骨形成蛋白-7与肾脏病

骨形成蛋白 (ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ ,ＢＭＰ)是转化生长因子 (ＴＧＦ) β超家族的一员 ,因具有诱导骨形成的特性而被命名为骨形成蛋白 ,目前已发现了至少 15种ＢＭＰ分子 ,分别命名为ＢＭＰ 1～ＢＭＰ 15 [1] ,具有多种重要的生理作用[2 ] 。其中 ,ＢＭＰ 7又称成骨蛋白 1(ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｐｒｏｔｅｉｎ 1,ＯＰ 1)具有较强的诱导成骨作用 ,并与骨骼、眼、肾脏和心血管发生及发育均密切相关[3,4 ] 。近年来 ,动物实验发现 ,某些肾脏病的发生与ＢＭＰ 7减少有关 ,而ＢＭＰ 7治疗则可减轻肾脏损害 ,具有抗…     

应用转染BMP7基因组织工程软骨修复兔膝关节软骨缺损观察

目的 构建转染骨形态发生蛋白-7(BMP7)基因组织工程软骨,观察对家兔膝关节软骨缺损的修复作用.方法 将转染BMP7基因的软骨细胞(5×109个/L)接种于胶原-纤维蛋白凝胶的支架中,培养14 d后移植于家兔膝关节软骨表面,直径为5.0 mm,深达软骨下骨板的全层软骨缺损部位.移植后4、8、12周处死家兔,通过创面形态观察、组织形态的光镜观察、BMP7基因在移植部位的表达,评价转染BMP7基因组织工程软骨对兔膝关节软骨缺损的修复作用.结果 转染BMP7和未转染BMP7基因组织工程软骨培养物的体积分别为9 mm × 9 mm×2 mm和8 mm×8 mm×2 mm.转染BMP7基因组移植于家兔膝关节软骨后4、8、12周,均有软骨缺损修复作用,且移植部位有红褐色BMP7 mRNA和棕红色BMP7蛋白表达.移植后12周修复效果佳.优于未转染BMP7基因组.结论 转染BMP7和未转染BMP7基因组织工程软骨对兔膝关节软骨缺损均有修复作用,但转染BMP7基因组织工程软骨修复作用更强.     

大骨节病儿童及成人关节软骨中甲状旁腺激素相关肽的表达

目的 探索甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)在大骨节病儿童及成人关节软骨中的表达及分布。方法 应用免疫组化方法比较正常儿童和成人与大骨节病儿童和成人关节软骨中PTHrP的表达。结果 ①大骨节病儿童关节软骨表层、中层、深层PTHrP阳性细胞表达率分别为30％、24％和31％，中层、深层表达率比正常儿童明显增高(P＜0．01)；②大骨节病成人关节软骨表、中、深层PTHrP阳性细胞表达率分别为54％、46％和16％，各层细胞阳性表达率均明显高于正常组(P＜0．01)。②大骨节病儿童与成人比较各层软骨细胞PTHrP的阳性表达差异均有显著意义(P＜0．01)，表现为表、中层成人高于儿童，深层儿童高于成人。结论 大骨节病患者关节软骨中PTHrP阳性表达率高于正常对照。     

重组骨形态发生蛋白-7的复性及纯化

目的探讨重组骨形态发生蛋白-7（rhBMP-7）的复性及纯化获得高纯度rhBMP-7二聚体的方法。方法表达rhBMP-7的工程菌经发酵、裂菌、提取包涵体后,4℃下依次在尿素浓度为4、2、1 mol/L的磷酸盐缓冲液中透析使蛋白复性,然后再通过层析色谱纯化去除杂蛋白。结果纯化后rhBMP-7以单体和二聚体形式存在,纯度达95%以上,其中rhBMP-7二聚体含量可达60%以上。结论初步建立了先复性然后在低脲浓度下纯化的方法,能够获得含量较高的rhBMP-7二聚体。     

骨形态发生蛋白-7生物学功能的研究进展

最初发现骨形态发生蛋白(BMP)-7的作用是异位诱导成骨,并根据这一特点应用于治疗临床一些难治性骨缺损疾病.新近发现BMP-7还与泌尿系统、生殖系统关系密切,可用于治疗动物模型中缺血性肾病、炎性肾病、高转换率肾性骨营养不良和血管钙化等.因此,BMP-7具有广泛的功能与应用前景.     

重组人骨形态发生蛋白-7抗体的制备及鉴定

目的利用重组人骨形态发生蛋白-7（rhBMP-7）制备抗体,为BMP-7临床应用奠定基础。方法采用皮内多点注射法将rhBMP-7免疫新西兰大白兔4次,每次间隔2周。免疫后颈动脉插管取血。ELISA法测定抗血清效价,蛋白免疫印迹技术确定抗血清特异性、最佳稀释度、灵敏度。结果抗血清效价为1：640000;通过从小鼠骨组织及肾脏组织中提取的BMP-7证实抗体有很好的特异性,抗血清的最佳稀释度为1：5000-1：50000,灵敏度为1～100ng。结论成功制备了rhBMP-7抗体,该抗体具有很高的特异性及灵敏度。     

结缔组织生长因子与骨形成蛋白-9在骨代谢中的研究进展

<正>结缔组织生长因子(CTGF)是一种细胞外基质分泌蛋白,生理状态下,在心、脑、肝、肾等组织器官中呈基础量表达,病理状态下,如在某些增生性或纤维性疾病中,CTGF过度表达与疾病的发生发展紧密相关。CTGF调节细胞功能多样化,参与体内多种病理生理过程,如胚胎发育、雌性生殖系统、恶性肿瘤、纤维化疾病等。CTGF是骨形态发生蛋白(BMPs)信号通路的靶基因,可作用于BMPs信号通路〔1〕,而BMP-9是已知BMPs中     

骨质疏松大鼠的骨形成蛋白-4诱导成骨信号转导机制变化

目的 观察骨形成蛋白4(BMP-4)及其信号转导蛋白(Smad)5、6在去卵巢大鼠骨组织中的表达.方法 采用切除大鼠双侧卵巢法复制骨质疏松模型,术后94 d,用双能X线骨密度仪检测骨密度;用Western印迹法检测骨组织中BMP-4和Smad5、6蛋白表达水平.结果 与正常组比较,模型空白组大鼠股骨骨密度显著下降(P＜0.01);BMP-4和Smad5蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),Smad6蛋白表达水平明显升高(P＜0.01).结论 骨组织中BMP-4、Smad5蛋白表达水平的下降和Smad6蛋白表达水平的升高,可能是骨质疏松发生的重要机制之一.     

血管活性肠肽在骨关节炎患者关节软骨病变组织中的表达及意义

目的探讨血管活性肠肽（VIP）在骨关节炎（OA）发生、发展中的作用。方法选取进行关节置换的OA患者的关节软骨标本39份（观察组）,另取外伤截肢患者的膝关节软骨或股骨颈暴力骨折患者正常关节软骨标本9份（对照组）,采用免疫组织化学染色法检测软骨组织中VIP表达和分布,对阳性染色的平均光密度进行半定量分析。结果两组关节软骨中均可见VIP阳性神经纤维,纤维数无显著差异。观察组关节软骨VIP平均光密度值明显低于对照组（P〈0.05）。VIP含量与软骨改良M ank in病理评分呈负相关（r=-0.799,P〈0.05）。结论 VIP低表达与关节软骨退变程度、OA病程进展相关。     

燃煤型氟中毒大鼠骨形成蛋白表达变化研究

目的 复制燃煤型氟中毒大鼠模型,并观察骨形成蛋白-2(BMP-2)和骨形成蛋白-3 (BMP-3)在不同染氟剂量和染氟时间大鼠血清中的表达变化.方法 断乳4周80～ 120 g清洁级SD大鼠120只,按体质量随机分为对照组、低氟组、中氟组、高氟组,每组30只,雌雄各半.食用病区煤烘玉米,复制燃煤型氟中毒动物模型.对照组、低氟组、中氟组、高氟组的含氟量分别为6.30、9.56、15.89、23.00mg/kg.各组分别于染氟第30、90、180天时股动脉放血法处死10只动物,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清BMP-2和BMP-3水平.结果 ①BMP-2测定结果:染氟第90、180天时,血清BMP-2组间比较差异有统计学意义(F值分别为385.08、173.98,P均＜0.01).其中低氟组、中氟组、高氟组在染氟第90天时[(18.80±0.43)、(22.22±0.85)、(25.14±0.69)μg/L]和第180天[(7.98±0.68)、(8.97±0.78)、(15.04±0.89)μg/L]血清BMP-2表达高于对照组[(12.54±1.29)、(7.53±0.97)μg/L,P均＜0.05],且BMP-2表达随着染氟剂量的增加而增加(P均＜0.05).4组不同染氟时间血清BMP-2组内比较差异有统计学意义(F值分别为55.42、511.58、686.35、671.64,P均＜0.01).其中染氟第90天时,各组血清BMP-2[(12.54±1.29)、(18.80±0.43)、(22.22±0.85)、(25.14±0.69)μg/L]均高于同组染氟第30天时[(11.75±1.15)、(11.42±1.07)、(11.38±0.92)、(11.15±1.03)μg/L,P均＜0.05];染氟第180天时,各组血清BMP-2[(7.53±0.97)、(7.98±0.68)、(8.97±0.78)、(15.04±0.89)μg/L]均低于同组染氟第90天时(P均＜ 0.05).②BMP-3测定结果:染氟第30、90、180天时,血清BMP-3组间比较差异无统计学意义(F值分别为0.7215、1.2951、0.0964,P均＞0.05).结论 大鼠较长时间摄人过量氟,刺激BMP-2表达增强,但随着摄氟时间延长,氟对BMP-2的表达呈现抑制作用.氟对BMP-3表达的影响不及对BMP-2敏感.     

家兔C型利钠肽基因的克隆及鉴定

目的克隆家兔C型利钠肽基因,为其真核表达载体的构建奠定基础。方法通过RT-PCR从家兔腹主动脉组织中克隆C型利钠肽基因全长编码区,将该DNA片段亚克隆至克隆载体pMD18-T中,用Pst Ⅰ单酶切筛选出负向插入片段,对重组质粒进行鉴定。结果PCR、酶切及测序鉴定证实,家兔C型利钠肽基因全长编码区被准确插入到载体pMD18-T的TA克隆位点中。结论成功克隆家兔c型利钠肽基因,为其真核表达载体的构建及开展糖尿病足C型利钠肽基因治疗奠定了基础。     

化瘀泻浊方对肾间质纤维化大鼠骨形态发生蛋白-7的影响

目的 观察化瘀泄浊方对肾间质纤维化(RIF)大鼠骨形态发生蛋白 (BMP)-7的影响.方法 选用健康、雌性SD大鼠50只,用单侧输尿管结扎方法复制大鼠RIF模型,将其随机分为假手术组、化瘀泄浊方组(化瘀泄浊方5.7 g·kg-1·d-1经口灌服)、阿魏酸哌嗪分散片组(予阿魏酸哌嗪分散片6.7 mg·kg-1·d-1)、缬沙坦组(予缬沙坦5.3 mg·kg-1·d-1经口灌服)及模型组(予同等量生理盐水经口灌服),每组10只大鼠.行HE、Masson染色观察梗阻侧肾脏组织形态学改变并用免疫组化方法检测观察梗阻侧肾脏BMP-7表达水平.结果 模型组及各治疗组与假手术组相比均呈现程度不同的病理损害,梗阻肾间质BMP-7蛋白表达也明显减少(P<0.01).各治疗组与模型组比较,BMP-7表达明显增加(P<0.01).治疗各组间比较,化瘀泄浊方组优于阿魏酸哌嗪分散片组(P<0.01),其他各组间均无明显差异(P>0.05).结论 输尿管梗阻后肾组织呈现程度不同的病理损害,肾纤维化面积明显增加,这可能与BMP-7表达减少有关,化瘀泄浊方对其有一定的上调作用.     

骨形成蛋白-7在慢性胰腺炎中的表达及意义

目的研究骨形成蛋白-7(BMP-7)在大鼠CP组织中的表达,探讨其在胰腺纤维化形成中的意义。方法每周2次腹腔内注射二乙基二硫代氨基甲酸盐(diethyldithiocarbamate,DDC)建立大鼠CP模型。HE染色观察正常组及造模后2、4、6、8周时大鼠胰腺病理学变化,VG染色观察胶原纤维含量,免疫组化检测BMP-7、TGF-β1、Smad2/3的表达。结果(1)正常组BMP-7在腺泡细胞的胞质中表达。造模后4周腺泡细胞及部分炎性细胞BMP-7阳性面积比及阳性灰度值较正常组减少(P<0.05)。造模后8周腺体萎缩几乎无BMP-7表达,残留腺泡中表达量较正常胰腺显著减少[阳性面积比:(5.63±1.65)%vs(36.51±3.76)%,P<0.01;灰度值:144.20±5.67vs174.54±1.22,P<0.01]。(2)TGF-β1和Smad2/3的表达在纤维化进展中变化一致。对照组小叶间结缔组织和部分腺泡间有少量表达。8周时小叶内纤维化区域及残留腺泡细胞间可见大量TGF-β1和Smad2/3表达,TGF-β1为(22.66±6.73)%;Smad2/3为(24.58±4.35)%,较正常组增加(P<0.01)。(3)TGF-β1与Smad2/3表达呈正相关(r=0.61,P=0.005),BMP-7与TGF-β1、Smad2/3表达均呈负相关(r值分别为-0.69和-0.68,P=0.001)。结论胰腺纤维化过程中TGF-β1/Smad2/3信号通路活化,可促进细胞外基质沉积和腺泡细胞萎缩。BMP-7的表达量可反映残存腺泡细胞的数量,可能对CP的进展具有潜在的保护作用。     

C7orf69基因的克隆表达及生物信息学分析

目的体外克隆表达并纯化C70rf69重组蛋白,对C70rf69蛋白进行生物信息学分析。方法PCR扩增C70rf69目的基因片段,构建原核表达载体,转化BL21,IPTG诱导目的蛋白表达,SDS—PAGE和Westernblot鉴定,Ni-NTA纯化目的蛋白。结果扩增获得序列完全正确的C70rf69基因片段（自然变异体）,重组蛋白以包涵体的形式高效表达,在非变性条件下获得较高纯度的重组蛋白。生物信息学软件预测C70rf69蛋白（含信号肽）含有PKC、CK2磷酸化位点和N-十四烷基化位点。结论成功的对分泌蛋白C70rf69进行了基因克隆、表达与初步纯化,为其进一步的功能研究奠定了坚实的基础。     

重组骨形态发生蛋白7基因转染骨髓间充质干细胞及其在该细胞中的表达

目的将重组骨形态发生蛋白7质粒（pcDNA3．1-BMP7）转染至体外培养的兔骨髓间充质干细胞中．测定骨形态发生蛋白7基因在该细胞中的表达。方法骨形态发生蛋白7基因序列测定、拼接后与报道的骨形态发生蛋白7基因序列对照：脂质体介导pcDNA3．1-BMP7转染骨髓间充质干细胞，G418筛选14d，Western blot、PCR、原位杂交检测骨形态发生蛋白7基因的表达。结果序列测定证实与GenBank报道的骨形态发生蛋白7全长基因序列一致：转染pcDNA3．1-BMP7质粒的骨髓间充质干细胞有大量骨形态发生蛋白7蛋白及骨态发生蛋白7 mRNA表达。结论脂质体介导下，重组真核表达载体pcDNA3．1-BMP7能被转入骨髓间充质干细胞．且表达了骨形态发生蛋白7及骨形态发生蛋白7 mRNA。     

骨形态发生蛋白2和4在外源性Noggin模型大鼠再生肝的表达及其意义

骨形态发生蛋白(BMPs)信号转导通路是肝再生过程中重要的信号转导通路[1].本研究通过外源性Noggin的干预,探讨BMP-2和BMP-4对大鼠肝大部切除(partial hepatectomy,PH)后肝再生过程的影响.一、材料与方法1. 材料:外源性Noggin试剂盒购于美国R&DSystems,Inc.试剂公司,兔抗鼠BMP-2多克隆抗体、即用型SABC试剂盒、DAB显色剂均购自武汉博士德生物有限公司.兔抗鼠BMP-4多克隆抗体、即用型SP试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司.大鼠BMP-2定量酶联检测试剂盒购自上海森雄科技实业有限公司.     

刚地弓形虫RH株微线体蛋白MIC3成熟肽的克隆与表达

目的　克隆编码刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)RH株微线体蛋白MIC3成熟肽的基因,构建原核表达载体pET MMIC3,并在大肠杆菌BL2 1株中表达。方法　采用PCR技术从刚地弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码微线体蛋白MIC3成熟肽的基因,并克隆到T载体上,经测序鉴定后,将目的基因亚克隆到表达载体pET30a(+)上,构建质粒pET MMIC3。表达产物用Westernblot进行进一步确认。结果　经初步菌液PCR鉴定,提取质粒双酶切鉴定并测序,确认插入T载体的序列为所需的目的序列;亚克隆构建pET -MMIC3,转化到宿主菌大肠杆菌BL2 1,得到分子量为37.2kDa的重组表达蛋白,Westernblot的结果与预测相符。结论　成功的克隆并融合表达了刚地弓形虫RH株微线体蛋白MIC3成熟肽,为进一步研究其在弓形虫粘附和入侵中的作用奠定了基础。     

骨形态生发蛋白6和铁超载骨质疏松关系的最新进展

近年来的研究发现体内铁超载能引起骨质疏松,骨形态生发蛋白6(BMP-6)能上调铁调素的表达.因此BMP-6可能在铁超载骨质疏松的恢复过程中起到一定的作用.本文就BMP-6与铁超载骨质疏松关系的最新文献进行综述,旨在为铁超载骨质疏松的进一步研究打下一定基础.

Abstract：

Recent researches have revealed that iron-overload could lead to osteoporosis and bone morphogenetic protein 6(BMP-6)could enhance the expression of hepcidin. Therefore, it is believed that BMP-6 might play a key role in the treatment of such kind of osteoporosis. This paper focuses on the newest papers regarding the relationship between BMP-6 and iron-overload osteoporosis in order to lay a foundation for further research on the osteoporosis induced by iron overloading.     

Serum bone morphogenetic protein 7, insulin resistance, and insulin secretion in non-diabetic individuals

This study was to explore the relationship of serum BMP7 with insulin secretion and metabolic parameters in non-diabetic individuals. Serum BMP7 concentrations positively correlated with HOMA2-%B (insulin secretion index) and fasting insulin. Our findings suggested that BMP7 may stimulate insulin secretion and improve islet cell function in humans.     

CTX-M-12编码基因的克隆、表达及序列分析

目的 研究上海市华山医院临床分离的肺炎克雷伯菌K99—442菌株产生的超广谱β—内酰胺酶(ESBIs)的基因型。方法 采用聚合酶链反应(PCR)扩增K99—442转移接合子中的ESBLs全编码基因，克隆人pHSG398质粒、表达，并对PCR产物进行测序，分析其基因型。结果 K99—442转移接合子所产生ESBIs编码基因序列与GeneBank中CTX—M—12编码基因序列的同源性为100％。结论 临床分离的肺炎克雷伯菌K99—442菌株产生CTX—M—12型酶，可对多数的β—内酰胺类抗菌药物产生耐药性。