胃癌组织中相关肿瘤抑制基因启动子区甲基化状态

目的分析胃癌组织中肿瘤抑制基因启动子区甲基化状态及其与临床分期、分型的关系。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应方法,检测106例胃癌及其邻近胃小凹上皮、16例慢性胃炎小凹上皮石蜡标本中E钙黏素（E—CD）、错配修复酶hMLH1、APC和6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因启动子区甲基化状态,并对其中46例胃癌采用免疫组化方法检测E—CD蛋白表达情况。结果在胃癌、胃癌邻近小凹上皮及慢性胃炎小凹上皮中,基因甲基化频率分别为72．6％（77／106）、44．3％（47／106）和12．5％（2／16）,三者问差异有统计学意义（P〈0．01）。Laurén弥漫型胃癌甲基化（80．6％,50／62）明显高于肠型胃癌甲基化（61．4％,27／44）,两者间差异有统计学意义（P〈0．01）。甲基化与患者的年龄、性别、Ming分型及区域淋巴结转移无关（均P〉0．05）,甲基化与胃癌的浸润深度、pTNM分期和分化程度有关（均P〈0．05）。行E—CD蛋白检测的46例胃癌中,22例有E—CD基因甲基化,其中20例（90．9％）E—CD蛋白呈异质性减弱或基本消失表达;24例无E—CD基因甲基化,其中9例（37．5％）E—CD蛋白呈异质性减弱或基本消失表达,两者间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论上述肿瘤抑制基因启动了区甲基化可能是胃癌发生的早期事件。胃癌E—CD基因甲基化与E—CD蛋白异质性减弱或消失表达密切相关。     

老年人胃癌肿瘤抑制基因启动子区甲基化状态

目的 分析老年人胃癌组织及其癌旁小凹上皮和慢性胃炎小凹上皮中肿瘤抑制基因启动子区甲基化状态.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法,检测51例老年人胃癌及其癌旁小凹上皮和15例慢性胃炎小凹上皮石蜡标本中E钙黏素(E-CD)、错配修复酶hMLH1、APC和6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因启动子区甲基化状态.结果 在胃癌组织及其癌旁小凹上皮和慢性胃炎小凹上皮中,基因总的甲基化率分别为70.6%(36/51例)、47.0%(24/51例)和6.6%(1/15例),三者之间差别有统计学意义(P＜0.01).Lauren弥漫型、Ming浸润型、低分化和未分化、Ⅲ期和Ⅳ期、T3和T4以及有淋巴结转移胃癌的甲基化率分别高于Lauren肠型、Ming膨胀型、高和中分化、Ⅰ期和Ⅱ期、T1和T2以及无淋巴结转移胃癌的甲基化率(均P＜0.05).结论 E-CD、hMLH1、APC和MGMT基因启动子区甲基化在慢性胃炎小凹上皮中少见,在癌旁小凹上皮中频繁出现,在胃癌组织中普遍存在,提示甲基化可能是胃癌发生的早期事件.     

贲门腺癌Wif-1基因启动子区甲基化状态的检测及临床意义

目的 研究贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中Wnt抑制因子-1(Wnt inhibitory factor-1,Wif-1)基因启动子区甲基化状态及表达情况,探讨其与贲门癌发生的关系及可能机制.方法 分别用巢式甲基化特异性PCR(MSP)和RT-PCR方法检测贲门腺癌及相应正常黏膜组织中Wif-1基凶的甲基化状态和mRNA表达水平;应用免疫组化S-P法检测β-catenin蛋白的表达情况.结果 Wif-1基凶在贲门腺癌及正常黏膜组织中的甲基化率分别61.7%(58/94)和34.0%(32/94),癌组织中Wif-1基因的甲基化率明显高于正常黏膜组织(χ~2=14.409,P=0.000);癌及正常黏膜组织中Wif-1基因mRNA的阳性表达率分别为10.6%(10/94)和86.2%(81/94),β-catenin蛋白的异质表达率分别为90.4%(85/94)和38.3%(36/94),癌组织中Wif-1 mRNA表达及β-catenin蛋白的表达均与Wif-1基因的甲基化明显相关(P<0.01);Wif-1基因的甲基化与肿瘤的浸润深度及淋巴结转移相关(P<0.05),而与肿瘤的病理分级及临床分期无关.结论 Wif-1基因启动子区甲基化在贲门腺癌中频繁发生,可能通过引起经典Writ/β-catenin通路的异常激活与贲门腺癌的发生密切相关.     

TERT基因启动子区甲基化在胃癌发生发展中的作用研究

目的探讨TERT基因启动子区甲基化水平在胃癌组织与癌旁组织中的差异,并分析TERT基因启动子区甲基化与胃癌组织病理分化、神经转移、浸润深度、TNM分期等临床病理学参数的关系。方法采用Mass ARRAY Epi TYPER芯片检测30例胃癌组织以及胃癌癌旁组织的TERT基因启动子区甲基化水平,应用配对student t检验和线性回归检验,分析TERT基因启动子区甲基化水平在胃癌组织与癌旁组织中的差异以及其与临床病理学参数的关系。结果在胃癌组织和癌旁组织中,平均TERT基因启动子区甲基化水平分别为34.66%和35.72%,差异无统计学意义(P>0.05)。TERT基因启动子区平均甲基化水平与胃癌患者的年龄、性别、病理分化、神经转移、浸润深度、TNM分期等因素均无明显关系(P值分别为0.6290,0.5462,0.7316,0.2393,0.5913,0.0577)。Cp G_1在胃癌组织和癌旁组织中的甲基化水平与性别因素有一定关系(P=0.0498);Cp G_5.6.7、Cp G_15.16、Cp G_17在胃癌组织和癌旁组织中的甲基化水平与TNM分期均有相关关系(P=0.0421,0.0451,0.0204)。结论 TERT基因启动子区甲基化水平在胃癌组织与癌旁组织中没有显著差异,有部分Cp G位点与胃癌性别、TNM分期等临床病理学参数有关。提示临床上联合检测TERT基因部分启动子区甲基化水平对胃癌转移的预测可能会有所帮助。     

胃癌MGMT基因启动子甲基化状态与患者临床预后的关系

目的 通过回顾性分析胃癌患者MGMT基因启动子甲基化状态,探讨其对胃癌生存时间的影响.方法 收集经过治疗且通过病理学检查进行确诊的胃癌患者218例,获取胃癌组织及癌旁正常组织,采用甲基化特异性PCR检测MGMT基因启动子甲基化状态,分析其对胃癌生存时间的影响.结果 胃癌组织MGMT基因启动子甲基化状态与TNM分期有关(P＜0.01);胃癌组织MGMT基因启动子甲基化状态、TNM分期及肿瘤大小与胃癌5年生存时间相关(均P＜ 0.05).结论 MGMT基因启动子甲基化是胃癌患者5年生存时间的独立危险因素.     

胃癌组织中Caveolin-1基因外显子2甲基化状态检测

目的：应用甲基化特异性PCR（MSP）技术检测胃癌组织中Caveotin-1基因外显子2启动子区域5’端CpG岛甲基化状况,探讨Caveolin-1基因甲基化在胃癌发生发展中的作用．方法：收集30例胃癌组织和6例距肿瘤5cm以上的癌旁正常胃组织,运用标准蛋白酶K消化、酚-氯仿抽提法提取组织中基因组DNA,采用CpGenome DNA Modification Kit对DNA进行修饰后以甲基化特异性引物及非甲基化引物进行PCR,通过琼脂糖凝胶电泳及产物测序判定结果．结果：6例癌旁正常胃组织Caveolin-1基因外显子2启动子区域5＇端CpG岛均为甲基化阴性．30例胃癌组织中有27例甲基化阳性,甲基化率为90％（27／30）．其中16例胃癌组织（53．3％）仅有甲基化引物扩增出目的条带,表现为完全甲基化;11例胃癌组织（36．7％）甲基化与非甲基化引物均扩增出目的条带,表现为部分甲基化．统计结果显示胃癌组织中Caveolin-1基因外显子2启动子区域甲基化率显著高于癌旁正常胃组织．结论：胃癌组织中存在Caveolin-1基因外显子2启动子区域高甲基化,且可能参与胃癌的早期过程．     

胃癌组织中p16基因甲基化分析

目的：探讨抑癌基因p16在胃癌组织中是否存在甲基化异常及其与胃癌发生发展的关系。方法：对20例胃癌组织及相应正常胃粘膜组织应用于甲基敏感酶（HpaⅡ）和甲基非敏感酶（MspⅠ）酶切,结合PCR扩增技术,对p16基因外显子1、外显子2的二核苷酸胞嘧啶特定序列5‘-CCGG-3‘位点甲基化进行检测。结果：20例胃癌组织中,p16基因外显子1、2异常甲基化分别为5例（25％）和9例（45％）,正常组织未发现甲基化异常;14例高甲基化标本中,中分化胃癌4例,低分化7例,高分化1例,有2例存在外显子1、2同时甲基化异常,二者均为低分化胃癌,进展期胃癌（Ⅲa,Ⅳ期各1例）中1例呈现泳动易位;外显子2甲基化异常多发生于晚期肿瘤患者（P＜0．05）。结论：p16基因甲基化异常可能会造成基因功能丧失,从而失去了对细胞增殖的负性调控作用,导致胃癌发生与进展;外显子2高甲基化与临床进展有关,可能为晚期事件。     

EBV相关胃癌组织CTHRC1基因启动子区甲基化研究

目的分析比较EB病毒(EBV)相关胃癌(EBVaGC)与EBV阴性胃癌(EBVnGC)组织中胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)基因的甲基化状态,探讨EBV感染对CTHRC1基因甲基化的影响。方法采用甲基化特异性PCR检测49例EBVaGC和50例EBVnGC组织中CTHRC1基因启动子区域CpG岛甲基化状态,分析两种胃癌组织中CTHRC1基因甲基化状态及与临床病理特征的关系。结果 EBVaGC组织CTHRC1基因的甲基化状态明显高于EBVnG组织(χ2=14.278,P<0.01)。胃癌组织CTHRC1基因甲基化率与病人性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤浸润程度、肿瘤组织分化程度以及有无淋巴结转移均无关(P>0.05)。结论 EBV感染可使EBVaGC组织中CTHRC1基因甲基化率明显升高。     

RASSF1A基因启动子区甲基化在胃癌阶段性发生及进展中的作用及临床意义

目的通过检测胃癌癌旁距离原发灶不同距离组织及胃癌原发灶RASSF1A基因启动子区甲基化状态的差异,分析正常胃组织、癌前病变及癌组织中该基因甲基化的动态变化以及RASSF1A基因甲基化与胃癌原发灶病理生物学行为的关系,探讨RASSF1A基因启动子区甲基化在胃癌阶段性发生及进展中的作用及临床意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测距胃癌癌灶边缘5、3、1cm组织及胃癌原发灶组织中RASSF1A基因甲基化状态。结果 RASSF1A基因启动子区甲基化发生率在距胃癌灶边缘5、3、1cm组织及胃癌组织中分别为5.0%、7.5%、22.5%及42.5%,从距癌灶边缘5cm胃组织至胃癌原发灶组织中的表达中随距癌灶边缘距离的减少呈上升趋势,差异有统计学意义(P<0.01)。从组织病理学角度分析,RASSF1A基因启动子区甲基化发生率在正常胃组织、癌前病变组织及胃癌原发灶中分别为0.0%、17.39%、42.5%,动态上升,三者间差异具有统计学意义(P<0.01)。RASSF1A基因甲基化发生率在胃癌患者透浆膜组显著高于未透浆膜组(P<0.05);在转移淋巴结数7枚以上组显著高于0～7枚组(P<0.05),与胃癌胃壁浸润深度、转移淋巴结数相关,在不同大体类型、生长方式、分化程度、性别及年龄胃癌患者间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 RASSF1A基因启动子区异常甲基化可能与胃癌的阶段性发生及临床进展相关。     

食管癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化检测及其临床意义

目的探讨Ras相关结构域家族基因1A（RASSF1A）启动子区异常甲基化与食管癌发生发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法,检测66例食管癌组织及相应的癌旁正常组织RASSF1A基因启动子区异常甲基化。分析食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化与临床病理特征的关系。结果在食管癌组织、癌旁正常组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率分别为48．5％（32／66）、6．1％（4／66）。淋巴结转移者食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率（61．1％）明显高于无淋巴结转移者（33．3％）（χ^2=5．055,P=0．025）;晚期（Ⅲ～Ⅳ期）食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率（69．2％）明显高于早期（Ⅰ～Ⅱ期）（35．0％）（χ^2=7．392,P=0．007）;食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化与肿瘤分化程度无相关性（P〉0．05）。结论食管癌组织中存在RASSF1A基因启动子区的异常甲基化,甲基化与食管癌病理分期和淋巴结转移有关。     

胃癌中E-cadherin基因甲基化状况及其表达的研究

目的:检测胃癌组织中E-cadherin基因启动子区域的甲基化状况,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床病理指标的关系。方法:采用甲基化特异性PCR方法对胃黏膜中E-cadherin基因启动子区域甲基化状况进行检测,并采用免疫组织化学方法相应检测了E-cadherin蛋白表达。结果:胃癌中E-cadherin基因甲基化率为3 4.6% (2 8/81 ) ,显著高于正常胃黏膜该基因甲基化率(P =0 .0 2 8)。E-cadherin蛋白表达阳性率为64.2 % (5 2 /81 )。E-cadherin基因甲基化与其蛋白表达无相关性(P >0 .0 5 ) ,与肿瘤组织学类型、淋巴结转移及性别均无相关性,但与年龄有关,随着年龄增加病人甲基化率呈增高趋势。结论:E-cadherin基因甲基化与年龄有关,E-cadherin基因异常甲基化是常见的一种基因异常改变,可能参与了胃癌的发生发展过程。     

胃癌中P16基因启动子区甲基化检测的临床意义

目的：探讨P16基因启动子区域甲基化在胃癌发生和发展过程中的临床意义。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）对37例胃癌病人手术切除肿瘤组织及其癌旁组织P16基因启动子区域甲基化状态进行检测。结果：P16基因在手术切除的29．7％的胃癌组织和2．7％的癌旁组织发生了甲基化，且与年龄、性别、淋巴结转移以及分化程度等临床病理指标无相关性。结论：P16基因启动子区甲基化可能是肿瘤特异性的（P〈0．05），可作为胃癌早期诊断的分子标记物。     

胆囊癌组织bcl-2和p53基因甲基化水平研究

目的:探讨胆囊癌组织总甲基化水平、bcl-2和p53基因甲基化水平在胆囊癌发病中的作用。方法:改进的酶联免疫吸附技术检测45例胆囊癌组织和40例胆囊炎组织基因组总甲基化水平,应用甲基化特异性PCR技术检测bcl-2和p53基因甲基化水平,应用荧光RT-PCR技术检测bcl-2和p53 mRNA的表达。结果:胆囊癌组织基因组总甲基化水平明显低于胆囊炎,差异具有统计学意义(P<0.05)。胆囊癌组织p53基因甲基化发生率高于胆囊炎(64.4%vs17.5%),差异具有统计学意义(P<0.05);胆囊癌组织bcl-2基因甲基化发生率与胆囊炎比较差异无统计学意义(17.8%vs 15.0%,P>0.05)。胆囊癌组织bcl-2 mRNA的表达明显高于胆囊炎、p53 mRNA的表达明显低于胆囊炎,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:基因组总甲基化水平降低和p53高甲基化可能是胆囊癌发生的分子机制之一。     

胃腺癌组织中雌激素受体的检测

①目的探讨雌激素受体（ＥＲ）与胃腺癌的发生及其生物学行为之间的关系。②方法应用葡聚糖包裹活性炭饱和分析法，检测了４０例胃腺癌及其远隔胃粘膜组织中ＥＲ的含量。③结果４０例胃癌组织中７例ＥＲ阳性，含量为１５５．４±９１．０ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白；而远隔胃粘膜组织中未检测到ＥＲ；胃癌组织中ＥＲ阳性率及含量均显著高于远隔粘膜组织（Ｐ＝０．０１；ｔ＝１１．４，Ｐ＜０．０１）。ＥＲ阳性率与胃癌病人的年龄、性别、Ｂｏｒｒｍａｎ分型、肿瘤大小及细胞分化程度，在不同分组间差异均无显著意义（χ２＝０．０６～１．５４，Ｐ均＞０．０５）。④结论ＥＲ在胃粘膜癌变过程中具有一定的作用     

乳癌组织TSLC1基因mRNA表达及启动子甲基化状态

目的探讨乳癌组织中非小细胞肺癌抑制因子(TSLC1)基因mRNA表达及其启动子甲基化状态。方法应用实时荧光定量PCR和甲基化特异性PCR,分别检测39例人乳癌组织及对应癌旁组织中TSLC1基因mRNA表达及其启动子甲基化状态,并探讨二者之间的关系。结果乳癌组织中TSLC1mRNA的表达量是癌旁组织的0.44倍。乳癌组织及癌旁组织中TSLC1基因甲基化率分别为56.4%、10.3%,乳癌组织中TSLC1基因甲基化率明显高于相应癌旁组织(χ2=16.673,P<0.01)。甲基化的癌组织中TSLC1mRNA的表达量是非甲基化者的0.60倍,表达TSLC1mRNA的癌组织的甲基化率为50%,不表达者为100%,两者之间差异有显著性(P=0.046)。结论 TSLC1基因异常甲基化是其在乳癌组织中表达缺失或下调的原因之一,在乳癌的发生发展中起一定作用,可能成为乳癌的早期诊断及治疗靶点基因之一。     

宫颈癌组织中抑癌基因Syk启动子甲基化的研究

目的 探讨宫颈癌组织中脾酪氨酸激酶(Syk)基因启动子甲基化程度及其临床意义.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测60例宫颈癌、50例宫颈上皮内瘤变(CIN)和20例正常宫颈组织中Syk基因启动子甲基化情况.结果 宫颈癌组织中Syk基因启动子甲基化率明显高于CIN组织及正常宫颈组织(χ2=17.13、19.71,P<0.05);Syk基因甲基化程度在宫颈癌组织中的表达与肿瘤淋巴结转移有明显相关性(χ2=10.22,P<0.01),但与病人年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学类型及病理类型无明显相关性(P>0.05).结论 Syk 基因启动子甲基化可能与宫颈癌发生及其淋巴转移有关.     

METHYLATION PATTERN OF LRP15 GENE IN LEUKEMIA

Objective To investigate the methylation status of LRP15 gene in acute leukemia (AL) patients and its role in the tumorigenesis. Methods The methylation of LRP15 promoter and first exon of bone marrow mononuclear cells in 73 patients with AL, 10 with chronic leukemia (CL), 9 with hematological benign diseases, and 20 healthy transplantation donors was analyzed by using methylation specific polymerase chain reaction. The methylation of LRP15 gene promoter and first exon in COS7, K562, and HL60 cell lines was also assayed. Results No LRP15 gene promoter methylation was detected in COS7 cell line. LRP15 gene promoter was methylated in K562 and HL60 cell lines. No deletion of LRP15 gene was detected in all samples. In nearly all French-American-British leukemia subtypes, we found that frequency of LRP15 methylation in adult patients with AL was 71.23% (52/73). There was no detectable methylation in any of the 20 healthy donors and 8 chronic myeloid leukemia patients. The difference in frequency of LRP15 methylation between AL patients and healthy donors or CL patients (10.00%, 1/10) was significant (P<0.01). Hypermethylation of LRP15 gene was found in 57.14% (16/28) of newly diagnosed AL patients, 83.33% of relapsed AL patients respectively, which was significantly different (P<0.05). We also demonstrated LRP15 methylation in 55.56% (5/9) adults with benign hematological diseases. Conclusions LRP15 methylation changes are common abnormalities in leukemia. LRP15 is postulated to be a tumor suppressor gene.     

TBX2基因和FEZ 1基因在胃癌中的表达及其临床意义

目的：探讨TBX2、FEZ1在正常胃黏膜、上皮内肿瘤及胃腺癌中的表达及其临床病理意义。方法采用免疫组织化学方法检测30例正常胃黏膜、30例上皮内肿瘤及80例胃腺癌中 TBX、FEZ1蛋白质的表达。应用统计学软件 SPSS15．0分析其与临床病理及预后的关系。结果 TBX2在低分化组织中的阳性表达高于高分化组织（P＜0．05）,临床分期Ⅳ期的表达高于Ⅰ期（P＜0．05）,肌层浸润＞1/2的表达高于≤1/2的表达（P＜0．05）;FEZ1在低分化组织中的阳性表达低于高分化组织（P＜0．05）,临床分期Ⅲ期的阳性率表达低于Ⅰ期的表达（P＜0．05）,肿瘤直径＞4cm阳性表达低于≤4cm的表达（P＜0．05）,肌层浸润＞1/2的表达低于≤1/2的表达（P＜0．05）,有淋巴结转移的表达低于无淋巴结转移的表达（P＜0．05）,年龄＞60岁的表达低于≤60岁的表达（P＜0．05）。结论TBX2和 FEZ1在胃黏膜发生发展中发挥着重要作用,前者发挥着原癌基因的作用,后者发挥着抑癌基因的作用。     

PINCH蛋白在胃腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨PINCH(particulary interesting new cysteine-histidine rich protein,PINCH)蛋白在胃腺癌和胃黏膜非典型增生、正常胃黏膜中的表达情况,分析PINCH蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、部位以及淋巴结转移的关系.方法 采用免疫组织化学SP法,检测30例正常胃黏膜、36例非典型增生胃黏膜及70例胃腺癌石蜡包埋标本中PINCH蛋白的表达,并分析其临床意义.结果 PINCH蛋白在胃腺癌组织相关间质中呈异质型表达,其阳性率为74.28%(52/70),明显高于正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(P＜0.05);而PINCH蛋白胃黏膜非典型增生中的表达阳性率为38%(14/36),与正常胃黏膜相比,差异无统计学意义(P＞0.05);而且PINCH蛋白在肿瘤浸润的边缘阳性更为明显;在胃腺癌中,淋巴结转移组阳性表达率为77.78%(35/45),淋巴结无转移组表达率为48.00%(12/25),二者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);PINCH蛋白的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、部位无相关性(P＞0.05).结论 PINCH蛋白在胃腺癌的发生、发展中可能起着重要作用,并与肿瘤的浸润和转移有关.     

胃腺癌组织中MAC30蛋白的表达变化及意义

目的观察胃腺癌石蜡包埋标本中MAC30蛋白的表达变化,并分析其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测20例正常胃黏膜组织及40例胃腺癌组织中MAC30蛋白的表达。结果胃腺癌组织MAC30表达阳性率为65％（26／40）,明显高于正常胃黏膜组织中的15％（3／20）,差异有统计学意义（P〈0．05）;在胃腺癌中,MAC30蛋白与淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论胃腺癌组织中MAC30蛋白高表达可能与胃腺癌的发生和转移有关。