c-jun反义核酸对自体移植静脉内膜增生和ET-1水平的影响

目的 :观察反义c - jun核酸对自体移植静脉内膜增生及血管活性因子内皮素 - 1(ET - 1)的影响。方法 :选择 6 0只SD大鼠 ,等分为实验组和对照组 ,均行自体颈外静脉、腹主动脉移植手术 ,实验组移植静脉周围和血管吻合口周围应用反义c- jun核酸凝胶涂布 ;对照组仅行凝胶涂布。于手术时取静脉血 1ml,放射免疫分析检测血浆ET - 1的水平。术后 2周取出移植血管 ,分别行病理学、免疫组织化学检测移植血管内膜厚度 ,内膜平滑肌细胞数及增殖细胞核抗原和脱氧核糖核酸反映血管平滑肌细胞增殖情况的指标的表达情况。同时在另一侧颈外静脉取静脉血 1ml,仍采用放射免疫分析检测血浆ET - 1水平。结果 :移植静脉术后动脉化 ,管壁增存 ,血浆ET - 1水平升高 ,但转染c - jun反义核酸组移植血管内膜厚度及VSMC增殖均较对照组减少 ,PCNA和DNA阳性表达情况亦较对照组明显减少 ,血浆ET - 1水平升高幅度低于对照组。结论 :反义c - jun核酸可抑制VSMC分裂而减少VSMC的增殖 ,降低促进血管收缩和细胞增殖的ET - 1的表达 ,从而有效地抑制移植静脉内膜的过度增生。     

联合转染NOS基因、反义ET核酸对移植静脉血管内皮细胞功能影响的研究

目的：从蛋白分子水平探讨联合转染内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因、反义内皮素（ET）核酸对移植静脉血管内皮素细胞功能的保护作用。方法：选择20只大鼠,随机等分为实验组和对照组,均行自体颈静脉腹主动脉移植手术,实验组移植颈静脉在腺病毒介导eNOS基因转染后实施移植手术,吻合后移植血管周围应用反义ET核酸凝胶涂布,对照组移植静脉无eNOS基因转染,仅行凝胶涂布,无任何药物。利用放射免疫分析法和Griss方法动态观察血浆ET、NO水平,并比较两组之间的差别。结果：实验组血浆ET水平明显低于对照组,而NO则高于对照组,实验组于术后7天接近术前水平,而对照则于术后14天接近术前水平。结论：联合转染eNOS基因和反义ET核酸可有效地保护移植血管内皮细胞,促进血管内皮细胞正常内分泌功能的恢复。     

纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄

背景：前期研究成果,纤维蛋白胶不仅是一种良好的非限制性、生物可降解血管外支架,能够预防移植静脉内膜和中膜增生,而且是一种良好的药物缓释系统,能够提高血管外膜基因转染效率。 目的：验证应用纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄的作用。 方法：建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型,随机分为模型组、纤维蛋白胶支架组、纤维蛋白胶联合反义PNCA组。后两组分别给予纤维蛋白胶和纤维蛋白胶与携带PCNA反义寡核苷酸腺病毒的混合物于静脉桥外周均匀喷洒。 结果与结论：移植后第28天模型组静脉移植物内膜和中膜增生明显,纤维蛋白胶外支架组静脉移植血管内膜和中膜增生程度明显减少(P  < 0.01),纤维蛋白胶联合反义PNCA组内膜和中膜增生程度明显少于纤维蛋白胶外支架组(P  < 0.05)。纤维蛋白胶联合反义PNCA组PCNA基因mRNA及蛋白表达明显减少纤维蛋白胶外支架组(P < 0.05),纤维蛋白胶外支架组表达明显弱于模型组(P  < 0.05)。提示血管外膜反义PCNA转染可进一步抑制移植静脉管壁PCNA表达,纤维蛋白胶外支架联合反义PCNA对移植静脉内膜和中膜增生有协同抑制作用。     

阿托伐他汀对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的： 探讨新型降脂药阿托伐他汀对自体移植静脉内膜增生的影响。 方法： 将Wistar大鼠颈外静脉移植于腹主动脉,建立大鼠自体静脉移植模型,实验分为3组：假手术组、移植对照组和移植实验组。自术后第1 d起,对移植实验组大鼠经胃管灌注给予阿托伐他汀(5 mg·kg-1·d-1)处理。干预4周后取移植静脉组织标本,制备4 μm厚组织切片,行病理组织学观察分析移植静脉内膜增生情况,行免疫组化染色分析新生内膜细胞SMα-actin和PCNA的表达情况。 结果： 移植对照组和实验组移植静脉内皮下层SMα-actin染色阳性平滑肌细胞大量增生,导致静脉内膜显著增厚,血管管腔明显狭窄。新生内膜定量分析显示移植实验组移植静脉内膜增生受到明显抑制,其新生内膜面积及新生内膜/中膜面积比均显著低于对照组(P<0.01);并且实验组移植静脉新生内膜细胞PCNA标记指数显著低于对照组(P<0.01)。 结论： 阿托伐他汀通过抑制新生内膜平滑肌细胞的增殖能有效抑制自体移植静脉内膜增生的发生发展,在防治血管重建术后再狭窄方面显示出良好的应用前景。     

超声波辅助转染PDGF-B mRNA的反义寡肽核酸抑制兔动脉再狭窄

目的：探讨反义寡肽核酸在体内对血管平滑肌细胞增殖和再狭窄的影响。方法：建立兔髂动脉再狭窄模型，用合成的反义寡PNA作为药物以超声波辅助转导局部血管壁细胞，分别用原位分子杂交和LSAB免疫组织化学法检测PDGF-B mRNA和PCNA表达；用形态测量法检测血管内膜厚度和面积。结果： PNA显著抑制损伤后1周内膜VSMCs表达PCNA和PDGF-B mRNA，与对照组相比抑制率分别为84.19%和63.95%；显著减少血管内膜厚度和面积。 结论：反义寡PNA可阻止兔VSMCs增殖及内膜增生。     

转染PDGF-B反义核酸和tPA基因预防狗冠脉搭桥术吻合口再狭窄

目的： 探讨联合应用组织型纤溶酶原激活物（tPA）基因质粒和血小板源性生长因子（PDGF-B）反义核酸预防冠状动脉搭桥术后吻合口再狭窄。方法： 建立狗冠状动脉搭桥术吻合口再狭窄模型，构建tPA基因质粒并设计合成（PDGF-B）反义寡核苷酸，在冠状动脉搭桥术同时以超声波辅助转染心肌细胞和吻合口血管平滑肌细胞，采用常规病理、免疫组织化学、原位杂交以及形态测量方法观察对吻合口局部血栓形成、血管内膜细胞增殖细胞核抗原（PCNA）和PDGF-B mRNA表达以及内膜增生的影响。结果： 成功转染tPA基因和（PDGF-B）反义核酸；2种基因联合应用显著抑制血管内膜细胞表达PCNA和PDGF-B mRNA，抑制率分别为65.01%和81.75%；显著减少局部血管内膜厚度、内膜面积和吻合口血栓形成，使吻合口狭窄率显著减少62.63%。结论： 联合转染tPA表达质粒和PDGF-B的反义寡核苷酸在一定程度上抑制猪实验性冠状动脉搭桥术后吻合口再狭窄。     

BTEB2反义基因转染抑制血管平滑肌细胞增殖及其机制

目的：研究基本转录元件结合蛋白2（BTEB2）反义RNA对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响及其机制。 方法: 用BTEB2反义腺病毒载体Ad.ASBTEB2转染VSMC，通过RT-PCR检测BTEB2反义RNA在VSMC中的表达；经免疫印迹法检测BTEB2蛋白质表达；通过MTT比色法和流式细胞仪分别检测VSMC增殖及细胞周期；用免疫细胞化学方法分析增殖细胞核抗原（PCNA）、血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）和血小板源性生长因子B链（PDGF-BB）在VSMC中的表达情况。 结果: VSMC被Ad.ASBTEB2转染后，可检测到BTEB2反义RNA的表达; Ad.ASBTEB2转染可显著抑制VSMC的BTEB2蛋白表达及血清诱导的VSMC增殖，使VSMC出现明显的G0/G1期阻滞；Ad.ASBTEB2转染可显著抑制AngⅡ诱导的PCNA、AT1R和PDGF-BB表达。 结论: BTEB2反义RNA可显著抑制VSMC增殖; 这种抑制作用可能是通过抑制VSMC增殖相关基因AT1R、PDGF-BB和PCNA等的表达而实现的。     

内皮源性吲哚胺2,3-过氧化酶对自体移植静脉桥狭窄的抑制作用

目的:观察内皮源性吲哚胺2,3-过氧化酶(IDO)对自体移植静脉桥狭窄的抑制作用。方法:成年长耳大白兔32只,随机分为实验组和对照组,每组16只。实验组利用建立内皮细胞高表达IDO的颈静脉作为血管桥,对照组则利用质粒载体建立静脉桥。分离并切取2cm长颈外静脉,移植到自体同侧颈总动脉中。分别于术后当天、第7天、第14天和第21天取两组动物各4只,完整取下移植静脉桥,常规石蜡包埋,切片后分别行HE染色及PCNA免疫组化染色,计算静脉桥中膜厚度和平滑肌细胞PCNA阳性指数。结果:两组移植静脉桥中膜均有不同程度增厚,且有随移植时间延长而增加的趋势。移植后第21天实验组静脉桥中膜厚度测值明显小于对照组(P<0.05),且平滑肌细胞PCNA阳性指数明显低于对照组(P<0.05)。结论:内皮源性IDO对移植静脉内平滑肌细胞增生有抑制作用。     

PP60c-Src在血管紧张素II诱导的大鼠血管平滑肌细胞信息转导中的作用(英)

目的：本研究通过观察c-Src在AngII对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)的激活和c-Fos蛋白表达中的影响，以进一步阐明AngII促VSMC增殖的细胞内信息转导机制。方法： 原代和传代培养SD大鼠主动脉VSMC，以脂质体包裹反义c-Src寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides, ODNs)转染培养的VSMC以抑制c-Src蛋白表达和激酶活性。以未转染的VSMC为对照，观察10-7mol/L AngII刺激对转染的VSMC的MAPK活性和c-Fos蛋白表达的影响。蛋白免疫沉淀和酶自身磷酸化率法测定c-Src激酶活性；髓鞘碱性蛋白(MBP)底物磷酸化率测定MAPK激酶活性；Western blotting免疫印迹法测定c-Src和c-Fos蛋白表达情况。结果： 转染不同浓度反义c-Src ODNs的VSMC，c-Src蛋白含量呈浓度依赖性降低，c-Src激酶活性也显著 抑制，以Ang II刺激经转染反义c-Src ODNs的VSMC，c-Src激酶活性增幅仅为对照组的8.7%；MAPK活性仅为对照的1.6%；c-Fos蛋白表达的增幅为对照组的30.0%。结论： AngII可诱导VSMC c-Src激活和细胞内信息转导，且AngII引起的MAPK和c-fos的激活依赖于c-Src的激活，提示c-Src是AngII促血管平滑肌细胞增殖的重要信息分子。     

自体移植静脉模型中环氧化酶2表达及其与移植静脉狭窄的关系

背景：环氧化酶2是与炎症反应密切相关的酶,其表达程度可能与移植静脉的狭窄相关。 目的：观察环氧化酶2在移植静脉中的表达情况,分析环氧化酶2的表达与移植静脉血管狭窄的相关性。 方法：实验分为2组,实验组在建立兔自体颈外静脉-颈总动脉移植模型后应用环氧化酶2抑制剂干预,对照组建模后正常喂养,于静脉移植后2,8,12周观察移植静脉血管壁增生情况及血管中环氧化酶2表达的差异。 结果与结论：术后各移植静脉均保持通畅。正常静脉无明显环氧化酶2表达,移植静脉环氧化酶2表达明显增高。实验组移植静脉中环氧化酶2 mRNA表达较对照组低,移植静脉内膜及中膜增厚程度也低于对照组。结果表明,环氧化酶2在移植静脉中出现明显的表达增高,抑制移植静脉中环氧化酶2的表达可以减缓移植静脉血管壁的增生。     

Expression of cell cycle regulators during smooth muscle cell proliferation after balloon catheter injury of rat artery

Intimal hyperplasia is defined as the abnormal migration and proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) with deposition of extracellular matrix. However, the cell cycle regulatory mechanisms of injury-induced VSMC proliferation are largely unknown. To examine the expression kinetics of cell cycle regulatory factors which is known to be worked positively or negatively, we used rat balloon injury model. Marked induction of proliferating cell nuclear antigen (PCNA), G1/S cyclin-dependent kinase (cdk2), and its regulatory subunit (cyclin E) occurred between 1 and 3 days after balloon arterial injury, and this was sustained for up to 7 days and then declined. However, the induction of the negative regulators, p21 and p27, occurred between 3 and 5 days of injury, peaked after 7 and 14 days and was then sustained. VSMC proliferation after balloon catheter injury of the rat iliac artery is associated with coordinated expression of positive (cdk2, cyclin E and PCNA) and negative (p21, p27) regulators. Cell cycle regulators such as cdk2, cyclin E, p21, p27 may be suitable targets for the control of intimal hyperplasia.     

Inhibitory effect and mechanism of chuanxiongzine on multiplication of VSMC

Objective: To study the inhibitory effect of chuanxiongzine on vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation and explore its molecular biology basis. Methods: we selected the VSMC cultured 4～8 generation from rat aorta thoracalis as research object.The objects were divided into four groups( Ⅰ )control group, ( Ⅱ )chuanxiongzine(50 μg/ml)group, ( Ⅲ )chuanxiongzine (100 μg/ml) group and( Ⅳ ) chuanxiongzine (200 μg/ml) group. The inhib itory effect of chuanxiongzine on VSMC proliferation was investigated by cell counting, MTT and 3H-TdR incorporation assay. In order to illuminate the molecular biology mechanism of chuanxiongzine inhibiting VSMCs proliferation, the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and C-myc were detected.Results: Chuanxiongzine could inhibit the proliferation of VSMC significantly in a dose- and time-dependent manner, compared with control group (P ＜ 0.05). The expression of PCNA and c-myc were inhibited obviously and correlated with the concentration of chuanxiongzine (P ＜ 0.05). Conclusion: Chuanxiongzine may play a considerable role in VSMC proliferation process. The inhibitory effect of chuanxiongzine in a dose- and time-dependent manner can be realized via down regulating the expression of PCNA and c-myc. In this study, The great theoretical fundament about Chinese medicine, which is used to treat atherosclerosis (AS), has been obtained.     

阿托伐他汀对移植动脉慢性排斥反应的抑制作用及机制

目的： 研究阿托伐他汀(atorvastatin)对大鼠移植动脉慢性排斥的抑制作用及机制。方法： 建立大鼠腹主动脉移植慢性排斥反应模型，分为3组：异系移植对照组、异系移植治疗组和同系移植组，60 d后对移植动脉行病理组织学检测，观察移植动脉内膜增生程度；并行免疫组织化学染色(SP法)，检测移植动脉增殖细胞核抗原（PCNA）和平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况,行硝酸还原酶比色法测定移植动脉组织NO的含量。结果： 异系移植治疗组血管内膜增厚程度(11.60%±2.40%)显著低于异系移植对照组(34.60%±6.40%,P<0.05)，高于同系移植组（1.15%±0.65%,P<0.05）；PCNA在异系移植治疗组（4.80%±0.80%）表达明显低于异系移植对照组（18.40%±1.80%,P<0.05），高于同系移植组（1.20%±0.40%,P<0.05）。 结论： 阿托伐他汀可抑制大鼠移植动脉慢性排斥反应，PCNA基因表达的下调可能是阿托伐他汀抑制移植动脉慢性排斥反应的机制之一。     

AT2R基因在体转染抑制大鼠颈动脉新生内膜增生

目的: 探讨AngⅡ 2型受体（AT2R）基因在体转染对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生的抑制作用。方法:大鼠颈动脉球囊损伤后，局部转染AT2R重组腺病毒载体（pAdCMV/AT2R）或空病毒载体（pAd-GFP），于术后7、14和21 d用RT-PCR、免疫组织化学及HE染色方法，进行AT2R、AngⅡ 1型受体(AT1R)、PCNA在颈动脉壁中表达的变化及定量组织形态学分析；免疫荧光双标染色和激光共聚焦技术检测血管中AT2R与PCNA表达的关系。结果: pAdCMV/AT2R转染后，大鼠颈动脉AT2R的表达水平显著高于未转染组和pAd-GFP组(P<0.01)，21 d时仍维持较强表达。在14 d时pAdCMV/AT2R组PCNA阳性表达率显著低于未转染组和pAd-GFP组［(27.29±5.81)% vs ( 72.25±4.47)%、(68.43±9.12)%，P<0.01］，在AT2R表达阳性的部位PCNA表达阴性。在21 d时，pAdCMV/AT2R组的内膜面积与中膜面积比显著低于未转染组和pAd-GFP组(0.78±0.06 vs 1.44±0.22、1.36±0.21, P<0.01)，pAd-GFP组和未转染组间无显著差异（P>0.05）；各组颈动脉AT1R表达水平无显著差异(P>0.05)。结论: AT2R基因在体转染可抑制球囊损伤后大鼠颈动脉平滑肌细胞增殖和新生内膜增生，AT2R基因转染后表达并发挥其生物学作用时，AT1R和AT2R之间不存在表达量上此起彼伏的关系，可能是建立在信号转导基础上的功能调节关系。     

神经肽Y对bcl-2、bax、fas基因表达和血管平滑肌细胞增殖的作用

目的:研究神经肽Y(NPY)对细胞凋亡相关基因表达和细胞增殖的作用。方法:应用生物化学比色法和荧光免疫组化定量技术观察NPY对血管平滑肌细胞(VSMC)中细胞凋亡相关基因bcl-2、bax及fas表达和细胞核增殖抗原(PCNA)的平均荧光值。结果:NPY作用下,细胞凋亡相关基因bcl-2、bax和fas表达及VSMC的增殖活度和PCNA明显高于对照组。结论:NPY可影响VSMC细胞凋亡的相关基因表达及增殖活动。