GSH对砷氧化损伤保护作用的研究

[目的]研究细胞内谷胱甘肽（GSH）对砷致人角质形成细胞系（HacaT）氧化损伤的保护作用。[方法]用流式细胞仪检测细胞内二氯荧光素（DCF）的荧光强度;用改良硫代巴比妥酸荧光法测定细胞内丙二醛（MDA）含量。[结果]单独用NaAsO2作用后,DCF荧光强度和MDA含量与对照组比较差异有显著性意义（P〈0．05）,用N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理后,细胞内DCF荧光强度和MDA含量与砷作用组相比差异有显著性意义（P〈0．05）,其中MDA达到对照组水平。用丁硫氨酸亚矾胺（BSO）预处理细胞后,DCF荧光强度和MDA含量与NaAsO2单独作用组相比明显增高（P〈0．05）。[结论]NAC可减轻砷对细胞的氧化损伤,而BSO则可加重其氧化损伤,说明细胞内的GSH可对砷引起的氧化损伤起一定的保护作用。     

高浓度葡萄糖对人树突状细胞CD83、CD86、CD36、CCR7和μ-阿片受体的影响

目的：观察高浓度葡萄糖对人树突状细胞（DC）受体CD83、CD86、CD36、CCR7和μ-阿片受体（MOR）表达的影响,探讨高血糖在动脉粥样硬化免疫炎症反应中的作用。方法：从人外周血中提取和分离单个核细胞,在含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白介素4的RPMI1640完全培养基中培养。7d后未成熟DC分3组,分别在含有D-葡萄糖5mmol／L（NG组）、10mmol／L（TG组）和25mmool／L（HG组）的RPMI1640完全培养基中继续培养48h后,采用流式细胞术检测DC表面CD83、CD86、CD36、MOR和CCR7的变化。结果：TG组和HG组DC表面分子CD36、CCR7、CD83和CD86的阳性率均高于NG组（P〈0．05-P〈0．01）,HG组DC表面分子MOR的阳性率高于NG组（P〈0．05）,而HG组CD36、CD83和CD86的阳性率亦均明显高于TG组（P〈0．01）。结论：高浓度葡萄糖能促进DC表面分子CD36、CD86、CD83和CCR7的表达。     

异丙酚、氯胺酮对大鼠大脑皮层星形胶质细胞缺氧复氧损伤的影响

目的观察异丙酚和氯胺酮对缺氧复氧大鼠大脑皮层星形胶质细胞损伤的影响。方法取新生2～3dWistar大鼠大脑皮层星形胶质细胞，原代纯化培养3周。将细胞分为正常对照组（Nor组），缺氧6h后复氧24h组（Ano组），加异丙酚50μmol／L缺氧6h后复氧24h组（Pro组），加氯胺酮50μmol／L缺氧6h后复氧24h组（Ket组），加异丙酚和氯胺酮各50μmol／L缺氧6h后复氧24h组（PK组）。检测皮层星形胶质细胞内游离钙浓度（[Ca^2＋]i）、凋亡及丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）活性，并观察细胞形态学的改变。结果与Nor组比较，Ano组细胞大量凋亡，[Ca^2＋]i和MDA含量升高，SOD和GSH活性均降低（均P〈0．01），未凋亡的星形胶质细胞增生肥大。与Ano组比较，Pro组、Ket组和PK组凋亡均明显减少，[Ca^2＋]i和MDA含量降低，SOD和GSH活性均有不同程度的恢复和升高（P〈0．05，P〈0．01），细胞无明显增生肥大。Pro组和Ket组间比较差异无统计学意义（P〉0．05），Pro组和Ket组分别与PK组比较差异有统计学意义（均P〈0．01）。结论异丙酚和氯胺酮均可通过抑制缺氧复氧损伤大鼠海马星形胶质细胞内钙超载和脂质过氧化反应，清除自由基而发挥保护作用，且两者有协同作用。     

吡咯烷二硫氨基甲酸酯对犬心肌线粒体损伤的保护作用

目的观察吡咯烷二硫氨基甲酸酯（PDTC）对体外循环（extracorporeal circulation，ECC）中犬心肌线粒体损伤的保护作用。方法12只犬随机分为对照组（C组，n=6）和PDTC组（P组，n=6），腹腔内注射戊巴比妥钠25ms／kg麻醉后建立ECC心肌缺血再灌注模型。P组于ECC前静脉注射PDTC20mg／kg，C组静脉注射等量生理盐水。分别于ECC前、阻断主动脉60min、开放主动脉30min和60min时，测定心肌线粒体超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）、丙二醛（MDA）、总抗氧化能力（T—AOC）和线粒体肿胀度（MSD）。结果与ECC前比较，两组阻断主动脉后SOD、GSH—PX及T—AOC均降低（P〈0．01），MDA和MSD含量均升高；开放主动脉后C组SOD、GSH—PX及T—AOC均降低（P〈0．01），MSD和MDA含量均升高（P〈0．01）；P组在开放主动脉60min时SOD、GSH—PX、T—AOC、MSD和MDA含量差异无统计学意义（P〉0．05）。P组在阻断主动脉60min时和开放主动脉后SOD、GSH—PX及T—AOC均显著高于C组（P〈0．01），MSD和MDA含量均显著低于C组（P〈0．01）。结论ECC中使用PDTC可提高心肌线粒体抗氧化能力，减轻心肌线粒体损伤。     

阻断p38 MAPK信号通路对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路的阻断对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响。方法 大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cells MCs）分别培养在低糖浓度（5．5mmol／L，LG组），高糖浓度（25mmol／L，HG组）及25mmol／L葡萄糖＋10μmol／L SB203580（p38抑制剂）。CCK-8测定MCs增殖，比色法检测细胞培养液中的超氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量的变化。结果 高糖组MCs出现增殖增加，SOD、GSH下降，MDA增加，SB203580干预能抑制MCs的过度增殖，使SOD、GSH增加、MDA减少。结论 抑制p38MAPK途径能抑制高糖环境下的系膜细胞增殖．并显著减少高糖诱导的氧化应激水平。     

云芝多糖B对血管紧张素Ⅱ诱导的巨噬细胞膜糖胺聚糖和细胞内谷胱甘肽含量变化的影响

目的 探讨野生云芝多糖水溶性新组分CVP-B对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的RAw264．7巨噬细胞糖胺聚糖（GAG）表达及细胞内还原型谷胱甘肽（GSH）的作用。方法用超速离心法分离巨噬细胞膜,用1,9-二甲基亚甲基兰法测定CVP-B对AngⅡ诱导RAW264．7巨噬细胞膜GAG表达的影响：同时应用荧光分光光度法测定CVP-B对AngⅡ诱导RAW264,7巨噬细胞内GSH变化的影响。结果AngⅡ（1μmol／L）刺激RAW264,7细胞,细胞膜GAG含量升高115％;随着CVP-B浓度升高（1,10,50ixg／m1）,AngⅡ（1μmol/L）诱导的细胞膜GAG分别降低13％、43％（P〈0.01）及52％（P〈0．01）。同时,AngⅡ（1μmol/L）刺激RAW264．7细胞,细胞内GSH活性降低69％（P〈0．01）;随着CVP．B浓度升高（1,10,50μg/ml）,AngⅡ（1μmol/L）诱导的GSH活性分别升高11％、104％（P〈0．01）及168％（P〈0．01）。结论CVP-B能明显抑制AngⅡ氧化应激诱导的RAW264．7巨噬细胞膜GAG表达。     

ACE2／Ang（1－7）／Mas通路在奥美沙坦酯对高糖环境大鼠主动脉平滑肌细胞效应中的作用

目的：研究奥美沙坦酯对高糖环境大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（ VSMCs）增殖、迁移的影响,并探讨ACE2／Ang（1－7）／Mas通路在该效应中的作用。方法离体培养大鼠原代胸主动脉VSMCs,分为正常糖组（ NG组）、甘露醇对照组（ Man组）、高糖组（ HG组）、奥美沙坦酯组（ Olm组）、A779组共5组处理细胞。 NG组：5．5 mmol／L D－葡萄糖;Man组：5．5 mmol／L D－葡萄糖培养基中补充19．5 mmol／L甘露醇;HG组：5．5 mmol／L D－葡萄糖培养基补充19．5 mmol／L D－葡萄糖;Olm组：HG组培养基中加入1×10－4 mmol／L奥美沙坦酯;A779组：1×10－5 mmol／L A779预处理细胞30 min后, HG组培养基中加入1×10－4 mmol／L奥美沙坦酯和1×10－5 mmol／L A779。 MTT法检测不同处理因素下细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期改变,划痕实验观察细胞迁移情况, Western blot法检测ACE2、Mas表达。结果与NG组相比,HG组表现出高增殖、高迁移,Man组与NG组差异无统计学意义。 Olm组可改善高糖所致病理改变,A779预处理后奥美沙坦酯的治疗作用减弱。 Western blot显示高糖环境下VSMCs中ACE2、Mas表达均下调,而Olm组可上调ACE2、Mas的表达。结论奥美沙坦酯可抑制高糖环境VSMCs的增殖、迁移,该效应可能通过调节ACE2／Ang（1－7）／Mas通路来实现。     

那格列奈治疗冠心病并2型糖尿病25例疗效观察

目的比较那格列奈（商品名：唐力）与阿卡波糖（商品名：拜唐苹）治疗冠心病并2型糖尿病患者的临床疗效。方法将50名冠心病并2型糖尿病患者随机分为那格列奈组25例及阿卡波糖组25例,疗程为12周。定期测定并比较两组治疗前后空腹血糖（FPG）、餐后2h血糖（P2hBG）、糖化血红蛋白（AlC）、C反应蛋白（CRP）和体重指数（BMI）。结果那格列奈组FIG平均下降2．02mmol／L,阿卡波糖组平均下降1．89mmol／L,两组P值均〈0．05,降低的幅度无统计学意义（P〉0．05）;两种药物对P2hBG均有明显降低作用,那格列奈组平均下降5．12mmol／L,阿卡波糖组平均下降4．10mmol／L（P〈0．01）,两组比较P2hBG降低的幅度有统计学意义（P〈0．01）;两组AlC均能显著降低,那格列奈组从（9．83±1．50）％降至（6．34±0．55）％（P〈0．01）,阿卡波糖组从（8．56±1．32）％降至（6．88±0．60）％（P〈0．01）,两组比较AIC降低的幅度有统计学意义（P〈0．01）;CRP两组均能显著降低,那格列奈组平均下降4．55mg／L,阿卡波糖组平均下降3．22mg／L两组比较,CRP降低的幅度有统计学意义（P〈0．05）;治疗后12周那格列奈组BMI下降2．1％（P〈0．05）,阿卡波糖组BMI下降2．35％（P〈0．05）,两组间比较元统计学意义（P〉0．05）。结论那格列奈和阿卡波糖均有降低空腹和餐后血糖以及AlC CRP BMI的作用,那格列奈对餐后血糖高为主的糖尿病患者作用更好,那格列奈治疗冠心病并2型糖尿病患者有显著疗效。     

Gremlin基因转染对高糖环境中系膜细胞增殖的影响

目的：观察体外转染Gremlin质粒或Gremlin siRNA质粒对小鼠肾小球系膜细胞（mouse glomerular mesangial cells,MMCs）溴脱氧尿苷（bromodeoxyuridine,BrdU）及Ⅳ型胶原表达的影响。方法：将MMCs分为7组：正常对照组（NG,5.5 mmol/L）、正常糖+甘露醇组（NG+M,24.5 mmol/L甘露醇）、正常糖+空质粒组（NG+V）、正常糖+Gremlin质粒组（NG+P）/正常糖+Gremlin siRNA质粒组（NG+gremlin si）、高糖组（HG,30 mmol/L）、高糖+空质粒组（HG+V）以及高糖+Gremlin质粒组（HG+P）/高糖+Grem－lin siRNA质粒组（HG+gremlin si）。在高糖刺激24 h后,应用ELISA法测定BrdU表达,放免法测定Ⅳ型胶原浓度。结果：与NG组相比,NG+P组和HG 组BrdU表达增强及Ⅳ型胶原浓度增加（均P=0.000）;与HG组相比,HG+P组BrdU表达进一步增强及Ⅳ型胶原浓度进一步上调（均P=0.000）;然而,Gremlin siRNA质粒转染可抑制高糖诱导的BrdU表达增强及Ⅳ型胶原浓度增加（均P=0.000）。结论：Gremlin基因促进MMCs增殖和Ⅳ型胶原聚集;Gremlin基因可能在糖尿病肾病发病中起到重要作用。     

过氧化氢酶对高糖诱导NIT-1胰岛β细胞Pax6基因表达下降的影响

 【目的】探讨过氧化氢酶（eatalase）对高糖诱导的NIT-1胰岛B细胞成对同源异形盒转录因子6（Pax6）基因表达下降的影响。【方法】体外培养NIT-1胰岛B细胞24h，分4个处理组：低糖组（NG），低糖＋过氧化氢酶组（NG＋C），高糖组（FIG），高糖＋过氧化氢酶组（HG＋C），用2，7二氯氢化荧光素二酯（H2DCF-DA）染色检测活性氧簇（ROS）的水平，RT-PCR半定量检测Pax6 mRNA表达。【结果】HG组ROS水平（1．10±0．24）明显高于NG组（0．95±0．26），P〈0．05；FIG＋C组ROS水平（0．94±0．26）低于HG组，P〈0．05；HG组Pax6 mRNA表达（0．64±0．09）低于NG组（0．93±0．12），P〈0．05；HG±C组Pax6 mRNA表达（0．74±0．11）高于HG组，但差异无统计学意义，P〉0．05。【结论】高糖可使NIT-1胰岛β细胞内ROS产生增加，胰岛β细胞特异性转录因子Pax6基因表达下降，给予ROS的抗氧化剂过氧化氢酶后，Pax6基因表达有所恢复，但差异无统计学意义。     

尼克酰胺抑制PKC-βⅡ活性改善高糖导致的心肌微血管内皮细胞血管形成障碍

目的探讨尼克酰胺对高糖导致的微血管生成障碍的影响及可能机制。方法将原代心肌微血管内皮细胞分为正常糖组（NG,5.6 mmol/L）、高糖组（HG,33.3 mmol/L）、高糖＋尼克酰胺组（HG＋N,33.3 mmol/L＋20 mmol）和高糖＋蛋白激酶C-βⅡ（PKC-βⅡ）抑制剂LY333531组（HG＋LY,33.3 mmol/L＋20 nmol）,培养24 h后分别观察细胞的管腔形成、迁移及增殖情况。Western blotting检测不同组细胞PKC-βⅡ、Akt和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达情况。结果与NG组相比,HG组细胞的管腔形成、迁移和增殖能力明显降低（P〈0.05）;而HG＋N组和HG＋LY组细胞的管腔形成、迁移和增殖能力得到明显改善。Western blotting结果显示：与NG组相比,HG组PKC-βⅡ磷酸化程度上调,且伴随Aktser473及eNOSser1117表达水平的降低（P〈0.05）。尼克酰胺不仅抑制了高糖导致的PKC-βⅡ磷酸化程度上调,并且恢复Akt、eNOS磷酸化至NG组水平（P〈0.05）。结论高糖导致了PKC-βⅡ的激活,进而抑制Akt/eNOS通路的活性,从而阻碍了微血管细胞的血管形成。尼克酰胺抑制了高糖条件下PKC-βⅡ的磷酸化,上调Akt/eNOS通路活性,从而改善微血管形成障碍。     

高糖对大鼠肾系膜细胞增殖及NF-κBp65核转位的影响

目的：探讨高糖对大鼠肾系膜细胞增殖及NF-κBp65核转位的影响。方法：大鼠HBZY-1肾系膜细胞进行体外培养,用5.6mmol/L葡萄糖（正常对照组）、10、20、30mmol/L高糖分别作用12、24、48小时,用噻唑蓝（MTT）法测各组肾系膜细胞增殖,western-blot法测各组肾系膜细胞NF-κBp65总蛋白的表达;双染免疫荧光激光共聚焦显微镜测各组肾系膜细胞NF-κBp65核转位。结果：48h内,各高糖组大鼠肾系膜细胞的增殖无统计学差异（P〉0.05）;各高糖组NF-κBp65总蛋白的表达无统计学差异（P〉0.05）;高糖组NF-κBp65核转位增加（P〈0.01）,呈时间浓度依赖性。结论：在48h内,高糖直接促进肾系膜细胞NF-κBp65核转位导致NF-κB信号通路激活,并不促进大鼠肾系膜细胞的增殖及NF-κBp65总蛋白的表达增加。     

血清胱抑素C在不同血糖水平老年糖尿病患者的表达及对早期肾损伤的预测价值

目的：探讨血清胱抑素C（Cys C）在不同血糖水平老年糖尿病患者中的表达以及对老年糖尿病早期肾损害的预测意义。方法：150例老年2型糖尿病（T2DM）患者根据血糖控制情况分为A（FBG〈7.0mmol/L,PBG〈10mmol/L,HbAlc〈7%）、B（FBG〈7.0mmol/L,PBG≥10mmol/L,HbAlc〈7%）、C（FBG≥7.0 mmol/L,PBG〈10 mmol/L,HbAlc≥7%）、D（FBG〈7.0 mmol/L,PBG≥10mmol/L,HbAlc≥7%）4组,并选取同期健康体检的正常人40例作为正常对照组,对比5组人群血清Cys C水平,分析老年T2DM患者血糖水平与血清Cys C水平的相关性;并根据老年T2DM患者尿蛋白排泄率（UAER）将其分为早期糖尿病肾病组（EDN组）与非早期糖尿病肾病组（非EDN组）,对比两组血清Cys C水平,并分析老年T2DM患者UAER与血清Cys C水平的相关性。结果：4组老年T2DM患者血清Cys C水平均明显高于对照组,A、B、C组明显低于D组,A、B组低于C组,A组低于B组,差异均具有统计学意义（P〈0.01）;血清Cys C与血糖水平呈正相关（r=0.724,P〈0.01）;EDN组UAER及血清Cys C均高于非EDN组,差异均具有统计学意义（P〈0.01）;血清Cys C与UAER呈正相关（r=0.337,P〈0.05）。结论：随着老年T2DM患者血糖水平的增高,血清Cys C的表达逐渐增加,同时通过血清Cys C的检测,能够对患者发生EDN的风险或可能性进行预测。     

急性脑血管病高血糖相关激素的研究

目的探讨急性脑血管病患者血糖及相关激素的变化。方法采用葡萄糖氧化酶法检测67例非糖尿病急性脑血管病患者的血糖水平，根据血糖值分为高血糖组（41例）和正常血糖组（26例），另设24例体检健康者为对照组。用放射免疫法和酶联免疫法检测促肾上腺皮质激素（ACTH）、胰高血糖素（GCG）、胰岛素（INS）含量，脑CT或MRI扫描确定病灶大小及脑组织结构改变（有无脑室受压、脑中线移位）；对血糖水平、激素浓度和脑组织结构改变之间的关系做相关研究。结果高血糖组ACTH、GCG和INS显著增高；高血糖组和ACTH升高组脑组织结构改变的发生率显著高于正常血糖组和正常ACTH组。结论急性脑血管病血糖升高可能与下丘脑、垂体损伤有关，导致下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴（HPA轴）分泌增强；脑血管病急性期血糖、ACTH、GCG升高，提示预后不良。     

淫羊藿苷改善高糖培养乳鼠心肌细胞活性的线粒体相关机制

目的研究淫羊藿苷对抗体外高浓度葡萄糖诱导乳鼠心肌细胞的损伤及其潜在的线粒体相关机制。方法SD乳鼠心肌细胞分别在含5.5mmol／L葡萄糖（正常对照组）、5．5mmol／L葡萄糖＋20.0mmol／L甘露醇（高渗对照组）、25.5mmol／L葡萄糖（高糖损伤组）、25.5mmol／L葡萄糖＋10μmol／L淫羊藿苷（低剂量淫羊藿昔保护组）和25.5mmol／L葡萄糖＋100μmol／L淫羊藿苷（高剂量淫羊藿苷保护组）的培养基中进行原代培养48h后,检测细胞活力、细胞培养上清液乳酸脱氢酶（LDH）含量、细胞活性氧自由基（ROS）生成、超氧化物歧化酶（SOD）活性,同时检测心肌线粒体跨膜电位,并检测线粒体通透性转换孔（MPTP）开放值。结果与正常对照组比较,高糖培养组心肌细胞活性、细胞SOD活性及心肌线粒体跨膜电位水平均显著下降（P〈0．01）,而培养上清液LDH含量、细胞ROS生成及心肌细胞MPTP开放值则明显升高（P〈001）。淫羊藿苷干预减轻了高糖对心肌细胞各项指标的损伤,尤其是高剂量淫羊藿苷保护组的细胞活性、LDH漏出量、ROS生成值、SOD活性、MPTP开放值、线粒体跨膜电位均有明显改善。高渗对照组各项指标与正常对照组相比差异无统计学意义。结论淫羊藿苷对体外高糖培养乳鼠心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能通过提高细月旬抗眚化能力．减少ROS诱导的心肌MPTP开放程度．维持线粒体正常跨膜电位而实现的。     

蜕皮甾酮对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞影响机制的研究

观察蜕皮甾酮对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）细胞外基质的影响并初步探讨其可能的作用机制。方法：体外培养大鼠Mes细胞株,分低糖组、高糖组、甘露醇组、乙醇对照组、高糖＋蜕皮甾酮组（EDS组）、高糖＋苯那普利组,分别作用12h、24h、48h,免疫细胞化学法检测细胞Col1V蛋白的表达,RT—PCR检测TGF—β1及Smad7mRNA的表达。结果：（1）c01Ⅳ表达的变化：与低糖组比较,高糖组colⅣ表达显著增加（P〈0．01）;与高糖组比较,EDS组及苯那普利组Col1V表达显著减少（P〈0．01）,EDS组与苯那普利组无显著差异（P〉0．05）;（2）TGF—p1及Smad7mRNA的表达：与低糖组比较,高糖组24hSmad7基因表达明显增加（P〈0.01）,24h、48hTGF—B1基因表达均显著增加（P〈0．01）;与高糖组比较,24h、48hEDS组及苯那普利组Smad7基因表达均明显增加（P〈0．01）,TGF—B1基因表达均显著减少（P〈0．01）,EDS组与苯那普利组之间Smad7、TGF—B1基因表达无显著差异（P〉0．05）。结论：（1）蜕皮甾酮能减少高糖培养大鼠MCs细胞外基质的增加。（2）蜕皮甾酮能下调TGF—β1 mRNA的表达、上调Smad7 mRNA的表达,从而发挥对肾脏的保护作用。     

高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中NO的变化及其对细胞外基质的影响

目的 探讨高糖培养的肾小球系膜细胞中一氧化氮（NO）合成的变化,以及上述变化对细胞外基质的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,按干预方法分为正常组（NG组,5.56 mmol·L-1 DMEM）,高糖组（HG组,25 mmol·L-1 DMEM）、一氧化氮供体组（SNP组,5.56 mmol·L-1 DMEM＋100 μmol·L-1 SNP）、NO清除剂组（C-PTIO 组,25 mmol·L-1 DMEM＋200 μmol·L-1 C-PTIO）,以Griess比色法测定培养上清中NO水平;用ELISA法测定培养上清中Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量.结果 高糖培养条件下上清中NO增多（P〈0.05）,Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量增加（P〈0.01）,应用C-PTIO可显著降低上清中NO的含量,Ⅳ型胶原、层黏蛋白的含量也降低.结论 高糖可诱导大鼠肾小球系膜细胞产生NO,异常增多的NO又可导致系膜细胞中Ⅳ型胶原、层黏蛋白的积聚.     

格列吡嗪和格列奇特对MIN6细胞的影响

目的:研究不同磺脲类药物对胰岛素分泌细胞的影响及机制。方法:不同浓度格列吡嗪和格列奇特干预MIN6细胞一定时间后,MTT法检测细胞活力变化,运用ROS捕获剂双氢溴乙啶(HE)、双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)和双氢罗丹明123(DHR123)孵育细胞,用荧光显微镜观察细胞内荧光、流式细胞仪检测MIN6细胞的平均荧光强度(MFI)而测得细胞内ROS水平。用Annexin-vFITC和PI双标记细胞凋亡检测法通过流式细胞仪测定细胞凋亡情况。结果:格列吡嗪干预MIN6细胞后,细胞活力明显被抑制(P<0.05);细胞内的MFI明显增加;细胞凋亡率明显增加;而且,细胞活力下降、MFI和细胞凋亡率与药物作用浓度和时间呈正相关。而格列奇特干预MIN6细胞后,细胞活力无明显抑制(P>0.05);细胞内的MFI无明显增加;细胞凋亡率亦无明显增加。结论:格列吡嗪可诱导MIN6细胞发生氧化应激,诱导MIN6细胞凋亡,说明临床上磺脲类药物治疗糖尿病出现失效可能与磺脲类药物诱发胰岛细胞衰竭相关,然而,格列奇特不诱导MIN6细胞损害,说明并非所有磺脲类药物对β细胞都有损害作用。     

己酮可可碱联合霉酚酸酯对高糖诱导人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1和纤维连接蛋白表达的影响

目的探讨高糖对人肾小球系膜细胞（human mesangial cells,HMCs）单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoat-tractant protein-1,MCP-1）及细胞外基质的主要成分（extracellular matrix,ECM）纤维连接蛋白（fibronectin,FN）表达的影响及己酮可可碱（pentoxifylline,PTX）联合霉酚酸酯（mycophenolate,MMF）对上述指标的干预作用。方法将培养的HMCs分为8组：正常对照组（NG,5 mmol/L葡萄糖）;高糖组（HG,30 mmol/L葡萄糖）;甘露醇渗透压对照组（Man,5 mmol/L葡萄糖＋25 mmol/L甘露醇）;高糖＋PTX-0.03组（P1,30 mmol/L葡萄糖＋0.03 mg/mL PTX）;高糖＋PTX-0.3组（P2,30 mmol/L葡萄糖＋0.3 mg/mL PTX）;高糖＋MMF-10组（M1,30 mmol/L葡萄糖＋10μg/mLMMF）;高糖＋MMF-100组（M2,30 mmol/L葡萄糖＋100μg/mL MMF）;高糖＋PTX＋MMF组（P＋M,30 mmol/L葡萄糖＋0.3 mg/mL PTX＋100μg/mL MMF）,分别在24、48、72 h采用RT-PCR法和ELISA法检测PTX、MMF及PTX＋MMF对高糖条件下MCs内MCP-1 mRNA及蛋白、FN表达的影响。结果高糖组HMCs MCP-1 mRNA、蛋白的表达及FN的分泌较正常对照组显著增加（P〈0.01）,且48 h表达最高;不同浓度的PTX、MMF均能下调MCP-1 mRNA、蛋白及FN的表达（P〈0.01）;不同浓度的MMF对MCP-1 mRNA、蛋白的表达及FN分泌的抑制程度不同,呈时间剂量依赖性（P〈0.05）;不同浓度的PTX则随着时间的延长对其抑制作用无明显差别;PTX联合MMF组比单独PTX各组在各时间点的抑制程度更明显（P〈0.01）,比单独MMF各组在各时间点抑制作用增强,（24 h,P〈0.05）,但随着时间延长,差异无统计学意义。结论 PTX及MMF可能通过阻抑MCP-1的表达及FN的分泌延缓糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）中肾小球硬化及间质纤维化的进展,联合给药组作用优于单药,可能从改善血流动力及抗炎角度解释了PTX联合MMF对DN肾脏的协同保护作用。