内皮素-1对体外培养人小梁网细胞纤维连接蛋白及Ⅰ型胶原表达的影响

目的观察内皮素-1（ET-1）对人小梁网细胞（TMCs）细胞外基质纤维连接蛋白（FN）、Ⅰ型胶原（COL Ⅰ）的影响。方法取死亡24h内尸眼小梁网组织,行TMCs原代和传代培养,并用FN、层黏连蛋白（LN）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和Ⅷ因子相关抗原（FⅧRAg）鉴定为人TMCs后,取传3代的人TMCs,给予不同浓度ET-1（10^-9、10^-8、10^-7mol／L）孵育72h后,免疫荧光和Western blot观察ET-1对TMCs中FN、COLⅠ表达的影响;然后取传3代的人TMCs,分别给予10^-7mol／L ET-1、10^-7mol／L ET-1＋10^-7mol／L ETA受体拈抗剂、10^-mol／L ET-1＋10^7mol／L ETB受体拈抗剂后孵育72h,Western blot观察ET受体拮抗剂对FN、COL Ⅰ表达的影响。结果研究受到伦理委员会的批准,取材前征得供体家属的知情同意。培养的细胞形态多样,含少许色素颗粒,FN、LN、NSE染色均呈阳性反应,FⅧRAg呈阴性反应。人TMCs与10^-9～10^-7mol／L ET-1共孵育后FN表达上调（F=18．41,P〈0．05）;与10^-8mol／L、10^-7mol／L ET-1共孵育后COLⅠ表达上调（F=39．81,P〈0．05）,并呈浓度依赖性,10^-7mol／L时作用最明显;给予ETA受体拮抗剂后,与ET-1组相比,FN、COLⅠ的表达均降低（qFN=7．213,P〈0．05;qCOLⅠ=6．187,P〈0．05）,但给予ETB受体拮抗剂后,FN、COLⅠ的表达均无明显变化。结论ET-1能够促进体外培养的人TMCs中FN、COLⅠ的表达,其机制可能是通过激动ETA受体而非ETB受体发挥作用的。     

内皮素-1体外对人小梁细胞骨架肌动蛋白的影响

目的：观察内皮素-1（endothelin-1,ET—1）对人眼小梁细胞细胞骨架肌动蛋白的影响。方法：培养3代人眼小梁细胞,随机分为4组：对照组（0mol／LET-1）;ET-1低剂量组（10^-9mol／LET—1）;ET-1中剂量组（10^-8mol／LET—1）;ET-1高剂量组（10^-7mol／LET—1）,各组细胞分别处理72h后,应用Western—blot方法检测小梁细胞骨架肌动蛋白（F—aetin）的表达,并用FITC—phalloidin荧光探针观察肌动蛋白在细胞内的分布。结果：ET—1作用后人小梁细胞肌动蛋白表达明显增高,在10^-9～10^-7mol／L浓度范围内呈剂量依耐性,荧光探针示ET-1处理组小梁细胞肌动蛋白应力纤维和周边肌动蛋白明显增多浓集,细胞微丝附着与胞膜,细胞间连接及细胞贴壁部位连接明显增多。结论：ET—1能促进小梁细胞肌动蛋白表达,参与了小梁细胞骨架的重构。     

玻璃体腔注射内皮素-1诱导猫视盘慢性缺血的实验研究

目的猫眼玻璃体腔注射内皮素-1（endothelin-1，ET-1）诱导视盘慢性缺血动物模型，研究慢性缺血对视神经的影响。方法将13只猫随机分为A组7只和B组6只。右眼为实验眼，左眼为对照眼。实验开始时（术前）行眼部检查和眼压测量，海德堡共焦扫描激光多普勒视网膜地形图（heidelberg retina tomography，HRT）分析视盘形态，海德堡共焦扫描激光多普勒视网膜血流分析仪（heidelberg retina flowmeter，HRF）分析视盘筛板微循环。实验眼注入10μL ET-1溶液，A组浓度为10^-6mol／L，B组为10^-5mol／L，对照眼注入10μL相应赋形剂。每周注射2次，连续4周。每次注药前后均行眼部检查、眼压测量。实验结束后检查同术前。取视神经标本进行视神经轴突计数。结果B组实验眼注药前后眼压与术前眼压比较，部分检测点差异有统计学意义；实验眼术后视盘筛板血流量降低33．80％，血流速降低57．73％，红细胞移动速率降低57．70％；术后实验眼较对照眼视神经轴突数减少10．70％。A组中实验眼和对照眼术前、术后各研究参数差异均无统计学意义。结论猫眼玻璃体腔多次微量注射10^-5mol／LET-1可诱导视盘缺血，损害视神经。     

紫杉醇对人Tenon囊成纤维细胞增生的抑制作用及机制

背景人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）的异常增生是导致抗青光眼滤过手术失败的主要原因。寻找抑制HTFs增生的药物对抑制青光眼术后功能性滤过泡的瘢痕化有重要意义。目的观察紫杉醇对体外培养的HTFs增生、凋亡、细胞周期以及基质金属蛋白酶-1（MMP-1）表达的影响。方法收集抗青光眼滤过术中切除的人眼Tenon囊组织,用组织块培养法培养HTFs并进行传代,取3～6代细胞用于实验。采用小鼠抗人角蛋白抗体、小鼠抗人波形蛋白抗体、小鼠抗人结蛋白抗体、小鼠抗人S-100抗体行免疫组织化学染色鉴定培养的HTFs。在培养基中分别加入0、1×10^-8、1×10^-8、1×10^-6mol／L紫杉醇,采用实时细胞电子分析系统（RT—CES）观察不同浓度紫杉醇作用后HTFs的细胞指数变化;采用DAPI染色法观察各组细胞的凋亡情况;用流式细胞术检测不同浓度紫杉醇作用后HTFs各细胞周期比例;采用实时定量PCR（real—timePCR）和ELISA法检测各组HTFs中MMP-1mRNA和蛋白的表达量,分别以MMP-1mRNA／GAPDHmRNA和MMP-1蛋白质量浓度（μg／L）表示。结果组织块原代培养7d内可见细胞游出,呈长梭形和不规则三角形,培养的细胞抗波形蛋白抗体染色阳性,而抗角蛋白抗体、抗结蛋白抗体和抗S-100抗体染色阴性。培养基中加入紫杉醇作用24h后,1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L紫杉醇组平均细胞指数值分别为1．09±0．191、0．665±0．093和0．473±0．117,均明显低于0mol／L紫杉醇组的1．514±0．283,差异均有统计学意义（均P=0．000）;紫杉醇作用后,HTFs的细胞核内可见呈DAPI蓝色荧光的颗粒状物质,荧光强度随着紫杉醇浓度的增加而增强。l×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L紫杉醇分别作用12h后,G,／M期HTFs的比例分别为（9．20±0．80）％、（12．37±0．45）％和（13．80±0．35）％,明显高于0mol／L紫杉醇组的（7．17±0．50）％,差异均有统计学意义（P=0．005、0．000、0．000）。与0mol／L紫杉醇组比较,1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L紫杉醇作用30min后HTFs中MMP-1mRNA的相对表达量均明显下降,差异均有统计学意义（均P=0．000）;1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L紫杉醇作用24h后,HTFs中MMP-1蛋白的表达量均明显低于0mol／L紫杉醇组,差异均有统计学意义（P=0．010、0．002、0．001）。结论1×10^-8～1×10^-6mol／L紫杉醇可抑制体外培养HTFs的增生,诱导细胞凋亡,阻断细胞的有丝分裂,其作用机制可能与下调细胞中MMP-1的表达有关。     

乙酰唑胺对培养的牛角膜内皮细胞液体转运功能的影响

目的 研究乙酰唑胺对培养的牛角膜内皮细胞液体转运功能的影响．方法 观察并记录给予不同浓度乙酰唑胺（0．1μmol／L，1μmol／L，10μmol／L，100μmol／L）角膜内皮细胞在低渗溶液中的体积改变．并计算其渗透水通透性（osmoilc water permeability，Pf）的变化。结果 培养的正常牛角膜内皮细胞的Pf值为（0．0446±0．0089）cm／s，在0．1-100μmol／L乙酰唑胺孵育72h后，培养的牛角膜内皮细胞的渗透性水通透性逐渐减少，其Pf值分别为（0．0406±0．0014）cm／s，（0．0364±0．0015）cm／s，（0．0300±0．0022）cm／s，（0．0226±0．0019）cm／s。结论 乙酰唑胺呈剂量依赖性地减低角膜内皮渗透性水通透性．抑制角膜内皮细胞液体转运功能。     

辅酶Q10对人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤的保护作用

背景有多种因素参与年龄相关性黄斑变性（AMD）的发病,其中视网膜色素上皮（RPE）细胞的氧化应激损伤与AMD的发病密切相关。实验和临床研究表明,辅酶Q10是一种强抗氧化剂,探讨其对人RPE细胞的氧化应激损伤是否有保护作用对于AMD的防治有重要的临床意义。目的探讨辅酶Q10对体外培养的人RPE细胞氧化应激损伤的保护作用及其作用机制。方法体外培养人RPE细胞,分为正常对照组（单纯培养基培养）、不同浓度（0．01、1、100μmol／L）辅酶Q10预处理组和单纯叔丁基过氧化氢（TBHP）处理组,其中各浓度辅酶Q10预处理组以辅酶Q10预处理后暴露于TBHP,光学显微镜下观察各组RPE细胞的形态;用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测各组RPE细胞活性的变化;AnnexinV—FITC／PI染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;TBARS法检测细胞的脂质过氧化水平;用DCFH—DA荧光法检测细胞内活性氧簇（ROS）水平;实时定量PCR法检测RPE细胞中促凋亡基因FasmRNA的表达;Westernblot法检测细胞中Fas蛋白的表达。结果单纯TBHP处理组RPE细胞贴壁数量较正常对照组明显减少,而0．01、1、100μmol／L辅酶Q10预处理组贴壁细胞数较单纯TBHP处理组增加,高浓度辅酶Q10预处理组细胞形态的改善和细胞存活的数目更接近正常对照组。与单纯TBHP处理组比较,1μmol／L、100μmol／L辅酶Q10预处理组RPE细胞吸光度（A450）值明显增高（0．52±0．10VS．0．25±0．03、0．59±0．06VS．0．25±0．03）,差异均有统计学意义（P=0．041、0．002）;RPE细胞的凋亡率明显下降[（72．1±6．6）％VS．（91．7±2．3）％、（69．0±4．4）％VS．（91．7±2．3）％],差异均有统计学意义（P=0．032、0．004）;0．01、1、100μmol／L辅酶Q10预处理组的细胞脂质过氧化水平依次降低,与单纯TBHP处理组比较差异均有统计学意义（P=0．047、0．030、0．015）,与单纯TBHP组相比,0．01、1、100μmol／L辅酶Q10预处理组细胞内ROS水平逐渐下降,I;xmol／L、100μmol／L辅酶Q10预处理组细胞内ROS水平明显低于单纯TBHP处理组（5．25±0．90 vs11．39±2．30、7．91±0．80VS．11．39±2．30）,差异均有统计学意义（P=0．028、0．007）;与单纯TBHP处理组相比,辅酶Q10预处理组细胞中FasmRNA表达量均有不同程度的下降,1μmol／L、100μmol／L辅酶Q10预处理组细胞中FasmRNA表达量的差异均有统计学意义（P=0．049、0．008）;0．01、1、100μmol／L辅酶Q10预处理组细胞中Fas蛋白表达量均明显下降,差异均有统计学意义（P=0．001、0．000、0．000）。结论辅酶Q10对体外培养的人RPE细胞具有保护作用,其作用在一定范围内呈浓度依赖性,这种保护作用可能与减少细胞的氧化应激损伤和抑制细胞凋亡有关。     

氧化衰老、细胞外基质和光感受器外节膜盘对RPE细胞中黏着斑激酶表达的影响

背景脉络膜新生血管（CNV）是引起视力障碍的重要原因之一，发生机制复杂。黏着斑激酶（FAK）在调控细胞增生、存活、移行和分化等细胞进程中发挥重要作用，参与新生血管的应答。然而，FAK在CNV发生中的作用尚未见相关报道。目的观察氧化衰老、细胞外基质（ECM）成分和吞噬光感受器外节膜盘（POS）等CNV生成相关因素作用下人视网膜色素上皮（RPE）细胞中FAK的表达及磷酸化变化，探讨FAK在CNV发生中的作用。方法体外原代培养来自于供体眼的人RPE细胞，并分别暴露于H2O2氧化衰老、吞噬POS和ECM成分等刺激因素。用10、20、50、100μmol／L4种浓度的H2O2处理培养的RPE细胞20d，诱导RPE细胞氧化衰老；用含终密度1×10^6／mlPOS的培养液培养RPE细胞20d，设置正常细胞对照组、单纯POS处理组、200μmol／LCoCl2缺氧组及POS＋缺氧组；将RPE细胞接种于涂布100mg／L的纤维连接蛋白（FN）、层黏连蛋白（LN）和I型胶原酶的培养皿中，分别继续培养30rain和1h。在不同时间点收集细胞提取总蛋白，Western blot法观察不同时间点RPE细胞中FAK的表达及磷酸化FAK（pFAK）变化。结果20μmol／L及50μamol／LH2O2处理组FAK蛋自在RPE细胞的表达量明显高于对照组，而pFAK在各H2O2处理组均较对照组明显下降，差异均有统计学意义（P〈0．01）。长期吞噬POS后，RPE细胞内出现消化不完全的溶酶体颗粒；单纯POS处理组与对照组间RPE细胞中FAK和pFAK的表达量差异无统计学意义（P〉0．05），但单纯缺氧组FAK和pFAK的表达量较对照组均升高，POS＋缺氧组pFAK的表达较单纯缺氧组显著升高，差异均有统计学意义（P〈O．01）。与对照组比较，在FN、LN和I型胶原刺激后1h，RPE细胞中pFAK表达上调，差异均有统计学意义（P〈0．05，P〈O．01）。结论在衰老、吞噬POS和ECM成分等因素作用下，RPE细胞中出现FAK的表达及磷酸化．提示FAK在CNV发生过程中发挥调控作用。     

白细胞介素-1α对培养的人眼小梁细胞吞噬功能的影响

目的观察白细胞介素-1α（IL-1α）对体外培养的人眼小梁细胞（HTM）吞噬功能的影响。方法取人眼小梁组织进行小梁细胞体外培养,取传3～5代的人眼小梁细胞,加入不同浓度的IL-1α的DMEM-F12培养液,用倒置相差显微镜、光镜、电镜观察细胞吞噬功能的变化。结果小梁细胞吞噬乳胶微球数与IL-1α浓度（F=3．603,P=0．046）和作用时间（F=15．846,P=0．005）均有相关性（F=18．069,P=0．000）。结论IL-1α可以直接损害体外培养的人眼小梁细胞吞噬功能,其吞噬程度与IL-1α作用时间和浓度相关。     

静态压力对大鼠视网膜微血管内皮细胞内皮素-1和NO表达的影响

目的观察静态压力变化对大鼠视网膜微血管内皮细胞（RMECs）形态、增生活性及分泌血管活性物质内皮素-1（ET-1）和一氧化氮合酶（NOS）的影响。方法体外培养并鉴定大鼠RMECs,分为A（1．33kPa）、B（2．67kPa）、C（5．33kPa）和D（10,67kPa）组和未加压对照组。用倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,常规方法进行细胞计数,锥虫蓝染色检测活细胞比例。用Griess硝酸还原酶法检测NO代谢产物NO2^-／NO3^-的含量,放射免疫法检测培养细胞的ET-1蛋白表达;用RT-PCR法半定量研究RMECs中ET-1、eNOS、iNOS mRNA的表达。结果B、C、D组RMECs细胞核膨大,胞体拉长,可见少量悬浮细胞;静态压力促进RMECs增生（F=12．205,P〈0．01）,C组和D组细胞数量高于对照组、A组和B组（P〈0．01）;静态压力升高造成各组细胞损伤,拒染率降低（F=11．180,P〈0．01）,B、C、D组细胞拒染率低于对照组（P〈0．05）。B、C、D组ET-1浓度较对照组增加（P〈0．01）。C组和D组RMECs培养液中NO2^-／NO3^-浓度高于对照组（P〈0．01）。B、C、D组RMECs中ET-1 mRNA表达较对照组升高,差异有统计学意义（P〈0．01）;C组和D组RMECs中eNOS mRNA和iNOS mRNA表达较对照组升高,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论高静态压力可直接导致RMECs的结构损伤,高静态压力下RMECs合成ET-1、NO增多可能是高眼压眼底病变的机制之一。     

全反式维甲酸诱导的Cx43基因在RB细胞中的过表达及其对RB生长的抑制作用

背景诱导细胞间隙连接蛋白（＆）基因在瘤细胞中过表达是全反式维甲酸（ATRA）抑制肿瘤细胞生长的重要机制。我们先前的研究已证实,ATRA抑制视网膜母细胞瘤（RB）细胞增生、分化作用的机制与诱导Cx43过表达有关,但药物作用位点及其对在体肿瘤组织生长的影响尚未明确。目的研究ATRA对RB细胞中Cx43基因及其蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法用无水乙醇将ATRA溶解并配制成浓度为1×10^-2mol／L的溶液,使用前再用细胞培养液配制成不同浓度ATRA液。用含体积分数10％热灭活胎牛血清（FBS）的RPMI-1640培养液常规培养人RB细胞株HXO—RB44,将1×10^5-×10“和1×10^-2mol／L的ATRA分别加至培养基中,分别于添加后2、4、6d采集细胞,分别采用Westernblot法和逆转录PCR法检测细胞中Cx43蛋白及mRNA的表达变化。选取15只BALB／c裸鼠,将RB细胞悬液1恤l（含5×10^5个细胞）进行裸鼠右眼前房注射,建立裸鼠眼前房RB模型。将造模成功的11只裸鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和1X10。mol／LATRA组,阴性对照组和1×10^-5mol／LATRA组裸鼠分别行0．5％无水乙醇的生理盐水或1×10^-5mol／LATRA前房注射,每3天1次,共注射3周,裂隙灯显微镜下观察各组裸鼠肿瘤生长情况;实验结束时摘除实验眼,用苏木精-伊红染色法进行组织病理学检查。结果Westernblot法检测结果显示,随ATRA作用时间的延长,各组Cx43蛋白表达量（Acx43／AGPDH）均逐渐增加,总体比较差异有统计学意义（F时间=71．31,P=0．00;F分组7．66,P=0．00）;药物作用后2d1×10^-5mol／LATRA组、作用后4d1×10^-6mol／LATRA组、作用后6d1×10^-7mol／LATRA组Cx43蛋白表达量均明显高于空白对照组,差异均有统计学意义（t=3．34,P〈0．叭;t=2．33,P〈0．05;t=3．12,P〈0．01）。逆转录PCR检测结果显示,随ATRA作用时间的延长,各组Cx43 m     

电针对透镜诱导型近视豚鼠脉络膜血流和内皮素-1及其受体表达的影响

目的：观察透镜诱导型近视豚鼠脉络膜毛细血管密度的变化,探讨脉络膜内皮素-1(ET-1)、内皮素受体A(ETAR)及受体B(ETBR)的表达变化及电针治疗机制。

方法：将54只豚鼠随机分为正常对照组(NC组)、透镜诱导组(LIM组)和电针+透镜诱导组(LIM+EA组)。NC组正常饲养,不干预; LIM组和LIM+EA组右眼配戴-6.00D透镜片,建立近视模型。造模2、4wk测量各组豚鼠屈光度、眼轴和脉络膜毛细血管密度,实时荧光定量PCR(q-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫组化检测各组脉络膜ET-1、ETAR和ETBR mRNA及蛋白表达水平。

结果：造模2、4wk后,与NC组相比,LIM组和LIM+EA组近视屈光度和眼轴均增加(均P<0.001); LIM+EA组与LIM组相比,屈光度和眼轴均减小(均P<0.05)。造模2、4wk后,与NC组相比,LIM组脉络膜毛细血管密度均降低(P<0.001),脉络膜ET-1、ETAR及ETBR mRNA和蛋白水平均增加(均P<0.05); 而LIM+EA组与LIM组相比,脉络膜毛细血管密度升高(P<0.01),脉络膜ET-1、ETAR及ETBR mRNA和蛋白水平均降低。

结论：在透镜诱导型近视豚鼠中,随着屈光度和眼轴的增长脉络膜血流减少,而电针可能通过神经调控改善了脉络膜的血流,影响了血管剪切力,下调ET-1及其受体含量以延缓近视的发生发展。     

内皮素-1体外对人小梁细胞骨架肌动蛋白的影响

目的:观察内皮素-1(endothelin-1,ET-1)对人眼小梁细胞细胞骨架肌动蛋白的影响。方法:培养3代人眼小梁细胞,随机分为4组:对照组(0mol/L ET-1);ET-1低剂量组(10-9mol/L ET-1);ET-1中剂量组(10-8mol/L ET-1);ET-1高剂量组(10-7mol/L ET-1),各组细胞分别处理72h后,应用Western-blot方法检测小梁细胞骨架肌动蛋白(F-actin)的表达,并用FITC-phalloidin荧光探针观察肌动蛋白在细胞内的分布。结果:ET-1作用后人小梁细胞肌动蛋白表达明显增高,在10-9～10-7mol/L浓度范围内呈剂量依耐性,荧光探针示ET-1处理组小梁细胞肌动蛋白应力纤维和周边肌动蛋白明显增多浓集,细胞微丝附着与胞膜,细胞间连接及细胞贴壁部位连接明显增多。结论:ET-1能促进小梁细胞肌动蛋白表达,参与了小梁细胞骨架的重构。     

Effects of endothelin-1 on the cytoskeleton protein F-actin of human trabecular meshwork cells in vitro

AIM: To observe the effect of endothelin-1 (ET-1) on the cytoskeleton protein F-actin of cultured human trabecular meshwork (HTM) cells. · METHODS: Cultured HTM cells were randomly divided into four groups: control group, low-dose ET-1 (10-9 mol/L) treatment group, middle-dose ET-1 (10-8 mol/L) treatment group, and high-dose ET-1(10-7 mol/L) treatment group. After treated with ET-1, the expression of cytoskeleton protein F-actin in trabecular meshwork was analyzed with Western-blot and the distribution of F-actin was detected with FITC-Phalloidin probe. · RESULTS: ET-1 dose-dependently and significantly increased F-actin in trabecular meshwork cells (P <0.05). The F-actin stress fiber and periphery actin fiber highly increased and manifested mild reorganization after treated with ET-1; and there were much more cell-to-cell and cell-to-extracellular matrix attachments formation in ET-1 treated HTM cells than that in the untreated HTM cells. · CONCLUSION: ET-1 promotes the expression of cytoske- leton protein F-actin and induced the trabecular meshwork actin cytoskeleton reorganization.     

原发性开角型青光眼患者小梁细胞中GRP78和Myocilin蛋白的共表达

背景 Myocilin蛋白的错误折叠是原发性开角型青光眼(POAG)的重要发病机制,GRP78能将错误折叠的蛋白质转移到内质网外,以保持应激状态下内质网蛋白质合成功能的正常运转,但二者的相互关系及其在POAG发病中的作用机制仍未阐明. 目的 检测体外培养的POAG患者小梁细胞内GRP78与Myolicin蛋白的共定位表达.方法在手术中获取POAG患者的小梁网组织,采用组织块培养法分离和培养小梁细胞,采用免疫化学染色法检测培养的细胞中特征性因子的表达,并将其形态学特征与健康供体眼培养的小梁细胞进行比较.将体外培养的小梁细胞分为衣霉素(Tm)组、十字孢碱(STS)组和正常对照组,分别在培养液中加入含有1 μmol/L Tm、0.1μmol/L STS和不含药物的培养液培养细胞24 h,采用免疫荧光法检测各组培养的细胞中GRP78与Myocilin蛋白的共表达情况. 结果 培养的原代细胞多呈扁平星形或不规则形,可见细胞突起,细胞核呈椭圆形,细胞体较大,细胞质丰富,可见大量黑色吞噬颗粒.POAG来源小梁细胞培养3～7代生长良好,细胞中层黏连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)、神经烯醇化酶(NSE)和波形蛋白(Vimentin)均呈阳性表达.免疫荧光染色结果显示,Tm组、STS组和正常对照组细胞的细胞质中均可见GRP78和Myocilin阳性表达,分别为红色和绿色荧光,正常对照组中人来源小梁细胞的周边部可见GRP78和Myocilin的不完全共表达,POAG来源小梁细胞周边部GRP78和Myocilin呈完全共表达;Tm组和STS组中不同来源的小梁细胞中GRP78和Myocilin均呈完全共表达,Tm组中不同来源小梁细胞均出现细胞核周围GRP78蛋白聚集现象. 结论 POAG来源小梁细胞中GRP78蛋白与Myocilin蛋白共表达,提示二者在POAG的发病和进展过程中可能存在相互作用.GRP78可能保护小梁细胞免受内质网应激途径诱导的细胞凋亡.     

Human optic nerve head astrocytes as a target for endothelin-1

PURPOSE: To determine whether human optic nerve head astrocytes (hONAs) are target cells for the actions of endothelin (ET)-1, a potent vasoactive peptide, by causing astrocyte proliferation, as occurs in glaucomatous optic nerve heads. ET-1 levels are elevated in glaucomatous eyes, and administration of ET-1 to the retina causes glial activation and optic nerve damage in animal models in a manner similar to that observed in glaucoma. METHODS: Well-characterized hONAs were used in this study. Cell proliferation of hONAs was assessed, after ET-1 treatment under serum-free culture conditions, with both a formazan assay and [3H]thymidine uptake. ET receptor involvement for cell proliferation was determined with BQ788 (an ETB antagonist), BQ610 (an ETA antagonist), PD142893 (an ET(A/B) mixed antagonist), and sarafotoxin 6C (S6C; an ET(B) agonist). ET-1-induced intracellular calcium ([Ca2+]i) in hONAs was measured by fura-2 imaging. RT-PCR was used to determine whether hONAs express mRNA for preproET-1, ET(A), and ET(B) receptors. RESULTS: ET-1 (10 and 100 nM) caused a time-dependent proliferation of hONAs, which was completely blocked by PD142893, as detected by two different cell proliferation assays. The effects of ET-1 were blocked by BQ788 and were also mimicked by S6C, indicative of the involvement of ET(B) receptor activation. ET-1-induced elevation in [Ca2+]i, and cell proliferation were both blocked completely by the ET(A) antagonist BQ610, suggesting ET(A) receptor involvement. The hONAs expressed mRNA for ET(A) and ET(B) receptors as well as preproET-1, suggesting that these cells may also be a source for ET-1 in the optic nerve head. CONCLUSIONS: ET-1 induces astroglial proliferation in cultured human optic nerve head astrocytes through ET(A/B) receptor activation. This is similar to the proliferation of ET-1 in brain astrocytes. These findings suggest that ET-1, which is elevated in glaucoma, could cause proliferation of ONAs in the optic nerve head.     

视网膜全光凝对糖尿病视网膜病变患者血浆VEGF,ET-1和NO的影响(英文)

目的:研究增生性糖尿病视网膜病变(PDR)患者进行视网膜全光凝(PRP)治疗前后血浆中血管内皮生长因子(VEGF)、内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)含量的变化。方法:对40例患有PDR但未经过PRP治疗的的患者进行前瞻性研究,其中女23例,男17例,平均年龄48.5±12.2岁,同时选取30例年龄性别相匹配的健康人群作为健康对照组。分别在激光治疗前(作为基线值)和完成最后一次光凝治疗后3mo抽取患者的血样,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中VEGF,ET-1和NO的含量。分别将激光治疗前患者血浆中VEGF,ET-1和NO含量基线值分别和健康对照组,以及经视网膜全光凝治疗后3mo的检测值进行比较分析。结果:患有PDR的患者血浆中VEGF(375±89ng/L),ET-1(20±5ng/L)和NO(135±53μmol/L)的含量均比健康对照组高(P<0.01),经过视网膜全光凝治疗3mo后,上述各检测指标分别下降至VEGF(179±66ng/L)、ET-1(11±5ng/L)和NO(91±49μmol/L),但仍比健康对照组高。结论:患有PDR的患者血浆中含有较高的VEGF、ET-1和NO,经过视网膜全光凝治疗后显著下降。     

闭角型青光眼患者红细胞免疫功能与EPO和ET-1的相关性

目的：探讨闭角型青光眼患者红细胞免疫功能与血清促红细胞生成素(EPO)和血浆内皮素-1(ET-1)的相关性。

方法：选取2017-06/10期间我院收治的闭角型青光眼患者30例(病例组)与眼部正常者30例(对照组)为研究对象。测定并比较两组受试者红细胞免疫功能、血清EPO和血浆ET-1浓度,分析之间的相关性。

结果：病例组受试者红细胞C3b受体花环率明显低于对照组(10.81%±2.01% vs 18.06%±3.44%),红细胞免疫复合物花环率明显高于对照组(17.21±3.49% vs 11.74±2.14%),血清EPO浓度明显高于对照组(26.10±5.22 mU/mL vs 22.68±4.06mU/mL),血浆ET-1浓度明显高于对照组(70.85±7.16ng/L vs 58.43±5.09ng/L)。闭角型青光眼患者红细胞C3b受体花环率与血清EPO浓度呈显著正相关(r=0.271,P<0.05),与血浆ET-1浓度无明显相关性。

结论：闭角型青光眼患者红细胞免疫功能与血清EPO浓度呈正相关。