大鼠肝微粒体体外代谢奥美拉唑的研究

建立了大鼠肝微粒体体外孵育代谢奥美拉唑酶促反应及用反相HPLC法测定奥美拉唑两种主要代谢物——羟基奥美拉唑和奥美拉唑砜含量的方法.吉果表明,奥美拉唑主要通过羟化和S原子氧化反应进行代谢。其羟化反应的最大反应速率为2033nmol/(min·mgprotein),米氏常数为46.8umol·L^-1,而S原子氧化反应的最大反应速率为187.9nmol/(min·mgprotein),米氏常数为120.7Umol·L^-1。同时证明,美芬妥英、5种苯二氮类药物及罂粟碱对奥美拉唑的羟化代谢均有显著的抑制作用,其中罂粟碱的作用最强。     

大鼠肝微粒体中美西律对映体氧化代谢的立体选择性研究

目的测定大鼠肝微粒体中R-(-)-和S-(+)-美西律体外氧化代谢的立体选择性。方法将(±)-美西律与大鼠肝微粒体孵育后,采用柱前衍生化毛细管气相色谱-氢火焰离子化检测法测定了酶促反应的时间曲线及动力学参数Vm和Km值。结果在大鼠肝微粒体中,美西律的两个对映体的Vm和Km值均有显著性差异(P<0.01)。结论美西律在大鼠肝微粒体中的氧化代谢具有对映体选择性。     

应用中国成人肝微粒体研究地西泮代谢

本文建立了中国成人肝库，并应用中国成人肝微粒体研究了中国人地西泮代谢的规律和代谢地西泮的肝微粒体细胞色素Ｐ４５０氧化酶的特点，结果表明，中国人的地西泮代谢主要经Ｎ－去甲基化和Ｃ３－羟化反应，分别生成去甲地西泮（ＮＤＺ）和羟地西拌（ＴＭＺ）两种代谢产物，随着底物浓度的增加，这两种酶促反应呈双曲线分布，当底物浓度＞２０μｍｏｌ·Ｌ－１时，Ｎ－去甲基化反应的速率低于羟化反应速率，羟地西泮代谢物生成量明显高于去甲地西泮，同时发现，中国成人肝微粒体中可能存在着两种与地西泮具有不同亲和力的药酶组份，结果还表明，异喹胍，奎尼丁（被Ｐ４５０２Ｄ６酶所催化代谢）和美芬妥因，苯妥英（被Ｐ４５０２Ｃ类酶所催化代谢）对中国人肝微粒体试管内地西泮代谢无影响，而普奈洛尔及与Ｓ－美芬妥英羟化代谢相关的奥米拉唑能显著地抑制试管内地西泮的Ｎ－去甲基化和Ｃ３－羟化代谢反应。催眠药甲喹酮能显著地激活地西泮的氧化代谢反应。     

镉、铅、汞对苯巴比妥诱导肝微粒体药物代谢酶的影响

一次ip醋酸镉2.4mg/kg、醋酸铅100mg/kg或氯化汞 2.0 mg/kg均可抑制大鼠肝微粒体药物代谢酶。上述处理还可明显降低苯巴比妥对肝微粒’乙基吗啡N-脱甲基化酶、氨基比林N-脱甲基化酶、苯胺羟化酶和环己巴比妥羟化酶活力的诱导作用,降低苯巴比妥对细胞色素P450和细胞色素 b_5以及微粒体蛋白合成的诱导作用。结果提示镉、铅、汞可能通过降低微粒体酶的新生合成,抑制肝微粒体药物代谢酶。     

大鼠肝微粒体中芬氟拉明对映体氧化代谢的立体选择性研究

目的建立大鼠肝微粒体孵育液中l-和d-芬氟拉明的对映体选择性测定的方法,并用于研究芬氟拉明Ⅰ相代谢的立体选择性。方法将dl-芬氟拉明与大鼠肝微粒体孵育后,采用柱前衍生化毛细管气相色谱-氢火焰离子化检测法进行对映体的分离,测定时间反应曲线和酶动力学参数。结果单个对映体的线性范围是1~50μg/mL;l-和d-芬氟拉明的方法平均回收率分别为92.4%和95.5%,检测限和定量限分别为0.1μg/mL和1.0μg/mL,方法精密度为RSD<10%(n=6)。l-和d-芬氟拉明的Km,Vm ax,C lint值分别为(0.15±0.01)和(0.27±0.02)μmol.mL-1,(4.99±0.52)和(9.53±0.87)nmol.g-1.m in-1,(33.3±3.0)和(35.3±3.1)mL.m in-1.g(蛋白)-1。结论方法准确可靠,已用于l-和d-芬氟拉明在大鼠肝微粒体孵育液中的代谢及其动力学研究;结果表明,芬氟拉明在大鼠的Ⅰ相代谢具有对映体选择性。     

溴氰菊酯对大鼠肝微粒体酶活性的影响

溴氰菊酯对大鼠肝微粒体酶活性的影响张秀莲，于丽华，夹访贤溴氰菊酯是Ⅱ型拟菊酯类农药［１］。具有杀虫谱广，效果强，低残留和在环境中分解较快的特点，被广泛应用于防洽农业害虫、仓储害虫和卫生害虫等方面，接触人群面广和量多，已构成对人群的危害。急性菊酯类农药...     

大鼠肝微粒体中美西律对映体氧化代谢的立体选择性研究

目的测定大鼠肝微粒体中R-(-)-和S-(+)-美西律体外氧化代谢的立体选择性。方法将(±)-美西律与大鼠肝微粒体孵育后,采用柱前衍生化毛细管气相色谱-氢火焰离子化检测法测定了酶促反应的时间曲线及动力学参数V_m和K_m值。结果在大鼠肝微粒体中,美西律的两个对映体的V_m和K_m值均有显著性差异(P<0.01)。结论美西律在大鼠肝微粒体中的氧化代谢具有对映体选择性。     

不同甲状腺机能状态对地西泮氧化代谢的影响

本文建立了大鼠的甲状腺机能低下（甲低）和甲状腺机能亢进（甲亢）的动物模型,用HPLC方法测定地西泮的代谢物,以研究甲低和甲亢对SD大鼠单次口服地西泮氧化代谢的影响,甲低组大鼠地西泮的N－去甲基化代谢物去甲地西泮的血药浓度（AUC）升高,消除减慢,说明甲低对地西泮的N－去甲基化影响不大,而主要影响去甲地西泮的C3－羟化代谢,不同程度甲亢对地西泮氧化代谢的影响有所不同,轻度和中度甲亢组去甲地西泮血药浓度（AUC）低于对照组,消除加快;而重度甲亢组去甲地西泮血药浓度（AUC）略高于对照组,消除减慢。轻、中、重度甲亢大鼠地西泮C3－羟化代谢物替马西泮血药浓度（AUC）都不同程度地低于对照组,表明仅在重度甲亢对去甲地西泮的C3－羟化代谢才有抑制性影响,但不同程度甲亢均抑制地西泮的C3－羟化代谢。     

Effects of Diazepam,Phenobarbital,Propranolol,and Cimetidine on Diazepam Oxidizing Isoenzymes in Rat Liver Microsomes

研究地西泮、苯巴比妥、普萘洛尔和西咪替丁对地西泮氧化代谢的影响及其药酶蛋白的初步分析，应用ＨＰＬＣ，ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层扫描测定地西泮及其代谢物，并对大鼠肝微粒体和酶蛋白进行分离和含量测定。结果表明地西泮、普萘洛尔和西咪替丁使肝微粒体中Ｐ４５０含量明显降低。地西泮和普萘洛尔明显抑制地西泮Ｃ３羟化活性，大剂量普萘洛尔尚能抑制地西泮Ｎ脱甲基。苯巴比妥明显诱导Ｐ４５０生成，增强地西泮Ｎ脱甲基和Ｃ３羟化酶活性及分子量为５１，０００和５９，０００的电泳蛋白带，而地西泮、普萘洛尔则呈抑制作用。并发现，地西泮Ｎ脱甲基酶活性和分子量为５９，０００蛋白含量呈线性相关（Ｐ＜０．０５），而Ｃ３羟化酶活性则与５１，０００蛋白含量呈线性相关（Ｐ＜０．０１）。因此地西泮Ｃ３羟化代谢可能与５１，０００的Ｐ４５０酶蛋白有关，而Ｎ脱甲基代谢则可能与５９，０００的Ｐ４５０酶蛋白有关。     

丹红注射液对大鼠肝微粒体5种CYP亚型酶活性的影响

摘要目的研究丹红注射液对5种细胞色素P450亚型酶活性的影响,为临床合理用药提供参考。方法采用大鼠体外肝微粒体孵育法,分别以非那西丁、甲苯磺丁脲、右美沙芬、氯唑沙宗、睾酮为CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4的探针药物,在大鼠肝微粒体孵育体系中孵育,用高效液相色谱（HPLC）法测定相应的代谢产物,比较空白对照组和丹红注射液低、中、高剂量组之间探针药物代谢率的差异,评价丹红注射液对各亚型酶活性的影响。结果在体外肝微粒体孵育体系中,丹红注射液低剂量组中CYP1A2 和CYP2C9活性与空白对照组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）;中和高剂量组中CYP1A2和CYP2C9活性与空白对照组相比降低,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）;丹红注射液低、中、高剂量组中CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4的活性与空白对照组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。丹红注射液对大鼠肝微粒体CYP1A2酶活性的半数抑制浓度（IC50）和抑制常数（Ki）分别为0.54%和0.226%。结论丹红注射液对大鼠肝微粒体CYP1A2酶活性有抑制作用,且为混合型抑制;对CYP2C9有弱抑制作用;对CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4酶活性无明显影响。     

灯盏花素注射液对大鼠体外肝微粒体细胞色素P450酶活性的影响

摘 要 目的:研究灯盏花素注射液对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A1/2 五个亚型酶活性的影响。方法: 采用大鼠肝微粒体体外孵育法,选用非那西丁（CYP1A2）、甲苯磺丁脲（CYP2C9）、右美沙芬（CYP2D6）、氯唑沙宗（CYP2E1）和睾酮（CYP3A1/2）作为5个亚型酶的探针药物,孵育系统中加入不同浓度的灯盏花素注射液,用HPLC法测定5个亚型酶探针药物代谢产物的生成量,比较空白对照组与不同浓度灯盏花素注射液给药组探针药物的活性,反映灯盏花素注射液对5个亚型酶活性的影响。结果:大鼠肝微粒体体外孵育系统中,灯盏花素注射液对大鼠CYP3A1/2的IC₅₀为29.40μg·ml^-1,K_i为37.78 μg·ml^-1;对CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6和CYP2E1的IC₅₀＞200 μg·ml^-1。结论:灯盏花素注射液对大鼠体外肝微粒体CYP3A1/2有弱的抑制作用,对CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6和CYP2E1活性无明显影响。     

吡喹酮在大环内酯类抗生素和糖皮质激素诱导的大鼠肝微粒体中的代谢

我们的结果表明，只有经细胞色素P－450ⅢA1同功酶特异的诱导剂（红霉素和地塞米松）处置过的大鼠肝微粒体能显著地代谢吡喹酮（PQT），高铁氧化钾能破坏细胞色素P－450Fe(Ⅱ）－代谢物的复合物，使细胞色素P－450ⅢA1同功酶的活性恢复。因此，当微粒体和PQT的温孵体系中加入高铁氰化钾时，PQT在经多剂红霉素处置后的微粒体中的代谢速率进一步增加，而乙酰螺旋霉素诱导的细胞色素P－450并不形成复合物，因此，高铁氰化钾不影响PQT在经乙酰螺旋霉素处置后的微粒体中的代谢。三乙酰竹桃霉素作为细胞色素P－450ⅢA1的特异抑制剂，能抑制PQT在地塞米松处置过的肝微粒体内的代谢速率53％，以上结果表明，大鼠肝细胞色素P－450ⅢA1同功酶参与PQT在大鼠肝微粒体内的代谢。     

HPLC法测定大鼠肝微粒体中睾酮的含量

目的:建立以高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体中细胞色素P4503A4(CYP3A4)探针底物睾酮含量的方法。方法:色谱柱为Ultimate-XB C18,流动相为水-乙腈(50∶50),内标为地西泮,流速为1.0mL·min-1,检测波长为245nm,柱温为30℃,进样量为20μL。结果:睾酮生物样品检测浓度的线性范围为10.0～200.0μmo·lL-1(r=0.9995);低、中、高浓度的平均方法回收率分别为86.15%、103.10%、97.48%,平均相对回收率为111.15%、107.24%、100.78%,日内RSD分别为3.92%、2.46%、2.82%,日间RSD分别为2.98%、1.34%、2.41%。结论:本方法简便快速、灵敏度高、重复性好,可用于大鼠肝微粒体中CYP3A4活性的测定及相关研究应用。     

乌头碱在豚鼠和小鼠肝微粒体细胞色素氧化酶中的代谢作用研究

目的:研究乌头碱(AC)在豚鼠和小鼠体外肝微粒体中代谢产物的差异。方法:优化2个种属肝微粒体与AC的P450反应体系,应用高效液相色谱-高分辨质谱联用(HPLC-HRMS)和超高相液相色谱-多级质谱(UPLC-MS/MS)法测定AC在2种肝微粒体中的细胞色素氧化酶(CYP)代谢产物。结果:AC在2种肝微粒体中均代谢产生8种代谢产物,其中6种为CYP代谢产物;脱甲基、脱乙基、脱氢和氧化反应是其主要代谢特征。结论:乌头碱在豚鼠和小鼠体外肝微粒体中的CYP主要代谢途径相同。     

奥美拉唑在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学研究

目的研究奥美拉唑在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学。方法采用高效液相色谱法测定奥美拉唑在体外代谢系统中的产物5’-羟基奥美拉唑,并用Eadie-Hofstee作图法分析数据,计算酶促反应动力学参数最大反应速率(Vmax)、米氏常数(Km)。结果在体外代谢系统中,奥美拉唑生成5’-羟基奥美拉唑的Vmax为2010nmol/(min.mgprotein)、Km为50.3μmol/L。结论本分析方法符合方法学验证的要求,体外代谢常数准确,可满足奥美拉唑体外代谢的研究。     

HPLC法测定大鼠肝微粒体中6-羟基氯唑沙宗的含量

目的：建立高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体中6-羟基氯唑沙宗的含量.方法：采用Diamonsil C18柱（200 mm×215;4.6 mm,5 μm）,以甲醇-水-磷酸（45：55：0.1）为流动相,流速1.0 ml·min^-1,检测波长为296 nm.结果：6-羟基氯唑沙宗浓度在0.5 - 25 μmol·L^-1 范围内呈现良好的线性关系（r=0.999 1）,方法回收率为92.57% - 98.72%,提取回收率为76.38%-82.25%,日内、日间精密度RSD〈9%.结论：该方法可靠、准确、重复性好,可用于大鼠肝微粒体中6-羟基氯唑沙宗的含量测定及体外代谢研究.     

Effect of Water-miscible Organic Solvents on CYP450-mediated Metoprolol and Imipramine Metabolism in Rat Liver Microsomes

The catalytic activity of cytochrome P450 enzymes is known to be affected by presence of organic solvents in in vitro assays. However, these effects tend to be variable and depend on the substrate and CYP450 isoform in question. In the present study, we have investigated effect of ten water miscible organic solvents (methanol, ethanol, propanol, isopropanol, acetone, acetonitrile, dimethylsulphoxide, dimethylformamide, dioxane and PEG400) on water soluble substrates of CYP450, metoprolol and imipramine, at 0, 0.1, 0.25, 0.5, 0.75 and 1% v/v concentration in rat liver microsomes. Organic solvents studied had a concentration dependent inhibitory effect on the metoprolol and imipramine metabolism activity. Metoprolol metabolism was found to be more susceptible to the organic solvents, almost all the ten solvents had more or less inhibitory effect compared to imipramine metabolism. Except acetone, PEG400 and dimethylsulphoxide, all solvents had ~50% inhibition of total metoprolol metabolism activity, while in case of imipramine metabolism activity, only n-propanol, isopropanol and PEG400 had ~50% inhibition at 1% v/v. Interestingly, methanol, dimethylsulphoxide and acetonitrile had negligible effect on the imipramine metabolism (less than 10% inhibition at 1% v/v) while, total metoprolol metabolism activity was substantially inhibited by these solvents (MeOH 52%, DMSO 29% and ACN 47% at 1% v/v). In both cases, dioxane was found to be the most inhibitory solvent (~90% inhibition at 1% v/v).     

HPLC法测定大鼠肝微粒体中洛伐他汀含量的方法学研究

目的:考察测定大鼠肝微粒体中洛伐他汀含量的方法学。方法:采用高效液相色谱法,内标为地西泮,色谱柱为Ulti-mateXB-C18,流动相为乙腈-水(70∶30),流速为1.0mL·min-1,检测波长为238nm,柱温为30℃,进样量为20μL。结果:大鼠肝微粒体中洛伐他汀检测浓度的线性范围为2.5～40μmol·L-1(r=0.9983),低、中、高浓度洛伐他汀溶液的日内RSD分别为5.44%、2.89%、2.83%,日间RSD分别为5.48%、1.84%、1.91%,方法回收率分别为(109.24±3.28)%、(104.82±5.92)%、(102.17±1.92)%,绝对回收率分别为(104.65±2.93)%、(113.72±6.25)%、(101.92±1.89)%。结论:方法学考察结果表明,本方法简单易行、灵敏度高,可用于肝微粒体中洛伐他汀的含量测定。