吩噻嗪类化合物抑制肿瘤细胞多药耐药及蛋白激酶C活性的三维构效关系研究

目的：利用本室诱导建立的耐药细胞株K562/A02,研究在体外条件下吩噻嗪类衍生物(PTZs)逆转多药耐药(MDR)活性的构效关系。方法与结果：利用已知PKC Cys 2功能区晶体结构,结合计算化学和分子图形学手段对PKC抑制剂与PKC蛋白分子间可能的相互作用模式进行探讨。结果表明,2位取代各种基团逆转MDR作用强度依次为：COC₃H₇>CF₃>COCH₃>H。边链哌嗪环4′-位取代基作用强度为:CH₃>COOC₂H₅>C₂H₄OH。结论：选出代表性化合物测定对鼠脑的抑制活性,初步三维构效关系研究表明,PTZs抑制PKC活性确实与特定的立体结构特征有关。本研究为进一步探索PTZs,PKC和MDR三者间的内在机制和设计有效PKC抑制剂或多药耐药逆转剂提供了新的途径。     

蛋白激酶C与多药耐药

蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）由多种亚类组成。多种多药耐药（ＭＤＲ）细胞内ＰＫＣ含量／活性高于相应的敏感细胞。在体外，敏感细胞经ＰＫＣ激活剂诱导或转染编码ＰＫＣ的ｃＤＮＡ后可变为相应的ＭＤＲ细胞，提示ＰＫＣ在ＭＤＲ的发生，发展中起重要作用。其作用机制可能与ＰＫＣ调节ｍｄｒｌ基因表达和Ｐ１７０磷酸化有关。ＰＫＣ具异质性，各亚型在ＭＤＲ中的作用有所不同。     

P—糖蛋白介导的多药耐药逆转剂的构效关系

寻找高效、低毒、专属性的多药耐药逆转剂是肿瘤化疗中面解决的难题。但是由于其作用机制的本质仍不清楚，这一问题的解决很困难，鉴于Ｐ－糖蛋白的重要作用，研究其介导的多药耐药逆转剂的构效关系有助于揭示多药耐药性的产生及其逆转机制，设计理想的可用于临床的逆转剂，本概述了对多药耐药逆转剂构效关系研究方法的认识，总结了近来出现的一些逆转剂特定的构效关系，并介绍了这方面的研究状况。     

蛋白激酶C与多药耐药相关性的研究进展

蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）是磷脂依赖性蛋白激酶家族，由第二信使二酰基甘油（甘油二酯）（ＤＡＧ）激活。ＰＫＣ也是佛波酯类肿瘤促进剂，如ＰＤＢｕ和ＴＰＡ的高亲和力受体，而且可被这些肿瘤促进剂激活。ＰＫＣ活化是一系列细胞级联信号传导途径的关键环节，在细胞的发育、...     

蛋白激酶C与P—糖蛋白介导的肿瘤多药耐药

肿瘤细胞的多药耐药是化疗失败的重要原因，严重影响肿瘤的预后。蛋白激酶Ｃ是一族结构相近，具有异质性的同工酶，参与细胞信号传递，蛋白质的磷酸化等多种生理、生化及病理过程。近年来的研究表明，ＰＫＣ与Ｐ－糖蛋白介导的ＭＤＲ有关，ＰＫＣ可能通过调节ｍｄｒ１基因和Ｐ－ｇｐ而在ＭＤＲ中起作用，ＰＫＣ抑制剂在ＭＤＲ的逆转方面具有一定作用。     

P-糖蛋白抑制剂及其构效关系研究进展

P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）是一种ATP依赖性的跨膜转运蛋白,可将多种结构和药效不同的化合物排出细胞。P-gp具有重要的病理生理功能,既影响药物的体内过程,也是肿瘤产生多药耐药的主要原因之一。因此,开发P-gp的抑制剂对于药物代谢动力学行为的调节及逆转肿瘤多药耐药具有重要意义。本文总结了近年来P-gp抑制剂开发及构效关系（structure-activity relationship,SAR）的研究进展,这对进一步筛选及合成理想的P-gp抑制剂有重要的指导作用。     

中药逆转肿瘤细胞多药耐药的研究现状

综述中药在逆转肿瘤细胞的多耐药（MDR）方面的研究现状。肿瘤细胞的多药耐药性，是目前导致化疗失败的主要原因。解决肿瘤细胞的MDR问题．是提高肿瘤化疗疗效的重要举措。     

9种黄酮类化合物对肿瘤细胞的抑制活性及构效关系研究

目的研究9种黄酮类化合物对3种肿瘤细胞的增殖抑制作用及构效关系。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法体外检测黄酮化合物对Bel-7402(人肝癌细胞)、Hela(人宫颈癌细胞)和HT-29(人结肠癌细胞)3种癌细胞模型的抗肿瘤活性。结果 9种黄酮化合物对3种肿瘤细胞具有抑制作用,其中木犀草素活性最显著(IC50:12.81,19.02,19.69),通过对9种黄酮化合物IC50值对比,发现黄酮母核、2,3位双键、5-OH和3′,4′-OH的存在对抑制肿瘤细胞的增殖具有显著的作用。结论黄酮化合物对肿瘤细胞的增殖抑制作用与其结构有一定的相关性,为以后黄酮化合物及其衍生物的研究提供参考。     

姜黄素衍生物的药理活性及构效关系研究进展

姜黄素具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗抑郁和抑制组织因子等多种药理作用.本文综述了近几年姜黄素衍生物药理活性的研究现状,论述了姜黄素及其衍生物的结构与其抗氧化、抗炎和抗肿瘤的药理作用的关系,为姜黄素的开发利用提供基础.     

Protein Kinase C Activators as Synaptogenic and Memory Therapeutics

The last decade has witnessed a rapid progress in understanding of the molecular cascades that may underlie memory and memory disorders. Among the critical players, activity of protein kinase C (PKC) isoforms is essential for many types of learning and memory and their dysfunction, and is critical in memory disorders. PKC inhibition and functional deficits lead to an impairment of various types of learning and memory, consistent with the observations that neurotoxic amyloid inhibits PKC activity and that transgenic animal models with PKCβ deficit exhibit impaired capacity in cognition. In addition, PKC isozymes play a regulatory role in amyloid production and accumulation. Restoration of the impaired PKC signal pathway pharmacologically results in an enhanced memory capacity and synaptic remodeling / repair and synaptogenesis, and, therefore, represents a potentially important strategy for the treatment of memory disorders, including Alzheimer's dementia. The PKC activators, especially those that are isozyme‐specific, are a new class of drug candidates that may be developed as future memory therapeutics.     

反义寡脱氧核苷酸抑制多药耐药基因mdr1表达并逆转耐药肝癌细胞的体外试验研究

目的:探讨反义寡脱氧核苷酸(ASODN)抑制多药耐药基因(mdr1)对耐阿霉素(ADM)肝癌细胞HepG2/ADM化疗敏感性的影响。方法:以多药耐药基因mdr1人工合成寡脱氧核苷酸(ODN),其中ODN分为ASODN和正义寡脱氧核苷酸(SODN),并采用脂质体转染技术将ODN与HepG2/ADM共培养,试验分为反义寡脱氧核苷酸(mdr1-ASODN)处理组、正义寡脱氧核苷酸(mdr1-SODN)对照组和空白对照组,通过逆转录聚合酶链式反应和蛋白免疫印迹法观察HepG2/ADM细胞中mdr1mRNA及其蛋白表达情况;MTT法观察HepG2/ADM细胞转染mdr1-ASODN前、后对化疗药物(ADM、顺铂、5-氟尿嘧啶)的敏感性。结果:与mdr1-SODN对照组和空白对照组比较,mdr1-ASODN处理组HepG2/AMD细胞中mdr1mRNA及其蛋白表达均明显降低(P<0.05);与转染前比较,HepG2/ADM细胞的增殖抑制率明显增加(P<0.05)。结论:ASODN能有效抑制mdr1基因表达,并恢复肝癌HepG2/ADM细胞对化疗药物的敏感性。     

Reversal of Dopamine Inhibition of Dopaminergic Neurons of the Ventral Tegmental Area is Mediated by Protein Kinase C

Adaptation of putative dopaminergic (pDA) neurons in the ventral tegmental area (VTA) to drugs of abuse may alter information processing related to reward and reinforcement and is an important factor in the development of addiction. We have demonstrated that prolonged increases in the concentration of dopamine (DA) result in a time-dependent decrease in sensitivity of pDA neurons to DA, which we termed DA inhibition reversal (DIR). In this study, we used extracellular recordings to examine factors mediating DIR. A 40 min administration of DA (2.5–10 μM), but not the DA D2 receptor agonist quinpirole (50–200 nM), resulted in inhibition of neuronal firing followed by DIR. In the presence of 100 nM cocaine, inhibition followed by DIR was seen with much lower DA concentrations. Reversal of quinpirole inhibition could be induced by an activator of protein kinase C, but not of protein kinase A. Inhibitors of protein kinase C or phospholipase C blocked the development of DIR. Disruption of intracellular calcium release also prevented DIR. Reduction of extracellular calcium or inhibition of store-operated calcium entry blocked DIR, but the L-type calcium channel blocker nifedipine did not. DIR was age-dependent and not seen in pDA VTA neurons from rat pups younger than 15 days postnatally. Our data indicate that DIR is mediated by protein kinase C, and implicate a conventional protein kinase C. This characterization of DIR gives insight into the regulation of autoinhibition of pDA VTA neurons, and the resulting long-term alteration in information processing related to reward and reinforcement.     

反相离子对HPLC法测定细胞中蛋白激酶活性

建立一种用 ＨＰＬＣ测定细胞中蛋白激酶活性的方法。方法：μＲｏｎｄｏｐｋａ Ｃ１８柱;流动相：甲醇：磷酸盐缓冲液（２０：８０ｖ／ｖ,内含５ ｍｍｏｌ／Ｌ ＰｉＣＡ,ｐＨ ７．０）;检测波长为２５９ ｎｍ;柱温：室温;灵敏度：０．０１ ＡＵＦＳ;进样 ２０ μｌ。结果：酶蛋白用量 ０． ３ ｍｇ左右、反应时间为 １０ ｍｉｎ、Ｈｉｓｔｏｎｅ（ Ⅲ－Ｓ）用量 １ｍｇ／ｍｌ、 ＡＴＰ浓度 ５００ μｍｏｌ／Ｌ时,活性测定结果理想。ＡＴＰ回收率为９９．６３％,ＲＳＤ为１．１１％（ｎ＝６）。结论：该方法简便、准确,适合于蛋白激酶的活性测定。     

人参皂苷Rh2逆转MCF-7/ADM多药耐药性的研究

目的观察人采用人参苷Rh2对逆转人乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADM的分子机制。方法采用MTT比色法对不同浓度下人参皂苷Rh2对MCF-7/ADM的阿霉素(ADM)以及氟尿嘧啶(Fu)耐药逆转指标检测,同时使用多功能酶标仪检测人参皂苷Rh2干预对细胞内罗丹明123荧光强度以反映其对细胞多药耐药蛋白P-gp活性的影响。结果经过人参皂苷Rh2的干预,MCF-7/ADM对ADM以及Fu两种临床常用化疗的敏感性增强。另外,人参皂苷Rh2还对细胞的罗丹明123外排有显著的浓度依赖性抑制作用。结论人参皂苷Rh2能够有效逆转MCF-7/ADM多药耐药性,其作用机制可能主要为抑制了细胞多药耐药蛋白P-gp的活性。     

肿瘤多药耐药机制及逆转药物的研究进展

导致肿瘤多药耐药的机制很复杂,主要涉及有：ATP结合盒型转运蛋白超家族、DNA甲基化、细胞凋亡、拓扑异构酶Ⅱ、谷胱甘肽解毒系统及相关多药耐药信号通路等,这些机制单独或共同存在而导致耐药。逆转肿瘤多药耐药的方法主要有：化疗增敏剂、中药逆转剂和基因工程技术逆转耐药等。本文就肿瘤多药耐药机制的研究进展及逆转耐药的方法作一综述。     

中药抗肿瘤多药耐药机制的研究进展

肿瘤治疗中化疗药物的使用很大程度上抑制了肿瘤的生长,复发及转移,但肿瘤多药耐药现象的出现严重影响了化疗的疗效及肿瘤患者的生存期。多药耐药是肿瘤细胞在接触某种化疗药物之后,对其产生耐药性,同时对其他结构类似的化疗药物也产生交叉抗药性的一种肿瘤治疗进程中出现的难题。越来越多的中药制剂已表现出逆转肿瘤多药耐药的潜力,对其作用机制的研究也越发得到关注。本文将综述一下中药抗肿瘤多药耐药的广泛机制,并以胃癌为例进行较详细阐述,最后提出一些中药抗肿瘤多药耐药的研究新思路。     

葛根素对肾癌GRC-1 细胞多药耐药的逆转作用

目的探讨葛根素对肾癌GRC-1细胞多药耐药的逆转作用。方法体外培养GRC-1人肾细胞癌株,并分为空白对照组、阿霉素处理组（10mg·L^-1ADM）、葛根素处理的对照组（0．48g．L^-1Pur）、阿霉素联合葛根素处理组（10mg．L^-1ADM＋0．24g·L^-1Pur或10mg．L^-1ADM＋0．48g．L^-1Pur）,药物处理24h后,采用细胞毒性实验检测GRC-1细胞的生存率,用流式细胞术（Annexin-V／PI双标记）及TUNEL法检测细胞的凋亡情况。结果以对照组细胞生存率为100％,ADM组细胞生存率为（69．7±0．04）％,显著低于对照组（P〈0．05）,经0．12、0．24和0．48g．L^-1Pur联合用药后,细胞生存率分别为（70.1±0．03）％、（63．2±0．02）％和（42.1±0．04）％,均明显低于空白对照组（P〈0.05）,且0．24和0．48g．L^-1Pur联合用药的细胞生存率显著低于ADM处理组（P〈0.05）;012和0.24g．L^-1Pur单独用药的细胞生存率分别为（97．4±0．02）％和（90．1±0．01）％,与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,而0．48g．L^-1Pur单独用药的细胞生存率为（75．0±0.03）％,显著低于空白对照组（P〈0.05）。此外,与空白对照组相比,0．24和0．48g·L^-1Pur处理细胞后,细胞凋亡率明显升高（P〈0．05）,且随Pur剂量增加而升高;而0.24和048g·L^-1Pur联合用药组细胞凋亡率均明显高于ADM组（P〈0．05）。结论葛根素可有效促进肾癌GRC-1细胞的凋亡,并可减轻GRC-1细胞对阿霉素的耐药性.     

复方当归注射液逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

目的:研究复方当归注射液对人红白血病多药耐药(MDR)细胞株K562/A02MDR1、多药耐药相关蛋白(MRP)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、谷光甘肽-S-转移酶-π(GST-π)基因及其相应蛋白表达的影响。方法:采用台盼蓝染色法检测复方当归注射液的细胞毒作用;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法分别检测复方当归注射液在非细胞毒浓度(IC10)作用下对K562/A02细胞上述基因及其表达的影响。结果:复方当归注射液作用后,K562/A02细胞中MDR1基因及P-gp表达降低(P<0.01);TopoⅡ蛋白表达增高(P<0.01),TopoⅡ基因表达无显著变化(P>0.05);MRP、GST-π基因及其蛋白的表达无明显变化(P>0.05)。结论:复方当归注射液能部分逆转K562/A02细胞的耐药性,其作用机制可能与下调K562/A02细胞MDR1mRNA的表达,导致细胞膜上P-gp的表达量减少及在蛋白水平上调K562/A02细胞TopoⅡ的表达有关。     

卡莫氟固脂纳米粒的制备及其体外逆转人大肠癌细胞多药耐药性研究

目的 研制卡莫氟固脂纳米粒（HCFU-SLN）并检测其相关参数,考察其对大肠癌细胞（CCL-187）多药耐药的逆转作用。方法 采用溶剂乳化法制备HCFU-SLN,透射电镜观察其外部特征,激光粒度仪测定其粒径和粒径分布,MTT法考察其对CCL-187多药耐药的逆转作用。结果HCFU-SLN外观圆整,平均粒经为（172.9±70.5） nm,包封率为92.0%。其对敏感细胞的细胞毒作用与游离卡莫氟的作用差异无显著性,对耐药细胞的杀伤力较游离卡莫氟显著增强（P＜0.05＝,CCL-187对HCFU SLN的敏感性是对游离卡莫氟的5.5倍。结论卡莫氟固脂纳米粒可有效逆转人大肠癌细胞多药耐药。