维甲酸诱导基因G慢病毒表达载体的构建及对肺癌细胞A549的影响

背景与目的：维甲酸诱导基因G(retinoic acid-induced gene G,RIG-G)是从急性早幼粒细胞性白血病细胞系NB4细胞中克隆出的肿瘤抑制基因。我们通过调控基因(Tet-on)系统构建受强力霉素(doxycycline,DOX)诱导RIG-G基因表达的A549细胞系,并观察其对A549细胞增殖的作用。方法：采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术扩增RIG-G基因片段,利用LR重组系统构建pLenti6/TO/V5-GIM-RIG-G慢病毒载体,对该慢病毒载体和Tet-on慢病毒载体包装和病毒滴度测定后,感染A549细胞;采用有限稀释法筛选稳定株;使用细胞免疫荧光和蛋白［质］印迹法(Western blot)鉴定RIG-G基因受DOX调控表达的效果;CCK-8试验检测细胞增殖能力。结果：成功构建pLenti6/TO/V5-GIM-RIG-G慢病毒载体,包装后测得其活性滴度为1.0×10⁸ TU/mL;慢病毒经Tet-on包装后物理滴度为4×10⁹ VP/mL;RIG-G蛋白成功地在慢病毒感染后的A549稳定株中合成和表达,并且受DOX的诱导调控。RIG-G蛋白表达成功后,A549细胞的增殖与对照组相比显著降低(1.168±0.107 vs 2.099±0.162,P<0.05)。结论：本研究成功建立了RIG-G基因可调控表达的A549稳定株;RIG-G蛋白对A549的增殖有抑制作用。     

α-干扰素和维甲酸对人卵巢癌细胞的联合抗增殖作用

采用台盼益拒染法及3H-脱氧胸苷和3H-亮氨酸掺入实验，观察α-干扰素和维甲酸联合对人卵巢癌SKOV3细胞DNA及蛋白质合成的影响。结果显示：1μm／L维甲酸和1000μ／mlα-干扰素联合可显著降低SKOV3细胞的增殖速度，抑制其DNA和蛋白质的合成，联合作用强于二者单独应用之和，且细胞毒性并不增加。提示小剂量维甲酸和α-干扰素联合可用于卵巢癌的治疗。     

维甲酸α受体介导全反式维甲酸抑制胃癌细胞生长的作用机理

目的 探讨维甲酸α受体（ＲＡＲａ）介导全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）抑制胃癌细胞生长的作用机理。方法 应用Ｎｏｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析维甲酸受体在胃癌细胞中的表达水平,通过脂质体转染方法将ｓｅｎｓｅ ＲＡＲａ和ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＡＲａ分别转染到细胞中,通过ＭＴＴ方法和软琼脂集落形成实验分析ＡＴＲＡ对转染细胞生长和恶性程度的影响,瞬时转染和测定氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）活性,分析维甲酸应答元件（ＲＡＲ     

α干扰素诱导蛋白27与肿瘤

α干扰素诱导蛋白27（IF127）是近年来发现的一种重要蛋白,参与细胞凋亡、细胞自噬、溶瘤作用、机体免疫调节等多种生物学功能。IF127在乳腺癌、卵巢癌、肝癌、鳞状细胞癌等肿瘤中主要发挥促进肿瘤发展的作用。另有研究表明IF127通过与信号传导及转录激活因子1、微小RNA、干扰素调节因子4等基因相互作用发挥促肿瘤发展的作用。IF127有望成为监测肿瘤发生发展的标志物,为肿瘤治疗提供新靶点。     

维甲酸对HeLa细胞缝隙连接蛋白Cx43信号转导机制的调控作用

目的：探讨细胞分化诱导剂维甲酸对人子宫颈癌细胞系ＨｅＬａ中缝隙连接蛋白Ｃｘ４３信号转导途径的调控作用。方法应用特异指示剂Ｆｌｕｏ－３ＡＭ,在激光扫描共聚焦显微镜（ｌａｓｅｒ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ,ＬＳＣＭ）下,动态观察经维甲酸处现后细胞质内信号分子游离钙离子（「Ｃａ＾２＋」ｉ）浓度及分布变化。应用流式细胞仪（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｅｒ,ＦＣＭ）、结合免疫蛋白电泳     

α—干扰互和维甲酸对人卵巢癌细胞的联合抗增殖作用

采用台盼蓝拒染法及＾３Ｈ－脱氧胸苷和＾３Ｈ－亮氨酸掺入实验，观察－干扰素和维地人卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞ＤＮＡ及蛋白质合成的影响。结果显示：１μｍ／Ｌ维甲 １０００＾／ｍｌα－干扰 联合可显著降低ＳＫＯＶ３细胞的增殖速度，抑制其ＤＮＡ和蛋白质的合成，联合作用强于二者单独应用之和，且细胞毒性并不增加。提示小剂量维甲酸和α干扰素联合可用于卵巢癌的治疗。     

CHOP方案联合维甲酸与干扰素治疗蕈样霉菌病12例分析

蕈样霉菌病(mycosis fungoides，MF)是1种少见的皮肤T细胞淋巴瘤，临床可分为红斑期，斑块期和肿瘤期。肿瘤期患者预后一般都较差，特别是Ⅳ期(TNM分期)患者，光化疗法、局部氮芥治疗或放疗效果均不佳。我们自2000年始采用生物化学治疗(biochemotherapy)方法治疗12例Ⅳ期MF患者，疗效较理想，现报告如下。     

低氧诱导因子-1α的表达调控

低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是调节氧稳态的核心转录因子,在机体的生理和病理过程中起着关键作用,在肿瘤形成中也起着非常重要的作用。它是由α、β两个亚基组成的异二聚体,其活性主要由HIF-1α亚基来决定,而α亚基的DNA结合活性和转录活性又受到严格调控。这些调控因素除氧浓度外,还包括其它刺激物如金属离子、NO、活性氧和生长因子等。本文概述HIF-1α表达调控的分子机制。     

干扰素-α诱导蛋白27在胰腺癌组织中的表达及临床意义北大核心

目的:探讨干扰素-α诱导蛋白27(IFI27)在胰腺癌组织中的表达情况及其临床意义。方法:免疫组织化学法检测IFI27蛋白在胰腺癌、癌旁及慢性胰腺炎组织中的表达情况,分析阳性表达与胰腺癌患者相关临床病理参数和预后的关系。利用生物信息学方法基于TCGA数据库分析IFI27在胰腺癌组织中的表达差异和预后相关性。结果:IFI27在胰腺癌组织中表达的阳性率高于癌旁以及慢性胰腺炎组织(P<0.05),且与血管侵犯、淋巴结转移以及肿瘤分化程度相关。胰腺癌患者的总体生存期与肿瘤分化程度、血管侵犯、淋巴结转移以及IFI27阳性表达相关。多因素分析显示IFI27阳性表达是胰腺癌患者预后的独立危险因素。基于TCGA数据库分析得出IFI27在胰腺癌组织中的表达量高于正常组织(P<0.05),生存曲线提示IFI27低表达患者的预后优于高表达患者(P<0.05)。结论:IFI27高表达的胰腺癌患者预后差,IFI27阳性表达是胰腺癌患者的独立预后指标。     

缺氧诱导因子2α基因多态性与乳腺癌相关性

摘 要：［目的］探讨缺氧诱导因子2α（HIF-2α）基因多态性与乳腺癌的关系。［方法］ 研究入组2019年1月至 2022年1月间在青海省肿瘤医院乳腺科就诊的258例乳腺癌患者和270名健康女性（对照组）,研究对象检测4个HIF-2α单核苷酸多态性（rs12619696、rs13419896、rs2881504和rs4953354）,分析HIF-2α多态 性与乳腺癌易感性之间的关联。使用Kaplan-Meier分析分析来自癌症基因组图谱（TCGA）数据库的1 376个乳腺癌样本的总体生存率。［结果］ 免疫组织化学染色显示,乳腺肿瘤组织标本中的HIF-2α表达高于癌旁组织标本（P<0.05）。TCGA数据集分析显示,HIF-2α高表达乳腺癌患者的总体生存率较低表达显著性降低（P<0.05）。具有CT基因型的HIF-2α rs13419896者患乳腺癌可能性是TT纯合子的2.20倍（AOR=2.20, 95%CI：1.70~2.85,P<0.05）。具有HIF-2α rs4953354多态性的C等位基因的女性比具有T等位基因的女性更容易患乳腺癌（AOR=1.29,95%CI：1.06~1.57,P<0.05）。在rs13419896 HIF-2α基因型中,具有CT基因型的患者较具有TT基因型者增加患Ⅲ~Ⅳ期疾病（OR=1.72,95%CI：1.11~2.67）。［结论］ HIF-2α基因变异与乳腺癌易感性及其在携带HIF-2α rs13419896多态性女性的乳腺癌进展之间存在关联性。     

细胞间隙连接蛋白基因在鼻咽癌细胞株中的表达及维甲酸对其表达及调控作用

目的：为了检测细胞间隙连接蛋白基因家族中哪些成员在鼻咽癌细胞中表达，研究分化诱导剂对这些基因的表达作用和机制。方法：细胞生长曲线，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交。结果：细胞间隙连接蛋白基因（ｃｏｎｎｅｘｉｎ，Ｃｘ）家族成员的两个基因：Ｃｘ３７、Ｃｘ４６在鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１表达。维甲酸能抑制ＨＮＥ１的生长和Ｃｘ３７和Ｃｘ４６在ＨＮＥ１中的表达，并能诱导ＲＡＲａ的表达。去除维甲酸处理后细胞生长抑制被解除，Ｃｘ３７、Ｃｘ４６、ＲＡＲａ的表达恢复正常。结论：Ｃｘ３７和Ｃｘ４６是鼻咽癌细胞中特异表达的Ｃｘ家族基因，维甲酸能抑制Ｃｘ４６和Ｃｘ３７的表达，可能的机制是通过诱导ＲＡＲａ的表达而起作用，维甲酸对Ｃｘ基因表达调节是可逆的。     

干扰素诱导肿瘤凋亡的分子机制

干扰素（interferons，IFNs）是一类重要的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节细胞因子。IFNs广泛用于造血系统恶性肿瘤、淋巴瘤及多种实体瘤的临床治疗。IFNs与细胞表面受体结合后，主要通过JAK／STAT信号途径，调节一系列干扰素刺激基因（IFN-stimulated genes，ISGs）表达，这些功能性基因包括凋亡相关分子Fas／FasL、TRAIL／APO-2、抑癌基因bax、bak及p53等，这些ISGs与细胞凋亡及抑制细胞周期密切相关。此外，IFN还可放大由caspase诱导的线粒体功能紊乱效应，诱导细胞经线粒体途径凋亡。因而，IFNs主要通过抑制细胞周期、诱导抑癌基因的表达及增强肿瘤细胞对凋亡信号敏感性，诱导肿瘤细胞凋亡，而发挥其抗肿瘤生物学活性。     

不同种类干扰素联合维甲酸对HL-60细胞增殖和分化的影响

目的:研究干扰素联合维甲酸(ATRA)对HL-60细胞增殖和分化的影响及其机制.方法:IFNα、IFNγ、ATRA单独或联合作用于HL-60细胞后,采用MTT法检测细胞的增殖,用光镜观察、NBT还原实验和流式细胞仪检测细胞的分化,并用间接免疫荧光法观察PML蛋白表达的情况.结果:两种干扰素分别与ATRA联合应用都能够增强ATRA对HL-60细胞的增殖抑制作用,两种干扰素之间无显著性差别.IFNγ与ATRA联合应用能够增强ATRA对HL-60细胞的诱导分化作用,但IFNα与ATRA联合应用却没有此作用.两种干扰素都能够诱导PML蛋白的表达.结论:两种干扰素都能够通过诱导PML蛋白表达而抑制细胞生长;IFNγ与ATRA联合应用增强ATRA对HL-60细胞的诱导分化作用可能与两种药物的信号传导途径发生交叉激活有关.     

全反式维甲酸诱导大肠癌细胞分化的实验研究

作者采用全反式维甲酸对大肠癌细胞株ＬｏＶｏ进行体外实验，结果细胞增殖受抑制，呈时间剂量依赖关系，细胞周期改变，被阻滞于Ｇｏ／Ｇ１期，Ｓ期比例下降，分化标志酶ＡＬＰ比活性增高，双层软琼脂糖培养细胞集落形成能力降低，提示全反式维甲酸具有诱导ＬｏＶｏ细胞分化作用，实验结果有重要的临床指导意义。     

干扰素诱导肿瘤凋亡的分子机制

干扰素(interferons,IFNs)是一类重要的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节细胞因子。IFNs广泛用于造血系统恶性肿瘤、淋巴瘤及多种实体瘤的临床治疗。IFNs与细胞表面受体结合后,主要通过JAK/STAT信号途径,调节一系列干扰素刺激基因(IFN-sti mulated genes,ISGs)表达,这些功能性基因包括凋亡相关分子Fas/FasL、TRAIL/APO-2、抑癌基因bax、bak及p53等,这些ISGs与细胞凋亡及抑制细胞周期密切相关。此外,IFN还可放大由caspase诱导的线粒体功能紊乱效应,诱导细胞经线粒体途径凋亡。因而,IFNs主要通过抑制细胞周期、诱导抑癌基因的表达及增强肿瘤细胞对凋亡信号敏感性,诱导肿瘤细胞凋亡,而发挥其抗肿瘤生物学活性。     

维甲酸诱导的基因RA109染色体定位和蛋白质定位

目的：确定全反式维甲酸诱导肺腺癌细胞系GLC－82表达上调的基因RA109在染色体上的位置及其编码蛋白在细胞中的位置。方法：应用辐射杂交细胞系（RH）定位的方法进行染色体定位,应用绿色荧光蛋白（GFP）基因作为报告基因,结合荧光显微摄影进行蛋白质定位。结果将RA109基因定位在5号染色体长臂5q35,RA109蛋白定位在细胞核。结论RH定位是一个快速、简捷、精确的染色体定位方法,以此方法可将RA109定位在5号染色体长臂的一个疾病基因富含区。利用GFP进行蛋白质定位简单明了,以此可将RA109蛋白定位在细胞核这个重要的细胞结构中。     

热休克对维甲酸导致的基因异常表达影响的实验研究

本研究目的系统观察热休克和维甲酸共同作用对胚胎生长发育的影响，用Ｗｉｓａｒ种大白鼠ｄ１０１期胚胎，应用全胚胎体外培养技术和全胚胎原位杂交－基因表达三维检测技术，结果发现热休克可以降低由维甲酸所致的胚胎畸形发生率以及由维甲酸所致Ｈｏｍｅｏｂｏｘ２．２基因的异常表达。     

肿瘤坏死因子α增强全反式维甲酸诱导早幼粒白血病细胞凋亡

目的:分析肿瘤坏死因子α增强全反式维甲酸诱导早幼粒白血病细胞凋亡的作用。方法:选择NB4人急性早幼粒白血病细胞,利用全反式维甲酸单独作用,并选择肿瘤坏死因子α联合全反式维甲酸作用,测定细胞增殖以及细胞凋亡情况。结果:随着早幼粒白血病细胞分化的逐渐进行,单一组、联合组的细胞增殖速度均慢慢下降;随着早幼粒白血病细胞分化的逐渐加深,单一组、联合组细胞凋亡率慢慢升高;分化2天,联合组细胞CD11b阳性率明显高于单一组,P<0.05。结论:全反式维甲酸具有诱导早幼粒白血病细胞分化、凋亡的作用,而肿瘤坏死因子α会增强全反式维甲酸的作用效果。     

全反式维甲酸诱导胶质瘤细胞基因的差异表达

 目的 分析全反式维甲酸诱导胶质瘤细胞所致的差异表达基因,为研究胶质瘤进展的基因通路及机制提供依据。 方法 运用cDNA微阵列技术比较全反式维甲酸处理前后胶质瘤SHG-44细胞（WHO Ⅳ级）的基因表达谱,鉴定与胶质瘤进展相关的差异表达基因。随机选择数个差异表达基因进行Northern杂交以验证cDNA微阵列结果的可靠性。 结果 鉴定出42个差异表达基因,其中表达上调28个、下调14个;按功能有凋亡类、细胞侵袭与转移类、细胞周期与生长调节类、细胞骨架类、细胞代谢类等。 结论 初步揭示SHG-44细胞基因的差异表达,开展对这些基因的研究有可能阐明胶质瘤进展的基因通路及机制。     

干扰素α上调肝癌细胞胸苷磷酸化酶的表达及其机制

目的 探讨干扰素α(IFN-α)调控肝癌细胞SMMC-7721胸苷磷酸化酶(TP)表达的机制.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SMMC-7721细胞中TP mRNA的表达水平;应用JAK-STAT信号通路阻断剂AG-490研究该通路的作用;应用基因转录抑制剂放线菌素D研究TP mRNA的半衰期.结果 IFN-α上调TP mRNA表达具有时间-剂量依赖性.10000U/rrd的IFN-α处理SMMC-7721细胞8h后,TP mRNA表达水平开始升高,至12h时峰值达0.7272±0.0582,此后维持在0.6573±0.1873水平至72h.5000U/ml和10000U/ml的IFN-α处理肝癌细胞24h,TP mRNA表达水平分别为0.5991±0.2179和0.6298±0.1786,与未用IFN-α处理的肝癌细胞(0.2231±0.0595)相比,差异有统计学意义(P<0.05).应用AG-490阻断JAK-STAT通路,IFN-α上调TP mRNA表达的能力明显受到抑制(0.2545±0.1053),与未处理的肝癌细胞(0.2329±0.1032)相比,差异不明显,仅应用IFN-α而未应用AG-490处理的肝癌细胞,其TP mRNA表达水平则显著升高(0.7209±0.1168).应用IFN-α处理SMMC-7721细胞24h后,利用放线菌素D阻断RNA聚合酶,TP mRNA半衰期为35.8h,而未用IFN-α处理的肝癌细胞为8.5h.结论 一定剂量的IFN-α上调TP mRNA的表达水平,与细胞内JAK-STAT信号通路有关;IFN-α具有转录后稳定TP mRNA的作用.