流式细胞仪在膀胱癌多药耐受研究中的应用

目的：探讨流式细胞仪（ＦＣＭ）在膀胱癌多药耐受研究中的应用。方法：利用蛋白质印迹,免疫细胞化学和ＦＣＭ检测并比较膀胱癌多药耐受细胞ＥＪ／ＭＲＰ的多药耐受糖蛋白（Ｐ－ｐｇ）和多药耐受相关蛋白（ＭＲＰ）的表达;利用ＦＣＭ检测了ＥＪ／ＭＲＰ药物耐受的功能水平。结果：ＥＪ／ＭＲＰ高表达ＭＲＰ,无明显Ｐ－ｇｐ表达,ＦＣＭ的检测结果与蛋白质印迹,免疫细胞化学的结果一致,但检测更简便,功能检测显示柔红霉素（ＤＮ     

三种逆转剂对人膀胱癌多药耐受相关蛋白介导的多药耐受逆转的研究

目的：观察环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）、维拉帕米（Ｖｅｒ）、黄体酮（Ｐｒｏｇ）对膀胱癌多药耐受相关蛋白（ＭＲＰ）介导的多药面受（ＭＤＲ）的塑转作用。方法：分别采用ＭＴＴ方法和流式细胞仪检测观察ＣｓＡ、Ｖｅｒ和Ｐｒｏｇ塑转化疗药物ＶＣＲ对ＭＲＰ高表达的膀胱癌细胞的细胞毒性作用的塑转效果。以及地细胞内柔红霉素（ＤＮＲ）聚集、外排的影响。结果：ＣｓＡ和Ｖｅｒ作为多药耐受糖蛋白（Ｐｇｐ）的良好剂同样可以显著逆转ＶＣＲ对Ｍ％ＲＰ高表达的ＥＪ／ＭＲＰ细胞毒性作用,具有增加ＥＪ／ＭＲＰ细胞内ＤＮＲ的聚集百的作用。剂量越大作用越强;而Ｐｒｏｇ则无类似作用。结论：ＣｓＡ和Ｖｅｒ对人膀胱癌ＭＲＰ介导的ＭＤＲ具有良好的逆转作用。可通过增加细胞内的药物聚集和减少外排已进入细胞内的药物起作用。这种作用存在剂量依从关系。     

膀胱癌多药耐受相关蛋白和P53的表达及相关性分析

目的 :分析膀胱癌多药耐受相关蛋白 ( MRP)、突变型 P53( mt P53)的表达及两者的相关性。方法 :利用链霉亲和素生物素酶复合物法 ( SABC法 )检测了 93例膀胱癌和 1 0例正常膀胱粘膜的 MRP、mt P53表达 ,并分析了两者表达的相关性。结果 :膀胱癌与正常膀胱粘膜间的 MRP、mt P53表达差异分别有显著性意义 ( P <0 .0 5)和极显著性意义 ( P <0 .0 1 ) ;MRP和 mt P53表达具有较强的相关性 ( r=0 .682 ,P <0 .0 1 )。结论 :膀胱癌 MRP、mt P53的表达显著增强 ,两者表达具有密切的相关性。     

人膀胱癌多药耐受性细胞亚系BIU—87PR的建立及生物学特征

多药耐受肿瘤细胞系是研究肿瘤多药耐受性的良好实验模型。本研究通过使用单一浓度阿霉素短时冲击诱导的方法,历时5月,成功地诱导建立了人膀胱移行上皮癌多药耐受细胞亚系BIU-87PR。生物学鉴定表明,BIU-87PR对阿霉素的耐药性较敏感细胞BIU-87提高了2.1倍。对足叶乙■的耐药性提高了4倍.对长春新碱的敏感性提高了2.4倍.BIU-87PR的生物学特性与BIU-87相似,生长速率较慢,融合密度略降低,细胞轻度异形性,染色体分析显示双微体略增多.     

抗P—170单克隆抗体MRK—16对膀胱癌多药耐受的诊断及调节作用

本文通过抗P-170单克隆抗体免疫组化研究发现,不同诱导途径建立的人膀胱癌多药耐受(MDR)。细胞均表达P-170,说明P-170在人类膀胱癌MDR机制中起重要的中介作用,MRK-16对不同类型的人膀胱癌MDR均有特异性诊断价值。MRK-16具有明显的化疗增敏作用,不仅能明显提高膀胱癌MDR细胞的化疗效果,而且能轻度提高敏感细胞的化疗疗效,其增效作用具有剂量依赖性,并与细胞本身的耐药水平相关,说明MRK-16对人膀胱癌化疗具有明显的调节增敏作用。     

多药耐药相关蛋白研究进展

多药耐药相关蛋白是一种蛤导多药耐药性的跨膜转运蛋白，分布于细胞内及细胞膜上，能减少细胞内药物聚积，或改变药物内分布，从而降低化疗疗效。本文综述了多药耐药相关蛋白的结构，功能，基因表达及调控，在组织细胞中分布，以及多药耐药相关蛋白的诱导，耐药机制和耐药性逆转因素。     

多药耐药相关蛋白研究进展

多药耐药相关蛋白是一种介导多药耐药性的跨膜转运蛋白，分布于细胞内及细胞膜上，能减少细胞内药物聚积，或改变药物在细胞内分布，从而降低化疗疗效。本文综述了多药耐药相关蛋白的结构、功能、基因表达及调控、在组织细胞中分布，以及多药耐药相关蛋白的诱导、耐药机制和耐药性逆转因素。     

胃癌组织中多药耐药和多药耐药相关蛋白基因的表达及其意义

我们通过检测胃癌组织中多药耐药(multidrug resistance，MDR1)和多药耐药相关蛋白(multidrug resistanceassociated protein，MRP)基因表达，探讨其与肿瘤临床病理特征及其预后的关系。     

膀胱癌中缺氧诱导因子和多药耐药相关蛋白表达的组织芯片研究

目的 :利用组织芯片研究缺氧诱导因子 (HIF 1α)和多药耐药相关蛋白 (MRP)在膀胱癌中的表达及其相互间的关系。方法 :构建膀胱癌组织芯片 ,应用免疫组织化学SABC法检测 12 6例膀胱癌及正常组织中HIF 1α和MRP的表达。结果 :在 119例膀胱癌组织中 ,HIF 1α阳性表达率为 5 7.9% ,并随膀胱癌的临床分期升高而增加 (P <0 .0 1) ,尤其在G3 膀胱移行细胞癌中呈高表达 ,为 6 4 .6 % ,而且HIF 1α的表达与MRP的表达也密切相关 (P <0 .0 1)。结论 :HIF 1α的表达与MRP相关 ,抑制缺氧环境可提高膀胱灌注化疗效果。组织芯片技术在检测膀胱癌的原癌基因、抑癌基因及其相关蛋白质产物方面具有样本量大、检测指标多、耗时少和通量高等特点。     

胃癌体外药敏试验与多药耐药基因、多药耐药相关蛋白表达的关系

目的 探讨胃癌体外化疗药物敏感试验与胃癌组织中多药耐药基因（MDR1）和多药耐药相关蛋白（MRP）基因表达的关系。方法 收集42例手术切除胃癌标本，采用噻唑蓝（MTT）比色法进行胃癌原代细胞培养体外药物敏感试验，检测其对9种临床常用化疗药物的敏感性，并应用逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）检测胃癌组织中MDR1和MRP mRNA表达，分析药敏试验结果与MDR1、MRP mRNA表达的关系。结果42例胃癌组织中MDR1、MRP mRNA表达阳性率分别为38．1％和28．9％。CDDP、ADM和OXA耐药组中，MDR1 mRNA表达阳性率显著高于敏感组；在CDDP和HCPT耐药组中，MRP mRNA表达阳性率显著高于敏感组。结论MDR1和MRP高表达是胃癌对多种化疗药物具有耐药性的标志，结合体外药敏试验，有助于临床筛选有效的化疗药物。     

反义核酸对膀胱癌细胞系多药耐药性的逆转效应

目的 探讨多药耐药性逆转的新方法。方法 应用基因重组方法构建能转录出ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ反义ＲＮＡ的逆转录病毒质粒,然后将该质粒导入膀胱癌耐药细胞系中,测定转染细胞对不同药物的耐药性,观察反义核酸对ＭＤＲ的逆转效应。结果 耐药细胞经导入反义核酸逆转录病毒质粒后,对阿霉素（ＡＤＭ）、秋水仙素（ＣＯＬ）的ＩＣ５０显著降低（Ｐ〈０．０１）;细胞膜上Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ＧＰ）染色信号显著减弱。结论 反义核酸是逆     

蛋白激酶C-α在调节人膀胱癌T24细胞多药耐药中的作用

目的探讨蛋白激酶C-α(PKCα)对人膀胱癌T24细胞多药耐药的调节作用。方法将载有PKCα基因的表达质粒GFP-PKCα导入人膀胱癌细胞系T24。应用噻唑蓝(MTT)比色法,检测T24/PKCα及亲本细胞对阿霉素的敏感性,以及在激活(10nmol/LPMA2h)和抑制(10nmol/LCalphostinC2h)PKCα的情况下,T24/PKCα细胞对阿霉素敏感性的变化。同时用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测多药耐药基因-1(MDR-1)、多药耐药相关蛋白(MRP)和肺耐药相关蛋白(LRP)基因的表达。结果转染了PKCα基因后,T24细胞对阿霉素的耐药性增强(耐药指数7.52,P<0.05)。PKCα的激活显著提高了T24细胞的耐药性(耐药指数153.78,P<0.01),而抑制PKCα活性则使耐药指数降至1.20(P>0.05)。T24/PKCα的MDR-1表达水平是亲本细胞的2.28倍(P<0.01)。激活PKCα可使MDR-1基因表达水平较亲本细胞升高12.80倍(P<0.01),抑制PKCα则MDR-1表达下降(P>0.05),而MRP和LRP基因表达水平并无明显变化(P>0.05)。结论PKCα可能通过上调MDR-1表达,在人膀胱癌的化疗耐药中起到了重要的作用。     

肺耐药相关蛋白基因及基因产物在膀胱移行细胞癌中的表达

目的探讨肺耐药相关蛋白(LRP)在膀胱癌组织中的表达及与临床病理参数的关系。方法用半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术,检测66例(Ta期12例,T1期26例,T2期11例,T3期10例,T4期7例;G135例,G219例,G312例)术前未经任何治疗的原发膀胱癌患者癌组织及正常组织中LRP、多药耐药基因1(MDR1)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)mRNA表达,并用免疫组化法检测LRP、P53和P63蛋白的表达情况。结果(1)膀胱癌标本中,,LRPmRNA的表达率最高(64%,42/66);(2)LRPmRNA水平,正常膀胱组织(142±036)高于膀胱癌组织(080±033,t=282,P<001);低分级膀胱癌组织(G1为139±042)高于高分级癌组织(G2、G3为072±031,t=414,P<001),浅表膀胱癌组织(136±039)高于浸润癌组织(068±030,t=358,P<005);(3)LRPmRNA表达与MDR1或MRP1表达无关,但与其自身的蛋白表达密切相关(r=089,P<001);(4)LRP蛋白表达与低分级、低分期相关(r=081,P<001;r=078,P<005),但与P53、P63表达无关(P>005)。结论膀胱癌组织中,LRPmRNA与蛋白表达一致,且与肿瘤进展有关,可能是膀胱癌内源性多药耐药的预测指标。     

人膀胱癌多重抗药性逆转的实验研究

为探讨膀胱癌多重抗药性逆转机理，应用阿霉素（ＡＤＭ）大剂量短暂冲击结合低浓度持续递增法，获得了具有多重抗药性的ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞。通过测定细胞内ＡＤＭ聚积量和钙离子浓度，发现ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞内ＡＤＭ聚积量显著低于ＢＩＵ８７细胞（Ｐ＜００５）；维拉帕米（ＶＰＬ）、奎宁能使ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞内ＡＤＭ聚积量增加（Ｐ＜００５），两者协同应用基本上可逆转ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞的抗药性。结果表明：（１）细胞内ＡＤＭ聚积量减少是抗药细胞的重要变化，在细胞抗药性发生机理中可能起主导作用，（２）ＶＰＬ、奎宁能逆转ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞的抗药性，可能与增加细胞内ＡＤＭ聚积量有关，与钙通道无关。     

耐药相关蛋白在肾癌中的表达

为探讨耐药相关蛋白（ＭＲＰ）在肾癌中表达的意义，应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测２０例肾癌组织中ＭＲＰ表达。结果：ＭＲＰ阳性表达率为６０％，在胞浆和胞膜上均见表达，但以胞浆中（粗颗粒状）更显著。晚期肾癌（Ⅲ、Ⅳ期）阳性表达率为８９％，明显高于早期肾癌（Ⅰ、Ⅱ期）的３６％，Ｐ＜００５。结果认为ＭＲＰ与肾癌浸润转移相关，并可能是其内源性耐药的重要机制之一     

AP-1反义寡聚脱氧核苷酸逆转人膀胱癌耐药细胞多药耐药的实验研究

目的 观察以激活剂蛋白-1(AP-1)位点为靶序列的特异性反义寡聚脱氧核苷酸(a-sODNs)对人膀胱癌耐药细胞株多药耐药性的逆转作用。方法 设计针对谷胱甘肽(GSH)生物合成的限速酶γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因启动子区域AP-1序列的特异性asODNs，用阳离子脂质体包被后转染人膀胱癌细胞株BIU87及其多药耐药(MDR)亚株BIU87／A，然后分别用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法[以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照]、荧光分光光度法、MTT法等检测AP-1-asODNs对两株细胞γ-GCSmRNA表达、细胞内GSH水平及其对6种抗癌药物肿瘤细胞抑制率的变化。结果 AP-1-asODNs转染72h后，BIU87和BIU87／A细胞的γ-GCS mRNA的表达和细胞内GSH的水平均出现下降。同时6种抗癌药物对反义转染后的两株细胞的抑制率大部分都有所提高。结论 γ-GCS特异的AP-1-asODNs可通过降低细胞内的GSH水平增强膀胱癌细胞对化疗的敏感性，逆转肿瘤细胞的耐药。     

胆管癌耐药相关蛋白LRP和P170的表达及临床意义

目的：探讨胆管癌组织中肺耐药蛋白（LRP）和P糖蛋白（P170）的表达情况及其临床意义。方法：收集手术切除的21例胆管癌标本,采用免疫组织化学方法检测组织中LRP及P170的表达及其与临床病理因素的关系。结果：LRP和P170在胆管癌组织中的表达阳性率分别为61.9%和66.7%,显著高于对照组的12.5%和25.0%（P〈0.05）。上述指标与性别、年龄、病理分期、分化程度、淋巴结转移均无关（P〉0.05）。结论：LRP和P170在未经化疗的胆管癌组织中均有不同程度的高表达,胆管癌的原发性多药耐药可能与LRP和P170有关。