大鼠脑出血蛋白激酶C与细胞凋亡关系的实验研究

目的：研究大鼠脑出血后血肿周围蛋白激酶C（Protein kinase C,PKC）及神经细胞凋亡的表达及其多黏菌素B（polymyxin B PMB）对上述表达的影响。方法：将100只SD大鼠随机分为四组：假手术组、脑出血组、小剂量多黏菌素B干预组（0.4mg/kg.d）、大剂量多黏菌素B干预组（0.8mg/kg.d）,立体定位仪定位注射自体不凝血制造大鼠脑出血模型,分别为术后6h、12h、24h、72h、120h处死,免疫组织化学法检测血肿周围区PKC、TUNEL阳性细胞（凋亡细胞）数的表达、TNF-α（肿瘤坏死因子-α）含量、NO（一氧化氮）含量以及大小剂量PMB对其干预后的影响。结果：假手术组PKC少量表达,偶见凋亡细胞;脑出血组自6h起PKC、凋亡细胞及TNF-α、NO含量大量增加,72h达高峰,PKC在120h基本降至假手术组,但凋亡细胞TNF-α、NO含量仍处于较高水平,与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;大小剂量多黏菌素B干预组均有明显抑制PKC、凋亡细胞、TNF-α含量的表达,有统计学意义（P〈0.01）;但PMB剂量的大小无明显差异性（P〉0.05）。结论：脑出血后血肿周围存在大量PKC表达上调、神经细胞凋亡、TNF-α、NO含量增加,PMB能够明显抑制PKC激活,TNF-α、NO释放,减少血肿周围细胞凋亡,起到神经元保护作用。     

脑出血大鼠脑水肿与血浆肿瘤坏死因子关系的研究

目的 观察肿瘤坏死因子在大鼠脑出血后的变化及其与脑水肿的关系.方法 采用随机方法将40只Sprague-Dawley实验大鼠分为对照组、脑出血模型组,每组又按照不同的时相点6、24、72、168h分为4个亚组,每个亚组5只.采用自体血脑内注入法制作大鼠脑出血模型,对照组只进针不注血.干、湿重法检测脑含水量;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-alpha, TNF-α)的浓度.结果 脑出血模型组大鼠各个时相点脑含水量、血浆TNF-α的浓度均显著高于对照组(P＜0.01).结论 脑出血后大鼠血浆肿瘤坏死因子-α浓度明显增高.脑出血后脑水肿的产生可能与肿瘤坏死因子的大量释放有关.     

肿瘤坏死因子α诱导早孕原代培养细胞滋养细胞的凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）对早孕细胞滋养细胞凋亡的影响.方法 选取正常妊娠早孕（7～9周）绒毛,采用Percoll梯度离心法提取细胞滋养细胞进行原代培养.A组6孔培养皿分别加入10 μL PBS,10 μg/mL,100 μg/mL TNF-a,B组双孔对照.24 h后分别收集细胞使用RT-PCR方法测定Bax和Bcl-2的表达.并使用TUNEL方法测定细胞凋亡数目.结果 A组与B组相比,TNF-α可以明显增加Bax的表达（P〈0.05）,并呈剂量相关性.TUNEL方法测定显示：与B组相比,A组凋亡细胞数明显增加（P〈0.05）.结论 TNF-α可以诱导早孕细胞滋养细胞的凋亡.     

蛋白激酶C与培养神经元缺氧后caspase-3表达及细胞凋亡关系的研究

目的 探讨蛋白激酶C（PKC）对神经元缺氧调亡的影响及作用机制。方法 建立体外培养Wistar胎鼠皮层神经元模型及培养神经元缺氧模型,用3种不同浓度的PKC催化亚基特异性抑制剂Calphostin C预孵育培养神经元后进行缺血处理,观察神经元下述指标的改变;神经元存活率、caspase-3（CPP32）和细胞凋亡的规律。结果 随着缺氧时间的延长和Calphostin C浓度的增加,培养神经元的存活数量显著下降、caspase-3和TUNEL荧光染色阳性率及平均荧光强度均显著升高。结论 ①PKCt caspase-3均参与了缺氧神经元调亡;②PKC抑制剂Calphostin C可加重缺氧神经元凋亡;且该作用是通过caspase-3信号转导途径实现的。③PKC的激活在缺氧神经元凋亡中起保护作用。     

重型颅脑损伤后TNF-α表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在大鼠重型颅脑损伤后各个阶段的表达水平及其与颅脑损伤后细胞凋亡的关系.方法 将36只大鼠随机分为实验组与对照组.实验组大鼠制作重型颅脑损伤模型,对照组大鼠予以假手术处理,两组大鼠分别在伤后6、24与72h通过RT-PCR法检测TNF-αmRNA水平、TUNEL法检测细胞凋亡水平.结果 重型颅脑损伤后大鼠脑组织TNF-αmRNA水平、细胞凋亡水平均较对照组明显升高,并在伤后24h达到高峰.结论 TNF-α可能在颅脑损伤后的细胞凋亡中起了重要的作用,对TNF-α表达的干预可望起到减少神经元凋亡从而保留更多神经功能的目的 .     

蛋白激酶Cα反义核酸诱导肺癌A549细胞凋亡

目的 探讨聚乙烯亚胺(PEI)介导的人蛋白激酶Cα(PKCα)基因反义寡核苷酸(ASODN)对人肺癌A549细胞凋亡的影响. 方法 以PEI介导PKCα ASODN转染A549细胞,设空白对照组、PEI组、PEI-ASODN组(PKCα ASODN终浓度分别为1.25、1.50 μmol/L),通过Hoechst 33258染色和电镜检测,观察细胞凋亡的形态学改变;设空白对照组、PEI组、PEI-随机寡核苷酸(RODN)组(RODN终浓度1.50 μmol/L)、PEI-ASODN组(PKCα ASODN终浓度分别为1.00,1.25,1.50 μmol/L),采用PI单染和Annexin Ⅴ/PI双染流式细胞术,检测细胞亚二倍体峰和早期凋亡率. 结果 Hochest 33258染色和电镜检测均可见PKCα ASODN转染组细胞有核固缩、边集和裂解等凋亡形态学变化.流式细胞术示:PKCα ASODN转染组细胞出现了明显的亚二倍体峰和早期凋亡细胞群,与空白对照组、PEI或PEI介导的RODN转染组相比,差异有统计学意义(P<0.05),并呈浓度依赖性效应. 结论 PEI介导的PKCα反义核酸能诱导A549细胞凋亡.     

大鼠实验性脑出血后TNF-α、C9表达的相关分析

目的研究大鼠实验性脑出血后血肿周围肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、补体成分C9的表达情况,探讨TNF-α、补体C9在脑出血后继发性损伤中的作用以及应用眼镜蛇毒因子（CVF）干预后的影响。方法采用立体定向技术,将自体不凝血注入大鼠尾状核制备脑出血模型,将动物分为假手术组、出血组和CVF干预组,分别在不同时间点断头取脑,连续切片分别作TNF-α、补体C9免疫组化染色和HE染色。结果脑出血后2h血肿周围脑组织开始表达C9,24h达高峰;TNF-α24h表达明显增加,72h达高峰,各组与假手术组之间比较有差异（P〈0.05）;TNF-α的表达与C9的表达呈正相关关系（r=0.824,P〈0.05）;经CVF干预后,血肿周围组织C9、TNF-α表达量明显下降,干预组与出血组之间比较有显著差异（P〈0.01）。结论脑出血后补体级联激活C9及TNF-α表达明显增加;CVF干预后C9及TNF-α表达下降,能达到神经保护作用。     

蛋白激酶C在乙醇诱导人γδT细胞凋亡中的作用

目的: 观察蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在乙醇诱导人γδT细胞凋亡中的作用。方法: 用结核杆菌多肽抗原(MtbAg)刺激正常人外周血单个核细胞,获得Mtb-Ag激活的T细胞(γδT细胞为主);采用Annexin-V-FITC/PI染色流式细胞术观察不同浓度乙醇对人γδT细胞凋亡诱导情况,并观察Rottlerin (PKC抑制剂)预处理对乙醇诱导γδT细胞凋亡的影响。结果: 4.0%的乙醇作用结核杆菌抗原活化的γδT细胞4 h、12 h、24 h均可显著诱导γδT细胞凋亡(P<0.01);5.0 μmol/L和40.0μmol/L Rottlerin可显著抑制4.0%乙醇诱导γδT细胞凋亡(P<0.01),凋亡抑制率分别为75.17%和58.95%。结论: PKC途径参与乙醇诱导人γδT细胞凋亡信号传导。     

脓毒症模型大鼠肿瘤坏死因子-α和肝细胞凋亡的关系

目的:探讨脓毒症大鼠肿瘤坏死因子a(TNF a)与肝细胞凋亡的关系以及对肝功能的影响。方法:大鼠随机分为正常对照组和实验组,实验组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症大鼠模型,分别于术后30、60、120、180min(CLP术后30、60、120、180 min组)处死动物,测定肝组织和血浆TNF a水平,并检测肝细胞凋亡的情况,同时测定丙氨酸氨基转移酶(ACL)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。正常对照组麻醉后不行CLP术,其余同实验组。结果: 与正常对照组相比,CLP术后30、60、120、180 min组肝细胞凋亡数、血清TNF-α、ALT水平均明显升高(P<0.01),有随着时间的延长增加的趋势;与正常对照组相比,CLP术后120、180 min组血清AST含量明显升高(P<0.01);CLP术后大鼠肝组织、TNF-α表达强度随时间延长而有增强的趋势。结论: CLP后大鼠肝脏产生大量TNF-α,与肝细胞凋亡有密切关系,肝功能受到损伤。     

蛋白激酶C和蛋白酪氨酸激酶活性对缺血再灌注心肌细胞凋亡影响的实验研究

为探讨缺血预适应（Ｉｓｃｈｅｍｉｃ Ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ,ＩＰ）早期以及蛋白激酶Ｃ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ Ｃ,ＰＫＣ）及蛋白酷氨酸激酶（Ｐｅｏｔｅｉｎ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｋｉｎａｓｅ,ＰＴＫ）激动剂和抑制剂对缺血再灌注（Ｉ／Ｒ）心肌细胞凋亡的影响以及ＩＰ效能发挥通路中央ＰＫＣ和ＰＴＫ的关系。用ＴＵＮＥＬ法检测Ｉ／Ｒ心肌细胞凋亡。结果显示：１、ＩＰ早期能显著降低Ｉ／Ｒ心肌细胞凋亡（     

蛋白激酶C在兔肺缺血预处理保护中的作用

目的 :探讨蛋白激酶C(PKC)在兔肺缺血预处理保护中的作用。方法 :采用在体兔单肺原位缺血再灌注模型。 5 0只日本大耳兔随机均分为 5组。假手术组 (S)、缺血 /再灌注组 (I/R)、缺血预处理组 (IPC)、多粘菌素B组 (PMB)和缺血预处理加多粘菌素B组 (IPC +PMB)。实验末测血浆SOD活力和MDA含量 ,肺湿干重比和肺泡损伤数比值 ,观察肺超微结构变化。结果 :①I/R组与假手术组相比 ,SOD活力下降 ,MDA含量、湿干重比及肺泡损伤数比值增加 (P均 <0 .0 1)。IPC组与I/R组相比 ,SOD活力增加 ,MDA含量、湿干重比及肺泡损伤数比值下降 (P均 <0 .0 1)。I/R组、PMB组及IPC +PMB组之间的检测指标对比无明显变化 (P均 >0 .0 5 )。②电镜显示I/R组、PMB组及IPC +PMB组均有明显的肺超微结构损伤 ,而IPC组损伤不明显。结论 :缺血预处理对肺缺血再灌注损伤有明显的保护作用 ,且可被PKC抑制剂多粘菌素B取消 ,提示PKC参与肺缺血预处理的保护作用     

脑出血早期患者出血量与血清白介素-6和肿瘤坏死因子-α的关系

目的观察白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在脑出血早期患者血清中IL-6、TNF-α含量变化,探讨其对脑出血预后生活质量的影响。方法采用ELISA法、放射免疫法测定169例脑出血早期患者入院d2血清中IL-6、TNF-α水平,其中出血10~29ml组41例,30ml~49ml组93例,50~60ml组35例。设30例健康人作对照。同时对出院者进行神经功能缺损评分(NDS)评定,观察IL-6、TNF-α不同含量水平对脑出血预后生活质量的影响。结果与对照组比较,出血量10ml以上者血清中IL-6、TNF-α含量明显升高(P<0.05);30ml以上组较10ml以上组显著升高(P<0.05),但低于50ml以上组(P<0.05)。同等条件下脑出血患者早期血清中IL-6、TNF-α含量越高,NDS越下降(P<0.05,P<0.01)。结论脑出血患者早期血清中IL-6、TNF-α含量明显升高,出血量与其后的生活质量有关。     

大鼠脑出血后血肿周围核因子-кB的表达和意义

目的研究大鼠实验性脑出血后血肿周围脑组织核因子-кB(NF-кB)的表达及其在继发性脑损伤中的作用。方法采用自体不凝血注入大鼠尾状核制备脑出血模型,免疫组化染色法检测脑组织NF-кB、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达。结果脑出血后6 h血肿周围脑组织NF-кB开始表达,48 h达高峰,ICAM-1 12 h开始表达,72 h达高峰;各组与假手术组之间有显著差异(均P<0.01);脑出血后NF-кB与ICAM-1呈正相关关系(γ=0.868,P<0.05),NF-кB表达从开始到高峰均早于ICAM-1。结论脑出血后NF-кB表达增加,并通过ICAM-1参与了脑出血继发性脑组织损伤。     

逼尿肌不稳定大鼠逼尿肌组织蛋白激酶C活性变化的实验研究

目的了解逼尿肌不稳定(DI)大鼠逼尿肌细胞蛋白激酶C(PKC)活性的变化.方法建立DI大鼠模型,原代培养逼尿肌稳定(DS)及DI大鼠逼尿肌细胞,分别检测这两种细胞胞浆和胞膜PKC活性.结果DS、DI组大鼠逼尿肌培养细胞胞浆PKC活性分别为(5.10±0.67 )、(5.15±0.41)pmol·min-1·mgprotein-1,两者差异无统计学意义(P＞0.05.胞膜PKC活性分别为(1.21±0.17 )、(1.92±0.24)pmol·min-1·mgprotein-1,DS大鼠较DI大鼠显著降低(P＜0.01).结论DI大鼠逼尿肌细胞胞膜PKC发生了由胞浆向胞膜的转运激活.     

蛋白激酶C对逼尿肌不稳定大鼠逼尿肌细胞钾离子通道影响的实验研究

目的观察蛋白激酶C(PKC)对逼尿肌不稳定(DI)大鼠逼尿肌细胞钾离子通道亚型Kv1.5的影响.方法建立DI大鼠模型,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫蛋白印迹(Western-blotting)技术检测原代培养的DI及逼尿肌稳定(DS)大鼠逼尿肌细胞Kv1.5的表达及乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)、H-7(PKC 特异抑制剂)对DS大鼠逼尿肌培养细胞Kv1.5的影响.结果DS、DI组大鼠膀胱逼尿肌细胞中均有Kv 1.5 mRNA和蛋白表达,DI组和DS PMA组大鼠逼尿肌细胞Kv 1.5 mRNA和蛋白表达显著低于DS组(P＜0.05～0.01), DS PMA组Kv 1.5蛋白表达明显低于DI组(P＜0.05),DS PMA H-7组Kv 1.5 mRNA和蛋白表达显著高于DI组(P＜0.05).结论PKC对逼尿肌钾离子通道Kv 1.5具有明显抑制作用,这可能是导致DI发生的一个重要原因.     

地塞米松及酪氨酸蛋白激酶抑制剂对胃上皮细胞白介素-8分泌抑制作用的实验研究

目的 :探讨慢性胃肠道炎症机制及其防治 ,本文对肿瘤坏死因子和白细胞介素 (白介素 ) 1β诱导的胃上皮细胞白介素 8分泌作用使用地塞米松及酪氨酸蛋白激酶抑制剂进行了体外实验研究。方法 :胃上皮细胞经体外培养后由肿瘤坏死因子和白介素 1β刺激 ,由酶联免疫法检验其白细胞介素 8的分泌 ,并与地塞米松和蛋白激酶抑制剂组相比较。结果 :地塞米松在 10 -8,10 -7,10 -6,10 -5mol/L可抑制肿瘤坏死因子和白介素 1β诱导的胃上皮细胞白介素 8分泌。酪氨酸蛋白激酶抑制剂金雀异黄素和核比霉素A具有类似效应 ,但蛋白激酶C和A抑制剂却无抑制效应。结论 :本文结果提示细胞介素诱导的胃上皮细胞白细胞介素 8的分泌可能是促进胃部炎症性疾病的原因之一 ,抑制白细胞介素 8的产生可为胃肠道炎症的防治机制提供理论依据     

大鼠脑出血后血肿周围核因子-KB的表达和意义

目的研究大鼠实验性脑出血后血肿周围脑组织核因子-kB（NF-kB）的表达及其在继发性脑损伤中的作用。方法采用自体不凝血注入大鼠尾状核制备脑出血模型，免疫组化染色法检测脑组织NF-kB、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的表达。结果脑出血后6h血肿周围脑组织NF-kB开始表达，48h达高峰，ICAM-1 12h开始表达，72h达高峰；各组与假手术组之间有显著差异（均P〈0．01）；脑出血后NF-kB与ICAM-1呈正相关关系（7=0．868，P〈0．05），NF-kB表达从开始到高峰均早于ICAM-1。结论脑出血后NF-kB表达增加，并通过ICAM-1参与了脑出血继发性脑组织损伤。     

蛋白激酶C在糖尿病周围神经病变中的表达及中药干预的实验研究

目的　蛋白激酶C(PKC)与糖尿病(DM)及其并发症的关系已成为研究的焦点,本实验检测了DM大鼠坐骨神经及腓肠肌PKC -beta表达及活性变化,探讨PKC在糖尿病周围神经病变(DPN)发病中的作用,并观察中药对其影响。方法　利用(γ -32P)ATP底物磷酸化方法检测实验对照组、中药组DM大鼠及正常组大鼠坐骨神经及腓肠肌的胞浆、胞膜PKC-beta活性,并行免疫印迹分析PKC- beta在神经肌肉组织中的表达。结果　实验 2个月,两组DM大鼠坐骨神经及腓肠肌的胞浆、胞膜PKC beta活性与正常组大鼠比较均增高,实验对照组增高明显,中药组稍高于正常组。PKC- beta表达与活性测定结果相一致。结果提示实验对照组坐骨神经及腓肠肌部位PKC- beta表达明显增加,活性明显增高,而中药组接近正常组。结论　实验性 2个月DM大鼠周围神经病变中的PKC- beta表达及活性明显增加,本中药复方对其有一定抑制作用。     

β-七叶皂甙钠对高血压性脑出血患者血清CRP和TNF-α含量变化的影响

目的动态观察急性高血压性脑出血患者血清C-反应蛋白(CRP)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量变化规律及β-七叶皂甙钠对其变化的影响。方法将高血压基底节区脑出血患者80例,随机分为两组各40例;常规组给予常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加用β-七叶皂甙钠,并测定发病后4天、10天、21天血清CRP和TNF-α含量。结果发病后第4天,两组患者血清TNF-α、CRP水平和NIHSS评分差异无统计学意义(P>0.05),而病程的第10天和第21天治疗组CRP、TNF-α水平和NHSS评分低于常规组(P<0.01)。结论高血压性脑出血急性期血清中CRP、TNF-α水平增加,表明其参与了脑出血的病理生理过程。β-七叶皂甙钠通过调节血清CRP、TNF-α、水平而改善脑出血的预后。