葡萄球菌核酸酶去C—末端的肽段52—79的分离纯化

目的 建立金黄色葡萄球菌核酸酶（ＳＮａｓｅ）去Ｃ－末端的５２（ＳＮ５２）和７９（ＳＮ７９）的提纯方法，并鉴定其纯度。方法 应用低温乙醇沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－１００柱层析分离纯化；十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和高效液相层析（ＨＰＬＣ）鉴定其纯度。结果 化的ＳＮ５２和ＳＡＮ７９级ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定为单一区带；ＨＰＬＣ鉴定均为一个峰。结论 纯     

人类胎盘碱性磷酸酶的分离纯化

①目的分离纯化人类胎盘碱性磷酸酶（ＰＬＡＰ）。②方法应用正丁醇抽提、丙酮沉淀、热处理、ＤＥＡＥ－纤维素和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析，从人类胎盘中提纯ＰＬＡＰ；聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和高压液相层析（ＨＰＬＣ）鉴定其纯度；十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳测其亚基分子量。③结果ＰＬＡＰ的纯化倍数为１６１倍，比活力为１３８ｍｍｏｌ·ｓ－１／ｇ；纯化的ＰＬＡＰ经ＰＡＧＥ鉴定为单一区带，ＨＰＬＣ分析为单一对称峰；测得酶的亚基分子量为６４．６９ｋｕ．④结论纯化的ＰＬＡＰ已达电泳纯和层析纯，可用于其结构与功能的研究     

基因工程人生长激素的纯化及鉴定

将在中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）中基因克隆表达的人生长激素（ｈＧＨ）培养物经Ｏｃｔｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ疏水层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析，ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ５２离子交换层析，得到了较纯的ｈＧＨ。通过ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），Ｎ－末端氨基酸分析及放免分析，证明基因工程ｈＧＨ与天然ｈＧＨ性质相符。     

人重组粒细胞集落刺激因子突变体rhG—CSF—Ala—17的纯化及 …

目的：建立高效简便的人重组粒细胞集落刺激因子突变体ｒｈＧ－ＣＳＦ－Ａｌａ－１７纯化工艺,并对其进行鉴定。方法：大肠杆菌表达的ｒｈＧ－ＣＳＦ－Ａｌａ－１７经包涵体洗涤、变性复性后,彩和ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ阴离子交换层析和Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５凝胶过波层析分离纯化。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＦＰＬＣ检测纯度,并进行Ｎ端氨基酸序列分析、比活性分析、紫外最大吸收光谱分析、内毒素检测等指     

东亚钳蝎（ButhusmarthensiiKarsch）毒镇痛活性肽的分离纯化及其镇痛作用研究

本文采用凝胶过滤及离子交换层析法从东亚钳蝎毒中分离纯化出一种蝎毒镇痛活性肽（ＳｃｏｒｐｉｏｎＡｎａｌｇｅｓｉｃＰｅｐｔｉｄｅ简称ＳＡＰ）．ＳＡＰ经ＰＡＧＥ得单一条带，ＨＰＬＣ层析为单一峰；以ＳＤＳ－ｐＡＧＥ法测定其分子量为９１２０，等电聚焦法测定ＳＡＰ的等电点为７．８５，ＳＡＰ对热比较稳定．用小鼠醋酸扭体法等３种动物实验模型测定ＳＡＰ的镇痛作用，结果表明均有较强的镇痛活性．     

加热法人心肌钙蛋白T的提取与纯化

目的以加热法从人左心室肌组织中提取并纯化心肌肌钙蛋白Ｔ（ＣＴｎＴ）。方法取新鲜人左心室肌经捣碎、淬取、加热、透析后提取ＣＴｎＴ,以ＤＥＡＥ５２柱层析纯化。结果经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳初步鉴定,每１００ｇ左心室肌经此法可得１１．７９ｍｇＣＴｎＴ纯品,纯化后的ｃＴｎＴ为单一条带,分子量为３７ＫＤ。结论本法提取ＣＴｎＴ步骤简单,纯度尚可,可做抗原使用。     

重组人血管抑素的纯化和生物活性鉴定

目的：纯化大肠杆菌表达的重组人血管抑素（ｒｈＡＧＮ）并鉴定其抗血管生成生物活性。方法：通过超声破碎、包涵体洗涤、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００ 凝胶过滤层析等步骤初步纯化ｒｈＡＧＮ,Ｌｏｗｒｙ法测定蛋白浓度,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析观察其纯度;应用 ＭＴＴ法观察在终浓度为 ０．１～３．０ ｍｇ／Ｌ范围内 ｒｈＡＧＮ对 １０ μｇ／Ｌ ＥＧＦ刺激的人真皮微血管内皮细胞系ＨＤＭＥＣ的增殖抑制活性;以ＰＢＳ为对照（ｎ＝５）,应用原位鸡胚绒毛尿囊膜（ＣＡＭ）技术观察１００ μｇ／只（ｎ＝５）和２００ μｇ／只（ｎ＝５）ｒｈＡＧＮ作用７２ ｈ对３０ｎｇ ｂＦＧＦ 诱导的鸡胚ＣＡＭ毛细血管生成的抑制作用。结果：①ｒｈＡＧＮ电泳纯度达到 ９６％,总回收率为 ６１．７％;②ｒｈＡＧＮ对 ＨＤＭＥＣ细胞增殖的最大抑制剂量约为 ２．０ ｍｇ／Ｌ,抑制率约９２．３％．半数最大抑制剂量在１．０ ｍｇ／Ｌ附近;③１００ μｇ／只和２００ μｇ／只ｒｈＡＧＮ组鸡胚ＣＡＭ 载样滤纸片下毛细血管数目分别为７９±２３条和３７±１１条,两组间比较差异显著（Ｐ＜０．０５）;与对照组（１４５±３６条）相比,均有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。结论：ｒｈＡＧＮ达到了较高的电泳纯度,     

掌叶半夏凝集素A的分离纯化及分析

首次从中草药掌叶半夏（ＰｔｎｅｌｌｉａｐｅｄａｔｉｓｅｃｔａＳｃｈｏｔｔ）中通过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００分子筛层析、ＤＥ－３２离子交换层析和制备电泳分离纯化出一种对兔红血球有血凝活性的凝集素，称之为掌叶半夏凝集素Ａ（ＰｉｎｅｌｌｉａｐｅｄｔａｉｓｅｃｔａｌｅｃｔｉｎＡ，ＰＰＬ－Ａ）。在ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳上ＰＰＬ－Ａ均显示出一条蛋白质着色带，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其Ｍｒ为１６．３×１０３，用等电聚焦电泳测得其等电点为５．８，经ＤＮＳ－Ｃｌ分析法分析其氨基末端为丙氨酸。对所含的１８种氨基酸作了定量分析。通过Ｓｃｈｉｆｆ试剂电泳染色法鉴定ＰＰＬ－Ａ为糖蛋白，用酶标凝集素结合法分析了糖链的结构，糖链部分含有甘露糖，岩藻糖和乙酰氨基葡萄糖。     

大蒜超氧化物歧化酶的纯化

采用二次丙酮沉淀法和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶柱及ＤＥＡＥ－５２离子交换柱分离工艺纯化了大蒜铜锌超氧化物歧化酶。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测得其分子量为３２９３４ｕ（３３２００Ｄａｌｔｏｎ），产品达电泳纯。该酶在２５８ｎｍ处呈最大吸收，对氰化物、过氧化氢敏感。     

长白山白眉蝮蛇毒磷脂酶A2的提纯

应用ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－５０离子交换层析法，从长白山白眉蝮蛇毒中分离出２个具有磷旨酶Ａ２（ＰｈｏｓｐｈｌｉｐａｓｅＡ２，ＰＬＡ２）活性的蛋白质组分。其中之一再经ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＡ－５２离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０凝胶过滤进一步纯化，经两种不同类型的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定均为单一条带，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０凝胶过滤呈单一对称的峰形。     

蜜蜂毒中蜂毒素的分离纯化方法及含量测定

目的：从蜜蜂毒中分离纯化蜂毒素（melittin),建立以SDS-聚丙烯酰 胺凝胶电泳(SDS－PAGE）及HPLC进行蜂毒素定性定量分析的方法。方法：用Sephadex G-25、Sephadex G-50、Sephadex G-75三步层析法从蜜蜂毒中分离纯化蜂毒素,以SDS－PAGE定性,以HPLC进行含量测定。结果：样品经SDS－PAGE测定为单一条带,相对分子质量约3000。HPLC含量测定,平均回收率为95．97％,相对标准差（RSD）为1．07％。结论：以上述分离纯化法可制得高纯度的蜂毒素,检测方法准确、可靠、简单。     

招远市5例异常血红蛋白的解链及纯化

①目的 对发现于招远市的异常血红蛋白(Hb)进行分子结构的研究。②方法 取异常Hb血样,以生理盐水洗去血浆蛋白质,再以蒸馏水处理压积红细胞以溶血,溶血液以-20℃的酸性丙酮处理提取珠蛋白,用尿素将珠蛋白解链,再经柱层析分离及纯化异常链。③结果 经羧甲基纤维素及交联葡聚糖层析分离及纯化得到异常α或β链,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)检查纯度,这些异常α或β链均为一条电泳带。④结论 纯化的异常α或β链均电泳纯净。     

日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

目的分离纯化日本血吸虫成虫(AWA)和未成熟虫卵(SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病免疫诊断、预防提供新的抗原分子。方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原,SDS—PAGE及银染色进行分析鉴定。结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原AwA18000u,SIEA42000u,SIEA130000u。结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法。     

广东菲牛蛭中有效抗凝物质的分离纯化

目的从广东菲牛蛭鲜体中分离纯化有效抗凝物质,并对其生化性质进行测定。方法用水提醇沉、离子交换、反相层析法等分离纯化广东菲牛蛭中的抗凝物质,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其蛋白的分子质量,并运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS／MS）进行分析。结果从广东菲牛蛭中分离出得到一种电泳纯的活性多肽,其相对分子质量为19．2kDa。所得菲牛蛭抗凝活性多肽每克蛋白所含单位抗凝活性≥2548000ATU,活性回收率约为53％。结论从广东菲牛蛭鲜体中分离出的活性抗凝多肽对凝血酶具有极强的抑制作用,开发应用前景广阔。     

胰岛素受体的分离纯化及其酪氨酸蛋白激酶特性的研究

本文利用差速离心,2%Triton X-100增溶,伴刀豆球蛋白A-琼脂糖,胰岛素-亲和胶及麦胚凝集素-亲和胶亲和层析分离纯化了人胎盘的胰岛素受体。纯化的受体经圆盘电泳及HPLC凝胶过滤得单一峰。SDS-电泳显示分子量分别为135000及90000的两条带。纯受体有自身磷酸化作用,且对外源性底物呈现酪氨酸蛋白激酶活性。有意义地是纯化的受体的磷酸化可受促癌剂促癌因子抑制。     

重组变形链球菌V+蛋白的表达和纯化

目的：探讨变形链球菌表面蛋白可变区（V＋）基因在大肠杆菌中高效诱导表达及其表达产物的进一步纯化。方法：将V＋基因以C端融合6个组氨酸的形式在E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达。His6融合表达产物经金属离子（Ni^2 )融体亲和层析分离纯化，SDS－PAGE电泳和Western blot印迹分析表达产物。结果：SDS－PAGE分析确定有与His6融合表达产物（His6-rV )理论相对分子质量一致的诱导表达条带，其表达量占全菌蛋白的20％左右，表达产物以可溶形式存在。进一步纯化目的蛋白，纯度可达90％。Western blot实验表明表达产物具有良好的抗原性。结论：His6融合表达载体可以高效地表达和纯化重组V＋蛋白。     

成团泛菌低分子脂多糖的分离纯化和鉴定

目的 :从革兰阴性非致病菌成团泛菌中提取、分离和纯化出细菌脂多糖 ,开发一种新的免疫调节剂 Pantoea agglomeranslipopolysaccharide(L PSp)。方法 :用 westphal热酚水法粗提 ,阴离子交换层析法进行纯化。应用 Tricine- SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳法 (Tricine- SDS- PAGE)、鲎变形细胞溶解物实验法对 L PSp的相对分子质量及活性进行鉴定。同时对 L PSp的化学成分进行分析。结果 :获得相对分子质量为 5 0 0 0的低分子脂多糖 (L PSp)。经鉴定 L PSp为含有 1 8%2 - keto- 3- deoxyoctulosonate (KDO)、总糖量为 6 4 .5 %、总纯度 >99.0 7%、重量比活性较 E.coli O1 1 1 :B4 L PS高 2 .6倍。结论 :用阴离子交换层析法可纯化出低相对分子质量高纯度水溶性的成团泛菌脂多糖 L PSp,与其它细菌 L PS相比 L PSp具有较高的 KDO含量     

亲和层析法从红芸豆中纯化红血球凝集素的研究

目的制备一种亲和树脂快速分离红血球凝集素。方法通过甲状腺球蛋白和树脂的耦联来从红芸豆粗提液中快速分离红血球凝集素。结果从红芸豆粗提液中快速地提取出了较纯的红血球凝集素,经SDS-PAGE上显示亚基分子量为32kD.并通过质谱确认为红血球凝集素,提取得到的凝集素使人红细胞50%凝集的蛋白质最低浓度为4μg/ml左右。结论成功制备亲和树脂并用于快速分离红血球凝集素。     

人重组CD137-Fc分子的构建与真核表达

目的构建人CD137-Fc基因的真核表达质粒，并表达有生物学活性的纯化人CD137-Fc融合蛋白。方法从cDNA文库中用PCR扩增cD137全长编码基因，并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后，继续用PCR扩增其膜外区cDNA，酶切后与hIgGIFc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中，转染293T细胞瞬时表达，用夹心ELISA检测其表达情况，经蛋白A亲和纯化，用SDS-PAGE与免疫印迹进行鉴定。结果测序证实构建的CD137与CD137-Fc cDNA阅读框完整，连接部位序列正确；ELISA证实cD137-Fc蛋白的表达；SDS-PAGE与免疫印迹证实其为人cD137-Fc蛋白。结论获得了纯化的hCD137-Fc融合蛋白，为探讨CD137在免疫自稳调节中的地位，以及探索CD137的其它生物学功能奠定了坚实的实验基础