犀地凉血方对银屑病模型小鼠LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及相关炎症因子水平的影响

目的 探讨犀地凉血方治疗银屑病的机制。方法 将30只BALB/C小鼠随机分为对照组、模型组、甲氨蝶呤组及犀地凉血方低、中、高剂量组，每组5只。对照组小鼠背部脱毛区外涂凡士林，而其余各组小鼠则外涂咪喹莫特(IMQ)乳膏造模，并于造模当天给药干预。采用PASI评分对小鼠皮损情况进行评价，HE染色观察皮损病理形态学特征，IHC检测皮损组织中STAT3蛋白表达情况，qPCR及Western blot分别检测皮损组织中LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3基因及蛋白表达情况，ELISA法检测外周血中IL-17A、TNF-α、IL-22水平。结果 模型组小鼠出现典型的银屑病样皮损及相应的组织病理学改变，而犀地凉血方各剂量组能明显减轻小鼠皮损处红斑、鳞屑及浸润程度，降低PASI评分，并减轻表皮增生、角化过度及淋巴细胞浸润等。与对照组相比，模型组小鼠皮损组织中LncRNA NEAT1、STAT3高表达而miR-485-5p低表达；犀地凉血方各剂量组中LncRNA NEAT1、STAT3表达降低，miR-485-5p表达升高。与对照组相比，模型组小鼠外周血中IL-17A、TNF-α、...     

miRNA-188-5p表达下调通过调控PTEN/Akt途径抑制皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭能力

【摘要】 目的 探讨miRNA-188-5p（miR-188-5p）在皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）组织和细胞中的表达,分析其表达下调对皮肤鳞癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法 2012年11月至2018年10月在河南省新乡医学院第一附属医院收集50例手术切除的皮肤鳞癌组织及50例癌旁正常皮肤组织。实时荧光定量PCR（qPCR）检测皮肤鳞癌组织、癌旁正常皮肤组织、皮肤鳞癌细胞系SCL-1、A431、HSC-5和人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞中miR-188-5p的表达。培养的A431和HSC-5细胞分别分为2组：miR-188-5p抑制剂组和阴性对照组,对转染miR-188-5p抑制剂的细胞和阴性对照组细胞,通过qPCR检测miR-188-5p的相对表达（2-△△Ct）,并以CCK8法和Transwell小室分别检测各组细胞的增殖活性和侵袭能力。双荧光素酶报告实验检测miR-188-5p和PTEN的相互作用,Western印迹法检测PTEN、总Akt（t-Akt）和磷酸化Akt（p-Akt）的表达。两独立样本比较采用t检验。结果 皮肤鳞癌组织中miR-188-5p的相对表达（5.213 ± 3.138）显著高于癌旁正常皮肤组织（1.010 ± 0.364,t = 9.187,P < 0.001）。SCL-1、A431和HSC-5细胞中miR-188-5p的表达（3.858 ± 0.163、7.068 ± 0.262和4.572 ± 0.413）均显著高于HaCaT细胞（1.079 ± 0.300,t = 17.890、21.110和8.737,均P < 0.05）。与阴性对照组相比,miR-188-5p抑制剂组A431和HSC-5细胞miR-188-5p表达显著下调（均P < 0.01）,细胞增殖和侵袭能力下降（均P < 0.05）。双荧光素酶报告实验显示,miR-188-5p表达下调显著上调A431和HSC-5细胞中PTEN的表达,但抑制p-Akt的表达。结论 miR-188-5p在皮肤鳞癌组织和细胞中高表达,且miR-188-5p表达下调可能通过调控PTEN/Akt途径,抑制皮肤鳞癌细胞增殖活性和侵袭能力。     

miRNA-193b-5p抑制转录调节因子CITED2表达对黑素合成的影响

目的初步探讨miRNA(miR)-193b-5p对黑素合成的影响及可能机制。方法从健康男性包皮环切术后废弃的正常包皮组织中分离培养人原代黑素细胞。分别转染miR-NC模拟物(miR-NC mimics组)和miR-193b-5p模拟物(miR-193b-5p mimics组)至人原代黑素细胞及人黑素瘤MNT1细胞, 转染48 h时实时定量PCR(RT-qPCR)检测miR-193b-5p的过表达效率, 转染72 h时Western印迹检测黑素合成相关蛋白酪氨酸酶和小眼畸形相关转录因子的表达, 转染1周时采用氢氧化钠法测定细胞中黑素含量。通过TargetScan网站预测miR-193b-5p的靶基因并采用双荧光素酶报告实验验证, RT-qPCR及Western印迹检测miR-193b-5p过表达后该靶基因mRNA和蛋白表达水平的变化。两组间比较采用两独立样本t检验。结果人原代黑素细胞及人黑素瘤MNT1细胞中, miR-193b-5p mimics组miR-193b-5p的表达水平均显著高于miR-NC mimics组, t值分别为65.57、22.49, 均P < 0.001, 且...     

miR-545-3p抑制VEGFA/VEGFR2信号通路对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-545-3p(miR-545-3p)对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其对血管内皮生长因子A(VEGFA)/血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)信号通路的调控作用。方法 qRT-PCR检测miR-545-3p在不同前列腺癌细胞中的表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-545-3p与VEGFA的相互作用;MTT实验与流式细胞术检测miR-545-3p过表达及VEGFA过表达后前列腺癌细胞增殖能力及凋亡行为的变化;Western blot检测miR-545-3p过表达及VEGFA过表达后前列腺癌细胞CDK1、Bcl2、Bax及VEGFA/VEGFR2信号通路蛋白的表达水平变化。结果 miR-545-3p在前列腺癌细胞中的表达水平降低,与其他前列腺癌细胞相比,DU145细胞中miR-545-3p的表达水平较低;双荧光素酶实验证实miR-545-3p可调控VEGFA的表达及活性;miR-545-3p过表达可减弱前列腺癌细胞增殖能力,促进细胞凋亡;miR-545-3p过表达可下调VEGFA、p-VEGFR2、CDK1、Bcl2的表达,同时过表达VEGFA后可逆转miR-545-3p对前列腺癌细胞增殖及凋亡的作用。结论 miR-545-3p过表达可通过抑制VEGFA/VEGFR2信号通路而抑制前列腺癌细胞增殖及诱导癌细胞凋亡。     

miR-196-5 p靶向HOXA5激活JAK/STAT通路促进皮肤鳞状细胞癌的增殖、侵袭及EMT

目的:探讨miR-196-5p对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)增殖、侵袭和EMT的影响及其潜在的作用机制.方法:利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-196-5 p在癌旁正常组织、CSCC组织、A431细胞和HaCaT细胞中的表达水平.过表达或下调miR-196-5 p在A431细胞中的表达后,通过CCK-8...     

凉血消沱汤对角质形成细胞凋亡的影响

目的研究自拟方剂凉血消疕汤对角质形成细胞株HaCaT的增殖凋亡及细胞周期的影响作用。方法用MTT法和Annexin-V/PI双标流式细胞术分别检测自拟方剂凉血消疕汤的水提取液对HaCaT细胞株增殖、凋亡的影响;PI单标流式细胞术测该方的水提取液对HaCaT细胞株细胞DNA分布的影响。结果自拟方剂凉血消疕汤对角质形成细胞株HaCaT具有明显的增殖抑制作用,其抑制增殖作用呈量效关系。凉血消疕汤作用48h可诱导HaCaT细胞凋亡,10mg/mL作用48h时HaCaT细胞凋亡率达(31.77±5.88)%。凉血消疕汤处理组HaCaT细胞株细胞周期发生变化,细胞周期G_1期增加,S期缩短。结论自拟方剂凉血消疕汤可通过调控细胞周期进程、诱导细胞凋亡而有效抑制HaCaT细胞株细胞增殖。     

miR-20a靶向STAT3抑制角质形成细胞增殖参与银屑病的机制

目的探讨miR-20a是否可靶向调控STAT3表达影响角质形成细胞增殖参与银屑病发生发展过程。方法QPCR检测银屑病患者正常皮肤和皮损组织中miR-20a、STAT3的表达情况,统计分析二者间的表达相关性;QPCR检测miR-20a表达变化对STAT3水平的影响;LUC验证miR-20a和STAT3间的靶向关系;miRNA mimics和STAT3过表达载体共转染后,MTT检测HaCaT细胞的增殖活性。结果miR-20a在银屑病患者皮损组织中特异性低表达,STAT3在皮损组织中高表达,且miR-20a与STAT3表达呈负相关性;QPCR检测miR-20a表达变化对STAT3的影响后发现miR-20a可抑制STAT3表达;LUC实验发现miR-20a可靶向结合STAT3;MTT功能实验结果表明STAT3过表达可增强角质形成细胞增殖活性,而过表达miR-20a不仅可抑制细胞增殖活性和STAT3的表达,还可部分逆转STAT3对细胞增殖的促进作用。结论miR-20a可靶向STAT3抑制角质形成细胞过度增殖,在银屑病发生发展中发挥保护作用。     

miR-145对人角质形成细胞系HaCaT细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 研究miR-145对人角质形成细胞系HaCaT细胞增殖、细胞周期及凋亡的调控效应。 方法化学合成miR-145的模拟物,采用瞬时转染的方法过表达miR-145。采用实时PCR方法检测miR-145的表达。MTS方法检测过表达miR-145对HaCaT细胞增殖的影响。流式细胞仪分析过表达miR-145对细胞周期及凋亡的影响。采用荧光素酶实验,实时PCR和Western印迹鉴定NRAS是否为miR-145的靶基因。 结果 与阴性对照（NC）mimics转染组相比,miR-145 mimics转染组miR-145表达水平上调（85.00 ± 1.21）倍,两组差异有统计学意义（t = 115.90,P < 0.001）。转染miR-145 mimics有抑制HaCaT细胞的增殖作用（F = 8.76,P = 0.008）;转染后的时间因素（24、48、72、96 h）对细胞有影响（F = 17.85,P < 0.001）,转染mimics和培养时间之间不存在交互作用（F = 1.21,P = 0.18）。与NC mimics转染组相比,miR-145 mimics转染组的早期凋亡、晚期凋亡细胞比例均明显增加,差异有统计学意义（18.9% ± 4.1%比4.3% ± 1.2%,t = 7.126,P < 0.01;9.3% ± 2.3%比3.6% ± 1.6%,t = 12.38,P < 0.01）。与NC mimics转染组相比,miR-145 mimics转染组HaCaT细胞的G2及S期细胞比例均明显降低,差异均有统计学意义（6.26% ± 1.2%比19.36% ± 3.45%,t =7.610,P = 0.017;7.91% ± 1.3%比18.56% ± 5.23%,t = 7.230,P = 0.019）,而处于G1期的细胞比例升高,差异也有统计学意义（85.83% ± 5.2%比62.08% ± 6.23%,t = 11.78,P = 0.007）。与NC mimics联合psi-CHECK2-NRAS-wild组相比,在293T细胞中共转染miR-145 mimics和psi-CHECK2-NRAS-wild质粒,其荧光素酶值明显下降,miR-145可抑制含NRAS mRNA 3′UTR报告基因的荧光素酶表达（t = 11.09,P = 0.008）;而将NRAS mRNA 3′UTR报告基因上miR-145的结合位点进行突变后,转染miR-145 mimics对含NRAS mRNA 3′UTR报告基因的荧光素酶表达无明显的影响（P > 0.05）。实时PCR和Western印迹结果表明,过表达miR-145 mimics后,NRAS mRNA表达水平未出现明显变化（P > 0.05）,对NRAS蛋白水平的表达有明显的抑制（1.52 ± 0.07比0.20 ± 0.02,t = 28.43,P < 0.01）。 结论 miR-145可能通过NRAS影响HaCaT细胞的周期从而抑制细胞的增殖,同时促进HaCaT细胞的凋亡。     

长链非编码RNA NEAT1通过miR-34a靶向GAS1激活PI3K-AKT信号通路对宫颈癌的增殖、侵袭和上皮细胞-间充质转化的影响研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1对宫颈癌细胞增殖、侵袭和上皮细胞-间充质转化(EMT)的影响和机制研究。方法选取2019年10月购自上海生物细胞研究所的宫颈癌细胞株(Hela细胞)和人宫颈上皮永生化细胞株(H8细胞)作为研究对象。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NEAT1在Hela细胞和H8细胞中的差异表达,分析NEAT1对Hela细胞增殖、侵袭和EMT的影响。miRanda和双荧光素酶报告基因实验分析NEAT1和miR-34a之间的关系,检测NEAT1通过miR-34a对Hela细胞增殖、侵袭与EMT的影响,TargetScan和双荧光素酶报告基因实验分析miR-34a和GAS1的关系,检测miR-34靶向GAS1激活PI3K-AKT信号通路对Hela细胞增殖、侵袭和EMT的影响。分别用MTT、细胞侵袭实验和Western blot检测细胞的增殖、侵袭和EMT能力。结果 Hela细胞中NEAT1的表达上调(P0.01),miR-34a表达下调(P0.01),敲低NEAT1抑制了Hela细胞增殖、侵袭与EMT,NEAT1 3′UTR与miR-34a特异性结合。同时敲低NEAT1和miR-34a的表达,NEAT1表达的下调能部分逆转miR-34a下调对细胞功能的影响。同时过表达NEAT1和miR-34a, NEAT1能部分逆转miR-34a上调对细胞功能的影响。miR-34a和GAS13′UTR特异性结合,敲低GAS1抑制了Hela细胞增殖、侵袭与EMT,干扰GAS1抑制了Hela细胞p-PI3K、p-AKT蛋白的表达。和干扰miR-34a相比,同时抑制GAS1和miR-34a的表达能够逆转p-PI3K、p-AKT蛋白的上升。MK2206抑制了Hela细胞增殖、侵袭与EMT,而IGF-1促进了细胞的增殖、侵袭与EMT。结论 NEAT1通过miR-34a靶向GAS1激活了PI3K-AKT信号通路,从而促进宫颈癌的发展。     

miR-195靶向MYB激活PI3K-Akt通路调控皮肤鳞癌细胞增殖与恶性转移

 目的:探讨微小RNA-195（miR-195）对皮肤鳞癌细胞增殖与恶性转移的影响及其机制。方法:通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-195和MYB基因在皮肤鳞癌细胞（A431细胞）和人正常皮肤细胞（HaCaT细胞）中的表达。CCK-8实验检测过表达及下调miR-195对A431细胞增殖能力的影响;Western blot检测过表达及下调miR-195对A431细胞凋亡相关蛋白Bcl-2相关蛋白X（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）表达的影响;Western blot分析过表达及下调miR-195对A431细胞上皮细胞-间充质转化（EMT）的影响。TargetScan和双荧光素酶报告基因实验分析miR-195和MYB之间的关系,分析下调MYB对A431细胞增殖和EMT的影响。Western blot检测过表达MYB后对PI3K-Akt通路的影响。LY294002作用细胞后,检测过表达MYB对A431细胞增殖和EMT的影响。结果：与HaCaT细胞相比,A431细胞中miR-195表达明显下调（P<0.01）,MYB表达明显上调（P<0.01）。过表达miR-195抑制A431细胞增殖与EMT,促进细胞凋亡,下调miR-195则起到相反作用;miR-195和MYB具有靶向和负调控关系;下调MYB的表达抑制A431细胞增殖与EMT;过表达MYB激活细胞内PI3K Akt通路,且通过该通路促进A431细胞增殖与EMT。结论：miR-195通过靶向MYB激活PI3K-Akt通路调控A431细胞的增殖和转移。     

miR-142-3p/Sema3A轴调节角质形成细胞增殖凋亡及银屑病皮肤炎症反应

目的 旨在探讨miR-142-3p在M5刺激人表皮角质形成细胞HaCaT中的作用及潜在机制.方法 MTT法检测细胞增殖;ELISA凋亡检测试剂盒评估细胞凋亡.ELISA试剂盒测定炎症介质TNF-α、IL-22和IL-17A的分泌量.RT-PCR和Western blot分别测定目的基因mRNA和蛋白表达.荧光素酶报告实...     

过表达hsa＿circ＿0005986通过miR-129-5p/ABCB1轴促进宫颈癌细胞的增殖和转移

目的探讨hsa_circ_0005986对人宫颈癌细胞(SiHa细胞)增殖和转移的影响。方法 2021年3月从研域生物技术(上海)有限公司购入人宫颈癌细胞(SiHa细胞)和人正常宫颈上皮细胞(H8细胞)作为研究对象。利用实时荧光定量PCR检测SiHa细胞及人正常宫颈上皮细胞(H8细胞)中hsa_circ_0005986、miR-129-5p和ABCB1的表达量;分别利用CCK-8、细胞侵袭实验和Western blot检测下调hsa_circ_0005986对SiHa细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。miRanda和双荧光素酶报告基因实验检测hsa_circ_0005986和miR-129-5p之间的关系。下调miR-129-5p表达后,检测SiHa细胞的增殖、侵袭和EMT能力;检测hsa_circ_0005986通过miR-129-5p对SiHa细胞增殖、侵袭和EMT的影响。TargetScan和双荧光素酶报告基因实验检测miR-129-5p与ABCB1之间的关系。siRNA下调ABCB1表达,分析SiHa细胞增殖、侵袭和EMT能力。结果与H8细胞相比,SiHa细胞中hsa_circ_0005986和ABCB1表达上调(P0.01),miR-129-5p表达下调(P0.01)。下调hsa_circ_0005986明显抑制了SiHa细胞增殖、侵袭与EMT;hsa_circ_0005986与miR-129-5p具有靶向关系;上调hsa_circ_0005986通过miR-129-5p促进SiHa细胞增殖、侵袭与EMT。miR-129-5p靶向ABCB1。下调ABCB1表达抑制了SiHa细胞增殖、侵袭与EMT。结论过表达hsa_circ_0005986通过miR-129-5p/ABCB1轴促进SiHa细胞增殖、侵袭及EMT。     

miR-769-5p在急性中长波紫外线旁观者效应中的作用

目的探讨miR-769-5p在急性中长波紫外线旁观者效应中的作用。方法用miR-769-5p mimics转染人真皮成纤维细胞,培养24 h后取培养上清孵育旁观者细胞,培养48 h后检测细胞增殖率、凋亡率及氧化损伤水平。预先用miR-769-5p inhibitor下调细胞中miR-769-5p的表达,24 h后与辐射条件培养基共孵育,48 h后检测细胞的增殖率、凋亡率及氧化损伤水平。结果 miR-769-5p mimics可上调细胞中miR-769-5p的表达,过表达的miR-769-5p可通过上清在细胞间转移,且旁观者细胞的增殖水平明显降低,凋亡率和氧化损伤水平明显升高。使用miR-769-5p inhibitor下调细胞中miR-769-5p的表达,可以观察到急性中长波紫外线旁观者效应的减弱,即接受辐射条件培养基共孵育后,inhibitor预处理组的增殖水平明显高于对照组,凋亡率和氧化损伤水平明显降低。结论过表达的miR-769-5p能够被旁观者细胞摄取,并介导紫外线旁观者效应。     

miR-34a-5p对HaCaT细胞增殖及其靶基因Notch1表达的影响

目的: 检测miR-34a-5p对人角质形成细胞株HaCaT细胞体外增殖及其靶基因Notch1 mRNA表达的影响。方法: HaCaT细胞体外培养,优化转染浓度,分为4组进行转染：miR-34a-5p 模拟物组（minic 组）,阴性对照组（NC组）,miR-34a-5p 抑制物组（inhibitor组）,抑制物阴性对照组（inhibitor NC组）。MTT检测细胞增殖情况; RT-qPCR检测Notch1的mRNA表达情况。结果: 转染后48小时minic 组、inhibitor组细胞增殖活力分别为39.7%和15.7%,minic 组、inhibitor组与NC组（21.3%）相比,差异有统计学意义(Ps<0.05)。HaCaT细胞转染后,minic 组和inhibitor组Notch1表达量分别为2.78±1.30和0.37±0.46,与NC组(1.0±0.06)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论: miR-34a-5p促进HaCaT细胞体外增殖,机制可能与Notch1 mRNA表达上调有关。     

瘦素调节HaCaT细胞角蛋白17的表达

目的 探讨瘦素对HaCaT细胞角蛋白17（K17）表达的影响。 方法 体外培养HaCaT细胞,给予100 ng/ml的瘦素作用24 h,应用实时PCR检测K17 mRNA表达水平、Western印迹及免疫荧光染色法检测K17蛋白表达水平变化。 结果 与阴性对照组（1.000 0 ± 0.000 0）相比较,瘦素组（3.086 7 ± 0.186 1）K17 mRNA表达显著升高,差异有统计学意义（P < 0.01）。Western印迹结果表明,瘦素组K17蛋白较阴性对照组显著上调,细胞免疫荧光染色结果与RT-PCR、Western印迹结果相符。与单纯使用瘦素组（2.242 7±0.188 7）相比较,STAT3抑制剂组和Erk1/2抑制剂组K17 mRNA分别为0.674 1 ± 0.060 0、0.855 0 ± 0.390 3,Western印迹和细胞免疫荧光染色显示,两个抑制剂组的K17蛋白较瘦素组均显著下调,差异均有统计学意义（P < 0.01）。 结论 瘦素可以诱导HaCaT细胞表达K17,其机制可能与激活STAT3、Erk1/2信号转导途径有关。     

miR-425-5p在调控宫颈癌HeLa细胞功能中的作用及其机制

目的 miR-425-5p对宫颈癌HeLa细胞功能的调控作用及其机制。方法将体外培养的HeLa细胞分为miR-NC组(转染miR-425-5p模拟物对照)、miR-425-5p组(转染miR-425-5p模拟物)、anti-miR-NC组(转染miR-425-5p抑制剂对照)和anti-miR-425-5p组(转染miR-425-5p抑制剂)共四组。采用RT-PCR检测四组细胞中miR-425-5p的表达水平,CCK-8法、克隆形成试验、Transwell试验、划痕试验和流式细胞仪分别检测细胞增殖、克隆形成、侵袭、迁移和凋亡能力。生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因试验检测miR-425-5p和磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)的靶向关系,Western blot检测miR-425-5p对PTEN蛋白表达的影响。结果转染miR-425-5p模拟物后HeLa细胞中miR-425-5p的表达水平较miR-NC组明显升高,而miR-425-5p抑制剂后miR-425-5p的表达水平较anti-miR-NC组明显降低,差异均具有统计学意义(均P0.05)。与miR-NC组相比,miR-425-5p组中细胞OD值、克隆形成率、迁移率和侵袭细胞数均明显升高,而细胞凋亡率明显降低,差异均具有统计学意义(均P0.05);与anti-miR-NC组相比,anti-miR-425-5p组中细胞OD值、克隆形成率、迁移率和侵袭细胞数均明显降低,而细胞凋亡率明显升高,差异均具有统计学意义(均P0.05)。双荧光素酶报告基因试验证实miR-425-5p能够与PTEN 3′UTR靶向结合,Western blot试验结果证实miR-425-5p可负向调控PTEN蛋白的表达。结论 miR-425-5p可促进HeLa细胞增殖、侵袭、迁移并抑制细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控PTEN表达有关。     

miR-128-3p靶向沉默HO-1促进角质形成细胞炎症介质分泌

目的 探讨miR-128-3p对角质形成细胞HaCaT促炎介质分泌的影响及机制。方法 收集银屑病患者的皮损组织和正常皮肤组织,荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-128-3p和血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA表达,并对两者的相关性进行分析。生物信息学预测和荧光素酶报告基因分析miR-128-3p与HO-1之间的靶向作用关系。培养HaCaT细胞,在脂多糖处理后,转染miR-128-3p mimic/inhibitor, qRT-PCR检测白介素(IL)-1β和IL-6 mRNA表达,qRT-PCR和Western blot检测HO-1表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-1β和IL-6水平。以HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)处理HaCaT细胞后再用miR-128-3p inhibitor转染,qRT-PCR检测IL-1β和IL-6 mRNA表达,ELISA检测上清液中IL-1β和IL-6水平。结果 银屑病患者皮损组织中miR-128-3p表达上调,HO-1表达下调,两者呈负相关。HO-1为miR-128-3p的靶基因,miR-128-3p在转录...     

lncRNA LEF1-AS1通过靶向miR-612调控皮肤鳞状细胞癌细胞株增殖、凋亡、迁移侵袭的体外实验研究

【摘要】 目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）LEF1-AS1对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其机制。方法 通过干扰皮肤鳞状细胞癌SCC13细胞LEF1-AS1的表达和过表达、抑制miR-612的表达，将SCC13细胞分为转染LEF1-AS1干扰序列、无义序列的干扰LEF1-AS1组、干扰对照组，转染miR-612过表达序列、无义序列的miR-612过表达组、过表达对照组，以及转染LEF1-AS1干扰序列与miR-612抑制序列的干扰抑制组，和转染LEF1-AS1干扰序列与miR-612抑制无义序列的干扰抑制对照组。采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-612的相对表达，CCK8法检测细胞增殖，流式细胞仪分析细胞的凋亡情况，Transwell试验检测细胞的迁移、侵袭能力，Western印迹检测细胞周期蛋白依赖激酶1（cyclinD1）、细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂（p21）、Bcl-2家族蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达。用LncBase Predicted v.2 在线预测网站预测lncRNA LEF1-AS1与miR-612之间的互补序列，将互补/非互补序列用于构建荧光素酶报告基因质粒，分别与miR-612过表达及过表达对照基因共转染SCC13细胞，验证lncRNA LEF1-AS1与miR-612的结合能力。两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果 miR-612过表达组细胞增殖能力、迁移及侵袭细胞数均低于过表达对照组（均P < 0.05），凋亡率高于过表达对照组（P < 0.05）。干扰LEF1-AS1组、干扰对照组、干扰抑制组、干扰抑制对照组miR-612的相对表达差异有统计学意义（F = 150.78，P < 0.001），24、48、72 h时的增殖能力差异有统计学意义（均P < 0.05），凋亡率、迁移及侵袭细胞数差异均有统计学意义（均P < 0.05）。干扰LEF1-AS1组细胞中miR-612表达、凋亡率高于干扰对照组，48、72 h细胞增殖能力、迁移细胞数和侵袭细胞数低于干扰对照组（均P < 0.05），而干扰抑制组细胞中miR-612表达、细胞凋亡率低于干扰抑制对照组，48、72 h细胞增殖能力、迁移细胞数和侵袭细胞数高于干扰抑制对照组（均P < 0.05）。Western印迹显示，4组细胞cyclinD1、p21、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9蛋白相对水平差异均有统计学意义（均P < 0.001），干扰LEF1-AS1组cyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白相对水平均高于干扰对照组，p21、 Bax蛋白相对水平低于干扰对照组（均P < 0.05）；而干扰抑制组cyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白相对水平均高于干扰抑制对照组，p21、 Bax蛋白相对水平低于干扰抑制对照组（均P < 0.05）。共转染互补序列后，miR-612过表达组细胞荧光活性低于过表达对照组（t = 21.19，P < 0.001）；而共转染非互补序列后，miR-612组细胞荧光活性与过表达对照组差异无统计学意义（t = 0.28，P = 0.78）。结论 lncRNA LEF1-AS1调控皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭，机制与靶向miR-612相关。     

葫芦素Ⅰ对HaCaT细胞体外增殖及对角蛋白17、STAT3、VEGF表达的影响

目的 探讨葫芦素Ⅰ对HaCaT细胞体外增殖及角蛋白17(K17)、信号转导及转录激活子3(STAT3)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用不同浓度葫芦素Ⅰ(0.0125、0.025、0.05、0.1μmol/L)、含与0.1 μmol/L葫芦素Ⅰ等体积DMSO的DMEM培养液(溶媒组)、DMEM培养液(阴性对照组)、10 nmol/L卡泊三醇(阳性对照组)分别作用于HaCaT细胞.采用CCK8法检测葫芦素Ⅰ作用12、24、36 h后对HaCaT细胞体外增殖的影响,RT-PCR法检测葫芦素Ⅰ作用24 h对HaCaT细胞K17和VEGF mRNA表达的影响,Western印迹法检测葫芦素Ⅰ作用24h对HaCaT细胞K17、STAT3、磷酸化STAT3(P-STAT3)和VEGF蛋白表达的影响.结果 0.0125 μmol/L葫芦素Ⅰ作用12h即开始表现出对HaCaT细胞体外增殖的抑制作用,当葫芦素Ⅰ浓度增加到0.1 μmol/L时,24h和36h的抑制率分别为43.00％±2.11％和48.98％±2.27％.与阴性对照组相比,各浓度葫芦素Ⅰ组对HaCaT细胞体外增殖均有抑制作用(均P＜ 0.05),且该抑制作用随葫芦素Ⅰ浓度的增加及作用时间的延长逐渐增强.不同浓度葫芦素Ⅰ作用于HaCaT细胞24 h后,K17 mRNA及其蛋白、P-STAT3蛋白、VEGF mRNA及其蛋白表达量均随葫芦素Ⅰ浓度的增加而降低,差异有统计学意义(均P＜ 0.05).结论 葫芦素Ⅰ可抑制HaCaT细胞的体外增殖,并可在mRNA水平下调K17、VEGF的表达,在蛋白水平下调K17、P-STAT3、VEGF的表达.     

沉默circ＿0000218靶向miR-140-3p影响皮肤鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为

目的 探讨circ＿0000218对皮肤鳞状细胞癌（cSCC）细胞恶性生物学行为的影响及可能机制。方法 收集21例cSCC组织和21例正常皮肤组织,实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测组织中circ＿0000218和微小RNA-140-3p(miR-140-3p)表达。体外培养cSCC SCL-1细胞,分别转染si-circ＿0000218、miR-140-3p mimics、共转染si-circ＿0000218与anti-miR-140-3p后,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,蛋白质印迹法（Western blotting）检测细胞中活化的胱天蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ＿0000218和miR-140-3p调控关系。结果 cSCC组织中circ＿0000218表达量高于正常皮肤组织（P<0.05）,而miR-140-3p表达量低于正常皮肤组织（P<0.05）;转染si-circ＿0000218或miR-140-3p ...