靶向超声介导VEGF_(165)cDNA基因治疗大鼠心肌缺血的实验研究

目的探讨靶向超声介导VEGF165cDNA基因治疗大鼠心肌缺血的可行性。方法将60只心肌缺血的雄性SD大鼠分为3组:超声介导基因组(采用超声破坏微泡造影剂的方法将VEGF165cDNA基因转染大鼠)、单纯基因组(尾静脉输入同等量携带VEGF165cDNA基因的造影剂)、对照组。每组又分为24h后处死组和14d后处死组,每小组为10只。处死后分别行坏死区中性粒细胞记数,梗死区质量比测定,免疫组织化学检测缺血心肌中的VEGF蛋白表达,缺血心肌区域毛细血管记数。结果24h处死组:超声介导基因组坏死区中性粒细胞平均为(59.30±7.70)个/高倍视野,单纯基因组为(62.53±7.50)个/高倍视野。14d后处死组:超声介导基因组梗死区质量比明显小于单纯基因组,单纯基因组又明显小于对照组。超声介导基因组有大量VEGF蛋白阳性反应的棕褐色颗粒,而单纯基因组VEGF蛋白阳性反应的棕褐色颗粒少于超声介导基因组。结论超声介导微泡造影剂携带VEGF165cDNA基因能提高基因转染率,促进缺血区毛细血管再生,减少心肌梗死面积,对缺血区炎性细胞的浸润也有一些影响,且基因的转染>24h。     

靶向超声介导VEGF165cDNA基因治疗大鼠心肌缺血的实验研究

目的探讨靶向超声介导VEGF165 cDNA基因治疗大鼠心肌缺血的可行性.方法将60只心肌缺血的雄性SD大鼠分为3组超声介导基因组(采用超声破坏微泡造影剂的方法将VEGF165 cDNA基因转染大鼠)、单纯基因组(尾静脉输入同等量携带VEGF165cDNA基因的造影剂)、对照组.每组又分为24 h后处死组和14d后处死组,每小组为10只.处死后分别行坏死区中性粒细胞记数,梗死区质量比测定,免疫组织化学检测缺血心肌中的VEGF蛋白表达,缺血心肌区域毛细血管记数.结果24 h处死组超声介导基因组坏死区中性粒细胞平均为(59.30±7.70)个/高倍视野,单纯基因组为(62.53±7.50)个/高倍视野.14 d后处死组超声介导基因组梗死区质量比明显小于单纯基因组,单纯基因组又明显小于对照组.超声介导基因组有大量VEGF蛋白阳性反应的棕褐色颗粒,而单纯基因组VEGF蛋白阳性反应的棕褐色颗粒少于超声介导基因组.结论超声介导微泡造影剂携带VEGF165cDNA基因能提高基因转染率,促进缺血区毛细血管再生,减少心肌梗死面积,对缺血区炎性细胞的浸润也有一些影响,且基因的转染＞24 h.     

靶向超声介导VEGF_(165) cDNA基因及抗ICAM-1单克隆抗体治疗大鼠心肌缺血的对比性研究

目的 探讨靶向超声介导VEGF_(165) cDNA、抗ICAM-1单克隆抗体及两者协同作用于受损心肌的有效性及可行性.方法 将80只心肌缺血的雄性SD大鼠随机分为四组:第一组采用超声击破微泡造影剂的方法将VEGF_(165) cDNA基因及抗ICAM-1单克隆抗体混合物定向于受损心肌;第二组采用超声击破微泡造影剂的方法将VEGF_(165) cDNA基因定向于受损心肌;第三组采用超声击破微泡造影剂的方法将抗ICAM-1单克隆抗体定向于受损心肌;第四组为对照组只注射生理盐水1 ml,不采用超声波照射.每组分别于24 h和14 d后处死10只.处死后分别行坏死区中性粒细胞记数,梗死区测定,免疫组织化学检测缺血心肌中的VEGF蛋白表达,缺血坏死心肌区域毛细血管记数.结果 第一组大鼠心肌缺血治疗效果较第二、第三组效果显著,第一组中性粒细胞浸润以及心肌梗死区域均明显低于其他各组,VEGF蛋白表达以及毛细血管记数明显高于其他三组.结论 采用超声触发破坏含靶基因及抗体的微泡造影剂的方式,可明显对抗心肌再损伤,促进缺血心肌的新生血管再生,改善心肌缺血,且两者协同作用比单独作用效果更佳.     

心肌超声造影技术评价骨髓细胞移植于缺血心肌的促微血管新生效应

目的探讨骨髓间质干细胞移植到缺血心肌后局部新生的微血管在活体心脏的灌注状况。方法对正常、心肌缺血梗死和骨髓细胞移植兔进行心肌超声造影(MCE)检查,评价缺血梗死区造影剂填充程度及强度。免疫荧光技术检测移植区微血管新生状况。结果正常时兔心肌内造影剂均匀分布,急性心肌梗死后左室前间壁造影剂充盈缺损,而移植4周后该处心肌内可见少量造影剂回声。定量分析显示移植组造影剂峰值强度明显高于心肌缺血梗死组[(44±20)dB对(17±5)dB,P<0.01]。移植区可检测到Brdu标记阳性的移植细胞抗Ⅷ因子染色阳性,毛细血管密度较缺血梗死组显著增高(P<0.05)。结论骨髓细胞移植可导致缺血心肌局部功能性微血管新生,心肌组织灌注状况改善。     

可降解材料纤维蛋白胶介导血管内皮细胞生长因子对心肌梗死组织血管再生的影响

背景：血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）可促进梗死心肌血管再生,但经系统性静脉灌注来传递VEGF是无效的,反复直接心肌注射会损伤正常心肌结构。目的：验证通过可降解材料纤维蛋白胶将VEGF移植到心肌梗死及缺血区域促进血管再生的可行性,并观察大鼠心功能的变化。设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-01/2008-04在新疆医科大学第一附属医院冠心病VIP实验室完成。材料：树脂色谱法纯化获得重组蛋白VEGF121,与纤维蛋白胶结合得到VEGF纤维蛋白胶。9周龄雄性SD大鼠28只,其中13只节扎冠状动脉左前降支制备心肌梗死模型为心肌梗死组,其余15只仅打开心包,不节扎左前降支者为为非心肌梗死组。方法：心肌梗死组梗死即刻将空白或VEGF纤维蛋白胶移植到梗死区域,附着在梗死和缺血区;非心肌梗死组将空白或VEGF纤维蛋白胶附在相应的左室前壁,另有3只不处理做为对照。主要观察指标：移植4周后经心脏超声行心功能检测,然后麻醉处死大鼠,取出心脏行免疫组化及血管测量分析。结果：移植VEGF胶后,非心肌梗死和心肌梗死组大鼠的毛细血管密度显著高于空白胶组（P〈0.001）;心肌梗死组梗死附近缺血区毛细血管密度显著高于间隔区（P〈0.01）。移植VEGF胶后,大鼠心功能有改善的趋势,但差异无显著性意义（P=0.2482）,结论：通过可降解材料移植VEGF可使大鼠非心肌梗死区和心肌梗死心肌区的毛细血管明显增生;将纤维蛋白胶作为传递血管再生因子到心肌的介质是可行的。     

抗细胞间黏附分子1单克隆抗体对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察应用抗细胞间黏附分子1单克隆抗体阻断大鼠缺血再灌注后由细胞间黏附分子1介导的的炎症反应,对缺血脑组织的保护作用。方法:实验于2003-04/2004-04在徐州医学院附属医院神经病学实验室进行。将造模成功的健康雄性SD大鼠24只随机分为3组,每组8只:①脑缺血组:线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型。②再灌注组:同前造模,于缺血6h回抽尼龙线开始再灌注。③抗细胞间黏附分子1单克隆抗体组:处理同再灌注组,再灌注同时经颈内动脉注入抗细胞间黏附分子1单克隆抗体1mg/kg。每组随机取5只大鼠于再灌注48h在麻醉状态下处死,用免疫组织化学方法观察各组大鼠脑内细胞间黏附分子1阳性血管数,苏木精-伊红染色观察大鼠脑内白细胞浸润数,炎症反应;各组剩余3只大鼠同时间麻醉状态下处死,四氮唑红测定大鼠脑梗死体积占脑半球的百分率。结果:24只大鼠进入结果分析。①脑内细胞间黏附分子1阳性血管数:抗细胞间黏附分子1单克隆抗体组低于再灌注组,与脑缺血组无差异[(298±35),(450±73),(417±46)个/mm2]。②脑白细胞浸润数:抗细胞间黏附分子1单克隆抗体组低于再灌注组和脑缺血组[(8.5±1.7),(28.7±5.9),(16.3±4.6)个,P<0.05]。③脑梗死体积占脑半球的百分率:抗细胞间黏附分子1单克隆抗体组低于再灌注组,与脑缺血组无差异[(26.4±2.5)%,(42.5±3.5)%,(36.6±4.1)%]。结论:抗细胞间黏附分子1单克隆抗体对脑缺血后所伴发的炎症反应有抑制作用;可减轻缺血后脑组织的损伤,缩小脑梗死体积,在炎症损伤环节上可延长大鼠脑梗死的溶栓治疗时间窗。     

旁分泌效应联合超声生物学效应在MSCs归巢与修复缺血心肌的作用

目的 探讨超声联合微泡经静脉移植兔骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)中旁分泌效应及超声生物学效应在MSCs归巢和修复缺血心肌中的价值与作用.方法 密度梯度离心法及贴壁细胞培养法培养兔BM-MSCs.培养细胞进行成脂及成骨诱导分化.细胞移植后行免疫组织化学检测心肌缺血区SDF-1表达,Western blotting检测VEGF蛋白的表达并行定量分析.透射电镜观察各组心肌缺血区血管内皮细胞及通透性.结果 培养的细胞可分化成脂肪与骨骼样细胞.免疫组织化学示SDF-1在3组中均有表达,以2个细胞移植组的阳性表达更强.Western blotting VEGF/GAPDH定量分析超声辐照+微泡+细胞组(236.59±47.13)与静脉移植细胞组(151.48±25.07)和对照组(89.43±20.43)比较,P<0.05.透射电镜示超声+微泡+细胞组缺血区血管内皮细胞间隔增大,红细胞漏出,血管通透性增加.结论 移植MSCs通过旁分泌机制促进SDF-1、VEGF等因子分泌,超声生物学效应通过增加心肌血管通透性、上调VEGF的表达,二者协同促进MSCs归巢和修复缺血心肌.     

还原型谷胱甘肽对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞间黏附分子1表达的影响

目的:观察还原型谷胱甘肽对大鼠短暂性局灶性脑缺血再灌注后细胞间黏附分子1表达的影响。方法:实验于2005-06在兰州大学基础医学院人体解剖学教研室实验中心完成。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注24h模型,随机分为假手术组、缺血再灌注模型组和还原型谷胱甘肽处理组。每组15只。制模成功后观测各组大鼠的神经行为变化,脑梗死体积,行苏木精-伊红染色计数缺血区中性粒细胞浸润数目,应用免疫组化方法检测细胞间黏附分子1的表达情况。结果:实验中假手术组未见动物死亡,缺血再灌注组2只动物死亡,还原型谷胱甘肽处理组1只动物死亡。死因均为蛛网膜下腔出血所致。①还原型谷胱甘肽处理组及缺血再灌注模型组动物均有不同程度的神经功能缺损,且还原型谷胱甘肽处理组动物神经行为学评分有改善眼(2.04±0.47),(2.71±0.29),分(P<0.05)演;还原型谷胱甘肽处理组梗死体积小于缺血再灌注模型组眼(20.21±1.55),(29.57±4.40)%,P<0.05演,假手术组未见梗死灶。②脑缺血2h再灌注24h后大鼠脑血管细胞间黏附分子1表达增加。阳性反应的细胞间黏附分子1主要见于脑缺血侧梗塞区及其周围的毛细血管壁,于神经元和胶质细胞也可见。还原型谷胱甘肽处理组的表达较缺血再灌注模型组减少眼(11.29±1.11),(17.14±1.77),P<0.05演。③假手术组细胞形态正常;缺血再灌注模型模型组右侧大脑缺血范围内皮质水肿明显,神经细胞外周隙扩大,毛细血管周隙增宽,血管内血栓形成,在皮质和纹状体可见大量死亡神经元,可见筛状坏死灶,间质水肿呈松网状,有大量中性粒细胞的浸润;还原型谷胱甘肽处理组大脑皮质神经细胞层次尚清晰,未见明显坏死灶,神经细胞及毛细血管周围间隙稍大,但明显小于缺血再灌注模型组。间质水肿、中性粒细胞的浸润也轻于缺血再灌注模型组。结论:外源性谷胱甘肽可以改善大鼠局灶性脑缺血引起的神经行为障碍,减少脑梗死体积,通过减少脑缺血引起细胞间黏附分子1表达,抑制中性粒细胞的浸润,从而减轻脑缺血再灌注后的炎症反应,而发挥对脑缺血后的保护作用。     

超声造影剂介导血管内皮生长因子基因治疗心肌缺血的实验研究

目的探讨超声破坏造影剂微泡介导血管内皮生长因子(VEGF)基因转染兔缺血心肌的有效性。方法新西兰白兔48只，结扎兔冠状动脉左旋支，建立急性心肌梗死模型。术后3d，经胸超声检查左室壁运动情况，明确心肌缺血区域，然后将VEGF真核表达质粒与新型超声造影剂JD-95混合后，经耳缘静脉输入兔体内，同时进行超声实时造影成像，照射心脏缺血区。其他对照组包括超声和造影剂组、单独基因组、基因和超声组、基因和造影剂组以及空白对照组。术后17d处死动物，取动物缺血心肌、肝、肾及下肢骨骼肌组织，用免疫组化方法检测VEGF蛋白表达。结果在超声破坏造影剂微泡介导基因转染的实验组中5只兔的缺血心肌中VEGF蛋白的表达，2只兔肾有VEGF表达。而其他对照组中无VEGF蛋白表达。结论超声破坏造影剂微气泡的方法是将体外生物活性物质传递至心肌中的一种有效途径。     

自体骨骼肌卫星细胞移植对MI大鼠心肌的治疗性血管新生作用

目的了解自体骨骼肌卫星细胞移植对MI大鼠心肌的治疗性血管新生作用及其机制.方法 45只Wistar大鼠随机分为假手术组(n=15)、对照组(n=15)及移植组(n=15),对照组及移植组大鼠经结扎冠状动脉前降支建立心肌梗死(MI)模型.将体外培养2周的移植组大鼠自体SC以注射的方式移植到梗死区周围,4周后病理观察移植细胞的生长、增殖情况,测定缺血心肌中VEGFmRNA、VEGF蛋白的表达情况及缺血心肌毛细血管密度的改变.结果 SC在梗死区中可增殖分化为横纹肌纤维.与假手术组及对照组相比,移植组缺血心肌中VEGFmRNA、VEGF蛋白的表达及毛细血管密度均明显增高(P＜0.01或0.001).结论 SC在心肌梗死区中可增殖分化为横纹肌样细胞,并通过自分泌和旁分泌的方式增加缺血心肌VEGF的表达,由此促进缺血心肌中毛细血管密度的提高.     

超声破坏微泡促进骨骼肌血管新生的时间-效应关系研究

目的 探讨超声破坏微泡促进大鼠骨骼肌血管新生的时间-效应关系.方法 将48只SD大鼠随机分为4组(超声破坏微泡组、单纯超声组、单纯微泡组、对照组),超声破坏微泡组经尾静脉输入自制的脂质全氟丙烷微泡造影剂0.5 ml,同时用1.0 MHz、2.0 W/cm2的超声在其大腿骨骼肌局部作用3min;单纯超声组仅在骨骼肌局部用同等的超声能量作用;单纯微泡组仅由尾静脉输入脂质全氟丙烷微泡造影剂0.5 ml;对照组不作任何处理.实验结束后的第3、7、10、14、21、28 d,各组分别取两只大鼠处死,取局部骨骼肌行石蜡切片HE染色观察显微结构的变化,CD34免疫组化计数微血管密度(MVD),酶联免疫吸附试验(ELISA)定量评价血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 超声破微泡组有较多的血管新生;单纯超声组新生血管较少;单纯微泡组和对照组几乎无血管新生.随着时间的变化,超声破坏微泡组的MVD值和VEGF表达在第10 d达到高峰;单纯超声组的高峰出现在第14 d.结论 超声破坏微泡可刺激骨骼肌中内源性VEGF较快、较多地分泌,从而更好地促进新生血管生成.     

超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及介导VEGF基因转染大鼠心肌的实验研究

目的 探讨超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及其介导VEGF基因转染大鼠心肌的有效性。方法 18只健康雄性Wistar大鼠，取3只采用超声波在鼠胸壁破坏微泡造影剂，观察对心肌组织显微结构的影响。将另15只急性心肌梗死3天后的雄性Wistar大鼠分为3组，每组5只。第一组采用超声破坏微泡造影剂的方式，将pcDzVEGFm基因转染大鼠心肌至造影剂不再显影(约6min)；第二组尾静脉输入同等剂量携pcD。VEGF。基因的造影剂；第三组为对照。2周后，取缺血心肌组织行VEGF免疫组织化学染色，观察心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况。结果超声波破坏微泡造影剂能使心肌组织充血，产生大量空泡，并有部分心肌细胞坏死。采用超声微泡造影剂介导的VEGF基因转染，能明显增强大鼠心肌组织VEGF蛋白的表达。结论 超声微泡造影剂能明显增强对组织的空化效应，其介导的VEGF基因治疗是一种无创、新型、高效的基因转移方法。     

Experimental research on therapeutic angiogenesis induced by hepatocyte growth factor directed by ultrasound-targeted microbubble destruction in rats.

OBJECTIVE: The purpose of this study was to explore the feasibility of therapeutic angiogenesis in myocardial infarction induced by hepatocyte growth factor (HGF) mediated by ultrasound-targeted microbubble destruction. METHODS: Forty Wistar rats were divided into 4 groups after the models of myocardial infarction were prepared: (1) HGF, ultrasound, and microbubbles (HGF+US/MB), (2) HGF and ultrasound, (3) HGF and microbubbles, and (4) surgery alone. Destruction of ultrasound-targeted microbubbles loaded with the HGF gene with an electrocardiographic trigger mode was performed in the HGF+US/MB group. All the rats were killed after being transfected for 14 days. Enhanced green fluorescent protein expression was examined in the myocardium, liver, and kidney in all groups by fluorescence microscopy; CD34 expression was detected by immunohistochemistry, and microvessel density (MVD) was counted in the high-power field on microscopy. Hepatocyte growth factor expression in the myocardium was detected by western blotting and an enzyme-linked immunosorbent assay. RESULTS: Enhanced green fluorescent protein expression was detected in the myocardium of the HGF+US/MB group, but a few areas of HGF expression were detected only in small vessels and the capillary endothelium, and no expression was found in the surgery-alone and HGF and microbubbles groups. The results of MVD counting by microscopy showed that the MVD in the myocardium of the HGF+US/MB group was the highest among all the groups. The results of western blotting and the enzyme-linked immunosorbent assay showed that the amount of HGF in the myocardium was highest in the HGF+US/MB group. CONCLUSIONS: Ultrasound-targeted microbubble destruction could deliver HGF into the infracted myocardium and produce an angiogenesis effect, which could provide a novel strategy for gene therapy of myocardial infarction.     

超声破坏微泡造影剂促进大鼠心肌血管新生的实验研究

目的探讨超声破坏微泡刺激大鼠心肌内源性VEGF分泌、促进血管生成的新途径。方法正常成年Wistar大鼠30只随机分为3组。第1组超声破坏微泡组，第2组单纯超声辐照组，第3组对照组。每组均进行3次处理。第一次处理3d后每组各取1只大鼠断颈处死后取其心肌，常规HE染色光镜观察心肌结构变化。剩余大鼠于2周后取材，免疫组化检测心肌组织中VEGF表达，CD34免疫组化检测评定超声破坏微泡促进心肌血管新生疗效。结果超声破坏微泡组心肌组织中见大量VEGF和CD34表达，新生血管较多。单纯超声组心肌组织中有较少VEGF和CD34表达，新生血管较少。对照组仅有极少量VEGF和CD34表达，未见明显新生血管。结论超声破坏微泡可刺激心肌内源性VEGF分泌，促进血管新生。     

超声介导重组腺相关病毒载体心肌靶向转染对大鼠左室心功能的影响

目的 探讨超声造影剂介导下重组腺相关病毒载体(rAAV2-GFP)心肌靶向转染前后大鼠左室心肌功能的变化.方法 健康成年SD大鼠20只,随机分为对照组与实验组:对照组尾静脉注射超声造影剂+超声照射;实验组注射携带rAAV2-GFP造影剂+超声照射.分别于实验前和实验后14 d利用斑点追踪技术测量大鼠周向应变、收缩期应变率,舒张期应变率、扭转角度,并同时测量大鼠射血分数、短轴缩短率、舒张末期容积及收缩末期容积等左心功能指标.行心肌组织冰冻切片,荧光显微镜下观察GFP的表达情况.结果 超声介导重组腺相关病毒心肌靶向转染前后大鼠左室心肌功能指标及相对于心底水平的扭转角度及达峰时间的差异均无统计学意义(P>0.05).结论 超声及超声造影剂介导重组腺相关病毒载体靶向转染心肌组织对大鼠左室心肌功能无影响.     

超声介导重组腺相关病毒载体心肌靶向转染对大鼠左室心功能的影响

目的 探讨超声造影剂介导下重组腺相关病毒载体(rAAV2-GFP)心肌靶向转染前后大鼠左室心肌功能的变化.方法 健康成年SD大鼠20只,随机分为对照组与实验组:对照组尾静脉注射超声造影剂+超声照射;实验组注射携带rAAV2-GFP造影剂+超声照射.分别于实验前和实验后14 d利用斑点追踪技术测量大鼠周向应变、收缩期应变率,舒张期应变率、扭转角度,并同时测量大鼠射血分数、短轴缩短率、舒张末期容积及收缩末期容积等左心功能指标.行心肌组织冰冻切片,荧光显微镜下观察GFP的表达情况.结果 超声介导重组腺相关病毒心肌靶向转染前后大鼠左室心肌功能指标及相对于心底水平的扭转角度及达峰时间的差异均无统计学意义(P>0.05).结论 超声及超声造影剂介导重组腺相关病毒载体靶向转染心肌组织对大鼠左室心肌功能无影响.     

诊断超声联合微泡对骨髓间充质干细胞移植改善兔心肌缺血灌注的研究

目的 探讨诊断超声联合微泡介导下经静脉移植同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)改善心肌缺血兔血流灌注的价值.方法 冠状动脉左前降支结扎法建立兔心肌缺血模型,分为对照组(组Ⅰ)、单纯静脉移植MSCs组(组Ⅱ)和超声+微泡+MSCs组(组Ⅲ).4周后行心肌超声造影(MCE)分析各组心肌缺血区血流灌注情况,超声心动图检测左心室功能,免疫组织化学检测心肌缺血区CD34表达,Western blotting检测VEGF蛋白的表达并行定量分析.结果 MCE检测前壁的平均灰阶值组Ⅰ(51.86±11.75)与组Ⅱ(63.08±15.32)和组Ⅲ(70.42±12.21)比较差异有统计学意义(P值分别为0.032,0.000).左室短轴缩短率(FS)组Ⅰ[(19.28±2.84)%]与组Ⅱ[(26.29±2.93)%]和组Ⅲ[(30.43±4.09)%]比较差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05),组Ⅱ和组Ⅲ比较差异亦有统计学意义(P<0.05).组Ⅲ的射血分数(EF)为(61.5±5.8)%,与组Ⅰ[(42.6±5.0)%]和组Ⅱ[(55.6±4.71)%]比较差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05).双平面Simpson法EF值组Ⅲ[(48.6±3.96)%]与组Ⅰ[(34.64±4.59)%]和组Ⅱ[(41.78±4.21)%]比较差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05).CD34免疫组织化学检测显示各组均可见阳性血管着色,但组Ⅲ阳性血管最多,组Ⅱ次之,组Ⅰ最少.Western blotting VEGF/GAPDH定量分析显示,组Ⅲ表达(236.59±47.13)明显高于组Ⅱ(151.48±25.07,P<0.01)和组Ⅰ(89.43±20.43,P<0.01).结论 超声介导的微泡破坏与经静脉移植MSCs可有效改善心肌缺血兔的血流灌注及心功能.     

超声微泡转染前列腺癌细胞的参数筛选

目的观察不同辐照参数下超声微泡对前列腺癌细胞生长及基因转染效率的影响。方法采用噻唑兰比色法检测单纯超声、单纯微泡、超声辐照微泡对前列腺癌细胞生存率的影响。荧光显微镜观察超声微泡介导的质粒为EGFP基因与HSV l-TK基因共表达载体。观察它对前列腺癌细胞PC-3转染后荧光表达情况,Westernblot检测EGFP蛋白的表达情况。结果 MTT显示超声强度为1.0W/cm2,频率为1MHz,辐照时间30s时超声辐照对细胞无明显的抑制作用;采用不同浓度的微泡对前列腺癌细胞PC-3作用24h后,各实验组细胞存活率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);当采用最适的超声辐照时间辐照微泡浓度为10、20、40、80μL时,超声+微泡(80μL)组细胞存活率低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),而10、20、40μL组中细胞生长良好;转染EGFP后48h,在荧光显微镜观察对照组未见荧光表达,其他各组中均有荧光表达,并随着微泡剂量的增加,荧光表达量增多;Western blot检测显示各处理组中均有EGFP蛋白的表达,超声+微泡(20μL)+TK(1μg)组、超声+微泡(40μL)+TK(1μg)组的EGFP蛋白表达明显高于其他各组。结论在最适辐照参数下,超声微泡造影剂能够有效地促进TK基因的转染。     

经多功能心腔内超声导管超声辐照破坏微泡对犬心肌组织的生物学效应

目的观察经多功能心腔内超声(ICE)导管超声辐照破坏微泡对动物心肌产生的生物学效应,探索基因治疗缺血性心脏病的新方法。方法 15只犬随机分为US+MB组、US组、对照组3组,每组5只。以介入法将多功能ICE导管送入犬心室。对US+MB在ICE监控下向左心室游离壁注射0.5ml微泡,并以1 W/cm2的声能对注射部位辐照1min;对US组以相同条件行左心室壁辐照,但不注射微泡;对照组在插入导管后不进行任何处理。术后3天处死动物,观察心肌组织大体改变,并行HE染色观察细微结构变化。结果ICE能对注射针的进针深度、微泡注射及辐照过程进行实时监控。观察期内所有动物均正常存活。US+MB组心肌辐照部位出现充血、心肌细胞间隙增宽、少量炎性细胞浸润等改变,US组心肌组织仅出现轻微充血;对照组动物心肌无异常变化。结论经ICE导管超声辐照破坏微泡能在靶区域产生相应生物学效应,内置ICE可对心肌内微泡注射、超声辐照过程进行实时监控。此款新型多功能导管可能为基因治疗缺血性心脏病提供新的、更加安全有效的途径。