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1.
目的 建立金黄色葡萄球菌核酸酶(SNase)去C-末端的52(SN52)和79(SN79)的提纯方法,并鉴定其纯度。方法 应用低温乙醇沉淀,SephadexG-50和Sephacryl S-100柱层析分离纯化;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和高效液相层析(HPLC)鉴定其纯度。结果 化的SN52和SAN79级SDS-PAGE鉴定为单一区带;HPLC鉴定均为一个峰。结论 纯 相似文献
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①目的分离纯化人类胎盘碱性磷酸酶(PLAP)。②方法应用正丁醇抽提、丙酮沉淀、热处理、DEAE-纤维素和DEAE-SephadexA-50柱层析,从人类胎盘中提纯PLAP;聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和高压液相层析(HPLC)鉴定其纯度;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳测其亚基分子量。③结果PLAP的纯化倍数为161倍,比活力为138mmol·s-1/g;纯化的PLAP经PAGE鉴定为单一区带,HPLC分析为单一对称峰;测得酶的亚基分子量为64.69ku.④结论纯化的PLAP已达电泳纯和层析纯,可用于其结构与功能的研究 相似文献
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将在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中基因克隆表达的人生长激素(hGH)培养物经Octyl-SepharoseCL-4B疏水层析,SephadexG-100凝胶过滤层析,DEAE-CelluloseDE52离子交换层析,得到了较纯的hGH。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),N-末端氨基酸分析及放免分析,证明基因工程hGH与天然hGH性质相符。 相似文献
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人重组粒细胞集落刺激因子突变体rhG—CSF—Ala—17的纯化及 … 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:建立高效简便的人重组粒细胞集落刺激因子突变体rhG-CSF-Ala-17纯化工艺,并对其进行鉴定。方法:大肠杆菌表达的rhG-CSF-Ala-17经包涵体洗涤、变性复性后,彩和DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Superdex75凝胶过波层析分离纯化。经SDS-PAGE和FPLC检测纯度,并进行N端氨基酸序列分析、比活性分析、紫外最大吸收光谱分析、内毒素检测等指 相似文献
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加热法人心肌钙蛋白T的提取与纯化 总被引:4,自引:2,他引:2
目的以加热法从人左心室肌组织中提取并纯化心肌肌钙蛋白T(CTnT)。方法取新鲜人左心室肌经捣碎、淬取、加热、透析后提取CTnT,以DEAE52柱层析纯化。结果经SDS-PAGE凝胶电泳初步鉴定,每100g左心室肌经此法可得11.79mgCTnT纯品,纯化后的cTnT为单一条带,分子量为37KD。结论本法提取CTnT步骤简单,纯度尚可,可做抗原使用。 相似文献
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重组人血管抑素的纯化和生物活性鉴定 总被引:4,自引:1,他引:3
目的:纯化大肠杆菌表达的重组人血管抑素(rhAGN)并鉴定其抗血管生成生物活性。方法:通过超声破碎、包涵体洗涤、Sephadex G-100 凝胶过滤层析等步骤初步纯化rhAGN,Lowry法测定蛋白浓度,SDS-PAGE分析观察其纯度;应用 MTT法观察在终浓度为 0.1~3.0 mg/L范围内 rhAGN对 10 μg/L EGF刺激的人真皮微血管内皮细胞系HDMEC的增殖抑制活性;以PBS为对照(n=5),应用原位鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)技术观察100 μg/只(n=5)和200 μg/只(n=5)rhAGN作用72 h对30ng bFGF 诱导的鸡胚CAM毛细血管生成的抑制作用。结果:①rhAGN电泳纯度达到 96%,总回收率为 61.7%;②rhAGN对 HDMEC细胞增殖的最大抑制剂量约为 2.0 mg/L,抑制率约92.3%.半数最大抑制剂量在1.0 mg/L附近;③100 μg/只和200 μg/只rhAGN组鸡胚CAM 载样滤纸片下毛细血管数目分别为79±23条和37±11条,两组间比较差异显著(P<0.05);与对照组(145±36条)相比,均有显著性差异(P<0.01)。结论:rhAGN达到了较高的电泳纯度, 相似文献
8.
首次从中草药掌叶半夏(PtnelliapedatisectaSchott)中通过SephadexG-100分子筛层析、DE-32离子交换层析和制备电泳分离纯化出一种对兔红血球有血凝活性的凝集素,称之为掌叶半夏凝集素A(PinelliapedtaisectalectinA,PPL-A)。在PAGE、SDS-PAGE和等电聚焦电泳上PPL-A均显示出一条蛋白质着色带,经SDS-PAGE测定其Mr为16.3×103,用等电聚焦电泳测得其等电点为5.8,经DNS-Cl分析法分析其氨基末端为丙氨酸。对所含的18种氨基酸作了定量分析。通过Schiff试剂电泳染色法鉴定PPL-A为糖蛋白,用酶标凝集素结合法分析了糖链的结构,糖链部分含有甘露糖,岩藻糖和乙酰氨基葡萄糖。 相似文献
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采用二次丙酮沉淀法和SephadexG-100凝胶柱及DEAE-52离子交换柱分离工艺纯化了大蒜铜锌超氧化物歧化酶。SDS-PAGE电泳测得其分子量为32934u(33200Dalton),产品达电泳纯。该酶在258nm处呈最大吸收,对氰化物、过氧化氢敏感。 相似文献
10.
长白山白眉蝮蛇毒磷脂酶A2的提纯 总被引:2,自引:0,他引:2
应用CM-SephadexC-50离子交换层析法,从长白山白眉蝮蛇毒中分离出2个具有磷旨酶A2(PhosphlipaseA2,PLA2)活性的蛋白质组分。其中之一再经DEAE-CelluloseA-52离子交换层析和SephadexG-50凝胶过滤进一步纯化,经两种不同类型的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定均为单一条带,SephadexG-50凝胶过滤呈单一对称的峰形。 相似文献
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蜜蜂毒中蜂毒素的分离纯化方法及含量测定 总被引:8,自引:0,他引:8
目的:从蜜蜂毒中分离纯化蜂毒素(melittin),建立以SDS-聚丙烯酰 胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及HPLC进行蜂毒素定性定量分析的方法。方法:用Sephadex G-25、Sephadex G-50、Sephadex G-75三步层析法从蜜蜂毒中分离纯化蜂毒素,以SDS-PAGE定性,以HPLC进行含量测定。结果:样品经SDS-PAGE测定为单一条带,相对分子质量约3000。HPLC含量测定,平均回收率为95.97%,相对标准差(RSD)为1.07%。结论:以上述分离纯化法可制得高纯度的蜂毒素,检测方法准确、可靠、简单。 相似文献
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①目的 对发现于招远市的异常血红蛋白(Hb)进行分子结构的研究。②方法 取异常Hb血样,以生理盐水洗去血浆蛋白质,再以蒸馏水处理压积红细胞以溶血,溶血液以-20℃的酸性丙酮处理提取珠蛋白,用尿素将珠蛋白解链,再经柱层析分离及纯化异常链。③结果 经羧甲基纤维素及交联葡聚糖层析分离及纯化得到异常α或β链,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)检查纯度,这些异常α或β链均为一条电泳带。④结论 纯化的异常α或β链均电泳纯净。 相似文献
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日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定 总被引:3,自引:1,他引:2
目的分离纯化日本血吸虫成虫(AWA)和未成熟虫卵(SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病免疫诊断、预防提供新的抗原分子。方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原,SDS—PAGE及银染色进行分析鉴定。结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原AwA18000u,SIEA42000u,SIEA130000u。结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法。 相似文献
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目的从广东菲牛蛭鲜体中分离纯化有效抗凝物质,并对其生化性质进行测定。方法用水提醇沉、离子交换、反相层析法等分离纯化广东菲牛蛭中的抗凝物质,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其蛋白的分子质量,并运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI—TOF—MS/MS)进行分析。结果从广东菲牛蛭中分离出得到一种电泳纯的活性多肽,其相对分子质量为19.2kDa。所得菲牛蛭抗凝活性多肽每克蛋白所含单位抗凝活性≥2548000ATU,活性回收率约为53%。结论从广东菲牛蛭鲜体中分离出的活性抗凝多肽对凝血酶具有极强的抑制作用,开发应用前景广阔。 相似文献
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本文利用差速离心,2%Triton X-100增溶,伴刀豆球蛋白A-琼脂糖,胰岛素-亲和胶及麦胚凝集素-亲和胶亲和层析分离纯化了人胎盘的胰岛素受体。纯化的受体经圆盘电泳及HPLC凝胶过滤得单一峰。SDS-电泳显示分子量分别为135000及90000的两条带。纯受体有自身磷酸化作用,且对外源性底物呈现酪氨酸蛋白激酶活性。有意义地是纯化的受体的磷酸化可受促癌剂促癌因子抑制。 相似文献
16.
甘晓榕 《山西医科大学学报》2002,33(1):1-2
目的:探讨变形链球菌表面蛋白可变区(V+)基因在大肠杆菌中高效诱导表达及其表达产物的进一步纯化。方法:将V+基因以C端融合6个组氨酸的形式在E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达。His6融合表达产物经金属离子(Ni^2 )融体亲和层析分离纯化,SDS-PAGE电泳和Western blot印迹分析表达产物。结果:SDS-PAGE分析确定有与His6融合表达产物(His6-rV )理论相对分子质量一致的诱导表达条带,其表达量占全菌蛋白的20%左右,表达产物以可溶形式存在。进一步纯化目的蛋白,纯度可达90%。Western blot实验表明表达产物具有良好的抗原性。结论:His6融合表达载体可以高效地表达和纯化重组V+蛋白。 相似文献
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成团泛菌低分子脂多糖的分离纯化和鉴定 总被引:3,自引:1,他引:2
目的 :从革兰阴性非致病菌成团泛菌中提取、分离和纯化出细菌脂多糖 ,开发一种新的免疫调节剂 Pantoea agglomeranslipopolysaccharide(L PSp)。方法 :用 westphal热酚水法粗提 ,阴离子交换层析法进行纯化。应用 Tricine- SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳法 (Tricine- SDS- PAGE)、鲎变形细胞溶解物实验法对 L PSp的相对分子质量及活性进行鉴定。同时对 L PSp的化学成分进行分析。结果 :获得相对分子质量为 5 0 0 0的低分子脂多糖 (L PSp)。经鉴定 L PSp为含有 1 8%2 - keto- 3- deoxyoctulosonate (KDO)、总糖量为 6 4 .5 %、总纯度 >99.0 7%、重量比活性较 E.coli O1 1 1 :B4 L PS高 2 .6倍。结论 :用阴离子交换层析法可纯化出低相对分子质量高纯度水溶性的成团泛菌脂多糖 L PSp,与其它细菌 L PS相比 L PSp具有较高的 KDO含量 相似文献
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目的构建人CD137-Fc基因的真核表达质粒,并表达有生物学活性的纯化人CD137-Fc融合蛋白。方法从cDNA文库中用PCR扩增cD137全长编码基因,并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后,继续用PCR扩增其膜外区cDNA,酶切后与hIgGIFc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中,转染293T细胞瞬时表达,用夹心ELISA检测其表达情况,经蛋白A亲和纯化,用SDS-PAGE与免疫印迹进行鉴定。结果测序证实构建的CD137与CD137-Fc cDNA阅读框完整,连接部位序列正确;ELISA证实cD137-Fc蛋白的表达;SDS-PAGE与免疫印迹证实其为人cD137-Fc蛋白。结论获得了纯化的hCD137-Fc融合蛋白,为探讨CD137在免疫自稳调节中的地位,以及探索CD137的其它生物学功能奠定了坚实的实验基础 相似文献