平喘方对哮喘小鼠HMGB1/TLR4/NF-κB通路及IKKs、TGF-β1的影响

目的 研究平喘方对哮喘小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)及气道重塑相关因子IκB激酶家族（IKKs）、转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法 将32只雄性Balb/c小鼠随机分为空白组、模型组、地米组、平喘方组,每组8只。采用卵清白蛋白（OVA）联合氢氧化铝腹腔注射和5%OVA雾化吸入激发的方法建立哮喘模型,当日雾化结束1 h后灌胃给药14 d。各组于最后一次给药后收集小鼠血清、肺泡灌洗液（BALF）及肺组织。采用HE染色法观察小鼠肺组织病理改变,免疫组化染色法观察HMGB1、TLR4、NF-κB表达,ELISA法检测BALF及外周血中HMGB1、TLR4、TGF-β1、IKKs含量,RT-PCR检测肺组织中HMGB1、TLR4、NF-κB及IKKs mRNA表达,Western blot法检测肺组织中HMGB1、TLR4蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组气道重塑严重,HMGB1、TLR4及NF-κB表达明显增强,HMGB1、TLR4、TGF-β1及IKKs含量升高（P<0.05）,HMGB1、TLR4、NF-...     

苦参碱通过HMGB1/TLR4/NF-κB通路对胃溃疡大鼠溃疡修复的影响

目的:探讨苦参碱对胃溃疡(GU)大鼠炎症反应和溃疡修复的影响及对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的调控作用。方法:取SD雄性大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、苦参碱0.1、0.2 g/kg组、甘草酸(HMGB1抑制剂)0.03 g/kg组、苦参碱0.2 g/kg+甘草酸0.03 g/kg组,每组12只;除假手术对照组外,其余各组均用乙酸烧灼法建立GU大鼠模型,并于造模成功后灌胃给药,1次/d,连续给药28 d。观察大鼠一般行为变化;检测大鼠溃疡指数、溃疡抑制率;透射电镜观察大鼠胃黏膜组织形态变化;TUNEL法检测大鼠胃黏膜上皮细胞凋亡率;免疫荧光检测TLR4在胃黏膜组织中阳性表达水平;免疫组化法检测HMGB1、NF-κB在胃黏膜组织中阳性表达水平;蛋白印迹法检测白细胞介素-6(IL-6)、环氧合酶-2(COX-2)、髓样分化因子88(MyD88)、DNA损伤标记蛋白-磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)、修复关键蛋白-羧基末端连接蛋白反应蛋白(CtIP)和Rad51蛋白表达情况。结果:与假手术对照组比较,模型对照组大鼠...     

补肺汤对HMGB1诱导的特发性肺纤维化相关细胞TLR2/NF-κB信号通路的影响

目的?观察补肺汤对高迁移率族蛋白B1（HMGB1）诱导的人非小细胞肺癌细胞（A549）和人肺成纤维细胞（HFL1）形态损伤、炎症反应和Toll样受体2/髓样分化蛋白88/核因子-κB（TLR2/MyD88/NF-κB）信号通路的影响。方法?使用冷冻技术制备补肺汤冻干粉，大鼠补肺汤灌胃4周后取含药血清。将A549细胞和HFL1细胞随机分为空白组、HMGB1组（HMGB1诱导）、补肺汤冻干粉预培养加HMGB1组（冻干粉组，冻干粉浓度分别为0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%）、补肺汤含药血清预培养加HMGB1组（含药血清组，含药血清浓度分别为5%、10%、15%、20%、25%）、阳性药物组（甲泼尼松龙）及空白血清组，按照分组处理细胞。电镜下观察各组细胞形态和超微变化，ELISA法检测细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、NF-κB含量，Western Blot法检测细胞中TLR2、MyD88、NF-κB蛋白表达。结果?电镜显示HMGB1组细胞形态和超微结构损伤明显，补肺汤冻干粉和含药血清能有效恢复细胞形态和超微结构损伤，且浓度越高，恢复效果越显著。与空白组比较，HMGB1组细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、NF-κB含量均升高（P<0.01），TLR2、MyD88、NF-κB蛋白表达升高（P<0.01）；与HMGB1组比较，冻干粉组和含药血清组能浓度依赖性地降低细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、NF-κB含量，且0.25%和0.30%冻干粉组及15%、20%和25%含药血清组含量降低（P<0.05，P<0.01）；浓度依赖性抑制TLR2、MyD88、NF-κB蛋白表达，且0.30%冻干粉组和25%含药血清组抑制作用明显（P<0.01）；补肺汤冻干粉与含药血清各浓度组间各指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论?补肺汤冻干粉及含药血清对HMGB1 诱导的A549和HFL1细胞损伤有保护作用，并能减轻炎性因子的释放，机制可能与下调TLR2/MyD88/NF-κB信号通路有关。     

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨银杏二萜内酯对糖尿病大鼠视网膜病变的影响

[目的]研究银杏二萜内酯（GDL）对糖尿病大鼠视网膜病变的影响,并基于Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路探索其可能的作用机制。[方法]采用高糖高脂饮食加腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素（STZ）的方法构建糖尿病视网膜病变大鼠模型,设模型组、GDL(2.3 mg/kg)组、TAK242(TLR4抑制剂,3 mg/kg)组、GDL+TAK242(2.3 mg/kg+3 mg/kg)组;另设正常对照组。各组分别每日1次腹腔注射给药治疗14 d后,测定空腹血糖（FBG）水平、视网膜厚度和视网膜血管通透性,通过苏木精-伊红（HE）染色、TUNEL染色观察视网膜病理改变和细胞凋亡,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测视网膜炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]含量,Western blot法检测视网膜TLR4、NF-κB、p-NF-κB、NF-κB抑制因子（IκBα）、p-IκBα、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达。[结果]与模型组相比,GD...     

四磨汤通过调控NF-κB信号通路改善重度脓毒症大鼠结肠上皮细胞屏障功能障碍炎症状态作用研究

目的:探讨四磨汤对重度脓毒症大鼠结肠上皮细胞屏障功能障碍炎症状态的改善作用以及其对核转录因子κB(NF-κB)信号的调控机制。方法:采用盲肠结扎穿孔术(CLP)构建大鼠重度脓毒症模型；实验分组为正常组、模型组、四磨汤低剂量组、四磨汤高剂量组、激活剂组，每组10只；试剂盒检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量；末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)缺口末端标记(TUNEL)染色检测各组大鼠结肠组织的细胞凋亡；免疫荧光检测结肠组织中高迁移率蛋白-1(HMGB1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的表达；免疫组化检测结肠中白细胞共同抗原(CD45)、闭合蛋白1(Claudin-1)和闭锁蛋白1(ZO-1)的表达；Western blot法检测结肠组织中NF-κB、磷酸化NF-κB65 (NF-κB p65)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达。结果:四磨汤能明显下调重度脓毒症大鼠血清中TNF-α和IL-6的含量；抑制结肠组织中的细胞凋亡，降低结肠组织中HMGB1和NLRP3的...     

款冬花散对COPD大鼠巨噬细胞极化的影响及其作用机制研究

目的 观察款冬花散对慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠肺巨噬细胞极化的影响及TLR4/NF-κB/NLRP3通路在介导巨噬细胞极化过程中的作用。方法 48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、罗红霉素组及款冬花散低、中、高剂量组,每组8只。建立COPD（痰热壅肺证）大鼠模型,采用款冬花散干预,HE染色评估肺组织病理改变,ELISA法对肺泡灌洗液中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平和肺组织iNOS、CD10水平进行定量检测,通过免疫组化和RT-PCR检测肺组织Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)的蛋白和mRNA表达水平。结果 与空白组相比,模型组大鼠BALF中IL-1β、IL-18含量升高,肺组织中一氧化氮合酶（iNOS）含量升高、CD10含量降低,肺组织中TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达上调（P <0.01）,而款冬花散组对COPD（痰热壅肺证）模型大鼠的生物学特征有一定改善作用,在一定程度上改善肺组织炎性改变,降低大鼠BALF中IL-1β、IL-18含量,降低肺组织i...     

基于HMGB1/TLR4/NF-κB通路探讨桃仁承气汤调节肠源性脓毒症大鼠肠道肌电活动及微环境稳态的作用机制

目的:基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)通路研究桃仁承气汤调节肠源性脓毒症大鼠肠道肌电活动及微环境稳态的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、甘草酸(HMGB1抑制剂,0. 03 g·kg~(-1))组、桃仁承气汤(10 g·kg~(-1))组、甘草酸+桃仁承气汤(0. 03 g·kg~(-1)+10 g·kg~(-1))组,每组12只。除假手术组外,其余各组建立肠源性脓毒症大鼠模型,各组分别以药物处理后,采用苏木素-伊红(HE)染色检测各组大鼠小肠黏膜组织病理改变,比较黏膜厚度、绒毛高度变化;采用试剂盒检测各组大鼠小肠黏膜组织分泌型免疫球蛋白A(sIgA)含量,血清二胺氧化酶(DAO)及D-乳酸水平;检测各组大鼠肠道肌电活动,比较小肠平滑肌慢波频率、慢波振幅;检测各组大鼠肠道菌群,比较大肠埃希菌、双歧杆菌和乳酸杆菌含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小肠组织中HMGB1/TLR4/NF-κB通路蛋白HMGB1,TLR4,MyD88,NF-κB p65表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠小肠黏膜组织绒毛高度、黏膜厚度,sIgA含量,平滑肌慢波频率及振幅、肠道双歧杆菌及乳酸杆菌含量显著降低,血清DAO及D-乳酸水平、肠道大肠埃希菌含量、小肠组织HMGB1,TLR4,MyD88及NF-κB p65蛋白表达明显升高(P0. 05);与模型组比较,桃仁承气汤组、甘草酸组、甘草酸+桃仁承气汤组大鼠小肠黏膜组织绒毛高度、黏膜厚度,sIgA含量、平滑肌慢波频率及振幅、肠道双歧杆菌及乳酸杆菌含量升高,血清DAO及D-乳酸水平、肠道大肠埃希菌含量、小肠组织HMGB1,TLR4,MyD88及NF-κB p65蛋白表达降低(P0. 05);与桃仁承气汤组、甘草酸组分别比较,甘草酸+桃仁承气汤组大鼠小肠黏膜组织绒毛高度、黏膜厚度,sIgA含量、平滑肌慢波频率及振幅、肠道双歧杆菌及乳酸杆菌含量升高,血清DAO及D-乳酸水平、肠道大肠埃希菌含量、小肠组织HMGB1,TLR4,MyD88及NF-κB p65蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P0. 05)。结论:桃仁承气汤可减轻小肠黏膜损伤,调控肠源性脓毒症大鼠肠道肌电活动及微环境稳态,恢复肠道功能,保持菌群平衡,可能是通过下调HMGB1/TLR4/NF-κB通路实现的。     

基于Notch1/NF-κB信号通路探讨芍药汤联合美沙拉嗪对溃疡性结肠炎大鼠的治疗作用

[目的]观察芍药汤（SYD）联合美沙拉嗪（MES）通过调控Notch1/NF-κB信号通路治疗溃疡性结肠炎（UC）大鼠的作用机制。[方法]60只SD大鼠随机分为正常组（N组）、模型组（M组）、SYD组（20 g/kg）、MES组（0.2 g/kg）及SYD+MES组（20 g/kg+0.2 g/kg）,每组12只。采用5%葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液连续喂养7 d制备UC大鼠模型,造模后连续灌胃给药14 d,给药后第7 d和第14 d进行大鼠疾病活动指数（DAI）、结肠黏膜损伤指数（CMDI）评分;ELISA检测大鼠血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的水平;HE染色观察结肠病理变化并进行组织损伤指数（TDI）评分;荧光定量PCR检测结肠TNF-α、IL-1β和IL-6mRNA的表达水平;Western Blot法检测结肠胞浆Notch1、Notch1胞内域（NICD）、TNF-α、IL-1β、IL-6、磷酸化核因子κB抑制因子α(p-IκBα)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达及胞核内NF-κB p65水平。[...     

杜仲提取物对类风湿关节炎大鼠免疫功能及TLR2/NF-κB/TNF信号通路的影响

目的 观察杜仲提取物对类风湿关节炎大鼠免疫功能及TLR2/NF-κB/TNF信号通路的影响。方法将35只SD大鼠分为正常对照组、模型组、杜仲低剂量组（杜仲提取物200 mg/kg）、氨甲蝶呤组（氨甲蝶呤0.75 mg/kg）、杜仲高剂量组（杜仲提取物800 mg/kg），每组7只，连续给药3周。采用冷水游泳+足跖部皮内注射CFAO制备类风湿关节炎模型。记录各组大鼠关节肿胀程度及关节指数评分，ELISA检测血清免疫球蛋白水平；流式细胞仪检测T淋巴细胞水平；HE染色观察关节病变；Western blotting检测大鼠踝关节滑膜组织中Toll样受体2(TLR2)、核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平。结果 与正常对照组相比，模型组大鼠左后足肿胀度、关节指数评分及免疫球蛋白水平、TLR2、NF-κB、TNF-α升高，CD4+、CD4+CD25+Treg水平降低（P <0.05），与模型组相比，杜仲低剂量组、氨甲蝶呤组、杜仲高剂量组大鼠左后足肿胀度、关节指数评分及免疫球蛋白水平、TLR2、NF-κB、TNF-α降低，CD4+、CD4+CD25+Tre...     

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路及相关分子的影响,探讨二陈汤加味对COPD抗炎作用的分子机制。方法:将40只SD大鼠随机平均分为正常组、模型组、二陈汤加味组和EVP4593(NF-κB抑制剂)组。以香烟烟雾联合气管滴注脂多糖(LPS)方法制备COPD大鼠模型。二陈汤加味组以10 g·kg~(-1)灌胃(ig),EVP4593组皮下注射1 mg·kg~(-1),正常组、模型组ig等量生理盐水,连续干预14 d。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1),趋化因子(CXCL)-2,CXCL-3和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测肺匀浆中TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平,免疫组化(IHC)检测TLR4,MyD88,磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)在大鼠肺组织中的定位表达。结果:与正常组比较,模型组肺匀浆中TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA及蛋白表达均显著增加(P0.01),HMGB1,CXCL-2,CXCL-3和MCP-1含量显著升高(P0.01)。与模型组比较,二陈汤加味组TLR4,MyD88,NF-κB p65mRNA及其蛋白表达均显著减弱(P0.05,P0.01),HMGB1,CXCL-2,CXCL-3和MCP-1含量显著降低(P0.05,P0.01)。结论:二陈汤加味对COPD有抗炎作用,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路相关信号分子基因的表达,以及减少HMGB1,CXCL-2,CXCL-3和MCP-1的释放有关。