基于AMPK/mTOR自噬通路探讨芍药苷保护溃疡性结肠炎小鼠的作用机制

目的 探讨芍药苷通过腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）自噬通路对溃疡性结肠炎（UC）小鼠的保护作用机制研究。方法 自由饮用4%葡聚糖硫酸钠（DSS）建立UC小鼠模型，56只BALB/c雄性小鼠，随机分为模型组、AMPK抑制剂组（20 mg·kg^-1）、芍药苷（50 mg·kg^-1）+抑制剂（20 mg·kg^-1）组、芍药苷高剂量组（50 mg·kg^-1）、中剂量组（25 mg·kg^-1）、低剂量组（12.5 mg·kg^-1）药物干预7 d后，通过比较小鼠体质量、疾病活动指数（DAI）变化和苏木素-伊红（HE）染色结果判断芍药苷对UC的保护作用。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的水平，免疫荧光检测结肠中微管相关蛋白1轻链3（LC3）的含量，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织中AMPK、mTOR蛋白及其磷酸化蛋白p-AMPK、p-mTOR，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测AMPK、mTOR、Beclin1、LC3和p62的mRNA表达水平。结果 与空白组比较，模型组小鼠体质量下降、DAI评分升高、结肠出现严重的病理学损伤，炎症因子TNF-α、IL-6在血清中含量上升（P<0.01），LC3和p-AMPK/AMPK在结肠组织中蛋白水平下调，p-mTOR/mTOR蛋白水平上调（P<0.01）；AMPK、LC3的mRNA表达水平下调，mTOR、p62的mRNA表达上调（P<0.01）。与模型组和芍药苷+抑制剂组比较，经芍药苷治疗后小鼠体质量上升、DAI评分降低、结肠组织病理损伤减轻，炎症因子TNF-α、IL-6在血清中含量下降（P<0.05），LC3和p-AMPK/AMPK在结肠组织中蛋白水平上调，p-mTOR/mTOR蛋白水平下调（P<0.01），AMPK、Beclin1、LC3的mRNA表达水平上调，mTOR、p62的mRNA表达下调（P<0.01），抑制剂组小鼠结肠组织病理损伤严重，各项指标趋势与芍药苷高剂量组完全相反。结论 芍药苷可通过激活AMPK/mTOR信号通路，增强自噬，减轻UC小鼠的炎症损伤，从而起到保护作用。     

中药调控mTOR信号通路治疗缺血性脑卒中的研究进展

缺血性脑卒中（IS）是临床上较为常见的一类严重的脑血管疾病。针对其缺血损伤发生机制,通过静脉溶栓以恢复血流仍是临床上最主要最有效的治疗手段,但因静脉溶栓存在增加出血风险、治疗窗口狭窄、禁忌证多等弊端,使其在临床的应用受到限制。在未达到完全有效复流的同时,对缺血脑组织进行有效保护事关IS预后。研究发现,改善IS导致的脑损伤存在诸多通道机制,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路就是其中之一。中医在治疗IS,尤其在改善缓解患者症状和提高生活质量方面,具有丰富的干预手段和独特优势。在IS发病后,中医药尽早介入其治疗、康复和预防复发的全过程可以充分发挥中西医协同治疗优势,保证患者获益最大化,对IS后的神经功能和运动功能恢复具有重要临床意义。诸多研究表明,中药干预手段通过调控激活mTOR信号通路,以干预和调节细胞自噬、抑制神经细胞凋亡、抑制氧化应激和炎症反应等方式有效减轻IS导致的脑损伤,对实现脑保护、改善IS预后具有积极作用,为IS的防治提供了新的治疗策略和思路。该文基于此,对mTOR信号通路在IS发病中的作用机制及近年来中药调控mTOR信号通路治疗IS的研究进展进行综述,以期为IS的中医药治疗提供新的治疗思路和系统的科学参考。     

白藜芦醇介导AMPK/mTOR信号通路调控线粒体自噬缓解小鼠精原细胞氧化应激损伤和凋亡

目的 观察白藜芦醇(resveratrol, RES)是否通过腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(amp-activatedproteinkinase/mammalian target of rapamycin, AMPK/mTOR)信号通路调控线粒体自噬缓解小鼠精原细胞(Gc-1 spg)氧化应激损伤。方法 设置空白对照组(Control)、过氧化氢组(H₂O₂)、H₂O₂+RES组、H₂O₂+RES+AMPK抑制剂(Compound C,CC)组,各组给予相应处理后。CCK-8检测细胞活力,试剂盒检测过氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽过氧化物(glutathione peroxidase, GSH-PX)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)和三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)SOD、M...     

古方黄芪散调控AMPK/mTOR自噬信号通路改善肝脏脂肪变性的机制

目的：基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨古方黄芪散调节自噬减轻小鼠肝脏脂肪变性改善非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用机制。方法：通过数据库收集黄芪散主要化学成分及NAFLD相关靶点,对交集靶点进行基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析、构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并进行体内实验验证。雄性C57BL/6J小鼠60只,适应性喂养1周后随机分为正常组、模型组、二甲双胍组(0.25 g·kg^-1)、黄芪散低、高剂量组(0.5、1 g·kg^-1,每组12只。采用高脂饮食(HFD)诱导小鼠NAFLD模型,造模的同时灌胃给药13周,每天1次。通过检测随机血糖、血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(NEFA)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和肝脏中TG含量;称量肝脏湿重并计算肝指数;采用苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色、透射电子显微镜(TEM)、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western ...     

中药单体调控AMPK通路防治NAFLD的研究进展

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是一种发病机制复杂多样的慢性肝病,临床上尚无有效治疗手段和特效药用于其治疗。近年来,其发病率呈上升趋势,治疗相关患病人群成为国内外医学研究者的殷切期盼。腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）的作用为调节细胞能量稳态与线粒体稳态,被激活时对于脂质代谢紊乱和线粒体稳态失调贯穿始终的NAFLD疾病进程有良好的干预作用。激活AMPK对于NAFLD能抑制肝脏新生脂肪生成、促进肝脏脂肪酸氧化、增强脂肪组织线粒体功能,而作为代谢性疾病的关键靶点,AMPK还有改善细胞凋亡、肝纤维化、自噬和炎症等作用。中药擅长从多靶点、多途径治疗疾病,在临床上也常用于慢性肝病的治疗。针对NAFLD的大量体内外实验研究表明,中药单体通过AMPK信号通路对治疗NAFLD有着良好的前景,包括苷类、酚类、生物碱类、黄酮类、醌类、萜类、木脂素类在内的多种类型中药单体是AMPK的天然激活剂,该文通过综述中药单体调控AMPK通路防治NAFLD的研究进展,为中药治疗NAFLD提供更广阔的视野。     

基于AMPK/mTOR/ULK1信号通路介导的自噬探讨芪黄益气摄血方治疗免疫性血小板减少症模型小鼠的作用机制

目的 基于腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/Unc-51样激酶1（AMPK/mTOR/ULK1）信号通路介导的自噬探讨芪黄益气摄血方治疗免疫性血小板减少症（ITP）模型小鼠的作用机制。方法 50只BALB/c小鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组、芪黄益气摄血方高、低剂量组和强的松组,每组10只。采用豚鼠抗小鼠血小板血清（APS）腹腔注射方法,建立ITP小鼠模型;注射APS后的第8天,各组分别灌胃给药,连续14 d。检测外周血血小板计数（PLT）和血红蛋白（Hb）浓度变化;分离脾脏、胸腺组织,称质量,计算脏器指数;取胸骨做骨髓涂片,显微镜下进行骨髓巨核细胞分类;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清血小板生成素（TPO）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、γ干扰素（IFN-γ）水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测脾脏AMPK、mTOR、ULK1、微管相关蛋白1轻链3（LC3）、自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin1）、p62 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脾脏AMPK、p-AMPK、p-mTOR、p-ULK1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p62蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠外周血PLT计数、Hb及TPO水平明显下降（P<0.05,P<0.01）,脾脏和胸腺指数显著升高（P<0.01）,骨髓产板巨核细胞数显著减少（P<0.01）,血清IL-6、TNF-α、IFN-γ水平显著升高（P<0.01）,而IL-10、TGF-β₁水平显著降低（P<0.01）;与模型组比较,芪黄益气摄血方高、低剂量组及强的松组显著增加模型小鼠PLT计数、TPO水平（P<0.01）,明显降低脾脏和胸腺指数（P<0.05,P<0.01）,明显增加骨髓产板巨核细胞数（P<0.05,P<0.01）,明显降低血清IL-6、TNF-α、IFN-γ水平（P<0.05,P<0.01）,明显提高IL-10、TGF-β₁水平（P<0.05,P<0.01）;与芪黄益气摄血方低剂量组比较,芪黄益气摄血方高剂量组和强的松组在改善PLT计数、细胞炎性因子水平方面呈现不同程度的显著性差异（P<0.05,P<0.01）。Real-time PCR和Western blot结果显示,与正常组比较,模型组小鼠脾脏AMPK、LC3、Beclin1 mRNA和p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达均明显上调（P<0.05,P<0.01）,mTOR、ULK1、p62 mRNA和p-mTOR、p-ULK1、p62蛋白表达水平明显下调（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,芪黄益气摄血方高、低剂量组及强的松组可明显下调脾脏AMPK、LC3、Beclin1 mRNA和p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,同时明显上调mTOR、ULK1、p62 mRNA和p-mTOR、p-ULK1、p62蛋白表达水平（P<0.05,P<0.01）。结论 芪黄益气摄血方可能通过调控AMPK/mTOR/ULK1信号通路抑制自噬的过度发生,从而调节免疫失耐受,发挥治疗ITP作用。     

柴胡加龙骨牡蛎汤对帕金森病伴发抑郁模型大鼠的神经保护作用及对AMPK/mTOR信号通路的影响

目的 观察柴胡加龙骨牡蛎汤（CLMT）对帕金森病伴发抑郁（PDD）模型大鼠多巴胺能神经元的保护作用,并基于腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（AMPK/mTOR）信号通路探讨其作用机制。方法 80只雄性SD大鼠,随机选取10只作为正常组,其余采用长期低剂量颈背部皮下注射鱼藤酮联合慢性不可预见性温和应激（CUM）建立PDD大鼠模型,将造模成功的PDD大鼠随机分为模型组、西药组（多巴丝肼0.032 g·kg^-1+盐酸氟西汀0.002 g·kg^-1）、CLMT低、中、高剂量组（5、10、20 g·kg^-1）,每组10只,正常组和模型组予以等体积生理盐水灌胃,连续4周。旷场实验、爬杆实验评估各组大鼠行为学变化;高效液相色谱法（HPCL）测定脑脊液中多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）含量;苏木素-伊红（HE）染色法观察各组大鼠黑质DA能神经元病理改变;免疫组化法（IHC）检测黑质酪氨酸羟化酶（TH）阳性表达;免疫荧光法（IF）检测黑质α-突触核蛋白（α-synuclein）表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测纹状体微管相关蛋白1轻链3（LC3）、AMPK、磷酸化AMPK（p-AMPK）、mTOR、磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠旷场实验水平运动总距离及中央区域活动时间均明显减少（P<0.05,P<0.01）,爬杆时间明显缩短（P<0.01）,评分升高（P<0.01）,脑脊液中DA、5-HT含量减少（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,CLMT高剂量组和西药组水平运动总距离明显增加及中央区域活动时间均增加（P<0.05,P<0.01）,爬杆时间延长（P<0.05）,评分下降（P<0.05,P<0.01）,DA及5-HT含量增加（P<0.05,P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠黑质DA能神经元数量明显减少,胞体缩小且排列疏松,α-synuclein荧光表达显著增强（P<0.01）,TH阳性表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,CLMT高剂量组和西药组黑质DA能神经元数量增加,胞体增大,α-synuclein荧光表达明显减弱（P<0.05,P<0.01）,TH表达显著增加（P<0.01）。与正常组比较,模型组纹状体LC3Ⅱ/Ⅰ、p-AMPK/AMPK表达明显降低（P<0.05,P<0.01）、p-mTOR/mTOR表达显著增加（P<0.01）;与模型组比较,CLMT高剂量组和西药组LC3Ⅱ/Ⅰ、p-AMPK/AMPK表达均明显增加（P<0.05,P<0.01）、p-mTOR/mTOR表达显著降低（P<0.01）。结论 CLMT可抑制鱼藤酮神经毒性,发挥神经保护作用,提高DA水平,从而改善帕金森病大鼠抑郁状态,其机制可能与调控AMPK/mTOR信号通路,激活自噬,促进异常聚集的α-synuclein降解有关。     

基于mTOR通路探讨中医药调控心肌缺血/再灌注损伤中自噬的研究进展

自噬是广泛存在于真核细胞中用以维持细胞稳态的一种降解途径,在多种心血管疾病尤其是心肌缺血/再灌注损伤的发生、发展中起着重要的调控作用,是治疗心血管疾病的新靶点.哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路是自噬调控的诸多信号通路中的下游,在心血管疾病自噬过程中起重要作用,可调控心脏自噬,促进自噬流以改善心脏功能.中医药治疗心...     

基于Akt/mTOR及ERK/mTOR信号通路探究活心丸对心肌肥大大鼠自噬的影响

目的 基于蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)/mTOR信号通路探究活心丸对心肌肥大大鼠自噬的影...     

基于AMPK/mTOR/ULK1自噬相关通路探讨左归降糖通脉方对AGEs合并缺糖缺氧星形胶质细胞炎性损伤的影响

目的 探讨左归降糖通脉方对糖基化终末产物（AGEs）合并缺糖缺氧（OGD）损伤后星形胶质细胞（AS）的影响及干预机制。方法 使用细胞增殖与活性检测试剂盒（CCK-8）确定AGEs作用浓度及OGD时间,选择左归降糖通脉方（ZGJTTMP）含药血浆的作用浓度;将星形胶质细胞随机分为空白组、模型（AGEs+OGD）组、ZGJTTMP组、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂（Compound C）组、AMPK激动剂（AICAR）组、ZGJTTMP+AICAR组,倒置显微镜下观察各组细胞形态结构,CCK-8法检测各组细胞存活率,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞中白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量;电镜下观察各组细胞内自噬小体的数目,免疫荧光染色法观察各组细胞中微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达情况,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞LC3、p62、磷酸化（p）-AMPK、AMPK、磷酸化（p）-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、mTOR、磷酸化（p）-UNC-51样激酶1（ULK1）、ULK1蛋白的表达情况。结果 选择AGEs 200 mg·L^-1合并OGD 6 h作为最适造模条件,5%作为ZGJTTMP含药血浆的最佳作用体积分数。倒置显微镜下见造模后细胞受损严重,ZGJTTMP组与Compound C组细胞损伤得到明显改善;ELISA结果示模型组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量显著增加（P<0.01）,ZGJTTMP组与Compound C组炎症因子含量显著下降（P<0.01）;电镜下可见模型组细胞内自噬小体数目明显增多,免疫荧光结果示LC3荧光表达面积显著增加（P<0.01）,ZGJTTMP组与Compound C组细胞内自噬小体数目明显减少,LC3表达面积显著减少（P<0.01）;Western blot结果显示,与空白组比较,模型组细胞LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高（P<0.01）,p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1显著下降（P<0.01）,与模型组比较,ZGJTTMP组与Compound C组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著下降（P<0.01）,p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1显著升高（P<0.01）。结论 ZGJTTMP对AGEs合并OGD炎性损伤的星形胶质细胞具有保护作用,这一作用是通过抑制了AMPK/mTOR/ULK1自噬相关通路的激活,从而抑制了自噬的过度表达实现的。     

电针“肠病方”对急性溃疡性结肠炎大鼠结肠自噬及AMPK/mTOR信号通路的影响

目的：观察电针“肠病方”对溃疡性结肠炎（UC）大鼠自噬水平和腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其治疗UC的作用机制。方法：雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、西药组和电针组,每组8只。采用自由饮用5%葡聚糖硫酸钠溶液7 d复制UC大鼠模型。电针组予双侧“天枢”“上巨虚”和“中脘”电针治疗,每次20 min,每日1次,连续3 d;西药组予美沙拉嗪悬液（200 mg/kg）灌胃,每日1次,连续3 d。观察并记录各组大鼠一般情况,记录粪便形态并进行隐血试验以评估疾病活动指数（DAI）;HE染色法观察大鼠结肠形态及病理变化;ELISA法检测血清白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子（TNF-α）、IL-10的含量;荧光定量PCR法检测结肠组织自噬标志物微管相关蛋白3B(LC3B)、p62 mRNA的表达水平;Western blot法检测结肠组织中p62蛋白表达量及LC3BⅡ/LC3BⅠ、p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR比值。结果：与空白组比较,模型组大鼠一般情况较差,结肠黏膜屏障破坏,炎性细胞浸润,腺体萎缩或消失,隐...     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬探讨当归四逆汤对痛风性关节炎大鼠的影响

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路,探讨当归四逆汤对痛风性关节炎（GA）大鼠自噬水平的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组（0.3 mg·kg^-1）和当归四逆汤低、中、高剂量组（6.54、13.08、26.16 g·kg^-1）,每组10只,并分别给予相应药物灌胃,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续7 d。于第5天给药1 h后向各组（正常组除外）大鼠右侧踝关节注射尿酸钠混悬液（50 g·L^-1）建立GA模型,正常组注射等体积的无菌生理盐水。观察大鼠踝关节肿胀情况;测定血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β水平;观察踝关节病理形态变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测滑膜PI3K、磷酸化（p）-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）、自噬效应蛋白（Beclin-1）、泛素结合蛋白（p62）表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PI3K、Akt、mTOR、LC3、Beclin-1、p62 mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠关节肿胀指数显著升高（P<0.01）,血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高（P<0.01）,踝关节滑膜组织可见明显炎性细胞浸润和纤维组织增生,滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达显著升高（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达显著升高（P<0.01）,LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达降低（P<0.01）。与模型组比较,当归四逆汤中、高剂量组大鼠关节肿胀明显减轻（P<0.05）;血清中TNF-α、IL-6、IL-1β表达量显著明显降低（P<0.05）;踝关节滑膜组织未见明显炎性细胞浸润,纤维组织增生减轻;滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达量均明显降低（P<0.05）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达量亦明显降低（P<0.05）,而LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达量均明显上升（P<0.05）。结论 当归四逆汤可以抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,提高大鼠滑膜组织自噬水平,改善痛风性关节炎,并且以高剂量效果最佳。     

当归芍药散对MAFLD大鼠AMPK/mTOR/ULK1自噬信号通路的调节作用

目的：观察当归芍药散对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)大鼠腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/Unc-51样激酶1(AMPK/mTOR/ULK1)信号通路的调控作用，探讨其对MAFLD大鼠的治疗作用及机制。方法：60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组(多烯磷脂酰胆碱胶囊，0.144 g·kg^-1)及当归芍药散低、中、高剂量组(2.44、4.88、9.76 g·kg^-1)。采用高脂饲料连续喂养8周后，各用药组给予相应药物治疗4周。给药结束后，收集血清和肝组织用于后续实验检测。结果：与正常组比较，模型组大鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)和肝组织TC、TG、游离脂肪酸(FFA)的含量或活性均显著升高(P<0.01)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量显著降低(P<0.01)，肝组织磷酸化(p)-AMPK、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)Ⅱ、Beclin1和ULK1蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),p-mTOR和...     

中医药靶向mTOR信号通路治疗糖尿病肾病的研究进展

糖尿病肾病（DKD）是作为糖尿病（DM）常见并发症之一,是一种出现特定肾脏病理结构和功能改变的慢性肾脏病（CKD）。大多数学者认为,DKD发病机制与糖代谢紊乱、氧化应激、炎症反应、内质网应激、细胞自噬、脂代谢紊乱及外泌体调控等因素有关。现代研究发现,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）相关信号通路在DKD中起着关键作用,可以维持肾小球足细胞稳态,参与DKD细胞自噬、肾纤维化、氧化应激、脂代谢紊乱、炎症反应等过程,是当代治疗DKD的新型靶点。越来越多的研究表明,中医药能通过调节mTOR信号通路抑制DKD肾组织损伤,延缓DKD进一步恶化,改善疾病预后,提升患者生活水平。该文通过总结mTOR相关信号通路结构与机制,详述其在DKD中的作用,并对近年来中药单体、中药相关提取物及中药复方通过该信号通路防治DKD的研究现状作简要综述,以期为中医药临床治疗DKD提供新思路与方式。     

莪连颗粒对胃癌大鼠胃组织自噬及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 探讨莪连颗粒对胃癌大鼠胃组织自噬及磷酯酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（PKB/Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。方法 SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组、莪连颗粒组和胃复春组。除正常组常规饲养外,模型组、莪连颗粒组及胃复春组使用N-甲基-N''-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）综合法诱导构建胃癌大鼠模型,并分别予以生理盐水、莪连颗粒水溶液（3.240 g·kg^-1）及胃复春水溶液（0.390 g·kg^-1）灌胃,连续48周。剖腹取胃,肉眼观察胃大体改变,采用苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠胃组织病理学变化,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠胃组织微管相关蛋白1轻链3β（LC3B）,Beclin1,p62,PI3K,Akt,mTOR mRNA及蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠胃胀大,胃壁变薄,胃黏膜色泽苍白,皱襞萎缩浅平,走行紊乱,可见结节及赘生物;与模型组比较,莪连颗粒组大鼠胃胀大减轻,胃壁变薄改善,胃黏膜色暗,皱襞减少,走行尚规整,偶见细颗粒状结节。HE染色显示,与正常组比较,模型组大鼠胃组织腺体排列拥挤紊乱,形态多样,细胞形态不一,胞浆嗜碱性,核大深染不规则,可见核分裂像,黏膜肌层浸润破坏;与模型组比较,莪连颗粒组大鼠胃组织腺体排列尚规整,少部分可见轻度异型细胞。与正常组比较,模型组大鼠胃组织LC3B,Beclin1 mRNA和蛋白表达明显降低（P<0.05）,PI3K,p62,Akt及mTOR mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）;与模型组比较,莪连颗粒组胃组织LC3B,Beclin1 mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）,PI3K mRNA及p62,Akt,mTOR mRNA和蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论 莪连颗粒可改善胃癌大鼠胃组织细胞异型性,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进自噬相关。     

中药干预mTOR信号通路防治骨质疏松症研究进展

骨质疏松症（OP）是一种老年人多见的全身性骨骼疾病,其病理特征是骨流失、骨微结构退变等,其临床上多表现为骨骼脆性增加、骨痛等症状。同时,OP会因其引起的骨骼高脆性而增加骨折风险,最终导致OP患者终身残疾或死亡,给患者及其家庭带来了沉重的经济负担和心理负担。既往研究发现,OP发病机制极其复杂,与成骨细胞增殖与分化、破骨细胞活性与功能的障碍和自噬激活的异常等众多因素相关。近年来,国内外研究发现,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）相关信号通路参与骨稳态的调节,可通过调控成骨细胞增殖与分化、破骨细胞功能、激活细胞自噬而促进骨形成、改善骨代谢和骨微结构,在OP防治中发挥着至关重要的作用。此外,中医药防治OP历史悠久、疗效明确,且具有作用靶点多、不良反应小、来源广泛的特点和优势。因此,该文通过检索和查阅国内外最新研究报道,简略阐述了mTOR相关信号通路在OP发生发展中的作用,详细总结了中药提取物及中药复方干预mTOR相关信号通路防治OP的最新研究成果,旨为mTOR相关信号通路与OP的关系、临床应用中医药防治OP等领域的深入研究提供参考和依据。     

温胆汤通过调控PI3K/Akt/mTOR通路介导的脂肪细胞自噬对肥胖痰湿证炎症状态的影响

目的 观察温胆汤对肥胖痰湿证大鼠脂肪细胞炎症因子、自噬活性标志物及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路关键分子蛋白表达的影响,探讨肥胖痰湿证炎症状态形成的物质基础及温胆汤的干预机制。方法 将126只SD大鼠随机分成2组,即空白组16只和造模组110只,空白组喂养基础饲料,造模组喂养高脂饲料建立肥胖痰湿证动物模型,共8周。造模成功后,视体质量情况,按顺序淘汰体质量过轻者,遴选出48只肥胖大鼠,随机分为模型组、奥利司他组（32.40 mg·kg^-1）、雷帕霉素组（2 mg·kg^-1）、温胆汤低、中、高剂量组（4.45、8.90、17.80 g·kg^-1）,每组8只;另在空白组大鼠中随机选取8只设为正常组,各用药组按剂量（以生药量计算）给予灌胃,模型和正常组给予等体积蒸馏水灌胃,每天1次,共6周。检测或计算大鼠体质量、Lee''s指数、脂体比和肥胖率,采用免疫组化二步法检测脂肪细胞自噬活性标志物动物自噬启动蛋白1（ULK1）、自噬效应蛋白1（Beclin1）、人自噬相关蛋白5（Atg5）、p62、微管相关蛋白1轻链3（LC3）Ⅰ/Ⅱ表达水平;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测脂肪细胞炎症因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6、IL-1β、单核细胞趋化因子-1（MCP-1）、IL-4、IL-10、IL-13和转化生长因子（TGF）-β的表达;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脂肪细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子classⅠ-PI3K、磷脂酰肌醇三磷酸（PIP3）、Akt、mTORC1、ULK1、结节性硬化症（TSC）1、TSC2的表达。结果 与空白组比较,造模组体质量和Lee''s指数显著升高（P<0.01）,肥胖率>20%,有形体肥胖、活动度下降,食欲下降,皮毛无光泽、蓬松,便溏,对外界反应能力下降,饮水量减少等痰湿证表现,与正常组比较,模型组体质量、Lee''s指数、脂体比、脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达、促炎和抗炎细胞因子水平均明显升高（P<0.05,P<0.01）,脂肪细胞classⅠ-PI3K、PIP3、Akt、mTORC1、TSC1、TSC2蛋白表达显著下降（P<0.01）,但ULK1表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,各用药组体质量、脂体比、脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1、IL-4、IL-13水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,且雷帕霉素组、温胆汤中、高剂量组IL-10、TGF-β水平显著降低（P<0.01）,奥利司他组TGF-β的表达显著降低（P<0.01）,信号通路关键分子蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,但ULK1显著降低（P<0.01）。与雷帕霉素组比较,温胆汤各剂量组脂肪细胞所有自噬活性标志物蛋白表达显著升高（P<0.01）,温胆汤低剂量组炎性因子（除TNF-α外）含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,信号通路关键分子蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,温胆汤中剂量组炎性因子（除IL-16、MCP-1、IL-10外）含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,温胆汤中、高剂量组信号通路各关键分子蛋白除PI3K外表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。与奥利司他组比较,温胆汤低、中剂量组脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达显著升高（P<0.01）,温胆汤低剂量组IL-6、IL-4、TGF-β含量显著升高（P<0.01）,所有信号通路关键分子蛋白表达显著降低（P<0.01）,温胆汤中剂量组IL-4含量显著升高（P<0.01）,信号通路关键分子蛋白除PI3K外表达均明显降低（P<0.05,P<0.01）,温胆汤高剂量组体质量、自噬活性标志物ULK1、LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,信号通路关键分子PIP3、mTORC1、TSC1蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,而自噬活性标志物Beclin1、Atg5蛋白、炎性因子TNF-α、IL-13含量明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 肥胖痰湿证炎症状态的形成与PI3K/Akt/mTOR通路介导的脂肪细胞自噬密切关联,且温胆汤可有效干预肥胖痰湿证大鼠的慢性炎症状态,其作用机制可能与调控该信号通路进而改善脂肪细胞自噬有关。     

中药单体调控PI3K/Akt/mTOR信号通路治疗骨肉瘤的研究进展

骨肉瘤是临床上常见的一种原发性骨恶性肿瘤,具有肿瘤异质性高,预后差,易发生病变局部侵袭和远处转移及病死率高的特点。新辅助化疗联合保肢术为目前治疗骨肉瘤的主要治疗手段,虽然通过此种治疗方法有效地降低了骨肉瘤患者的致残率和致死率,但随着化疗技术的应用,长时间化疗药物的使用使得骨肉瘤细胞对其产生耐药作用,降低了肿瘤细胞对药物的敏感度,使得此治疗方式具有了一定的局限性。近年来,随着中医药抗肿瘤的发展和进步,中医药以其治疗效果明显,不良反应少等优势受到了广泛的关注。磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路作为经典的癌症信号通路,在骨肉瘤细胞中被异常激活,通过影响肿瘤细胞的周期、抑制肿瘤细胞的凋亡、抑制肿瘤细胞的自噬及促进肿瘤新生血管的生成,影响骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和转移等活动。临床研究发现,中药单体可以通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的活性,对骨肉瘤细胞的增殖、凋亡、自噬及新生血管的生成等方面产生作用,发挥抑制骨肉瘤组织和细胞发展的作用,并且能高效的逆转肿瘤细胞对抗癌药物的多药耐药。该文将从中医对骨肉瘤的认识和经验积累,及中...     

基于AMPK/mTOR通路介导的自噬探讨温补固肾方 对糖尿病肾纤维化的影响

目的：探究温补固肾方调控AMPK/mTOR通路介导的自噬途径对糖尿病肾纤维化的保护机制。方法：雄性SPF级SD大鼠100只，除对照组20只外，均采用腹腔注射链脲佐菌素（60 mg/kg）构建糖尿病肾病模型。其中60只大鼠随机分为对照组、糖尿病肾病组、达格列净组（1.0 mg/kg）、温补固肾方低、中、高剂量组（0.92、1.84、3.68 g/kg），每组各10只。给予相应药物灌胃12周后，检测各组大鼠肾功能生化指标；HE和PAS染色观察肾组织病理形态变化；免疫组化法检测肾组织α-SMA,E-Cadherin表达；电镜观察自噬小体形成；Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p-AMPK/AMPK和p-mTOR/mTOR表达。剩余40只大鼠随机分为对照组、糖尿病肾病组、温补固肾方高剂量组（3.68 g/kg）、温补固肾方高剂量组+AMPK抑制剂组（20 mg/kg），每组各10只。给予相应药物12周后，检测大鼠肾功能生化指标，电镜观察肾组织病理形态，Masson染色观察肾纤维化程度，Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及AMPK/mTOR通路蛋白表达。结果：与对照组比较，糖尿病肾病组大鼠肾功能损伤严重，并伴有明显的病理损伤，肾组织α-SMA表达增加，E-Cadherin表达降低（P <0.01），自噬小体数量减少（P <0.01）,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及p-AMPK/AMPK比值降低，p-mTOR/mTOR比值增加（P <0.01）。与糖尿病肾病组比较，温补固肾方各剂量组大鼠肾功能及组织病理性损伤均有不同程度改善，α-SMA表达降低，E-Cadherin表达增加（P <0.05,P <0.01），自噬小体数量增加，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及p-AMPK/AMPK比值增加，p-mTOR/mTOR比值降低（P <0.05,P <0.01）。与温补固肾方高剂量组比较，AMPK抑制剂能够逆转温补固肾方糖尿病肾病大鼠的治疗作用，抑制上述相关指标变化。结论：温补固肾方能够激活AMPK/mTOR通路介导的自噬改善糖尿病大鼠肾纤维化。     

黄芪散微丸对糖尿病肾病大鼠肾脏PI3K/Akt/mTOR通路及自噬的影响

目的:研究黄芪散微丸(HQS)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路的影响,探讨其对自噬的影响.方法:采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(35mg·kg-1)建立DN大鼠模型.DN大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦(0.027g·kg-1)...