大鼠心肌缺血后心、肝组织应激改变的研究

目的本研究旨在探讨短暂和持续心肌缺血应激后大鼠心、肝组织病理改变及热休克蛋白（HSP70）的表达规律。方法复制大鼠短暂心肌缺血（BMI）5min后再灌20h及持续心肌缺血（MI）20h模型,取心、肝组织,用Western blotting法、免疫组化及HE染色,观察大鼠心、肝组织的病理变化和HSP70的表达规律。结果短暂和持续心肌缺血后心、肝组织病理形态均有改变,HSP70表达均显著增加,心、肝组织中HSP70表达在短暂心肌缺血再灌组增加显著且组织病变较轻,持续心肌缺血组HSP70表达较少且组织损伤较大。结论不同程度心肌缺血对心、肝组织病理改变和HSP70表达影响不同,短暂心肌缺血再灌比持续心肌缺血对心脏及肝脏组织损伤较小而刺激组织HSP70增加较多。     

不同应激刺激后大鼠心脏、肝脏热休克蛋白(HSP70)的产生规律

目的 探讨热处理、心肌缺血及缺血预适应后大鼠心脏、肝脏热休克蛋白(HSP70)的产生规律。方法 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定不同应激刺激条件下各组动物心、肝组织产生HSP70的含量。结果 心肌组织对热休克、缺血等外源性应激刺激呈高敏感性，且随刺激形式的不同而产生的热休克蛋白含量也不同；而肝脏的反应则比较迟钝，对多数损伤反应的应答呈现一致性，但仍然显著高于对照组。结论 采用热休克蛋白作为研究指标时，应考虑到它的多源性和非特异性。慎下研究结论。     

热休克预处理对大鼠缺血再灌注损伤心肌P-选择素表达的影响

目的观察热休克预处理对大鼠缺血再灌注损伤心肌P-选择素(PS)表达的影响。方法成年雌性Wistar大鼠40，只，随机分为3组。热休克组予全麻后高热处理致肛温达42士O．5℃维持15min制成热休克动物模型，24小时后热休克组及对照组结扎左冠状动脉前降支(LAD)1小时，再灌注2小时制成心肌缺血再灌注损伤动物模型，假手术组只于LAD处穿线。术毕测血清CK-MB、心梗范围、热休克蛋白70(HSP70)、PS。结果热休克组HsP70表达高于对照组及假手术组(P＜O．05)，后两组比较差异无显著意义(P＞O．05)；热休克组心梗范围、血清CK-MB、PS表达皆少于对照组(P＜O．05)；HSP70的表达与Ps的表达成负相关(r=-O．560)。结论热休克预处理对心肌缺血再灌注损伤有保护作用；Ps参与了心肌缺血再灌注损伤；HSP70可能有抑制缺血再灌注损伤心肌Ps表达的作用，这或许是热休克预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的另一保护机制。     

热休克蛋白70在内毒素血症大鼠心肌中的表达及已酮可可碱的影响

目的：探讨热休克蛋白70在内毒素血症大鼠心肌组织中的表达及已酮可可碱的影响。方法：采用直接注射内毒素的方法建立大鼠急性内毒素血症模型。18只Wistar大鼠随机分成3组，假手术组，内毒素组和PTX组。分别采用免疫组织化学法和免疫印迹法检测心肌组织HSP70蛋白。结果：内毒素组免疫组织化学法与免疫印迹法检测心肌组织HSP70蛋白水平与假手术组比较都明显增强（P〈0．01）；予PTX干预后，免疫组织化学法与免疫印迹法检测心肌组织HSP70蛋白水平与内毒素组比较也都明显增强（P〈0．01）。结论：内毒素血症大鼠心肌组织内的HSP70蛋白表达可明显增高，PTX干预可以进一步增高内毒素血症大鼠心肌组织内的HSP70蛋白表达，从而进一步加强对心肌的保护作用。     

5-氟尿嘧啶对口腔鳞癌细胞株热休克蛋白27／70表达的影响

目的：为探讨热休克蛋白27和热休克蛋白70在口腔鳞状细胞癌化疗中的意义。本实验选用口腔鳞状细胞癌细胞株OSC-4作为研究对象t随机分组。实验组加100μg／mL 5-氟尿嘧啶。方法：用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot检洲HSP27和HSP70的表达。结果：OSC-4细胞经5-Fu处理后,MTT和流式细胞仪显示5-Fu抑制OSC-4细胞的存活率（P〈0．05）．并存在时间和剂量依赖。Western Blot结果显示HSP27和HSP70在OSC-4中均有表达,在OSC-4细胞中5-Fu能诱导HSP27和HSP70的表达（P〈0．05）。HSP27和HSP70在不同口腔鳞状细胞癌细胞株中均有表达,表达有差异（P〈0．05）。结论：5-Fu能诱导OSC-4细胞的凋亡,并呈现时间与剂量依赖;5-Fu能上调HSP27和HSP70的表达。     

热休克预处理对大鼠胰腺移植后缺血性再灌注损伤的抑制作用

摘要 目的：通过热休克预处理（HPC）,探讨减轻大鼠胰腺移植后缺血再灌注损伤的发生机制。 方法：热休克预处理后动态检测大鼠胰腺组织热休克蛋白表达。建立大鼠胰腺移植缺血再灌注模型,选择表达热休克蛋白高峰时段供体大鼠胰腺移植作为实验组,未预处理的供体大鼠胰腺移植作为对照组。胰腺移植后6h,检测静脉血及移植胰腺。Western blot法检测胰腺组织中热休克蛋白70（HSP70）的表达,免疫组化法测定肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达。碘淀粉比色法检测血淀粉酶水平。光镜观察胰腺病理改变。 结果：HPC后供体大鼠胰腺中HSP70的表达在12h 达到高峰,与其它各时段比较具有显著差异（P<0.05）,与未预处理组比较差异也显著（P<0.01）,48h恢复到原来水平。对照组胰腺组织中TNF-α、中性粒细胞、血淀粉酶的水平明显升高,与假手术组相比差异显著（P<0.01）。实验组降低了胰腺组织中TNF-α、中性粒细胞、血淀粉酶的水平,与对照组比较差异具有统计学意义。（P<0.05）。实验组胰腺间质水肿及出血明显低于对照组。 结论：热休克预处理可以减轻大鼠胰腺移植后缺血再灌注损伤, 热休克预处理的延迟保护作用与HSP70的诱导生成有关。     

HSP70对组织细胞的保护

1962年科学家Ritossa在研究果蝇唾液腺的染色体中首次发现了热休克蛋白（heatshockprotein，HSP）。HSP是指所有生物细胞在应激原诱导下所产生的高度保守的一组蛋白质，根据其分子量大小可将HSP分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60和sHSP等5个家族。其中最重要的家族之一是HSP70，在正常生理状态下HSP70表达水平很低，而理化刺激（热、重金属、辐射和药物等）、病理刺激（感染、氧化应激、肿瘤、心脑血管系统疾病和神经系统疾病等）和生理刺激（细胞分裂生长、分化、组织器官发生和饥饿）等应激原均能显著诱导其表达，提高细胞应激能力，保护细胞不被刺激损伤。目前认为HSP70在应激中具有诸多作用，是一种非特异性组织细胞保护蛋白，对各脏器组织细胞均有保护作用。     

冠心病患者外周血热休克蛋白70表达的临床意义

目的探讨冠心病患者外周血单核细胞热休克蛋白70（HSP70）阳性表达率和血清高敏C反应蛋白（hsCRP）浓度的变化与冠状动脉病变稳定性及病变程度的关系。方法选择冠状动脉造影（CAG）确诊并分层冠心病60例[急性冠脉综合征（ACS）38例,稳定性心绞痛（SAP）22例]和非冠心病患者（对照组）20例,以流式细胞术测定单核细胞HSP70阳性表达率,同期ELISA法测定血清hsCRP浓度。结果ACS组HSP70阳性表达率及血清hsCRP浓度明显高于SAP组及对照组（P〈0．05）;冠脉多支血管病变（MV）组HSP70表达水平及血清hsCRP浓度高于双支病变（DV）及单支病变（SV）组（P〈0．05）;而两项指标与患者冠脉病变形态类型无关（P〉0．05）;外周血单核细胞HSP70阳性表达率与血清hsCRP浓度呈显著正相关（P〈0．01）。结论HSP70和hsCRP两项指标与冠脉病变程度及发病性质有关,而与病变形态无关。     

丹参酮II A影响大鼠急性脊髓损伤HSP70神经元的表达

目的：通过对Wistar大鼠给予尾静脉注射丹参酮ⅡA,影响大鼠急性脊髓损伤热休克蛋白质70（HSP70）神经元水平的表达。方法采用Allen’s打击法建立急性脊髓损伤（ASCI模型）,观察丹参酮ⅡA组（STS组）、甲基强的松龙组（MP组）、安慰剂对照组（NS组）、不给药对照组（NO组）,观察在伤后1、2、4、8 h时间点HSP70阳性表达。结果四组HSP70在ASCI后组织中显著存在,且各组HSP70表达趋势随着各个时段上升呈上升趋势。①急性脊髓损伤大鼠不做任何处理或给予生理盐水的情况下, HSP70表达差异无统计学意义（P〉0.05）。②当注射丹参酮ⅡA或甲基强的松龙时,脊髓组织中HSP70表达差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。组间比采取t检验,其结果显示：①给脊髓损伤模型注射生理盐水和不给药时,对脊髓组织中HSP70表达是一致的（P〉0.05）。②给强的松龙治疗脊髓损伤作用优于丹参酮ⅡA注射液（P〈0.05）。结论①急性脊髓损伤过程中神经元受到损伤致使HSP70表达增高是产生应激性保护的一种标志,该标志在HSP 70表达中对受损神经元起到保护作用,也使得HSP70在ASCI后表达增强。②脊髓损伤后各组的HSP70表达均呈增加趋势。STS组和MP组HSP70随时段上升阳性神经元细胞表达上升,亦呈连续性, STS组数值虽低于MP组数值,但具有可比性。所以二者在急性脊髓损伤后HSP70阳性神经元表达层面上具有相同作用。     

热休克蛋白70（HSP70）在肝癌中的表达及其临床意义

目的：观察热休克蛋白70（heat shock protein HSP70）在肝癌组织及正常肝组织中的表达，探讨其在肝癌发生中的作用。方法：免疫组化S—P法检测HSP70 43例肝癌组织中的表达情况。结果：HSP70阳性表达在肝癌组织中较正常肝组织高。淋巴结转移组HSP70表达高于无转移组．肝癌组织中喝酒组HSP70表达高于不喝酒组。结论：HSP70在肝癌组织中的高表达与癌细胞的增殖转移有关，可能是调控肿瘤细胞增殖及凋亡的重要基因，可作为肝癌辅助诊断及判断预后的重要指标。     

热休克蛋白70对幼鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的研究川芎嗪（TMP）诱导热休克蛋白（HSP）70对未成熟心肌缺血再灌注损伤的保护作用,探讨其干预心肌缺血再灌注损伤的作用机制及合理用药途径,为临床使用提供理论依据。方法建立幼鼠在体心肌缺血再灌注模型。将96只体重60-75g SD幼鼠（〈21d）,随机分为3组：（1）假手术（SC）组,（2）缺血再灌注（IR）组,（3）TMP预处理后缺血再灌（TMP＋IR）组;每组再随机分为4个亚组：12h亚组、24h亚组、36h亚组、48h亚组,各亚组分别于腹腔药物注射[TMP＋IR组腹腔注射TMP（100mg／kg）,SC组与IR组腹腔注射等量0．9％氯化钠溶液]后12h、24h、36h、48h制作心肌缺血再灌注模型。测定血清中肌酸激酶同工酶（CK—MB）、乳酸脱氢酶（LDH）两种酶的含量,测定幼鼠心肌内HSP70的含量．应用电镜观察幼鼠心肌细胞超微结构的病理改变。结果IR组和TMP＋IR组各时间点血清中CK-MB、LDH含量明显高于SC组（P〈0．01）;IR组心肌中HsP70表达量较SC组略增加,TMP＋IR组HSP70的表达明显增加;电镜心肌细胞超微结构观察：SC组心肌细胞结构基本正常,IR组损伤最严重,TMP＋IR组心肌细胞损伤较IR组有明显改善。结论HSP70的表达可以减轻未成熟心肌的缺血再灌注损伤,可以提高未成熟心肌对损伤性应激的耐受能力。     

热休克蛋白70调节突触融合蛋白Syntaxin 1在哮喘中的表达

目的探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)对突触融合蛋白Syntaxin1(SYX1)在哮喘大鼠肺组织中表达水平的调节及相互作用。方法 30只健康Wistar大鼠按随机原则分为对照组、哮喘组、哮喘+地塞米松组,每组10只。通过卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏、激发建立哮喘大鼠模型,采用免疫组织化学、逆转录PCR及蛋白免疫印迹检测3组间HSP70及SYX1基因和蛋白表达水平,免疫共沉淀技术检测HSP70与SYX1的相互关系。结果与对照组比较,哮喘组HSP70及SYX1基因和蛋白表达水平均增加,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05);与哮喘组比较,哮喘组+地塞米松组HSP70及SYX1基因与蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05),但与正常对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05,P>0.05)。免疫共沉淀结果显示在哮喘大鼠肺组织中HSP70与SYX1存在相互作用。结论 HSP70及SYX1在哮喘肺组织中表达水平均明显增高,HSP70通过调节SYX1表达水平及相互作用共同参与哮喘的发病机制,且其表达受地塞米松的抑制,为临床寻找药物干预新的靶点提供了理论依据。     

大黄对肠缺血再灌注大鼠肠黏膜和通透性的影响及其机制

目的：观察肠缺血再灌注损伤后,肠内补充大黄对大鼠肠黏膜结构和通透性的影响,并探讨其作用机制。方法：雄性SD大鼠30只,随机分为3组（n=10）。大黄组：夹闭肠系膜上动脉建立肠缺血再灌注损伤模型,肠外营养＋肠内大黄液;模型组：建立肠缺血再灌注损伤模型,肠外营养;对照组：分离肠系膜上动脉但不夹闭,自由饮食。术后第3天收集尿液,采用双糖法（乳果糖/甘露醇）反应肠黏膜通透性,第6天处死大鼠留取小肠检测黏膜结构和热休克蛋白70（HSP70）含量。结果：对照组和大黄组肠黏膜通透性均低于模型组（P〈0.01）。大黄组肠黏膜通透性虽高于对照组,但无统计学意义（P〉0.05）;模型组小肠绒毛高度、黏膜厚度显著低于对照组和大黄组（P〈0.01）,大黄组接近于对照组（P〉0.05）;小肠全层厚度各组间无统计学差异;对照组和大黄组HSP70含量均高于模型组（P〈0.01）。大黄组HSP70含量虽略高于对照组,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：大黄可减少肠缺血再灌注损伤引起的肠黏膜通透性增加,保护肠黏膜结构。大黄的肠道保护作用与多种机制有关,诱导小肠HSP70表达增加可能是其中之一。     

中药金叶败毒制剂对鼠巨细胞病毒感染后的细胞病变及热休克蛋白70的表达影响

目的体外研究中药金叶败毒制剂对小鼠巨细胞病毒感染后的细胞病变及热休克蛋白70（HSP70）表达的影响,为研究金叶败毒（JYBD）抗小鼠巨细胞病毒（MCMV）分子机制打下基础。方法体外培养小鼠胚肺细胞,加入病毒吸附2h,弃病毒液,加入最大无毒浓度TD0金叶败毒,分别作用12、24、72、120h,收获细胞,设对照组;倒置显微镜下观察细胞形态学变化,免疫组织化学方法检测HSP70表达情况。结果细胞病变情况：与病毒对照组比较,金叶败毒组：12～72h细胞胞浆空泡变性程度均减轻,未观察到病变变圆细胞,120h观察到出现病变变圆细胞,部分正常细胞胞浆空泡变性程度减轻。与金叶败毒组比较,GCV组细胞胞浆空泡变性程度与之相当,但120h未观察到病变变圆细胞。金叶败毒组：12hHSP70表达增强,72h继续上升,120h达最高点。与正常细胞对照组比较,各时相HSP70表达强度差异均有统计学意义（P〈0.05）;与病毒组比较,12、24h2个时相HSP70表达强度差异均有统计学意义（P〈0.05）。更昔洛韦组：与金叶败毒作用类似,可增强病毒感染细胞内HSP70表达。结论金叶败毒制剂可抑制MCMV细胞病变作用,还能增强病毒感染细胞HSP70表达,可能是其抗MCMV分子机制。     

缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注不同时相心肌热休克蛋白70及血清超氧化物歧化酶和丙二醛的影响

目的 探讨缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤不同时相心肌热休克蛋白70（HSP70）和血清超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛的影响.方法 建立近交系Lewis大鼠颈部异位心脏移植左心作功模型,受体大鼠存活2d后,采用随机数字表法分为3组：①缺血再灌注组,结扎移植心脏冠状动脉左前降支30 min后再灌注3、6、12、24 h,2、4及7d,每个时相点8只受体鼠.②缺血后处理组,移植心脏缺血30 min,在再灌注前1 min给予再通10s,阻断10 s,连续3个循环.每个时相点8只受体鼠.③假手术组,穿线做套环,但不收紧结扎线.再灌注结束后检测大鼠移植心脏心肌HSP70表达和血清SOD及丙二醛值.结果 与假手术组比较,在再灌注时间3、6、12、24 h,2、4、7d等7个时相点,缺血再灌注组和缺血后处理组心肌HSP70表达水平明显增高（P＜0.01）,血清SOD值明显降低（P＜0.05）,丙二醛值明显升高[HSP70表达水平：（7.22±0.98）、（9.77±1.98）、（10.02 ±2.14）、（11.12 ±2.83）、（10.76±2.65）、（9.23±2.01）、（8.22±1.12）和（33.38±9.12）、（36.15±9.67）、（40.56±10.34）、（50.01 ±13.17）、（47.78±10.99）、（42.21 ±10.58）、（35.35 ±8.11）比（0.91 ±0.17）,SOD值：（35±6）、（34±4）、（31 ±4）、（26±3）、（29±4）、（35±7）、（37±5）和（44±7）、（41±6）、（40±5）、（32±4）、（37±5）、（44±9）、（45±8）μg/L比（57±10） μg/L,丙二醛值：（0.53±0.06）、（0.57±0.06）、（0.71±0.11）、（1.34±0.25）、（0.77±0.11）、（0.68±0.09）、（0.49±0.05）和（0.47±0.05）、（0.50±0.06）、（0.60±0.08）、（1.08±0.19）、（0.62±0.11）、（0.59±0.07）、（0.43±0.05） mmol/L比（0.36±0.04） mmol/L]（P＜0.05）;与相同灌注时间的缺血再灌注组比较,缺血后处理组在7个时相点的心肌HSP70表达水平明显增高（P＜0.01）,血清SOD值明显升高（P＜0.05）、丙二醛值明?     

加热对肿瘤细胞热休克蛋白70产生的影响及意义

目的探讨加热对肿瘤细胞热休克蛋白70产生的影响,为热疗治疗肿瘤提供理论依据。方法对体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721进行加热,42℃,2h,用超声细胞破碎仪破碎已经加热的SMMC-7721细胞,高速离心,用SDS-PAGE和Western blot方法对上清中HSP70的表达进行鉴定。结果加热42℃,2h的肝癌细胞热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）有较高表达。结论经加热42℃,2h的肝癌细胞热休克蛋白70（HSP70）有较高表达,为热疗治疗肿瘤提供了实验数据。     

PKC-ERK1/2通路在臭氧预处理减轻大鼠肝缺血再灌注损伤的作用

目的 探讨PKC介导的ERK1/2信号通路在臭氧（ozone，O₃）预处理大鼠肝缺血再灌注中的作用。方法 60只大鼠随机分成6组：对照组、缺血再灌注组、O₃预处理组、O₃预处理+ERK抑制剂组（O₃+PD98059组）、O₃预处理+PKC抑制剂组（O₃+CHE组）、缺血再灌注+PKC激活剂组（IR+PMA组）。除对照组外，其余各组均进行肝缺血再灌注手术。O₃相关组予O₃预处理，调节剂组予相应的调节剂。分别检测各组的血清中丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转氨酶水平，进行病理学观察，Western blotting检测肝组织中的热休克蛋白70（heat shock protein 70，HSP70）、蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）和细胞外调节蛋白激酶1/2（extracellular regulated protein kinases，ERK1/2）的表达水平。结果 与对照组相比，缺血再灌注组肝组织细胞损伤明显加重（P<0.05），肝组织中PKC、ERK1/2的磷酸化和HSP70的表达水平明显升高（P<0.05）。与缺血再灌注组相比，O₃相关组肝组织细胞损伤明显减轻（P<0.05），肝组织中PKC、ERK1/2的磷酸化和HSP70的表达水平明显升高（P<0.05）。与O₃预处理组相比，当使用PKC和ERK1/2抑制剂后，肝组织细胞损伤明显加重（P<0.05），肝组织中PKC、ERK1/2的磷酸化和HSP70的表达水平明显降低（P<0.05）。结论 O₃氧化预处理可通过激活PKC介导的ERK1/2信号通路，使HSP70的表达水平明显增加，使大鼠肝脏缺血再灌注损伤明显减轻。