牛磺酸对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

观察牛磺酸(taurine，Tau)在血管紧张素II(angiotensin II，Ang II)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblast，CFb)增殖过程中对一氧化氮(nitric oxide，NO)及蛋白激酶C alpha(p-PKCα)的影响，以探讨牛磺酸抑制CFb增殖的信号转导途径。胰酶消化法分离培养新生大鼠CFb，用Ang II诱导促进其增殖，采用MTT法检测细胞增殖；ELISA法测定I型胶原、 III型胶原的含量；流式细胞仪检测细胞周期；硝酸还原酶法检测细胞上清液NO含量；Western blotting法检测p-PKCα含量。牛磺酸(40、 80和160 mmol·L^-1)可抑制Ang II诱导的CFb增殖及I型胶原、III型胶原合成增加(P<0.05，P<0.01)，并使细胞G₀/G₁期百分率增加，S期细胞百分率降低(P<0.05，P<0.01)。牛磺酸明显抑制p-PKCα的蛋白表达， 提高CFb NO含量， 与Ang II组比较差别具有明显统计学意义(P<0.05， P<0.01)。牛磺酸通过降低p-PKCα的表达而提高CFb NO的含量，使CFb的增殖和胶原合成受到抑制。     

牛磺酸通过抑制PKCα抗心肌成纤维细胞增殖的作用

观察牛磺酸 (taurine, Tau) 在血管紧张素Ⅱ (angiotensinⅡ, AngⅡ) 诱导新生大鼠心肌成纤维细胞 (cardiac fibroblast, CFb) 增殖过程中对细胞周期调控蛋白p27、Cyclin D₁及核因子-κB (NF-κB) p65的影响, 以探讨牛磺酸抑制CFb增殖的途径。胰酶消化法分离培养新生大鼠CFb, 用AngⅡ诱导促进其增殖, 采用四甲基偶氮唑盐 (MTT) 法检测细胞增殖; Western blotting法检测p-PKCα含量; 流式细胞仪检测细胞周期调控蛋白p27表达; 免疫细胞化学染色检测Cyclin D₁蛋白表达; 免疫荧光细胞化学染色法检测NF-κB p65蛋白的核表达。牛磺酸 (80和160 mmol·L⁻¹) 可明显抑制p-PKCα的蛋白表达。牛磺酸 (80 mmol·L⁻¹) 可增加p27的蛋白表达 (P < 0.05); 明显抑制NF-κB p65的核转位, 与AngⅡ模型组比较差异具有统计学意义 (P < 0.01), 而以上作用均是通过抑制PKCα在胞膜的表达而实现的, 且PKC抑制剂与Tau合用呈现协同作用。牛磺酸通过抑制p-PKCα的表达而增加p27的蛋白表达、抑制NF-κB p65的核转位, 从而抑制CFb的增殖。     

牛磺酸对心肌成纤维细胞细胞周期的影响及其机制的研究

目的研究牛磺酸(taurine,Tau)对血管紧张素Ⅱ(an-giotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiacfibroblast,CFb)增殖的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法用AngⅡ诱导新生大鼠CFb增殖,建立心肌纤维化模型,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;羟脯氨酸测定检测胶原含量;流式细胞仪检测细胞周期及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物p27的变化;免疫细胞化学法测定细胞周期调控蛋白D(cyclin D)及p27蛋白的含量。结果Tau(40、80、160mmol.L-1)可明显抑制AngⅡ诱导的CFb增殖与胶原合成,同AngⅡ组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01),且呈现剂量依赖性。流式细胞仪检测表明Tau在80、160mmol.L-1可促进p27的蛋白表达;细胞G0/G1期百分率随Tau浓度增加而增加,S期细胞百分率随Tau浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。免疫细胞化学染色结合图像分析系统的分析结果也表明Tau可增加p27的蛋白表达,与AngⅡ组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。结论牛磺酸通过促进p27的表达,使细胞周期阻滞于G0/G1期,而抑制CFb增殖和胶原含量的增加。     

醛固酮对体外新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原代谢的影响

目的:探讨醛固酮对体外新生大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖及胶原代谢的影响并探讨其机制。方法:体外差速贴壁法分离纯化培养CFs,试验分为4组:对照组、醛固酮组、醛固酮+螺内酯组、醛固酮+洛沙坦组。各组作用24h后,MTT法检测CFs增殖;流式细胞分析仪分析细胞周期;分光光度法检测细胞上清中羟脯氨酸含量;免疫细胞化学荧光染色法检测纤维连接蛋白(FN)及增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白表达。结果:与对照组比较,醛固酮组可显著增强细胞活性,使S期细胞百分率增加,G0/G1期细胞百分率下降,羟脯氨酸含量增加,PCNA、FN的蛋白表达增强(P<0.01)。与醛固酮组比较,醛固酮+螺内酯组的CFs增殖及胶原合成被抑制,PCNA、FN的蛋白表达下降(P<0.05),醛固酮+洛沙坦组抑制CFs的增殖及胶原合成,FN的蛋白表达降低(P<0.01),而PCNA的蛋白表达无明显改变(P>0.05)。结论:醛固酮通过其受体及AT1受体途径促进CFs增殖及胶原合成,且醛固酮受体通路占主导地位;其作用机制可能与促进PCNA、FN的蛋白表达有关。     

牛磺酸对大鼠心肌保护作用的实验研究

根据血清乳酸脱氨酶1（SLDH1）同工酶的理论和技术，探讨牛磺酸对大鼠心肌的保护作用，与不服药组比较，SLDH1活性之间有统计学的显著差异（P＜0．01，n＝6）。     

牛磺酸抑制心肌成纤维细胞增殖的实验研究

目的：观察牛磺酸（Taurine，Tau）在血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）诱导新生大鼠心肌成纤维细胞（cardiac fibroblast，CFb）增殖的过程中对蛋白激酶C alpha（p-PKCa）及其下游信号转导途径的影响。方法：胰酶消化分离培养新生大鼠CFb，以AngⅡ诱导促其增殖，运用PKC抑制剂作为工具药，     

异丙基肾上腺素导致的心肌肥厚大鼠心肌牛磺酸转运障碍

目的　观察异丙基肾上腺素 (isoproterenol,Iso)导致的心肌肥大大鼠的心肌细胞牛磺酸 (taurine ,TAU)跨膜转运功能的改变。方法　Iso诱导大鼠心肌肥厚 ;氨基酸分析仪测牛磺酸含量 ;用3H标记的牛磺酸测定心肌牛磺酸转运及牛磺酸与心肌浆膜结合功能。结果　Iso组动物较对照组的血浆和组织牛磺酸含量分别升高 49% (P <0 0 1)和降低35 % (P <0 0 1) ,心肌3H 牛磺酸摄入减少。 5min时释放量与总摄入百分比高于对照组 6 0 % (P <0 0 1) ,Iso组释放量增加。Iso心肌浆膜3H 牛磺酸结合量较对照组低 ,最大结合速率 (Bmax)较对照组低 45 % (P <0 0 5 ) ,治疗组较Iso组Bmax值增加 116 % (P <0 0 1) ,Kd值无明显差异。结论　Iso诱导的心肌损伤存在牛磺酸转运障碍 ,给予外源性牛磺酸可以有效防治其心肌牛磺酸转运障碍     

牛磺酸对大鼠心肌Ca~(2+)调节作用的研究

研究了牛磺酸对大鼠离体左心室肌~(45)Ca内流的影响。对照组~(45)Ca内流与KH液中Ca_-~(2+)浓度有关。当Ca~(2+)浓度分别为0.62(低Ca~(2+)),1.25(正常Ca_-~(2+))和1.87(高Ca_-~(2+))mmol/L时,~(45)Ca内流相应为1.02±0.25,1.37±0.14,和1.45±0.14μmol/g。加入牛磺酸后,上述情况显著改变。低Ca_-~(2+),Tau 10、20、40mmol/L能分别使~(45)Ca内流增加为1.11±0.11,1.45±0.12和1.48±0.09μmol/g:正常Ca~(2+)时,Tau 10、20、40mmol/L能分别使~(45)Ca内流减少为1.19±0.07,1.14±0.23和0.97±0.24μmol/g:高Ca~(2+)时、Tau 10、20、40mmol/L能使~(45)Ca内流显著降低为1.12±0.05,0.58±0.18和0.53±0.10μmol/g。结果表明不同Ca~(2+)浓度能影响心肌~(45)Ca内流,牛磺酸对心肌~(45)Ca内流有双向调节作用,这可能在其抗心律失常机制中起重要作用。     

牛磺酸对大鼠心肌损伤时心肌细胞核钙转运功能异常的保护作用

目的观察异丙肾上腺素 (ISO)致大鼠心肌缺血损伤时心肌细胞核钙转运功能的异常变化及牛磺酸对其影响。方法给Wister大鼠皮下注射5mg·kg-1ISO液 ,造成心肌缺血损伤模型。超速离心分离纯化心肌细胞核。酶学方法鉴定核纯度和测定核膜Ca 2 _ATP酶活性 ,同位素法观测核钙的摄取。结果与正常对照组比较 ,心肌缺血组 (实验组 )心肌细胞核膜钙依赖性ATPase活性降低18.1 % (P<0.05) ,45Ca2 摄取效率也显著降低 ,其最大速度降低54.6 % ;牛磺酸保护组心肌细胞核Ca2 _ATPase活性及核45Ca2 摄取与正常对照组比较均未见显著性改变。结论牛磺酸对ISO致大鼠心肌损伤时心肌细胞核钙转运功能降低有保护作用     

牛磺酸对家兔左室心肌力学效应的研究

本实验在麻醉家兔研究了牛磺酸对心肌力学的效应。我们以 dp/dt max,V_(CE)和Vmax 评价牛磺酸对心肌收缩性的影响,结论表明:牛磺酸对正常心脏显示负性肌力作用,大约15分钟可恢复。在心肌收缩力减弱时,小剂量牛磺酸可轻度改善心功能,但大剂量牛磺酸则加重对心肌收缩力的抑制性。此外,牛磺酸可降低心肌耗氧,在心肌供氧不足时,具有保护意义。     

双苯氟嗪对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其机制研究

目的研究双苯氟嗪(d ipfluzine,D ip)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(card iac fibrob lasts,CFB)增殖和胶原合成的影响,并探讨其抑制心肌纤维化的机制。方法用消化法培养新生SD大鼠CFB,建立AngⅡ诱导新生大鼠CFB纤维化模型。采用MTT法检测D ip对CFB增殖的影响;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞分析仪技术检测细胞周期及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白和转化生长因子β1(TGF-β1)的基因表达;免疫组织化学染色方法,观察心肌成纤维细胞经典型蛋白激酶Cα亚型(cPKCα)和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1)蛋白的表达。结果①在一定浓度范围内,D ip能明显抑制AngⅡ诱导CFB的增殖和胶原合成(P<0.05或P<0.01)。②CFB细胞G0/G1期百分率随D ip浓度增加而增加,S期、G2/M期百分率和增殖指数随D ip浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。③D ip能降低PCNA蛋白表达,与AngⅡ组相比差异有显著性(P<0.01)。④D ip能够明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原和TGF-β1mRNA的表达(P<0.05或P<0.01)。⑤免疫组化结果显示D ip(10、100μmol.L-1)组ERK1和cPKCα阳性表达低于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01)。结论D ip通过抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原的增加而起到了抗心肌纤维化的作用,其抗纤维化作用与其降低TGF-β1基因表达以及抑制cPKCα、ERK1通路有关。     

牛磺酸对血管紧张肽Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖的抑制作用

目的：研究牛磺酸对血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的抑制及对转化生长因子β_1(TGF-β_1)蛋白表达的下调作用,以探讨其对抗AngⅡ诱导的心肌纤维化的作用。方法：在AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖前后加不同浓度的牛磺酸,并采用羟脯氨酸法、MTT比色法分别测定胶原量和细胞增殖情况、SDS-PAGE电泳测胶原Ⅰ/Ⅲ型比值、ELISA法测定TGF-β_1蛋白的含量。结果：(1) AngⅡ有促进心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,其浓度在1×10~(-7)mmol·L~(-1)时达最大效应；(2)牛磺酸能抑制由AngⅡ诱导的Ⅰ/Ⅲ型胶原比值增高和TGF-β_1蛋白含量的增加,其中100,200 mmol·L~(-1)的牛磺酸可抑制AngⅡ诱导的细胞增殖和胶原合成。结论：牛磺酸可用于抑制由AngⅡ导致的心肌纤维化。     

异丙肾上腺素导致的心肌损伤大鼠心肌牛磺酸转运障碍和牛磺酸防治作用

目的:观察异丙肾上腺素(ISO)导致心肌损伤大鼠的心肌组织牛磺酸跨膜转运功能及牛磺酸转运体(TAUT)和半胱氨酸亚磺酸脱羧酶(CSD)的改变.方法:用[~3H]标记的牛磺酸测定心肌牛磺酸转运及其与心肌浆膜结合功能;竞争性RT-PCR测定TAUT和CSD mRNA的含量.结果:ISO组与对照组比,心肌[~3H]-牛磺酸摄入减少,释放量增加,心肌浆膜最大结合速率(B_(max))减少,TAUT和CSD mRNA水平减少.牛磺酸治疗组与ISO组比,心肌牛磺酸摄入量明显增加,释放量减少,B_(max)值增加,TAUT和CSDmRNA含量增加,各组间K_d值无明显差异.结论:ISO诱导的心肌损伤存在牛磺酸转运障碍及TAUT和CSD基因的下调,外源性给予牛磺酸对心肌损伤有明显防治作用.     

越桔原花青素对大鼠心肌纤维化作用的影响

目的探讨越桔原花青素(procyanidin from Vaccini-um,PC)对大鼠心肌纤维化作用的影响及其机制。方法体内实验以异丙肾上腺素(isoprenaline,Iso)5 mg.kg-1.d-1背部皮下注射,构建大鼠心肌纤维化模型,同时以灌胃方式给予PC 100、200、400 mg.kg-1.d-1,分光光度法检测左心室心肌组织中羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)、丙二醛(ma-londialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)活性;电镜观察心肌超微结构变化。体外实验采用细胞培养技术以血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)建立新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblast,CFb)增殖模型,给予25、50和100 mmol.L-1的PC干预。采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖;ELISA法测定Ⅰ、Ⅲ胶原及转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白的含量。结果PC可剂量依赖性地降低心肌组织中Hyp、MDA含量、增强SOD活性,同Iso组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),电镜结果显示:PC可缓解Iso所导致的心肌损伤。体外实验部分PC(25、50和100 mg.L-1)可抑制AngⅡ诱导的CFb增殖、胶原合成增加及TGF-β1蛋白含量增多,与AngⅡ组比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论PC可通过抗氧化作用,抑制CFb的增殖及胶原的合成,进而抑制大鼠心肌纤维化,对心肌具有一定的保护作用。     

牛磺酸对大鼠心肌缺血损伤的保护

采用大鼠皮下注射异丙肾上腺素（ＩＳＰ，５ｍｇ·ｋｇ－１）造成心肌缺血损伤模型。观测心肌线粒体（Ｍｉｔ）、丙二醛（ＭＤＡ）、总磷脂（ＰＬ）、胆固醇（ＣＨ）含量，超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ·Ｐｘ）活力及心肌钙含量的变化。结果发现：在注射ＩＳＰ前３０ｍｉｎ腹腔注射牛磺酸（Ｔａｕ，２００ｍｇ·ｋｇ－１），对心肌缺血损伤有保护作用，表现为能明显减少心肌Ｍｉｔ中ＭＤＡ的生成，提高ＳＯＤ和ＧＳＨ·Ｐｘ）活力，减轻磷脂的降解和心肌钙聚集作用。提示：Ｔａｕ对心肌Ｍｉｔ的保护作用可能是其抗心肌缺血损伤的重要机制之一。     

苦参碱对心肌成纤维细胞增殖、胶原代谢及转化生长因子-β1蛋白表达的影响

目的探讨苦参碱对醛固酮诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞增殖、胶原代谢的影响,并探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）信号转导通路在苦参碱抗心肌纤维化中的作用机制。方法体外差速贴壁法分离纯化培养心肌成纤维细胞,试验分为对照组、醛固酮（1.0×10-7mol/L）组和醛固酮＋不同浓度（0.125,0.25,0.5mmol/L）苦参碱组5组。作用24h后,倒置显微镜观察细胞生长状态;四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测心肌成纤维细胞增殖;流式细胞分析仪分析细胞周期;分光光度法检测细胞上清羟脯氨酸含量;细胞免疫荧光染色及流式细胞仪检测TGF-β1蛋白表达。结果与对照组比较,醛固酮可显著提高心肌成纤维细胞MTT-OD值,使S期细胞比率增加,G0/G1期细胞比率下降;羟脯氨酸含量、TGF-β1的蛋白表达均显著高于对照组（P〈0.01）。苦参碱干预24h后,MTT-OD值、S期的细胞百分比、羟脯氨酸含量、TGF-β1的蛋白表达均显著低于醛固酮组（P〈0.01）,且苦参碱的效应呈浓度依赖性。结论苦参碱可抑制醛固酮诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成,其抗纤维化作用可能与直接下调TGF-β1蛋白表达有关。     

脂质体和牛磺酸对阿霉素心肌毒性的影响

在大鼠阿霉素急性心肌损伤的模型上，观察了脂质体联合携载阿霉素和牛磺酸对阿霉素所致心肌损伤作用的影响。结果表明：阿霉素可引起血浆ＬＤＨ、ＣＰＫ、ＭＤＡ及心肌组织ＭＤＡ和Ｃａ２＋水平明显升高，心肌组织细胞出现广泛的变性和水肿。用牛磺酸或脂质体包裹阿霉素均可降低阿霉素对心肌毒性的作用，血浆ＬＤＨ、ＣＰＫ、ＭＤＡ及心肌ＭＤＡ和Ｃａ２＋水平比损伤组织降低５％～４６．９％（Ｐ＜０．０５）。脂质体联合携载阿霉素和牛磺酸，上述生化指标进一步降低，与正常组无明显差异，病理检查结果与上述生化指标变化一致。结果提示：脂质体联合携载阿霉素和牛磺酸具有显著减轻阿霉素心肌毒性作用。     

乳鼠心肌成纤维细胞培养方法的改进

目的建立乳鼠心肌成纤维细胞培养模型.方法通过对经典的差速贴壁分离法稍作改进,采用每次贴壁60min、两次差速贴壁分离法收集、培养心肌成纤维细胞.结果形态学观察和免疫细胞化学染色鉴定显示,成功培养心肌成纤维细胞,纯度达95%以上.结论该研究成功建立乳鼠心肌成纤维细胞培养模型,为高纯度心肌成纤维细胞的获得和对其病理生理学的进一步研究打下良好基础.     

西红花酸对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨西红花酸(crocetin)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFB)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法:体外培养新生SD大鼠CFB,建立AngⅡ诱导新生大鼠CFB纤维化模型;MTT法检测CFB的增殖;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞周期;实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)的基因表达;蛋白免疫印迹(Western Blot)检测细胞P27^kip1(P27)蛋白的表达。结果:(1)在一定浓度范围里,crocetin能抑制AngⅡ引起的CFB增殖和胶原合成,并呈剂量依赖;(2)CFBG0/G1期百分率随crocetin浓度增加而增加,S期、G2/M期百分率和增殖指数随crocetin浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);(3)Crocetin能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP1、TGF-β1的表达,提高MMP-2的表达;(4)Crocetin能增加P27蛋白表达。结论:Crocetin通过抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原合成起到抗心肌纤维化作用,其机制可能与细胞因子分泌和对基质金属蛋白酶的调节有关。     

牛磺酸对肾血管性高血压大鼠左室肥厚的保护作用

目的　观察牛磺酸 (Tau)对肾血管性高血压大鼠左室肥厚的影响 ,并探讨其机制。方法　建立二肾一夹 (2K1C)肾动脉狭窄性高血压模型。羟脯氨酸法测定大鼠心肌胶原含量 (MCC) ;放免法测定心肌AngⅡ (MAC)及Ald(MDC) ;原位杂交方法检测c fosmRNA表达 ;显微镜观察心肌组织结构改变并测量心肌纤维直径 (MFD) ,并进行线性相关分析。结果　 2K1C组大鼠MCC、MAC、MDC含量及MFD较Sham组增加 (P <0 0 1) ,c fosmRNA表达高于Sham组 (P<0 0 1) ;心肌冠状动脉周围胶原纤维大量增生并向周围间质延伸 ;相关分析显示MCC及MFD皆与MAC、MDC正相关 (P <0 0 1)。牛磺酸 (5 0mg·kg-1·d-1)治疗 8wk降低2K1C大鼠尾动脉收缩压 (SBP)、MAC、MDF及MCC(P <0 0 1) ,左心室 /体重比 (LVWI)、MDC及心室肌c fosmRNA表达量亦明显下降 (P <0 0 1) ,并抑制心肌冠脉周围胶原纤维增生。结论　牛磺酸可通过降低心肌局部RAAS活性及c fosmRNA表达 ,从而抑制心肌细胞肥大及胶原纤维增生 ,有效防治肾血管性高血压左室肥厚。