广泛耐药结核病快速检测研究

目的探讨和研究广泛耐药结核菌（XDR-TB）的快速检测方法。方法痰结核菌经匡氏PNB（对硝基苯甲酸）琼脂培基直接分型鉴定,用匡氏双相琼脂培基痰菌直接药敏试验技术鉴定结核菌的耐药性。结果 116例痰标本中71例分离物为结核菌株,4例为结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌混合感染生长物,非结核非分枝杆菌生长物2例。75例结核菌生长物中9例为XDR株（12%）,平均检出时间19.6d;50例为耐多药结核菌（MDR）株（66.7%）,平均检出时间16.6d。结论采用匡氏双相琼脂培基痰结核菌直接药敏试验技术和匡氏PNB琼脂直接分型鉴定技术可以大大缩短临床XDR-TB、耐多药结核（MDR-TB）的检出时间,结果准确、可靠。     

耐多药结核分枝杆菌KatG及rpoB基因变异的研究

目的建立快速检测耐多药结核分枝杆菌的分子药敏方法,掌握盐城、南通地区结核分枝杆菌KatG及rpoB基因的突变特点,了解耐药分子机制及探索痰标本结核分枝杆菌耐INH、RFP直接检测的可行性。方法对收集的47例耐INH、RFP的结核分枝杆菌临床痰分离株行PCR-自动测序法检测KatG及rpoB基因突变,以结核分枝杆菌标准株H37Rv为参比菌株,应用BACTEC460TB快速培养系统进行自动培养、药敏。结果47例耐INH、RFP分离株结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变阳性分别为29/47、39/47,两者同时突变率为47%。结论PCR-直接测序法敏感、特异,是可靠快速检测结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变,适合于临床肺结核患者MDR-TB痰标本耐药性的快速检测。     

快速检测结核分枝杆菌γpoB基因突变的研究

目的 :应用PCR SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分枝杆菌γpoB基因突变 ,评价此方法用于结核分枝杆菌利福平 (RFP)耐药性的意义。方法 :以结核分枝杆菌H37Rv为对照、5 0例耐RFP(单耐和多耐 )结核分枝杆菌临床分离株、12例RFP敏感菌株、35例耐RFP肺结核患者痰标本 ,采用PCR SSCP检测痰标本和菌株中结核杆菌γpoB基因突变。结果 :5 0例耐RFP菌株中有 45例PCR SSCP条带与结核分枝杆菌H37Rv条带有明显差别 ,与药敏试验结果做对比 ,PCR SSCP检测敏感性为 90 % ,特异性为 10 0 % ;12例敏感菌株与H37Rv条带一致 ,35份肺结核病人痰标本 ,2 1份痰PCR扩增阳性 ,15份SSCP图谱与H37Rv图谱有差别 ,而用PCR SSCP 2 8份图谱与H37Rv有差别 ,阳性率为 80 %。结论 :PCR SSCP检测结核分枝杆菌γpoB基因突变快速、简便、易行 ,有望用于结核分枝杆菌RFP耐药性的快速测定 ,并将成为直接检测临床标本中结核分枝杆菌耐RFP快速方法     

痰耐药结核分枝杆菌rpoB基因的快速检测及利福平耐药机制研究

目的快速检测痰耐药结核分枝杆菌rpoB基因，了解利福平耐药的分予机制。方法根据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物．用PCR方法从耐药肺结核患者痰及临床分离菌株扩增rpoB基因片段，对扩增获得的rpoB基因片段进行序列测定，比较分析耐多药、全耐、单耐利福平、全敏感或标准结核分枝杆菌株之间的基因序列差异。结果于6h内从耐药肺结核痰中快速检测到rpoB举因。耐多药菌株、全耐及单耐利福平分离菌株均检测有rpoB基因点突变，突变位点主要为531、516或526常见密码子，且绝大多数为单碱基突变，发现1例MDR-TB出现479位和531位密码子同时突变。敏感株和标准株无基因突变。结论PCR及序列分析方法可快速、准确检测结核分枝杆菌rpoB基岗及其突变，结核分枝杆菌埘利福平的耐药性与rpoB基因点突变有关。     

耐多药结核分枝杆菌KatG及rpoB基因变异的研究

目的建立快速检测耐多药结核分枝杆菌的分子药敏方法，掌握盐城、南通地区结核分枝杆菌KatG及rpoB基因的突变特点，了解耐药分子机制及探索痰标本结核分枝杆菌耐INH、RFP直接检测的可行性。方法对收集的47例耐INH、RFP的结核分枝杆菌临床痰分离株行PCR-自动测序法检测KatG及rpoB基因突变，以结核分枝杆菌标准株H37Rv为参比菌株，应用BACTEC460TB快速培养系统进行自动培养、药敏。结果47例耐INH、RFP分离株结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变阳性分别为29／47、39／47，两者同时突变率为47％。结论PCR-直接测序法敏感、特异，是可快速检测结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变，适合于临床肺结核患者MDR—TB痰标本耐药性的快速检测。     

DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌耐异烟肼基因的研究

目的采用DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌INH耐药基因,为临床诊治提供实验依据。方法应用DNA微阵列芯片法和改良罗氏培养加比例法药敏试验对疑似结核病患者的150份痰液标本进行检测,并对检测的结果进行比较分析。结果 150份痰液标本的涂阳率为60.0%(90/150),DNA微阵列芯片法检测到结核分枝杆菌阳性率为62.7%(94/150),改良罗氏培养法阳性率为60.0%(90/150),比例法药敏试验异烟肼的耐药率为43.9%(36/82),异烟肼的kat G/inh A基因总突变率为35.1%(33/94);以改良罗氏培养加比例法药敏试验为标准,DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌阳性、异烟肼耐药性和敏感性的符合率分别为97.7%、86.1%和100.0%。结论 DNA微阵列法可快速准确地检测大部分疑似结核病临床标本的kat G和inh A基因突变,可用于临床耐药性的检测从而指导临床用药,也可用于临床诊断中的推广。     

反向膜杂交技术检测结核分枝杆菌耐药株的临床价值研究

目的评价反向膜杂交技术对于肺结核病患者的结核分枝杆菌耐药基因检测的临床应用价值。方法利用反向膜杂交技术检测了40株耐药结核分枝杆菌培养分离株、10株非结核分枝杆菌培养分离株、240例肺结核患者痰标本的rpoB、katG,、inhA突变基因。240例痰标本同时进行结核菌培养。106株膜芯片检测阳性样本测序验证。结果特异性方面：膜芯片检测40株结核分枝杆菌培养分离株,均为阳性;10株非结核分枝杆菌培养分离株,均为阴性。灵敏度方面：膜芯片检测240例临床痰标本中,66例结核分枝杆菌阳性,占27.5%。耐药基因准确性方面：106例膜芯片检测阳性的样本进行测序验证,两者结果完全一致。结论反向膜杂交技术可快速检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药突变基因,与常规结核分枝杆菌培养、测序检测耐药基因的结果相符,可应用于临床。     

呼和浩特地区耐药肺结核197例临床分析

目的了解呼和浩特地区结核病患者的耐药情况,为本地区结核病的防治提供参考。方法对本地区601例临床诊断肺结核住院患者的痰标本,采取进行结核分枝杆菌的培养、菌种鉴定、耐药检测。结果共培养出分枝杆菌197株,其中耐药菌株61株,耐药率为31.0%(61/197)。对一线抗结核药物的耐药率为23.4%(46/197),其中单药耐药结核占12.2%(24/197),多耐药结核占3.6%(7/197),耐多药结核(MDR-TB)占7.1%(14/197),泛耐药结核(XDR-TB)0.5%(1/197)。结论呼和浩特地区总体耐药率、多耐药结核、XDR-TB低于全国监测的数据,MDR-TB与全国监测的结果基本相似。6种抗结核药耐药顺位与全国和部分省市的监测结果存在差异。     

随机扩增DNA指纹分型分析耐利福平结核分支杆菌的传播

目的 对临床分离菌株进行鉴定,分析耐利福平结核分支杆菌是人群中传播。方法 采用一对随机引物（P15′－CCGGGGCGGTTC,P2,5′－CCGCCGACCGAC）,对从重庆地区肺结核病人痰标本中分离到的100株耐利福平结核发支杆菌的DNA进行随机PCR扩增,根据扩增产物的DNA电泳指纹进行分型。结果 100株耐利福平结核分枝杆菌的DNA指纹可分为6种类型,以Ⅱ、Ⅰ和Ⅲ型为主,它们分别占40％、31％和25％;这3型菌株有1／4是从初治结核病人的痰标本中分离,而地20－39岁年龄段则有1／3是从初治结核病人的痰标本中分离。结论 随机护增DNA指纹是一种简便、敏感、重复性好的菌株分型方法,可用于耐药性结核病流行监测。重庆地区结核病的流行很可能与耐利福平结核分支杆菌的传播有关。     

赣榆县结核杆菌与非结核杆菌感染情况及菌株耐药分布研究

目的了解本地区典型肺结核病人结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌感染及菌株耐药分布情况。方法收集2008年6月-2009年底我县典型肺结核病人痰标本,进行直接痰涂片检查、痰菌培养、耐药检测及结核分枝杆菌及非结核杆菌鉴定。结果 345例痰标本检出306例菌株。结核分枝杆菌288株,占94.12%,对H、R、E、S4种一线抗痨药耐药率分别为18.06%、18.40%、8.33%、21.53%;非结核分枝杆菌18株,对H、R、E、S4种一线抗痨药耐药率分别为100%、33.3.3%、33.33%、100%。结论本地区结核病人对一线抗痨药物耐药情况较为严重,非结核分枝杆菌感染比例较高,在今后工作中值得重视。     

基因芯片快速检测分枝杆菌技术辅助诊断小儿结核病的临床研究

目的：探讨基因芯片快速检测分枝杆菌技术在辅助诊断小儿结核病方面的临床研究。方法方便选取2014年7月-2015年7月住于该院的经临床、放射线疑诊0~14岁肺结核77例为观察对象,采用晶芯@结核病分子诊断系统对观察对象痰标本进行检测,将检测结果与最终诊断相比较,并与罗氏痰培养结核菌法、痰涂片找结核菌、DNA检测、PPD试验、结核抗体、对INH\RFP耐药性及对非结核分枝杆菌菌种鉴定结果进行对比,分别计算各检测方法的灵敏度和特异度,从而判断基因芯片技术在诊断儿童结核病可行性、敏感、快速。结果重症结核感染17例,其中有9例(11.69%)为血行播散型肺结核,7例(9.09%)合并有结核性脑膜炎,1例(1.3%)合并骨结核。检测异烟肼耐药相关基因,基因芯片法和罗氏培养法比较χ2=2.286,P=0.515,Kappa=0.604,检测利福平耐药相关基因,基因芯片法和罗氏培养法比较χ2=58.77,P<0.05,Kappa=0.587。基因芯片法与罗氏培养法、PPD试验、结核DNA、结核抗体、痰涂片多重比较,χ2=64.91,P<0.05。结果基因芯片法可以快速检测结核分枝杆菌,与罗氏培养法检测结核分枝杆菌拥有中等一致性,其快速、无创,可以用于辅助诊断小儿结核病。     

HIV/AIDS患者合并分枝杆菌感染及耐药性分析

目的了解HIV/AIDS患者合并分枝杆菌感染及其耐药状况。方法对601例HIV/AIDS患者标本用中性改良罗氏（Lowenstein-Jensen）培养基和BacT/ALERT 3D 240全自动培养仪同时进行分枝杆菌培养;培养阳性者用硝基苯甲酸（PNB）培养基、噻吩-2-羧酸肼（TCH）培养基进行菌种初步鉴定和用绝对浓度间接法进行8种抗结核药物敏感性试验。结果分枝杆菌培养阳性116例,检出率为19.30%;其中结核分枝杆菌93株,检出率为15.41%,非结核分枝杆菌23株,检出率为3.89%;93株结核分枝杆菌总耐药率为26.88%,耐多药率（MDR-TB）为7.53%,广泛耐药率（XDR-TB）为1.08%;23株非结核分枝杆菌总耐药率为100%。并且多数呈多重耐药。结论HIV/AIDS患者并发分枝杆菌感染率及其耐药率较高,尤其是非结核分枝杆菌耐药率更高,对HIV/AIDS患者疑为分枝杆菌合并感染时,应对相关标本进行分枝杆菌培养、鉴定和药敏试验,以便指导临床合理用药。     

电子支气管镜下取分泌物结核菌培养对支气管、不典型肺结核的诊断价值

目的评价BF260电子支气管镜下取分泌物用培养法对不典型肺结核的诊断价值。方法选自门诊和住院病人无痰或痰抗酸杆菌涂片检查屡为阴性的疑似肺结核患者,电子支气管镜下取分泌物培养结核杆菌。结果82例检出结核菌19株,培养阳性率为23.17%。同时做痰液培养生长2株,培养阳性率为3.66%。两者比较,差异明显,χ2=34.11,P<0.05;用支气管分泌物直接涂片检出抗酸杆菌5例,涂阳率6.10%,与培养比较,χ2=9.512,P<0.05。结论用支气管分泌物对无痰或痰抗酸杆菌涂片检查屡为阴性的肺结核患者行结核菌培养的方法,能明显提高结核菌的检出率,对临床不典型肺结核的明确诊断有重要价值。     

临床肺结核治疗中耐药性分析及对策

目的:了解从分离自肺结核患者的结核分枝杆菌耐药基因突变率及耐药情况,以利抗结核治疗中药物的合理选用。方法:对痰涂片阳性的新发初治和复治肺结核患者进行痰结核分枝杆菌培养,阳性菌株采用高、低两种药物浓度,四种抗结核药物耐药性测试,同时用实时PCR法对结核分枝杆菌的耐药基因和突变进行检测。结果:127例痰培养阳性菌株总耐药率为14.2%,其中初治耐药率8.1%,复治耐药率35.7%,对四种抗结核药物的耐药率依次为异烟肼8.7%,利福平2.4%,链霉素2.4%,乙胺丁醇0.8%。耐药基因检测结果,在初治组中rpoB和katG的突变率为12.1%(12/99)和10.1%(10/99);复治组中rpoB和katG的突变率为32.1%(9/28)和21.4%(6/28)。结论:分离自肺结核患者的结核分枝杆菌在初始治疗时已存在耐药性,而药物治疗有可能使其耐药性增加。结果表明抗结核治疗前及在治疗过程中对结核分枝杆菌进行耐药性及耐药基因检测对指导临床抗结核治疗很有实际意义。     

Research on preparation of mycobacterium tuberculosis DNA microarray]

OBJECTIVE: To optimize and develop the technique for mycobacterium tuberculosis DNA microarray. METHODS: The process included preparation of DNA samples, spotting and past-spotting treatment of arrays. DNA microarrays were prepared by spotting fluorescence labeled PCR products of target genes onto specially treated glass slides with robotics. The fluorescent signals before and after treatment were scanned with a scanner, and the DNA attachment rate was calculated from the obtained data by software. RESULTS: A foundation for optimizing the conditions of Mycobacterium tuberculosis DNA microarrays has been laid. The support aldehyde-modified glass slide is useful for anchoring DNA at Some distance. DMSO as spotting solution is of benefit to preparation of Mycobacterium tuberculosis DNA microarray. Drying the chip at 37 degrees C temperature after spotting can enhance the DNA combination rate. CONCLUSION: Several key steps of this technique have been optimized. This study has provided a foundation for optimizing the DNA attachment conditions in creating mycobacterium tuberculosis DNA microarray.     

非结核分枝杆菌临床分离株的流行病学及临床特征分析

目的 分析台州市非结核分枝杆菌临床分离株的流行病学及临床特征，为非结核分枝杆菌病的疫情监测和诊断治疗提供参考依据。方法 回顾统计分析我院于2015 年1 月～2019 年12 月间检到的非结核分枝杆菌的分离率、菌种分布、混合感染情况、性别年龄构成和临床特征等。应用DNA 微阵列芯片法对分枝杆菌进行菌种鉴定。结果 5年间共检到非结核分枝杆菌331 株，分离率为19.0%，且逐年增加。检到的主要为胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌和龟/脓肿分枝杆菌，以胞内分枝杆菌最为常见，占57.7%。男性高于女性，50 岁以上高发。非结核分枝杆菌感染者常合并有肺结核、支气管扩张、肺部感染和慢性阻塞性肺疾病，临床表现多以咳嗽、咳痰首次就诊。结论 台州市非结核分枝杆菌的分离率和患病率逐年增加，以胞内分枝杆菌最为常见，DNA 微阵列芯片法可以用于分枝杆菌的快速鉴定。     

耐异烟肼结核分枝杆菌及其katG、inhA基因的突变

目的 探讨耐异烟肼结核分枝杆菌及其katG与inhA基因突变的特征,为临床选择抗结核药物治疗提供实验室参考。方法 回顾性分析2015年1月1日-2017年1月1日在上海交通大学附属同仁医院海南分院的260例患者标本,对213例进行结核分枝杆菌分离培养,对47例进行博奥芯片法检测,再对213例培养所得菌株进行博奥芯片检测,对博奥芯片检测的47例痰标本进行结核分枝杆菌分离培养;对101株结核分杆菌进行katG与inhA基因检测。结果 培养法和博奥芯片结核分枝杆菌检出率分别为36.6%（78/213）和48.9%（23/47）;培养法和博奥芯片耐多药结核分枝杆菌检出率分别为41.0%（32/78）和47.8%（11/23）;博奥芯片法和比例法耐异烟肼符合率98.7%(77/78);男性结核分枝杆菌阳性率45.9%高于女性阳性率29.2%;检测katG基因和inhA基因,3个基因区域都发生突变,突变发生率大小依次为katG315（AGC→ACC）密码子(32株,54.2%)、katG315（AGC→AAC）密码子(16株,27.1%)、inhA-15（C→T）(10株,16.9%)。24株(23.8%,24/101)对异烟肼无突变但对利福平发生突变;43株也同时耐利福平(42.6%,43/101)。突变频率较高的突变位点是315,突变频率为81.4%(48/59),1株(1.7%,1/59)为双位点联合突变且突变频率最低。结论 结核分枝杆菌katG和inhA基因突变与耐INH相关,这为临床及时准确诊断、及早使用抗结核药物联合治疗提供了帮助。     

耐药肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌L型四种检测方法比较

目的:比较耐多药肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌L型的四种实验室检查方法及其临床意义.方法:对103例耐多药肺结核患者的痰标本分别采用萋-尼(Ziehl-Neelsen)抗酸染色法、改良罗氏培养法、聚合酶链反应(PCR)和结核分枝杆菌L型培养法进行检测.结果:结核分枝杆菌L型培养阳性率高于抗酸染色涂片、改良罗氏培养和PCR检测(P＜0.05～P＜0.005).结论:结核分枝杆菌L型培养可提高结核分枝杆菌的阳性检出率,对结核病的早期、快速诊断具有重要价值;耐多药肺结核患者有较高的结核分枝杆菌L型感染率,这也是结核病程缓慢变化、复发、难治的重要原因.     

应用聚合酶链反应-膜芯片技术快速鉴定分支杆菌菌种

目的建立一种简便、快速、灵敏、特异的分支杆菌菌种鉴定方法。方法通过 1 6SrDNA聚合酶链反应 单链构象多态性 (polymerasechainreaction singlestrandedconformationpolymorphism ,PCR SSCP)分析鉴定 1 4 0株分支杆菌临床分离株 ;设计与合成用于鉴定分支杆菌菌种的 1 6SrDNA寡核苷酸探针 ,制作膜芯片 ,与待测菌株生物素标记的 1 6SrDNA基因PCR产物进行反向斑点杂交。结果 1 4 0株分支杆菌临床分离株中 ,经 1 6SrDNAPCR SSCP初步鉴定 ,1 33株为结核分支杆菌复合群 ,7株为非结核分支杆菌。经膜芯片杂交分析 ,1 33株结核分支杆菌分离株鉴定为结核分支杆菌复合群 ;7株非结核分支杆菌中 ,1株鉴定为戈登分支杆菌 ,1株为土分支杆菌 ,1株为偶发分支杆菌 ,1株为胞内分支杆菌 ,另 3株与分析探针杂交阴性。分析 2 8种分支杆菌标准菌株和 9种非分支杆菌菌株 ,结果显示寡核苷酸探针是特异的。结论 1 6SrDNAPCR 膜芯片技术灵敏度高、特异性强、简便、快速 ,可用于鉴定分支杆菌菌种