柠檬醛抑制NB4细胞生长并诱导凋亡机制的研究

目的研究柠檬醛（Citral）对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株生长抑制和诱导凋亡作用;研究柠檬醛诱导NB4细胞凋亡可能的机制。方法采用台盼蓝拒染法测定细胞活力;采用CCK-8比色法检测柠檬醛对细胞增殖的影响;形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡;流式细胞仪检测线粒体膜电位（MMP）改变情况。结果 2～20 mg·L^-1柠檬醛具有时间和剂量依赖方式抑制NB4细胞增殖,诱导细胞凋亡,明显降低细胞线粒体膜电位。结论柠檬醛诱导NB4细胞内线粒体膜电位崩溃可能是引起细胞凋亡的机制之一。     

黄连素下调NRAV和PI3K/AKT通路减轻RSV感染致HEp-2细胞的损伤

目的 探讨长链非编码RNA NRAV(LncRNA NRAV)和PI3K/AKT通路在黄连素(berberine, BE)减轻RSV感染致HEp-2细胞损伤中的机制。方法 将HEp-2细胞感染RSV,并用BE、PI3K激活剂740Y-P处理或过表达NRAV。qRT-PCR检测NRAV、RSV-F、NS2表达水平;CCK-8实验检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞的凋亡率和线粒体膜电位;ATP检测试剂盒检测ATP水平;Western blot检测细胞PI3K、AKT、PINK1、Parkin、Beclin1、p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、BNIP3、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达;MitoSOX染色检测细胞线粒体ROS(mtROS);ELISA检测细胞IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α分泌水平。结果 过表达NARV细胞凋亡率、RSV活性增加,敲低后结果相反;BE能显著抑制NRAV和PI3K/AKT通路(P<0.05),改善线粒体功能、诱导线粒体自噬,提高细胞的活性、降低凋亡率（P<0.05）,并降低NLRP3炎性小体活化水平和IL-1β、IL-6、IL-8...     

格列苯脲通过激活ROS-JNK通路发挥抗肿瘤作用

目的：探讨ATP敏感性钾通道（KATP）阻断剂格列本脲对胃癌细胞株MGC-803的抗肿瘤作用及相关机制。方法：应用MTT、Hoechst法分别检测格列本脲对细胞活力和凋亡的影响：应用Western．blot、RT-PCR等方法检测MGC-803细胞KATP亚基的表达、线粒体细胞色素C和凋亡诱导因子（AIF）的释放、JNK,Akt的磷酸化,以及NADPH氧化酶催化亚基gp91的表达;应用H2DCFDAROS荧光探针检测ROS和O2-的产生,氧电极法测定线粒体呼吸功能。结果：MGC-803细胞表达由kir6．2和SUR1亚基构成的KATP通道。格列苯脲可降低MGC-803细胞活力、促进其凋亡;格列苯脲能促进NADPH氧化酶源性和线粒体源性ROS的生成,进而活化JNK激酶,并降低线粒体膜电位、促进细胞色素C和凋亡诱导因子（AIF）的释放,触发线粒体通路介导的细胞凋亡;抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）可抑制格列苯脲降低MGC-803细胞活力、诱发细胞凋亡,以及活化JNK的作用;进一步的研究显示,格列苯脲可显著降低野生型MEF细胞的活力、促进其凋亡,并能抑制抗凋亡的Akt信号通路,但不影响JNK1和JNK2-MEF细胞的存活。结论：KATP,通道阻断剂格列苯脲可通过促进ROS的生成,激活JNK、抑制Akt信号通路,触发线粒体通路介导的细胞凋亡,从而发挥其抗肿瘤作用。研究结果提示,KATP通道可能是发展抗肿瘤药物的有效靶标。     

大黄素诱导人肝癌HepG2细胞线粒体凋亡作用研究

目的 研究大黄素对人肝癌HepG2细胞线粒体凋亡的影响。方法 培养人肝癌HepG2细胞,与5、10、20、40、60、80、100 μmol/L的大黄素作用24、48 h,MTS法检测细胞增殖;40、80、160 μmol/L大黄素作用HepG2细胞24 h,AO/EB双荧光染色法观察细胞凋亡的形态学改变;Annexin V/PI染色经流式细胞仪检测细胞凋亡;分光光度法检测caspase 3活性;ATP试剂盒检测细胞ATP含量,不同荧光探针加载后流式细胞仪测定大黄素对HepG2细胞内活性氧（ROS）含量、Ca²⁺浓度、线粒体膜电位（MMP）变化的影响。结果 大黄素抑制HepG2细胞生长,且呈时间、浓度相关性,半数抑制浓度（IC₅₀）为（77.42±1.25）μmol/L;随着大黄素浓度升高,AO/EB双染观察到细胞核浓缩、碎裂、凋亡小体等凋亡形态;与对照组比较,大黄素40、80、160 μmol/L作用于HepG2细胞24 h后细胞凋亡率显著增加,caspase 3活性显著增强,ROS水平、Ca²⁺浓度明显增加（P<0.05、0.01、0.001）,80、160 μmol/L组线粒体膜电位明显降低,ATP含量显著下降（P<0.05、0.01、0.001）。结论 大黄素造成HepG2细胞内ROS堆积,ATP合成功能障碍,线粒体膜电位明显下降,进而诱导线粒体通透转运孔开放,导致钙离子和细胞色素C外流,活化caspase蛋白家族,导致细胞凋亡。     

一氧化碳对脂多糖诱导大鼠肺巨噬细胞损伤的影响

摘要： 目的 探讨一氧化碳（CO）对脂多糖（LPS）诱导大鼠肺巨噬细胞损伤的影响及可能机制。方法 用含有10%胎牛血清的细胞培养基, 在 37 ℃、 5%CO2细胞培养孵箱内培养大鼠肺巨噬细胞, 采用随机数字表法将其分为 4组（n=10）： 空白对照组（C 组）、 CO 组、 LPS 组、 LPS+CO 组。CO 组加入体外一氧化碳释放分子-2（CORM-2） 100μmol/L 孵育, LPS 组加入 LPS 10 mg/L, LPS+CO 组加入 CORM-2 100 μmol/L 预处理 1 h 后加入 LPS 10 mg/L 孵育, C组加入等量 PBS 液作为对照。每组细胞处理完毕后继续孵育 24 h, 采用 MTT 法测定细胞活力; 流式细胞仪测定细胞凋亡率和线粒体膜电位; ATP 酶含量试剂盒测定细胞内 ATP 含量; RT-PCR 法测定细胞中线粒体分裂相关蛋白Drp1 的 mRNA 含量; Western blot 法测定 Drp1 的蛋白表达。结果 与 C 组相比, LPS 组和 LPS+CO 组细胞活力、 ATP含量和线粒体膜电位下降, 细胞凋亡率、 线粒体分裂蛋白 Drp1 mRNA 及蛋白表达增加 （P < 0.05）, CO 组上述指标比较差异无统计学意义; 与 LPS 组比较, LPS+CO 组细胞活力、 ATP 含量和线粒体膜电位增加 （P < 0.05）, 细胞凋亡率、Drp1 mRNA 及蛋白表达减少（P < 0.05）。结论 CO 可减轻 LPS 诱导的大鼠肺巨噬细胞损伤, 其机制与下调线粒体分裂相关蛋白 Drp1 和改善线粒体功能有关。     

苯乙双胍通过影响线粒体功能促进A549/DDP细胞凋亡

目的 探究苯乙双胍抑制 A549/DDP细胞增殖并促进其凋亡的可能机制。方法 MTS法检测顺铂（顺铂 组）和苯乙双胍（苯乙双胍组）对 A549/DDP 细胞和 A549 细胞的细胞活力（24 h 和 48 h）的影响。苯乙双胍组以 2.5 mmol/L苯乙双胍处理,对照组采用PBS处理,MTS法检测苯乙双胍对A549/DDP细胞增殖的影响,克隆形成实验检测 苯乙双胍对 A549/DDP细胞克隆形成能力的影响,流式细胞术检测苯乙双胍对 A549/DDP细胞凋亡和活性氧（ROS） 胞内线粒体质量（Mitotracker）、钙离子（Rhod-2）的影响,实时荧光定量PCR检测线粒体DNA（mtDNA）变化,三磷酸腺 苷（ATP）试剂盒检测 ATP的变化,Western blot检测苯乙双胍对线粒体氧化磷酸化复合物表达的影响。结果 与顺 铂组比较,苯乙双胍组A549/DDP细胞在24 h和48 h的细胞活力降低（P＜0.05）,而2组间A549细胞24 h和48 h活力 差异无统计学意义。顺铂处理48 h时A549/DDP细胞活力均高于A549细胞（P＜0.05）,而24 h间差异无统计学意义; 苯乙双胍处理的A549/DDP细胞活力低于A549细胞（P＜0.05）。与PBS组相比,苯乙双胍组A549/DDP细胞的24 h和 48 h 增殖率、集落形成数减低,而凋亡率升高,ROS 水平增高,Mitotracker、Rhod-2、mtDNA 及 ATP 水平降低（P＜ 0.05）,线粒体氧化磷酸化复合物Ⅰ中的NDUFB8蛋白、复合物Ⅱ中的SDHB蛋白和复合物Ⅳ中的MTCO1蛋白表达明 显降低（P＜0.05）。结论 （1）A549/DDP细胞较 A549细胞对苯乙双胍更为敏感,但对顺铂耐受性较 A549细胞强。 （2）苯乙双胍通过增加细胞内 ROS、减少线粒体质量、钙离子和 mtDNA、抑制线粒体氧化磷酸化复合物表达,减少 ATP生成,从而抑制A549/DDP细胞增殖并促进其凋亡。     

Exendin-4对h IAPP诱导的胰岛β细胞凋亡的保护作用

目的 探究Exendin-4对人源胰岛淀粉样多肽（h IAPP）诱导的胰岛β细胞凋亡的保护作用及其可能的作用机制。方法 体外培养胰岛β细胞INS-1E，加入2.5、5、10、20μmol/L的hIAPP培养48 h，建立hIAPP诱导细胞凋亡模型。20、50、100 nmol/L Exendin-4预处理24 h,CCK-8法检测细胞活力，筛选有效的药物剂量。随后实验分为空白组、Exendin-4组、h IAPP模型组、h IAPP+Exendin-4组以及阳性对照组。LDH释放检测法分析膜通透性变化；化学发光法测定细胞内腺苷三磷酸（ATP）水平；JC-1荧光探针法检测线粒体膜电位的改变；Western blot检测线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax以及Bad的表达。结果 20μmol/L的hIAPP可以明显抑制INS-1E细胞增殖，增加LDH的释放，增加细胞内ATP的消耗，增加去极化线粒体膜电位比例，下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，上调促凋亡蛋白Bax和Bad的表达（均P<0.05）。与hIAPP组相比，h IAPP+Exendin-4组能够显著提高细胞活力，减少LDH释放，...     

注射用益气复脉(冻干)对阿霉素诱导H9c2(2-1)心肌细胞毒性的保护作用

目的 探讨注射用益气复脉（冻干,YQFM）对阿霉素（doxorubicin,DOX）诱导H9c2（2-1）心肌细胞毒性的保护作用。方法 H9c2（2-1）心肌细胞随机分为对照组,模型组（终浓度为0.3 μmol/L的DOX处理细胞48 h）,YQFM低、中、高剂量（125、625、3 125 μg/mL）组（提前2 h加入药物预处理,然后加入终浓度为0.3 μmol/L的DOX处理48 h）,采用CCK-8法检测细胞活力;使用乳酸脱氢酶（LDH）和ATP试剂盒检测细胞LDH和ATP水平;应用Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡;JC-1法检测细胞线粒体膜电位;Western blotting法检测caspase-3蛋白的表达水平。结果 与模型组比较,YQFM中、高剂量组显著增加细胞存活率（P<0.05、0.01）,低、高剂量组明显改善细胞凋亡;低、中、高剂量组LDH活性显著降低（P<0.05、0.01）,ATP含量显著增加（P<0.05、0.01）,线粒体膜电位明显恢复。结论 YQFM抑制DOX诱导H9c2（2-1）的细胞毒性,其作用机制可能与抑制线粒体凋亡信号通路的激活有关。     

芪苈强心胶囊通过PI3K/AKT/GSK3β信号通路延缓氧化应激损伤心肌细胞线粒体途径凋亡

目的探讨芪苈强心胶囊对氧化应激损伤心肌细胞线粒体途径凋亡的作用及机制。方法动物实验:通过结扎SD大鼠左冠状动脉前降支建立心梗后慢性心力衰竭(慢性心衰)大鼠模型,按分组分别灌胃给予芪苈强心超微粉(QLQX)或生理盐水4周。彩超检测心功能,ELISA法及荧光法检测血清乳酸脱氢酶(LDH)释放水平、活性氧(ROS)表达水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,TUNEL检测心肌细胞凋亡率,Western印迹法测凋亡相关蛋白表达水平及信号通路相关因子p-AKT/AKT和p-GSK3β/GSK3β表达相对比。细胞实验:使用H9c2心肌细胞给予或不给予QLQX或PI3K抑制剂LY294002,然后暴露于H2O2中共孵育24 h,MTS检测H9c2细胞生存活性,检测LDH和ROS表达水平及SOD活性,QRT-PCR法检测血红素氧合酶(HO-1)和过氧化氢酶(CAT)mRNA表达水平。流式细胞术测H9c2细胞凋亡率,Western印迹法测凋亡相关蛋白及信号通路相关因子蛋白表达水平。同时评估线粒体分裂、线粒体通透性转运孔(m PTP)开放和线粒体膜电位(MMP)水平。结果动物实验结果显示,与假手术组相比,模型组大鼠血清LDH和ROS水平显著增加,SOD活性降低(P<0.01);心肌细胞凋亡率明显增加,促凋亡蛋白Bax、细胞色素c、凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)、活化胱天蛋白酶9、活化胱天蛋白酶3蛋白表达水平升高(P<0.01);Bcl-2蛋白表达水平、p-AKT/AKT及p-Gsk3β/Gsk3β蛋白表达相对比降低(P<0.01),心功能下降(P<0.01)。给予不同剂量QLQX后均不同程度降低心衰大鼠血清LDH释放水平和ROS表达水平,升高SOD活性(P<0.05);抑制心肌细胞凋亡率及促凋亡蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达、p-AKT/AKT和p-GSK3β/GSK3β相对比,提高心衰大鼠心功能(P<0.05)。细胞实验结果显示,与H2O2组相比,QLQX促进H2O2损伤H9c2心肌细胞24 h后细胞增殖,抑制LDH释放水平和ROS表达水平,升高SOD活性、HO-1及CAT mRNA表达水平(P<0.01);抑制H9c2细胞凋亡率,下调上述促凋亡蛋白表达水平,上调Bcl-2蛋白表达、p-AKT/AKT及p-Gsk3β/Gsk3β相对比(P<0.01)。同时,QLQX抑制H2O2损伤H9c2细胞线粒体分裂、mPTP开放及MMP下降(P<0.01)。然而,QLQX改善氧化应激诱导H9c2心肌细胞线粒体损伤及凋亡作用可被PI3K抑制剂LY294002阻断。结论 QLQX可能通过激活PI3K/AKT/Gsk3β通路延缓氧化应激损伤心肌细胞线粒体依赖性凋亡。     

青蒿琥酯诱导人早幼粒白血病细胞HL60凋亡的线粒体机制

目的 :探讨青蒿琥酯 (artesunate ,Art)诱导人急性早幼粒白血病细胞HL6 0凋亡的线粒体机制。方法 :用Art处理HL6 0细胞 ,通过MTT比色法检测细胞增殖抑制的效果 ;透射电镜、DNA凝胶电泳技术观察细胞的凋亡 ;流式细胞术 (flowcytometry ,FCM)进行细胞周期分析和线粒体膜电位 (mitochon drialmembranepotential ,MMP)水平的检测 ;比色法检测半胱 天冬氨酸蛋白酶 3(cysteinecontainingas partate,Caspase 3)活性。结果 :Art呈浓度和时间依赖性的抑制HL6 0细胞的增殖 (P <0 .0 5 )。Art诱导后HL6 0细胞出现典型的凋亡形态学变化和生化改变 ,G2 M期细胞比例增高 ,S期减少 ,凋亡率上升 (P <0 .0 5 ) ,线粒体膜电位降低 (P <0 .0 5 ) ,Caspase 3活性增强 (P <0 .0 5 )。结论 :Art可能通过线粒体 半胱 天冬氨酸蛋白酶 3特定途径诱导HL6 0细胞凋亡。     

圣草次苷激活Nrf2信号通路保护H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤作用研究

目的 建立大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤模型,考察圣草次苷改善心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法 利用无糖无血清培养基结合厌氧（94%N₂、5%CO₂、1%O₂）处理H9c2心肌细胞4h后,更换新鲜完全培养基再放入正常孵箱复氧24h,制备H/R损伤模型。在造模前12h给予圣草次苷（5、10、20μg·mL^-1）,细胞活力及乳酸脱氢酶（LDH）检测实验中选择灯盏乙素（20μg·mL^-1）作为阳性药,对照组及模型组给予等体积DMSO。MTT法测定细胞存活率;试剂盒检测细胞培养上清液中LDH水平;试剂盒检测细胞内丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力;TUNEL染色检测细胞凋亡;DCFH-DA和JC-1探针分别检测细胞内活性氧（ROS）和线粒体膜电位改变;Western blotting检测核蛋白中转录因子（NF）-E2相关因子2（Nrf2）和总蛋白中血红素氧合酶1（HO-1）、γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）水平。结果 与对照组比较,H/R损伤诱导的模型组细胞存活率明显下降,凋亡明显增加,LDH水平明显升高,细胞内MDA水平明显升高,SOD、CAT、GSH-Px活力明显降低,ROS释放明显增多,线粒体膜电位明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.01）;与模型组比较,圣草次苷可剂量相关性地改善上述变化,其中10、20μg·mL^-1组均差异显著（P＜0.01）。Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组细胞Nrf2核转位以及HO-1、GCL表达水平无显著变化;与模型组比较,圣草次苷10、20μg·mL^-1显著增加Nrf2核转位及HO-1、GCL表达水平（P＜0.01）。结论 圣草次苷能够保护H/R诱导的H9c2心肌细胞损伤,其可能通过激活Nrf2抗氧化信号通路,增加细胞内源性抗氧化能力,抑制氧化应激损伤,保护线粒体功能以阻止细胞凋亡的发生。     

瓜子金皂苷己对连二亚硫酸钠致氧糖剥夺/复供诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PGSF)对氧糖剥夺/复供(oxygen-glucose deprivation and reperfusion,OGD/R)所诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制。方法以连二亚硫酸钠合并无糖Earle’s液造成氧糖剥夺,继而恢复为完全培养基以建立体外OGD/R模型,以Hoechst33342/PI双染及流式细胞术观察细胞受损和凋亡情况;以JC-1荧光染色法测定细胞线粒体膜电位(mitochondrial membranepotential,MMP);以Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果 PGSF可明显改善细胞形态并降低细胞受损和凋亡百分率,抑制MMP水平的降低,增加Bcl-2/Bax表达比值。结论 PGSF对OGD/R诱导的PC12细胞凋亡具有明显抑制作用,机制与其调节Bcl-2和Bax的表达及稳定MMP有关。     

青蒿琥酯抑制人头颈部鳞状细胞癌增殖及诱导凋亡的机制

摘要： 目的 探讨天然小分子化合物青蒿琥酯 （Akt） 通过诱导人头颈部鳞癌细胞凋亡而抑制肿瘤生长的分子机制。方法 培养人头颈部鳞癌细胞系 UM-SCC-10A, 利用四甲基偶氮唑蓝 （MTT） 法检测 Akt 半数抑制浓度 （IC50 ）;在荧光显微镜下观察不同浓度 （0、 2.5、 5、 10、 20、 40 μmol/L） Akt 对细胞形态的影响; 流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况; 免疫印迹 （Western blot） 分析 Akt 诱导凋亡相关蛋白和细胞周期调节因子表达水平的变化。结果 Akt 对 UM- SCC-10A 细胞的生长有明显抑制作用, 且生长抑制率随药物浓度增加而增加; 当 Akt 处理细胞 48 h 时, IC50 为 15.01 μmol/L。荧光显微镜下, 使用细胞核染料 Hoechst33258 观察到细胞核内出现凋亡小体; 流式细胞仪分析显示 Akt 诱导细胞周期阻滞在 G1 期, 细胞出现大量凋亡; Western blot 结果显示 P53、 P21 蛋白表达量上调、 细胞周期蛋白 D （Cy⁃ cline D） 下调; 线粒体途径诱导的 Bcl-2 相关 X 蛋白 （Bax）、 细胞色素 C （cytochrome C） 及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 （caspase-3） 表达上调, B 细胞淋巴瘤/白血病-2 （Bcl-2）、 procaspase-3 表达下调, 线粒体膜电位降低。结论 Akt 经由线粒体途径诱导 UM-SCC-10A 细胞凋亡, 阻滞细胞周期于 G1期, 进而抑制肿瘤细胞增殖。     

尼可地尔对内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的研究尼可地尔对体外内皮细胞氧化应激引起的损伤的保护作用。方法在体外培养基中,加入终浓度为100μmol.L-1的过氧化氢,给予人脐静脉内皮细胞氧化应激暴露24 h。用MTT法检测细胞增殖,Hoechst33258染色观察细胞核形态学,流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光定量分析一氧化氮生成。结果氧化应激引起内皮细胞增殖抑制及细胞核形态异常,使细胞凋亡率从(11.9±3.4)%上升至(78.6±7.6)%。尼可地尔可明显减轻氧化应激引起的细胞增殖抑制及细胞核形态改变,并使细胞凋亡率降低至(48.8±5.1)%;同时尼可地尔可减轻氧化应激引起的内皮细胞一氧化氮生成障碍。尼可地尔的保护效应可被线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂5-hydroxydecanoate部分逆转。结论尼可地尔可减轻氧化应激引起的内皮细胞凋亡及功能损害,该保护作用与开放线粒体ATP敏感性钾通道有关。     

姜黄素通过上调PPARγ抑制糖基化终末产物诱导的软骨细胞凋亡及线粒体功能损伤

目的观察姜黄素(curcumin)对糖基化终末产物(AGEs)诱导的软骨细胞凋亡及线粒体功能损伤的作用,并探讨相关机制是否与姜黄素上调过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)相关。方法原代培养家兔膝关节软骨细胞;TUNEL染色法检测细胞凋亡;Rhodamine-123试剂盒检测线粒体跨膜电位(△Ψm);ATP试剂盒检测线粒体ATP生成;分光光度法检测caspase-3活性;Western blot检测PPARγ、细胞色素C、Bax及Bcl-2蛋白表达;real-time PCR检测PPARγmRNA含量;DNA-binding法检测PPARγ活性。结果 AGEs(200 mg·L-1)可明显诱导兔软骨细胞凋亡,同时线粒体跨膜电位(△Ψm)降低、ATP生成减少,caspase-3活性增加,细胞色素C释放增加,Bax/Bcl-2的比值增加;线粒体通透性转换孔的抑制剂环孢霉素A(Cs A,100 nmol·L-1)可以明显抑制AGEs诱导的细胞凋亡;PPARγ特异性激动剂吡格列酮及姜黄素均可明显抑制AGEs诱导的软骨细胞凋亡及线粒体功能损伤,给予PPARγ特异性抑制剂GW9662 10μmol·L-1预处理后,可以明显拮抗姜黄素的保护作用。同时,姜黄素可以明显上调AGEs诱导的PPARγ活性的降低,并伴随PPARγ相应的mRNA及蛋白表达水平的升高。结论姜黄素通过上调PPARγ,有效地保护AGEs诱导的软骨细胞线粒体损伤,从而抑制AGEs诱导的软骨细胞凋亡。     

丹参素异丙酯对肝细胞脂肪过度蓄积的改善作用及其机制北大核心CSCD

目的探索丹参素异丙酯[isopropyl3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-hydroxypropanoate,IDHP]能否通过改善线粒体功能来抑制肝细胞的脂肪蓄积,减轻非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)患者的脂肪过度蓄积症状。方法利用游离脂肪酸棕榈酸和油酸(PA∶OA摩尔比=1∶2)诱导肝细胞脂肪蓄积,模拟细胞脂肪化模型。首先,利用CCK-8检测不同浓度PAOA及IDHP对细胞活力的影响;选用600μmol·L^(-1) PAOA诱导4株肝细胞脂滴蓄积,通过检测尼罗红(Nile Red)荧光信号和甘油三脂(triglycerides,TG)、胆固醇(TC)含量来判定细胞脂肪化模型建立是否成功;分别检测经不同浓度IDHP干预后,细胞内活性氧(ROS)含量、还原型谷胱甘肽(GSH)活性、三磷酸腺苷(ATP)水平及线粒体膜电位(MMP)的变化。结果PAOA诱导后,细胞内出现大量脂滴蓄积,TG、TC含量升高,生成过量的ROS,同时GSH活性降低,ATP合成减少且线粒体膜电位下降。而随着IDHP干预浓度的增加,能有效改善脂滴蓄积,抑制TG的累积,减少活性氧的生成,提高GSH的活性,ATP生成量增加,且线粒体膜电位恢复至正常水平。结论IDHP可通过发挥抗氧化作用缓解氧化应激,改善线粒体功能,调节能量代谢,进而抑制肝细胞脂肪变性。     

ASPM对肝癌QGY-7703细胞的增殖、凋亡和迁移的影响

目的 研究ASPM在肝癌细胞增殖、凋亡及迁移的作用及其机制.方法 通过合成siRNA沉默ASPM在肝癌细胞株QGY-7703的表达,再通过CCK8,克隆形成实验检测其生长能力的改变;流式细胞术检测其凋亡水平的改变;Transwell迁移实验检测其迁移能力的改变,qRT-PCR检测EMT相关分子E-cadherin,N-cadherin,Snail以及线粒体相关基因COX1,ND1,ND6,COXIV,TOMM20的的表达水平的改变;通过MitoTrackerTM Red CMXRos检测肝癌细胞QGY-7703的线粒体活性,MitoTrackerTM Green检测线粒体的数量的改变;ATP检测试剂盒检测细胞内ATP的生成水平的改变;Western blotting检测TGF-β/Smad3信号通路活性的改变.结果 沉默ASPM可抑制QGY-7703的增殖能力和克隆形成能力,促进了其凋亡水平;同时,可抑制肝癌细胞QGY-7703的迁移能力,并促进E-cadherin的mRNA表达水平,抑制N-cadherin,Snail的mRNA表达水平;流式结果显示,沉默ASPM后,线粒体ROS的水平明显上升,反应线粒体数目的MitoTrackerTM Green的平均荧光强度明显下降,ATP产量也明显下降,而线粒体相关基因COX1,ND1,ND6,COXIV,TOMM20的表达水平明显下降;Western blotting的结果显示,沉默ASPM的表达水平可抑制TGF-β/Smad3信号通路的活性.结论 ASPM通过TGF-β/Smad3信号通路导致线粒体的发生及活性增强,从而促进肝癌细胞的增殖和迁移.     

硫化氢抑制葡萄糖调节蛋白78减轻6-OHDA诱导的PC12细胞损伤

目的：探讨硫化氢（H2S）是否通过改变葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的表达参与其对抗6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法应用具有神经毒性的6-OHDA损伤PC12细胞为帕金森病细胞模型,以硫氢化钠（NaHS）作为H2S的供体;应用CCK-8比色法检测细胞存活率;DFCH-DA染色检测细胞内活性氧（ROS）的水平;Rh123染色检测细胞线粒体膜电位（MMP）;Western blot检测GRP78的表达。结果200μmol/L的6-OHDA引起PC12细胞的存活率显著降低,ROS生成增加及MMP降低,且诱导了GRP78的高表达。应用25~400μmol/L的NaHS预处理30 min,呈浓度依赖性抑制6-OHDA引起的细胞存活率降低,其中400μmol/L的NaHS作用最明显,此浓度也可以显著减少6-OHDA引起的ROS增多,提高MMP,同时明显抑制6-OHDA诱导的GRP78高表达。结论 H2S具有抗6-OHDA氧化应激损伤的PC12细胞保护作用,抑制内质网应激分子GRP78的表达可能是其机制之一。     

氧化应激在TRAIL诱导Hela细胞凋亡中的作用

目的 探讨氧化应激在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用.方法 40μg·L-1 TRAIL处理细胞后,用MTT法检测TRAIL对细胞增殖的抑制作用;用分光光度法检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪检测胞浆内的活性氧(ROS)水平;激光共聚焦测定细胞线粒体膜电位(△Ψm);蛋白质印迹法检测Bcl-2、Cyt C、DR 4、DR 5蛋白量.结果 40 μg·L-1 TRAIL对Hela细胞的生长具有显著的抑制作用;使抗氧化因子GSH含量明显下降,氧化应激产物ROS、MDA含量明显增多;到6h时△Ψm不断降低,能明显下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,引起线粒体Cyt C向细胞质的释放;同时上调死亡受体DR 5的表达.而抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能抑制TRAIL引起的这些变化.结论 氧化应激在TRAIL诱导的Hela细胞凋亡中起着重要作用,可能与ROS激活线粒体途径和上调DR 5的表达密切相关.     

瓜子金皂苷己对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PS-F)对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞损伤的影响,并且探讨其作用机制。方法 MTT法检测细胞存活率,Annexin V/PI染色流式细胞术检测PC12细胞凋亡,JC-1染色倒置显微镜检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),Western blot检测Caspase-3蛋白的水平。结果 500μmol.L-1MPP+作用PC12细胞48 h,能明显抑制细胞生长(P<0.01),诱导细胞发生凋亡,同时降低MMP,增加活性Caspase-3的蛋白水平。同时给予不同浓度PS-F处理,PC12细胞存活率增加(P<0.01);凋亡细胞量减少;MMP增高;活性Caspase-3蛋白水平降低(P<0.01)。结论 PS-F能抑制MPP+诱导的PC12细胞的凋亡,其作用机制可能与维持线粒体正常膜电位,稳定线粒体功能,降低活性Caspase-3蛋白水平有关。