白藜芦醇调控Wnt/β-catenin信号通路抑制胶质瘤细胞的机制

目的 分析白藜芦醇通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制胶质瘤细胞的机制.方法 采用0(对照组)、25(低剂量组)、50(中剂量组)以及100μmol/L(高剂量组)白藜芦醇对胶质瘤细胞U251进行处理,比较各组细胞培养24、48以及72 h时的细胞活力、侵袭个数、迁移个数、凋亡率,比较各组细胞培养72 h时的...     

促红细胞生成素对短肠综合征大鼠适应后期Hippo/YAP信号通路及干细胞分化的影响

目的 探讨促红细胞生成素(Epo)对短肠综合征(SBS)大鼠适应后期干细胞分化及Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路的影响.方法 将16只成功建立的SBS大鼠模型分为模型组和Epo组,每组8只;另选8只为假手术组,只行肠横断和再吻合.Epo组隔日皮下注射157μ/kg Epo,每周3次,持续2个月;其余两组注射...     

槐耳多糖调节YAP/TAZ信号通路对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨槐耳多糖（PST）通过调节Yes相关蛋白(YAP)/转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)信号通路对骨肉瘤（OS）细胞生物学行为的影响。 方法 将OS细胞系G292细胞分为G292组（未做任何处理的G292细胞）、L-PST组(1 μg/mL PST)、M-PST组(2.5 μg/mL PST)、H-PST组(5 μg/mL PST)、GA-017组（10 μmol/L YAP/TAZ信号通路激活剂GA-017处理G292细胞）、H-PST+GA-017组（5 μg/mL PST+10 μmol/L GA-017）。CCK-8法检测细胞活性;流式细胞术检测G292细胞凋亡;划痕实验以及Transwell法检测G292细胞迁移和侵袭;Western blot检测YAP/TAZ通路蛋白、EMT相关蛋白、凋亡蛋白水平。结果 PST抑制OS细胞系MG63、Saos-2、U20S、G292细胞活性,且G292细胞的A450最小,因此,以G292细胞为研究对象。与G292组相比,M-PST组、H-PST组G292细胞A450值、迁移率、侵袭数量以及vimentin、N-cadherin、Bcl-2、p-YAP/YAP、TAZ蛋白水平均显著下降（P＜0.05）,细胞凋亡率、E-cadherin、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著升高（P＜0.05）,GA-017组呈现相反的趋势（P＜0.05）,而L-PST组没有显著差异（P＞0.05）;GA-017削弱了H-PST对G292细胞恶性行为的抑制作用。结论 PST可能通过抑制YAP/TAZ信号通路来抑制OS细胞的增殖、迁移和侵袭     

miR-136对胶质瘤U251细胞生物学功能的影响

目的: 初步探讨miR 136对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法: 选取胶质瘤U251细胞系,分别转染miR 136 mimic(模拟物组)和miR 136模拟物阴性对照(对照组),采用qRT PCR法检测转染效率,观察2组细胞miR 136表达差异;显微镜下观察转染24 h后细胞密度,并拍照记录;CCK 8法检测转染后细胞增殖活性;Transwell和划痕实验分别检测转染后细胞侵袭及迁移能力;检索miRnada生物信息学数据库,预测并分析miR 136下游靶基因;qRT PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中FZD4 mRNA和FZD4蛋白的表达。结果： 与对照组相比,模拟物组细胞miR 136表达水平明显升高(P<0.05);转染24 h之后,模拟物组细胞密度低于对照组;CCK 8检测显示模拟物组细胞增殖活性较对照组明显降低(P<0.05);Transwell和划痕实验显示模拟物组细胞侵袭和迁移能力较对照组降低;miRnada数据库分析显示FZD4是miR 136的下游靶基因;与对照组相比,模拟物组FZD4 mRNA和FZD4蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05)。 结论： miR 136可能通过靶向调控FZD4基因的表达抑制胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和转移。     

斑蝥素酸镁对人星形胶质瘤细胞U-251MG生长、凋亡和侵袭的影响

目的 探讨斑蝥素酸镁对人星形胶质瘤细胞U 251MG生长、凋亡和侵袭的影响及机制。方法 体外培养人星形胶质瘤细胞U 251MG,分为空白组（Control组）、低剂量斑蝥素酸镁组（Canthardin 5μM组）、中剂量斑蝥素酸镁组（Canthardin 10μM组）和高剂量斑蝥素酸镁组（Canthardin 20μM组）。采用克隆形成实验检测细胞增殖情况;Hocest染色检测细胞凋亡情况;Transwell法检测细胞侵袭情况;Western blot 检测相关蛋白表达情况。结果 平板克隆实验结果显示,斑蝥素酸镁可以明显抑制人星形胶质瘤细胞U 251MG的增殖,且呈剂量依赖性（P＜0.05）;Hocest染色结果显示,斑蝥素酸镁可以明显促进人星形胶质瘤细胞的凋亡,且呈剂量依赖性（P＜0.05）;Transwell小室实验显示,斑蝥素酸镁可以显著抑制细胞的侵袭,且呈剂量依赖性（P＜0.05）;Western blot 检测结果显示,斑蝥素酸镁处理后,人星形胶质瘤细胞中PCNA蛋白、VEGF蛋白、Bax蛋白及p-AKT蛋白表达均显著降低（均P＜0.05）,Caspase 3蛋白、Bcl 2蛋白表达显著升高（P＜0.05）,AKT总蛋白表达无显著差异（P＞0.05）。 结论 斑蝥素酸镁可以通过调控Akt信号通路抑制人星形胶质瘤细胞U-251MG的增殖和侵袭,并促进其凋亡,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性。     

miR-145-5P通过调节Rho A蛋白表达抑制U251胶质瘤细胞的功能

目的 探究miR-145-5P对U251胶质瘤细胞增殖、侵袭影响及作用机制。方法 使用miR-145-5P mimic体外干预U251胶质瘤细胞,分为miR-145-5p过表达[miR-145-5p（+）]组、对照（NC）组。使用CCK-8实验、划痕愈合实验、Transwell实验检测miR-145-5P对U251细胞增殖、迁移、侵袭的影响,免疫荧光实验检测miR-145-5P对U251胶质瘤细胞骨架形成的影响,Western blot实验检测各组细胞中RhoA蛋白表达量的变化。结果 与NC组相比,CCK-8实验、划痕愈合实验、Transwell实验显示,miR-145-5p（+）组U251细胞的OD值、划痕愈合率、迁移/侵袭细胞数均明显减少（P均<0.05）;免疫荧光实验显示,miR-145-5p过表达后细胞形态由梭形变为圆形,丝状伪足及片状伪足皱缩;Western blot实验结果显示,miR-145-5p过表达后U251细胞中RhoA蛋白表达量减少（P<0.05）。结论 miR-145-5P通过调节RhoA蛋白表达量,进而影响胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭等生物学功能。     

大黄素调节Wnt1/β-catenin信号通路对垂体腺瘤HP75细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨大黄素调节Wnt1/β-catenin信号通路对垂体腺瘤HP75细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 以CCK-8法测定0、10、20、40、80、120μmol/L浓度大黄素处理24 h后的人垂体腺瘤细胞HP75的存活率,筛选出最佳药物作用浓度。体外培养HP75细胞并随机分为对照组、大黄素组、大黄素+氯化锂(Wnt1/β-catenin信号激活剂)组,以80μmol/L的大黄素和20 mmol/L的氯化锂分组处理后以免疫印记法检测各组细胞Wnt1/β-catenin通路相关蛋白表达;以Edu和TUNEL染色法分别检测各组细胞增殖、凋亡;以细胞划痕实验和Transwell实验分别检测各组细胞迁移、侵袭;以免疫印记法检测各组HP75细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)和上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、MMP-9、Vimentin)表达。构建垂体腺瘤裸鼠移植瘤模型并随机分为对照组、大黄素组、大黄素+氯化锂组,以10 mg/kg的大黄素和1 mg/kg的氯化锂分组处理后检测各组肿瘤体积。结果 与对照组比较,大黄素组细胞凋亡率、Bax与E-cadherin...     

去甲斑蝥素对原发性胆囊癌GBC-SD细胞系增殖和凋亡的影响

目的　研究去甲斑蝥素 (norcantharidin ,NCTD)对人胆囊癌GBC SD细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法　将NCTD作用于经体外培养的人胆囊癌GBC SD细胞 ,采用四氮唑盐比色 (MTT)法进行体外细胞杀伤实验 ,测定NCTD对GBC SD细胞生长的抑制率与剂量效应、时间效应的关系 ;采用流式细胞术测定NCTD处理后的GBC SD细胞的细胞周期及凋亡率 ;并通过光电显微镜观察其细胞形态学改变。结果　NCTD浓度为 10 μg/ml时 ,对GBC SD细胞的生长有抑制作用 ,且随药物浓度升高其抑制作用增强 ,呈剂量效应关系 ,NCTD对GBC SD细胞的半数抑制浓度 (IC50 )为 60 μg/ml;NCTD作用 6h后对GBC SD细胞生长具有抑制作用 ,48h时抑制作用最明显 ,呈时间效应关系。经NCTD作用后 ,流式细胞仪显示 :G2 M期的细胞明显增多 ,S期细胞明显减少 ,细胞凋亡率上升 ;光镜检查显示 :GBC SD细胞可出现细胞固缩 ,胞膜突出 ,核碎裂等现象 ,并出现凋亡小体 ;电镜显示 :细胞微绒毛卷缩、高尔基体、线粒体等细胞器衰退 ,并可见典型的凋亡细胞。结论　N...     

双氢青蒿素通过Wnt信号通路对胶质瘤细胞增殖侵袭的影响

目的:研究双氢青蒿素(dihydroartemisinine,DHA)对人胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭的影响及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察DHA对胶质瘤活性的影响;细胞划痕实验检测细胞迁移力; Transwell小室法检测细胞侵袭力;免疫印迹试验(Western blot,WB)检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及β-catenin、GSK-3β、Axin2、c-myc蛋白的表达水平。结果:DHA显著抑制胶质瘤U251细胞的增殖活性、迁移能力及侵袭能力且呈浓度依赖性; WB法显示DHA下调E-cadherin、β-catenin、c-myc蛋白的表达水平,上调N-cadherin、Vimentin、GSK3β、Axin2蛋白的表达水平且呈浓度依赖性。结论:DHA可以抑制人胶质瘤U251细胞增殖、迁移及侵袭,其机制可能与其抑制Wnt/β-catenin通路从而抑制EMT相关进程。     

斑蝥素通过抑制MAPK信号通路调控宫颈癌细胞凋亡、迁移及侵袭行为的机制

目的 宫颈癌是继乳腺癌、结肠直肠癌和肺癌之后的女性第四大癌症,严重影响女性身体健康和生活质量。中国是宫颈癌的高危地区之一。来源于大斑芫菁和眼斑芫菁干燥虫体的斑蝥素(cantharidin,CTD)具有抗肿瘤活性且可诱导多种肿瘤细胞凋亡。本文旨在探索斑蝥素对Hela宫颈癌细胞凋亡、迁移和侵袭方面的影响及其相关机制。 方法 CCK-8检测细胞活力;流式细胞术分析细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell分析细胞侵袭;蛋白印迹检测P38、P-P38、P-MAPKAPK和P-Hsp27的表达。 结果 低浓度(<20 μM)的斑蝥素处理Hela细胞对细胞活力无明显影响,细胞存活率在80%以上。高浓度(>20 μM)的斑蝥素处理Hela细胞后会降低Hela细胞活力,细胞存活率在80%以下。与对照组相比,5、10、20 μM斑蝥素组细胞凋亡率依次升高(均P<0.05)。斑蝥素(5、10 μM)处理Hela细胞后,细胞迁移和侵袭能力明显减弱(均P<0.05);20 μM斑蝥素处理Hela细胞后,细胞迁移和侵袭能力减弱更明显(P<0.01)。与对照组相比,5 μM斑蝥素组P-P38/P38的比值、P-MAPKAPK和P-Hsp27表达明显降低(均P<0.05);10 μM斑蝥素组P-P38/P38的比值、P-MAPKAPK和P-Hsp27表达显著降低(均P<0.01);20 μM斑蝥素组P-P38/P38的比值、P-MAPKAPK和P-Hsp27表达降低更明显(均P<0.001)。 结论 斑蝥素可通过抑制MAPK信号通路提高Hela宫颈癌细胞的凋亡,降低细胞迁移及侵袭能力。      

尿石素B对胶质母细胞瘤U251细胞生物学行为的影响

目的 检测尿石素B(UB)对胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及细胞周期的影响和机制.方法 用不同剂量的UB处理胶质母细胞瘤U251细胞,运用CCK-8方法、克隆形成、划痕愈合、Transwell侵袭实验检测UB对U251细胞增殖、迁移、侵袭的影响;用流式细胞术检测UB对细胞周期和凋亡的调控作用;运用Western...     

circ＿0086414靶向miR-155-5p抑制Hippo/YAP信号通路调控口腔鳞癌细胞增殖迁移和侵袭

目的:探究circ-0086414靶向miR-155-5p抑制Hippo/Yap信号通路调控口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:RT-PCR检测HIOEC、Tca8113、CAL27、SCC-9细胞中circ-0086414表达。将未转染任何质粒的SCC-9细胞设为Control组;将分别转染pcDNA-circ-0086414、pcDNA-NC、miR-155-5p inhibitor、miR-NC inhibito质粒的SCC-9细胞中,并设为pcDNA-circ-0086414组、pcDNA-NC组、miR-155-5p组、miR-NC组;将pcDNA-circ-0086414质粒转染于SCC-9细胞中,同时在培养基中加入5μmoL/L Verteporfin共同培养,设为Verteporfin组。RT-PCR检测细胞中circ-0086414、miR-155-5p表达;CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白质印迹检测细胞中Lats1、p-Lats1、YAP、p-YAP蛋白表达;双荧光素酶报告系统实验验证circ...     

甘草次酸通过Wnt/β-catenin通路抑制黑色素瘤恶性生物学行为的机制研究

目的 探讨甘草次酸通过Wnt/β-连环素(β-catenin)通路抑制黑色素瘤恶性生物学行为的可能机制。方法 以黑色素瘤细胞B16-F10为研究对象,MTT法进行浓度梯度试验选择0、1、2、4μmol/L为细胞处理浓度,并以顺铂0.01 mmol/L干预为阳性对照。采用Transwell小室法检测细胞侵袭及迁移能力;免疫印迹试验(Western blot)实验检测B16-F10细胞中Wnt/β-catenin通路蛋白和侵袭迁移相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达水平。构建裸鼠移植瘤模型,实验分为对照组(无药物处理)、甘草次酸组(40 mg/kg),观察移植瘤小鼠的肿瘤组织生长情况及肿瘤组织中Wnt/β-catenin通路蛋白和侵袭迁移相关蛋白表达水平。结果 MTT结果显示,甘草次酸以浓度依赖性方式抑制B16-F10细胞增殖,当甘草次酸浓度≥2μmol//L时,其对B16-F10细胞的增殖具有明显的抑制作用(P<0.05);Transwell小室实验结果显示,与对照组相比,甘草次酸2、4μmol/L浓度处理后,B16-F10细胞的侵袭、迁移能力明显下降(P<0...     

吉马酮调节FAK/YAP信号通路对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药性的影响

目的 探讨吉马酮(GMC)调节局部黏着斑激酶(FAK)/Yes相关蛋白(YAP)通路对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法 将A549/DDP细胞分为CK组、低剂量GMC组(GMC-L组,5μmol/L)、中剂量GMC组(GMC-M组,10μmol/L)、高剂量GMC组(GMC-H组,20μmol/L)、GMC-H+pcDNA组(20μmol/L+转染pcDNA)、GMC-H+pcDNA-FAK组(20μmol/L+转染pcDNA-FAK)。检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况;检测多药耐药基因1(MDR1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、磷酸化的FAK(p-FAK)、YAP蛋白表达情况。结果 与CK组比较,GMC-L组、GMCM组、GMC-H组A549/DDP细胞OD450值、克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、MDR1、PCNA、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、p-FAK蛋白及核YAP蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与GMC-H组、GMC-H+...     

ADAMDEC1对人脑胶质瘤U87细胞生物学行为的影响

目的 研究解聚素金属蛋白酶家族癸蛋白1(ADAM-DEC1)对人脑胶质瘤U87细胞增殖、黏附、侵袭、迁移和凋亡的影响及可能机制.方法 实验组(ADAMDECl-RNAi)人脑胶质瘤U87细胞用携带特异性siRNA的慢病毒感染来下调ADAMDEC1的表达,对照组(CONTROL-RNAi)用阴性对照慢病毒感染,通过观察GFP荧光的表达情况来判定转染效率,采用Real-time PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白质水平检测稳定转染的U87细胞ADAMDEC1基因的表达情况,CCK-8法检测下调ADAMDEC1表达后细胞增殖及黏附能力的变化,Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力的变化,流式细胞技术检测细胞凋亡的变化.结果 与CONTROL-RNAi相比,ADAMDECl-RNAi mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.01) ;CCK-8法检测结果显示下调ADAM-DEC1表达能够显著抑制U87细胞的增殖(P< 0.05)和黏附能力(P<0. 01) ;Transwell检测结果显示下调ADAMDEC1表达能够显著抑制U87细胞的侵袭和迁移能力(P<0. 01);流式细胞术检测结果显示下调ADAMDEC1表达能够促进 U87细胞的凋亡(P<0.01).结论 在体外细胞培养试验中,下调ADAMDEC1表达能够显著抑制U87细胞的增殖、黏附、侵袭、迁移能力,促进U87细胞的凋亡.     

去甲斑蝥素对人多发性骨髓瘤细胞株U266生长调控的影响及其机制的研究

目的 研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对多发性骨髓瘤细胞株的增殖及其凋亡的影响及其可能的机制.方法 四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethyl-2 thiahiazoyi)-3,5-di-phenyl-tetrazolium bromide,MTT]检测5、20、40、80、160μmol/L的NCTD对U266细胞增殖的影响;用流式细胞术检测不同浓度NCTD对细胞周期及细胞凋亡的影响,并应用半定量反转录聚合酶链反应检测survivin基因表达的变化.结果 在20～160μmol/L的浓度内,NCTD对U266细胞的增殖有抑制,抑制与NCTD的浓度呈剂量依赖关系(P<0.05).不同浓度的NCTD能诱导多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡,使细胞明显阻滞于G2 /M 期;在NCTD作用下,U266 细胞survivin 及其机制可能与诱导凋亡、细胞周期阻滞有关.结论 NCTD能抑制U266细胞的增殖,并诱导其凋亡的机制可能与抑制survivin的表达及G2 /M 期阻滞有关.     

益母草碱调节Akt/MDM2/p53信号通路对脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的 观察益母草碱调节蛋白激酶B(Akt)/双微体同源基因2(MDM2)/p53信号通路对脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法 2022年3—9月于湖北省十堰市太和医院实验室进行实验。采用CCK-8法测定不同浓度(0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mmol/L)益母草碱处理的小鼠脑胶质瘤细胞GL261存活率并筛选出其最佳作用浓度。体外培养GL261细胞并随机分为对照组、益母草碱组、益母草碱+SC79(Akt激活剂)组,以益母草碱1.6 mmol/L和5μmol/L的SC79分组处理后,采用蛋白免疫印记法检测各组细胞Akt/MDM2/p53通路相关蛋白表达;采用CCK-8法、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况。构建颅内胶质瘤小鼠模型30只并随机分为对照组、益母草碱低剂量组、益母草碱中剂量组、益母草碱高剂量组及益母草碱高剂量+SC79组,分组处理后以TUNEL染色检测各组小鼠颅内胶质瘤细胞凋亡情况;以免疫印记法检测各组胶质瘤组织Akt/MDM2/p53通路相关蛋白表达。结果 (1)细胞实验：与对照组比较,益母草碱组细胞凋亡...     

CXCR4 shRNA对胶质瘤细胞U251增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨CXCR4 shRNA对胶质瘤细胞U251体外增殖和侵袭能力的影响,为CXCR4 shRNA治疗胶质瘤提供实验依据. 方法 用脂质体LipofectimineTM2000将CXCR4-shRNA转染U251细胞,MTT实验检测转染细胞的增殖,Transwell侵袭实验检测转染细胞的迁移和侵袭能力. 结果 与转染非特异的pGPU6/GFP/NC组和未转染组比较,转染CXCR4-shRNA载体pGPU6/GFP/Rac 1-421组的U251细胞CXCR4 mRNA显著降低(P＜0.05),并且细胞体外增殖能力减弱(P＜0.05),侵袭到滤膜底面的细胞数为36.67±9.76,分别低于对应的pGPU6/GFP/NC组和未转染组(P＜0.05). 结论 CXCR4 shRNA载体pGPU6/GFP/Rac1-421可下调U251细胞CXCR4的表达,抑制U251细胞的增殖和迁移侵袭能力,提示CXCR4在胶质瘤发展过程中具有重要作用.