌肉同时接种PBS组,无抗体产生,不能阻止病毒复制,鼻内病毒滴度为log_210.1±0.2PFU。鼻内或肌肉接种F蛋白组,鼻洗液中均无IgA,不能阻止病毒复制,但后者有血清抗体。鼻内和肌肉同时接种F蛋白组亦有高滴度血清抗体但无鼻洗液IgA,病毒复制力比PBS组低。鼻内单独接种CT组,虽无抗F抗体,但能轻度抑制病毒复制,鼻洗液中病毒滴度为log_26.8±2.2 PFU,每只小鼠皆查到病毒说明与免疫接种无关。鼻内接种F+CT组,血清中有高滴度F和CT特异性IgG并     

用辅助性T细胞表位增强猪带绦虫DNA疫苗的免疫保护反应

在猪绦虫融合抗原pCC27(本室从六钩蚴cDNA表达文库筛选的3个保护性抗原经拼接所得)基因片段5′末端引入1个通用型辅助性T淋巴细胞表位、2个谷胱甘肽还原酶的辅助性T淋巴细胞表位(TGG)，构建成DNA疫苗。通过肌肉注射途径将这种DNA疫苗免疫小鼠和仔猪。动物试验结果表明，TGG表位可提高小鼠血清pCC27抗体IgG、IgG1、IgG2a的水平，且长时间保持较高应答水平。用该疫苗免疫仔猪获得了89％的保护率。     

医学生接种低剂量(2μg)乙型肝炎疫苗:肌肉接种与皮内接种免疫原性的比较

作者采用随机对照试验,将165名抗-HBs和抗-HBc阴性的医学生分成两组,83人于上臂三角肌或三头肌肌肉接种2μg血源性乙型肝炎疫苗(IM组);82名于上臂掌侧皮内接种同样的疫苗(ID组).两组均于0、1、2和6个月接种4次,于0、2、6和7个月采血.用放射免疫法检测抗-HBs和抗-HEc.对第7个月时抗-HBs滴度大于10IU/l但小于1000IU/l者在12个月时加强接种1剂2μg疫苗,并于13个月时采血;若第7个月时,接种者的抗-HBs滴度小于10IU/l,则再接种1剂20μg标准剂量疫苗.     

大肠杆菌LT及LTB在免疫预防小鼠幽门螺杆菌感染中的佐剂性

在抗幽门螺杆菌 ( Hp)感染的保护性免疫中 ,大肠杆菌不耐热肠毒素 ( LT)是一种良好的粘膜佐剂。为了解重组 LT及其 B亚单位 ( L TB)在肠道外免疫中的佐剂性 ,作者用脲酶加 L T和 LTB免疫无特定病原体的 6～8周龄雌性 Swiss- Webster小鼠 ,共 3次 ,每次间隔 2周。口服免疫是用吸管将 2 5 μl含2 5μg脲酶和 1μg L T的混合液滴入小鼠口中 ;皮下免疫采用后背皮下注射 1 0 0 μl加或不加 L T、L TB或氢氧化铝 ( alum)佐剂的脲酶 ( 1 0μg) ;皮内免疫采用背部皮内注射 5 0μl含 1 0 μg脲酶和 L T或 LTB的混合液。末次免疫后 1周收…     

炭疽、Ebola病毒、马尔堡病毒以及委内瑞拉马脑炎病毒的单独和联合DNA疫苗的比较

作者首先构建了炭疽杆菌保护性抗原( PA)、Ebola病毒 ( EBOV)、Marburg病毒( MARV)和委内瑞拉马脑炎病毒 ( VEEV)DNA疫苗。并用基因枪在 0、4、8和 2 1周对新西兰白兔免疫 2 0 μg炭疽 PA DNA疫苗 ;而对照动物则在 0、4、8和 1 2周肌肉注射0 .5ml人用吸附炭疽疫苗 ( AVA)或同剂量非重组质粒 ;在 2 4周时皮下注射有毒力的热激活炭疽芽孢进行攻击。用 EBOV包膜糖蛋白 ( GP)或核壳蛋白 ( NP) DNA疫苗对 6～ 8周的 BAL B/c小鼠进行接种 ,再用 EBOV的小鼠适应株攻击。在 MARV的研究中 ,使用钴辐射过的纯化 MARV Ravn或 Mu…     

克服与Ⅱ类分子有关的对乙型肝炎疫苗的无应答

本文报告,与主要组织相容性复合物Ⅱ类分子有关的对抗原的无应答可通过将抗原与能被无应答者Ⅱ类分子识别的T辅助细胞决定簇(TDh)联结而得以克服.作者对4周龄SJL/J(H-2~S)或B10M(H2~f)雌性小鼠(已知对HBsAg的S区无应答)腹腔内注射200μl乳剂,含100μl弗氏完全佐剂、50μl重组乙型肝炎疫苗(含1μg HBsAg)和50μlPBS,或注射1μgHBsAg和60μgFIS混合物,FIS为在Balb/c 小鼠中具有TDh特性的抹香鲸肌红蛋白中106～118位氨基酸肽,可被SJL/J小鼠的Ⅱ类分子识别.30和45天时分别用等量HBsAg加弗氏不完全佐剂作加强接种.分别于首针后30、45和60天从小鼠后眼窝采血.用ELISA测定抗体滴度.     

新型A族链球菌多表位M蛋白疫苗经注射和粘膜免疫小鼠后的免疫原性

A族链球菌 ( GAS) M蛋白是 GAS感染时的重要免疫原和毒力因子 ,是主要的 GAS候选疫苗。本文研究了 M蛋白多表位构建物——杂聚物鼻腔及口服免疫小鼠后诱导的特异性粘膜和全身抗体应答 ,并与注射接种作了比较。　　将 4～ 6周龄的 B1 0 .BR雌鼠分成 3组 ,第 1组 1 0只小鼠于第 1天鼻腔给予 2 0 μl含30μg杂聚物和 1 0μg霍乱毒素 B亚单位( CTB)的盐水 (每鼻孔 1 0 μl) ,第 7和 1 4天加强 2次 ,第 2 1天收集唾液和血液。第 2组 1 5只小鼠于第 0、7、2 8、4 2、56和 72天口服 1 0 0～ 2 0 0μl含 30μg杂聚物和 2～ 1 0μg CTB的碳…     

通过同时注射共刺激分子基因优化DNA疫苗

为增强DNA疫苗在体内诱导细胞毒性T细胞（CTL）的能力,作者构建了表达1型人类免疫缺陷症病毒（HIV-1）包膜和gag/pol蛋白的DNA疫苗（pCEnv、pCGag/pol）以及表达CD80和CD86的质粒（pCD80、pCD86）。对6～8周龄BALB/c小鼠的后肢肌肉以100μl 0.25％丁哌卡因盐酸预处理,2天后分3组进行免疫,剂量为:pCEnv+pCD80各50μg、pCEnv+pCD86各50μg以及pCEnv50μg（溶于PBS中）。两周后以铬释放法测CTL应答。发现pCEnv+pCD86可显著增强主要组织相容性Ⅰ类限制性及CD8~+T细胞依赖性CTL应答。     

超声粉碎抗原免疫预防鼠幽门螺杆菌感染的研究

目的研究幽门螺杆菌超声粉碎抗原与霍乱毒素B亚单位组成的口服疫苗预防HP感染的作用,探讨其保护性免疫应答机制。方法用HP超声粉碎抗原2mg加CTB10μg作为免疫预防组,另设单纯HP超声粉碎抗原组、单纯CTB组和PBS组为对照组。免疫4周后以活菌攻击,观察各组小鼠的免疫保护率。攻击前后测定血清中IgA、IgG1和IgG2a抗体的变化,小鼠胃黏膜分泌性IgA抗体变化情况。结果免疫预防组小鼠免疫保护率为73.33%,而对照组全部感染HP(P<0.001);攻击前免疫预防组小鼠IgA、IgG1和IgG2a抗体均轻度升高,攻击后IgA、IgG1和IgG2a抗体进一步升高,以IgG2a抗体增高更为明显,IgG1/IgG2a比值从0.67下降至0.59。结论HP超声粉碎抗原加CTB可预防HP感染,并诱导出以Th1反应为主的保护性免疫应答。     

吸附于阳离子微粒的HIV-1 gag DNA粘膜免疫延长基因表达并增强局部和全身免疫

迫切需要开发一种安全有效而又廉价的抗人类免疫缺陷病毒 ( HIV)感染的疫苗 ,已经证实开发粘膜投递性疫苗是一良好的选择。作者探讨了用吸附于聚丙交酯 -乙交酯( PLG)微粒表面的 HIV- 1 gag DNA( PLG-DNA)疫苗鼻腔免疫小鼠后所诱导的局部与全身免疫应答的潜力。　　以 1 0 0 μg PL G- DNA或裸 DNA疫苗按2～ 3周间隔 4次鼻腔接种雌性 CB6 F1小鼠 ,于末次免疫后 1周处死小鼠。于处死前 1日采集小鼠血清并以 ELISA检测抗体水平 ;经鼻孔冲洗获得 30 0 μl鼻洗液 ;从每组 5只小鼠收集并混合颈淋巴结和脾脏 ,并将相应器官组织制备…