甘草酸对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的治疗作用

目的 探讨甘草酸对MRL/lpr小鼠狼疮肾炎是否具有保护作用及其机制.方法 MRL/lpr狼疮小鼠随机分为MRL/lpr组、MRL/lpr+地塞米松(1.5 mg/kg)组,MRL/lpr+甘草酸(20 mg/kg)组,MRL/lpr+甘草酸(40 mg/kg)组,每组10只;野生型正常对照组C57BL/6小鼠10只.采用ELISA法检测各组小鼠血清中尿酸(UA)与肌酐(Cr)含量,各组小鼠血清及肾脏组织中IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子水平;采用HE染色法检测肾脏病理改变;采用Western blot技术检测各组小鼠脾脏NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、p-NF-κB、NF-κB、p-IκBα、IκBα蛋白的表达.结果 甘草酸能显著降低血清尿酸、肌酐含量;减少血清及肾脏IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子表达,改善肾脏病理改变;并能显著抑制NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、p-NF-κB、p-IκBα表达.结论 甘草酸对MRL/lpr狼疮小鼠肾脏起到保护作用.     

芍药苷对MRL/lpr狼疮小鼠肺损伤的保护作用

目的 探讨芍药苷对MRL/lpr狼疮小鼠肺损伤的影响。 方法 将系统性红斑狼疮MRL/lpr小鼠随机分为MRL/lpr组、MRL/lpr+地塞米松 (1.5 mg/kg) 组,MRL/lpr+芍药苷(20 mg/kg)组,MRL/lpr+芍药苷 (40 mg/kg) 组, 每组10只,给药7 d;另取10只野生型C57BL/6小鼠作为正常对照组。第8天采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和血清炎症因子白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素1β（IL-1β）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平;采用HE染色检测肺部病理改变,采用蛋白质免疫印迹（Western blot）技术检测各组小鼠肺组织中磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶（P-PI3K）、磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（P-Akt）、磷酸化核因子κB p65(P-NF-κBp65)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α（P-IκBα）蛋白的表达。 结果 芍药苷能显著降低血清MDA含量;提高血清SOD、CAT、GSH-PX水平,减少血清炎症因子水平,改善肺组织病理改变,并能显著抑制P-PI3K、P-Akt、P-NF-κBp65、P-IκBα蛋白表达。结论 芍药苷对MRL/lpr狼疮小鼠肺损伤起到保护作用。     

乳酸调控大鼠肠黏膜微血管内皮细胞的NF-κB信号通路

目的探讨内毒素(LPS)刺激大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMMVECs)后,乳酸(LA)调控NF-κB信号通路中磷酸化IκBα和NF-κB p65蛋白表达情况,肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)mRNA表达情况,阐明乳酸发挥作用的最佳时间及其调控NF-κB信号通路的部位。方法提取RIMMVECs总蛋白和总RNA,用Western blotting检测NF-κB p65、IκBα及p-IκBα蛋白表达水平,用real-time PCR对TNF-α和IL-6 mRNA进行定量检测。结果乳酸能降低LPS诱导RIMMVECs分泌的TNF-α和IL-6 mRNA表达水平,并分别于24 h和3 h下调效果最明显;乳酸能抑制IκBα磷酸化及NF-κB转录活性,并于4~8 h达到最佳效果;乳酸发挥作用部位是抑制信号通路中IκBα磷酸化。结论乳酸通过抑制IκBα磷酸化而阻断NF-κB的激活,抑制下游炎性因子表达,进而发挥出很好的预防炎症效果。     

解毒祛瘀滋肾方干预TLR9信号通路对MRL/lpr小鼠肾脏保护作用

目的：基于对TLR9-MyD88-NF-κB通路的干预作用,阐明解毒祛瘀滋肾方对狼疮鼠肾脏的保护作用。方法：将30只MRL/lpr狼疮鼠随机分为模型对照组、泼尼松治疗组、中药组共3组,对各治疗组进行相应的药物治疗,疗程8周。采用HE染色法、PAS染色法、Masson染色法分别对MRL/lpr小鼠肾脏切片进行病理染色,观察比较3组小鼠病理变化及治疗效果;采用Real-time PCR法观察比较各组小鼠TLR-9、MyD88、NF-κB mRNA表达量的差异。结果：与模型组比较,中药组能明显改善MRL/lpr小鼠的肾组织病理损伤。Real-time PCR法结果显示：中药组MRL/lpr小鼠的肾组织TLR-9、MyD88、NF-κB mRNA表达均低于模型组（均为P<0.05）。结论：解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr小鼠肾脏具有保护作用,可对其病理变化产生影响,减轻其肾脏损害,延缓病程,并与解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr小鼠TLR-9-MyD88-NF-κB信号通路的抑制作用相关。     

解毒祛瘀滋肾方干预TLR9信号通路对MRL/lpr狼疮小鼠肾脏的保护作用

目的 基于对TLR9-MyD88-NF-κB通路的干预作用,阐明解毒祛瘀滋肾方对狼疮鼠肾脏的保护作用。方法 将30只MRL/lpr狼疮鼠随机分为模型对照组、泼尼松治疗组、中药组共3组,对各治疗组进行相应的药物治疗,疗程8周。采用HE染色法、PAS染色法、Masson染色法分别对MRL/lpr小鼠肾脏切片进行病理染色,观察比较3组小鼠病理变化及治疗效果;采用real-time PCR法观察比较各组小鼠TLR-9、MyD88、NF-κB mRNA表达量的差异。结果 与模型组比较,中药组能明显改善MRL/lpr小鼠的肾组织病理损伤。Real-time PCR法结果显示:中药组MRL/lpr小鼠的肾组织TLR-9、MyD88、NF-κB mRNA表达均低于模型组(均为P<0.05)。结论 解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr小鼠肾脏具有保护作用,可对其病理变化产生影响,减轻其肾脏损害,延缓病程,并与解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr小鼠TLR-9-MyD88-NF-κB信号通路的抑制作用相关。     

地塞米松对MRL/lpr狼疮小鼠认知功能的保护作用

目的：探讨地塞米松对MRL/lpr狼疮小鼠认知功能的影响。方法：MRL/lpr狼疮小鼠随机分为MRL/lpr 组、MRL/lpr+地塞米松(1.5 mg/kg)组,每组10只;野生型正常对照组C57BL/6小鼠10只。采用 Morris水迷宫观察 各组小鼠认知功能和行为。检测各组小鼠血清、海马组织中炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介 素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)含量;检测各组小鼠海马组织中磷脂酰 肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/核因子-κB p65(nuclear factor-kappabinding p65,NF-κB p65)相关蛋白P-PI3K,P-Akt和磷酸化核转录因子κB抑制蛋白a(phospho-inhibitor of nuclear factor kappa Ba,P-IκBa)及P-NF-κB p65的表达。免疫组织化学法观察各组小鼠海马区P-NF-κB p65阳性表达。结果：地塞米松能缓 解MRL/lpr狼疮小鼠认知功能障碍,降低血清及海马组织IL-6,IL-1β,TNF-α的表达;抑制 P-PI3K,P-Akt,P-IκBa和 P-NF-κB p65的表达。结论：地塞米松可能通过降低MRL/lpr狼疮小鼠海马区TNF-α和IL-1β水平,从而对其认知功能起 保护作用。     

羟基红花黄色素A对小鼠肝癌移植瘤NF-κB信号通路的影响

目的 研究羟基红花黄色素A(HSYA)对小鼠H22肝癌移植瘤NF-κB信号通路的影响.方法 建立H22移植性肝癌小鼠模型50只,随机分为HSYA高剂量组(4.5 mg/kg)、HSYA中剂量组(2.25 mg/kg)、HSYA低剂量组(1.125 mg/kg)、阳性对照组(50 mg/kg)和生理盐水对照组,给药14 d.免疫印迹检测核转录因子-κB(NF-κB)p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκB-α)及NF-κB抑制蛋白(IκB-α)的水平.结果 HSYA高、中、低剂量组能够下调细胞核p65蛋白的表达,抑制活化p65核移位,抑制IκB-α的磷酸化和胞质内IκB-α的降解即降低NF-κB的转录活性,尤以中剂量组效果最显著.结论 HSYA能抑制小鼠肝癌移植瘤NF-κB的转录活性.     

羟氯喹通过Toll样受体4/核因子-κB信号通路对系统性红斑狼疮小鼠肺损伤的影响

目的:探讨羟氯喹(HCQ)对系统性红斑狼疮(SLE)小鼠肺损伤以及Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的影响。方法:取32只雌性MRL/lpr狼疮小鼠(自发型SLE小鼠模型)随机分为模型组、HCQ(80 mg/kg)组、HCQ(80 mg/kg)+TAK242(TLR4抑制剂,0.3 mg/kg)组和HCQ(80 mg/kg)+LPS(TLR4激动剂,2.5 mg/kg)组,每组8只;另取8只同龄雌性C57BL/6小鼠设为正常对照组。各组分别连续给药治疗5周后,通过肺功能仪检测肺功能指标[气道阻力(Raw)、动态肺顺应性(Cdyn)、第0.1秒用力呼气容积(FEV0.1)],ELISA法检测肺泡灌洗液中炎症因子[干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-6]水平和血清中免疫学指标[抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(ds-DNA)]水平,HE染色法和Masson染色法观察肺组织病理学改变和纤维化状况,并进行病理评分和计算胶原容积分数(CVF),RT-qPCR法和Western blot法检测肺组织TLR4、NF-κB p65、I...     

抗巨噬细胞移动抑制因子单抗对结肠炎小鼠结肠NF-κB、IκB表达的影响

目的探讨抗巨噬细胞移动抑制因子单抗对结肠炎小鼠结肠NF-κB p65、IκBα表达的影响。方法采用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导制备小鼠急性溃疡性结肠炎(UC)的模型,应用抗MIF单抗干预,观察抗MIF单抗对小鼠UC发病的干预作用。该实验分为正常对照组、UC模型组、抗MIF单抗干预组和生理盐水组。造模及药物干预期间观察小鼠一般情况并行疾病活动指数(DAI)评分,第8天断颈处死全部小鼠,行结肠大体损伤评分,HE染色光镜下观察结肠病理改变,免疫组化染色观察NF-κB p65、IκBα在结肠组织炎症细胞的表达情况。结果与正常组相比,UC模型组中NF-κB p65的表达显著增加,而IκBα的表达稍增加,在抗MIF单抗治疗后,NF-κB p65的水平明显低于UC模型组,并且IκBα含量增高。结论抗MIF单抗对DSS诱导的急性UC的小鼠具有保护作用,减低了小鼠结肠组织NF-κB p65的表达水平,提高IκBα的表达水平,从而达到抑制UC小鼠结肠组织NF-κB通路的过度激活的作用。     

MRL/lpr狼疮鼠骨TNF-α/NF-κB信号通路的表达

目的: 探讨系统性红斑狼疮小鼠(MRL/lpr)骨肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)/细胞核因子-κB p50 (nuclear factor-κB p50,NF-κB p50)信号通路的表达。方法: 选取C3He/HeJ小鼠(对照组)和MRL/lpr狼疮小鼠(狼疮组)各6只,饲养4个月后常规制备小鼠股骨组织切片,HE染色观察骨质情况,免疫组织化学染色检测TNF-α、NF-κB p50蛋白表达情况;密度梯度离心法分离和贴壁法筛选骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs),然后培养;免疫细胞化学染色观察BMMSCs中TNF-α、NF-κB p50表达情况。结果： 与对照组比较,狼疮组小鼠骨小梁松散,出现骨质疏松,股骨TNF-α和NF-κB p50蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01),BMMSCs中TNF-α和NF-κB p50蛋白表达亦升高(P<0.05或P<0.01)。结论：狼疮鼠骨TNF-α/NF-κB信号通路处于异常活化状态。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨雷帕霉素对狼疮小鼠肾脏的保护作用

目的 观察雷帕霉素(rapamycin, RAPA)对狼疮性肾炎(lupus nephritis, LN)模型小鼠Toll样受体4/髓系分化因子88/核转录因子κB(TLR4/MyD88/NF-κB)通路基因和蛋白表达水平的影响,探讨其治疗狼疮性肾炎的可能分子机制。方法 20周龄C57BL/6小鼠和MRL/lpr小鼠40只,分为正常对照组(n=10)、治疗组(n=10)、狼疮组(n=10)、狼疮治疗组(n=10)。正常对照组和狼疮组给予相同体积的生理盐水,治疗组和狼疮治疗组给予RAPA 2.0 mg/kg腹腔注射,连续28天;于第28天收集24小时尿液,第29天处死小鼠。检测24小时尿蛋白水平和血清anti-dsDNA、ANA、anti-Sm水平;HE、Masson、PAS、PASM染色方法观察肾组织病理变化;qRT-PCR、免疫荧光检测肾组织中TLR4、MyD88和NF-κB-p65基因和蛋白表达水平;TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡水平。结果 (1)雷帕霉素治疗后,24小时尿蛋白和血清ANA、anti-dsDNA、anti-Sm明显改善(P<0.05),病理损伤明显改善。(2...     

MRL/lpr 鼠部分病理指标动态变化及SIGIRR表达与狼疮肾炎相关性研究

目的观察MRL／lpr鼠病理指标动态变化,研究MRL／lpr小鼠肾组织单个免疫球蛋白区白介1相关受体（single IgIL-1-related receptor,SIGIRR）的表达是否随病理分级加剧而变化,以提示TLR4／NF-κB通路是否参与了狼疮肾炎（iupus nephritis,LN）的发生发展。方法对照组C57BL／6小鼠和模型组MRL／lpr小鼠各12只,分别检测12、15、18、21周龄时小鼠胸腺指数、脾指数、尿蛋白,血清尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、抗核抗体（antinuclear antibodies,ANA）;对肾组织切片进行苏木素依红（hematoxylin and eosin,HE）和马松（Masson）染色,观察模型鼠狼疮肾炎发病情况,采用免疫印迹（westernblot）和免疫组化（immunohistochemistry,IHC）方法观察不同周龄小鼠肾脏SIGIRR的表达情况。结果MRL／lpr小鼠12、15、18、21周龄时与同龄C57BL／6鼠相比其尿蛋白水平随周龄增加而升高,血清尿素氮以及抗核抗体和对照组相比无明显差异,HE、Masson染色显示模型鼠从12周开始即表现出肾小球肾炎,血管周围炎细胞浸润,之后逐渐间质纤维化,肾小球系膜和基底膜增厚,甚至出现肾小球纤维化和硬化。Westernblot和IHC结果显示,21周龄时MRL／lpr小鼠肾组织SIGIRR蛋白表达增加,与同龄C57BL／6相比有显著性差异。结论SIGIRR蛋白表达随MRL／lpr小鼠狼疮肾炎加重而增加,其可能与TLR4／NF-κB（Toll-like receptor 4／nuclear factor-kappa B,Toll样受体4／核因子κB）通路相关。     

苦参素预处理对肾缺血再灌注损伤的保护作用及对核转录因子-κB表达影响

目的:探讨苦参素(OMT)预处理对肾缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及核转录因子-κB表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为假手术组(S组)、I/R组、OMT高、低剂量组(H、L组),每组10只。H、L组在I/R造模前进行OMT给药干预,S、I/R组给予等体积0.9%氯化钠注射液处理。检测并比较各组动物肾损伤指标、炎性因子水平、氧化应激指标水平差异以及肾脏组织中核转录因子-κB(NF-κB p65)蛋白表达水平变化。结果:与S组比较,I/R组肾组织损伤明显,肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及丙二醛(MDA)水平均明显升高,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性明显降低,NF-κB p65蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与I/R组比较,OMT预处理组肾小管损伤明显减轻,Cr、BUN、IL-1β、IL-6、TNF-α及MDA水平均明显降低,SOD和GSH-Px活性明显升高,NF-κB p65蛋白表达水平明显降低,且H组效果更明显(P<0.05)。结论:苦参素预处理对肾脏有保护作用,其机制可能与增强肾脏抗氧化能力,减轻炎症反应,抑制NF-κB p65表达有关。     

温脾汤对大鼠残余肾组织中核转录因子-κB/IκB表达的影响

目的了解5/6肾切除大鼠残余肾组织核转录因子κappaB(NF-κB/IκBα)的表达与肾功能损害的关系,并观察温脾汤对NF-κB/IκBα的影响。方法采用5/6肾切除方法建立肾纤维化大鼠模型,以NF-κB p65亚基单抗及IκBα多抗为一抗,采用二步法免疫组化染色检测大鼠残余肾脏中NF-κB p65/IκBα的表达,结合血清肌酐、尿素氮、24 h蛋白尿等肾功能指标及肾脏病理损害情况,分析它们在肾脏损害中的作用,在此基础上阐明温脾汤肾保护作用与核转录因子-κB/IκB的关系。结果模型组肾组织中NF-κB p65的表达较正常组织显著增高,与尿蛋白及血肌酐增高呈正相关关系,而IκBα表达明显低于正常肾组织。与模型组相比,温脾汤可上调IκBα的表达,抑制NF-κB p65的过度活化。结论温脾汤能减轻5/6肾切除对大鼠肾功能的损伤,这一作用与其能降低肾组织NF-κB表达的异常增强有关。     

肾癌组织中NF-κB信号分子的表达及As2O3对人肾癌786-0细胞中NF-kB信号通路影响的研究

目的:探讨NF-κB信号通路与肾癌发生和发展的关系以及三氧化二砷(As2O3)对人肾癌细胞系786-0的NF-κB信号转导的影响.方法:采用ICC、ISH、Western blot和EMSA技术检测15例肾癌组织和10例正常肾组织中NF-κB信号分子IKKα/β、IkBα、p65和ICAM-1的表达和NF-κB DNA结合活性;As2O3处理肾癌786-0细胞后NF-κB信号分子蛋白表达、p65mRNA表达和NF-κB DNA结合活性的改变.结果:肾癌组织中NF-κB DNA结合活性及p65、IKKα/β和ICAM-1蛋白表达量升高(P＜0.01),但IκBα蛋白明显降低(P＜0.01);经2μmol/L浓度As2O3处理786-0细胞72h后,p65mRNA含量、NF-k B DNA结合活性及p65、IKKα/β、IκBα和ICAM-1蛋白的表达量均降低(P＜0.01).结论:NF-κB DNA结合活性及p65、IKKα/β和ICAM-1蛋白增加可能与肾癌的发生和进展有关;2μmol/L以上浓度As2O3可以全面抑制786-0细胞中p65、IKKα/β、IκBα和ICAM-1蛋白和p65 mRNA的表达,抑制NF-κB DNA结合活性,可能是As2O3抑制786-0细胞增殖的另一种机制,NF-κB有可能成为抗肾癌治疗的靶点之一.     

没食子酸与环丙沙星联用对小鼠慢性鼻-鼻窦炎模型的作用

探讨没食子酸与环丙沙星联用对小鼠慢性鼻-鼻窦炎模型(CRS)的作用。收集难治性CRS患者鼻黏膜样本,分离铜绿假单胞杆菌(Pseudomonas aeruginosa)构建小鼠CRS模型,没食子酸(GA)与环丙沙星(CIP)单独或联合灌胃治疗,HE染色观察小鼠鼻黏膜病理变化,ELISA检测血清炎性因子TNF-α、IL-6、IL-8的表达、试剂盒检测SOD活性、MDA及ROS含量,Western blot检测鼻黏膜组织中TNF-α、IL-6、IL-8、IκB及NF-κB p65的表达。结果显示,GA与CIP可显著降低CRS小鼠TNF-α、IL-6、IL-8、MDA、ROS及NF-κB p65的含量,增加SOD活性及IκB的表达,且联合用药效果更显著。结果说明,GA与CIP联用治疗CRS效果优于单独用药,可能通过抑制NF-κB信号通路,下调TNF-α、IL-6、IL-8表达发挥作用。     

慢病毒介导PDIA3过表达对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜屏障的影响及其机制

目的 探讨蛋白质二硫键异构酶A3(PDIA3)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的保护作用及其可能机制.方法 将60只C57BL/6小鼠随机分成正常对照组(Control组)、模型组(Model组)、空载慢病毒组(Lv-NC组)和PDIA3过表达慢病毒组(Lv-PDIA3组),每组15只.采用连续7d自由饮用3％葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液建立UC小鼠模型,造模成功后开始注射慢病毒干预.慢病毒干预7d后结束实验,对各组小鼠进行疾病活动指数(DAI)评分,HE染色观察结肠组织病理学变化,ELISA法检测血清中炎症因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及肠黏膜屏障通透性标志物D-乳酸(D-Lac)、二胺氧化酶(DAO)含量,qRT-PCR检测结肠组织中PDIA3 mRNA水平,Western blot检测结肠组织中PDIA3、ZO-1、Occludin、Claudin-1、IκBα、p-NF-κB p65 (Ser536)、NF-κB p65蛋白表达水平.结果 与Control组比较,Model组小鼠结肠组织受损严重,DAI评分、血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、D-Lac、DAO含量以及结肠组织中IκBα和p-NF-κB p65 (Ser536)蛋白表达水平均升高,而ZO-1、Occludin和Claudin-1等蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.01);与Model组比较,Lv-PDIA3组小鼠结肠组织受损程度减轻,DAI评分、血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、D-Lac、DAO含量以及结肠组织中IκBα和p-NF-κB p65(Ser536)蛋白表达水平降低,同时ZO-1、Occludin和Claudin-1蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(P＜0.01),而Lv-NC组差异无统计学意义.结论 过表达PDIA3能明显改善UC小鼠肠黏膜屏障功能,其机制可能与抑制NF-κB信号通路的激活有关.     

荆防药对正丁醇提取部位抗炎作用的NF-κB信号通路机制研究

目的观察荆防药对正丁醇提取部位对气管滴注脂多糖(LPS)所致小鼠急性肺损伤(ALI)模型及LPS刺激诱导的小鼠单核巨噬白血病细胞(RAW264. 7细胞)炎症模型的保护作用,探讨其抗炎效应的核转录因子-κB(NF-κB)信号通路机制。方法 (1)小鼠ALI模型:将雄性昆明种小鼠分为空白对照组,假手术组,模型组,地塞米松(5 mg/kg)+LPS组,荆防药对正丁醇部位低、中、高剂量(3. 33、6. 67、10. 01 g/kg)+LPS组,除地塞米松组于实验第2、4、5天腹腔注射给药1次外,其余各组动物连续灌胃给药5 d,1次/d,空白对照组、假手术组和模型组给予等体积0. 5%吐温溶液。末次给药30 min后,除空白对照组和假手术组外其余各组小鼠气管滴注LPS 100μL(5 mg/kg)制备小鼠ALI模型,假手术组小鼠行麻醉、气管滴注操作,但给予无菌生理盐水。造模后5 h各组再次给药1次,给予LPS后6 h处死小鼠,取小鼠肺组织进行病理形态学观察,Real-Time PCR法检测小鼠肺组织NF-κB p65、NF-κB p50、IκBαmRNA表达水平,Western-Blot法检测小鼠肺组织NF-κB p50蛋白表达水平。(2)RAW264. 7细胞炎症模型:取对数期RAW264. 7细胞悬液接种、培养24 h贴壁后,设空白对照组,LPS组(1 mg/L),LPS+DMSO对照组,LPS+地塞米松(5 mg/L)组,LPS+荆防药对正丁醇部位高、低剂量组(50、25 mg/L),LPS+5-O-甲基维斯阿米醇苷高、低剂量组(50、25 mg/L),LPS+橙皮苷组(50μg/L),LPS+迷迭香酸组(5 mg/L)。受试药物预处理3 h,除空白对照组外其余各组均加入1 mg/L LPS刺激12 h造模,吸取细胞上清,Griess法测定一氧化氮(NO)含量,ELISA法测定白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;裂解细胞,Real-Time PCR法检测细胞NF-κB p65、NF-κB p50和IκBαmRNA表达水平。结果 (1)与LPS所致小鼠ALI模型组比较,荆防药对正丁醇部位各剂量组可减少ALI小鼠肺组织嗜中性粒细胞计数,其中低剂量组降低作用显著(P 0. 01);荆防药对正丁醇部位中、低剂量组显著下调ALI小鼠肺组织NF-κB p65mRNA及NF-κB p50蛋白表达水平(P 0. 01),中剂量组亦明显下调NF-κB p50 mRNA表达水平(P 0. 05)。(2)与细胞炎症模型组比较,所有受试药物均能明显降低细胞上清IL-6水平(P 0. 01或P 0. 05),荆防药对正丁醇部位(50、25 mg/L)、5-O-甲基维斯阿米醇苷低剂量组可显著降低细胞上清NO含量(P 0. 01或P 0. 05),荆防药对正丁醇部位高剂量组有减少细胞上清TNF-α含量的趋势;荆防药对正丁醇部位低剂量组显著下调细胞NF-κB p65、NF-κB p50、IκBαmRNA表达水平(P 0. 05或P 0. 01),高剂量组明显抑制细胞NF-κB p50、IκBαmRNA表达(P 0. 05或P0. 01),5-O-甲基维斯阿米醇苷和橙皮苷亦可显著下调细胞NF-κB p50 mRNA表达水平(P 0. 05),迷迭香酸明显抑制模型细胞NF-κB p50和IκBαmRNA表达的上调(P 0. 05)。结论荆防药对正丁醇提取部位具有抗急性炎症作用,抗炎作用发挥与抑制NF-κB信号通路中关键因子NF-κBp65、NF-κB p50、IκBα基因及NF-κB p50蛋白表达有关,5-O-甲基维斯阿米醇苷、橙皮苷与迷迭香酸可能为其主要有效物质基础。     

基于网络药理学探讨红曲-山楂治疗NASH的作用机制及关于NF-κB信号通路的机制验证

[目的] 基于网络药理学预测红曲-山楂治疗非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，NASH)的潜在分子机制，并采用蛋氨酸-胆碱缺乏NASH模型对核心信号通路之一的核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信号通路进行实验验证。[方法] 通过中医药数据和分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP)、PubChem、Swiss Target Prediction等数据库获取红曲、山楂的有效成分及靶点，运用基因组注释数据平台(Genome Annotation Database Platform，GeneCard)、在线人类孟德尔遗传(Online Mendelian Inheritance in Man，OMIM)等数据库获取NASH的疾病靶点，结合 Cytoscape软件构建药物-成分-靶点拓扑图；取交集靶点并筛选核心共靶基因，应用 STRING数据库构建蛋白互作(protein-protein interaction，PPI)网络；应用Metascape进行基因本体(gene ontology，GO)和京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)富集分析。建立大鼠NASH模型，通过一般情况、生化检验、苏木素-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色、Masson染色、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)、免疫印迹等方式验证网络药理学分析结果。[结果] 通过网络药理学共筛选出18个活性成分，54个关键靶点，GO分析结果涉及炎症、代谢、自噬、肿瘤等，KEGG结果涉及NF-κB等经典信号通路。动物实验结果显示，红曲-山楂干预可显著改善NASH小鼠脂肪变性及炎症改变情况，降低组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)等炎症因子水平，降低核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)p65、NF-κB p50、NF-κB抑制蛋白-α(inhibitor of NF-κB-α，IκB-α)基因水平，下调NF-κB p65、NF-κB p50、磷酸化NF-κB-p65(phospho-NF-κB-p65，p-NF-κB p65)蛋白的表达。[结论] 红曲-山楂可能通过调控NF-κB信号通路，改善NASH模型小鼠的症状，本研究结果可为红曲-山楂的临床应用提供依据。     

Pyrin重组蛋白对小鼠肺纤维化NF-κB信号通路的作用

[目的]探讨Pyrin重组蛋白对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化NF-κB信号通路的作用.[方法]选择雌性清洁级BABL/c小鼠,随机分为正常对照组、肺纤维化模型组及Pyrin重组蛋白治疗组.第14 d给小鼠施行全身麻醉取右肺组织行HE及Masson三色染色.用Western blot检测肺组织中NF-κB p65蛋白的表达.[结果]与正常对照组比较,肺纤维化模型组小鼠肺组织中NF-κB p65蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与肺纤维化模型组比较,Pyrin重组蛋白治疗组肺组织中NF-κB p65蛋白水平显著降低(P<0.05).[结论]Pyrin重组蛋白可抑制肺纤维化的发生,其机制可能是通过阻断NF-κB信号通路实现的.