高糖对肾小管上皮细胞Toll样受体4表达的影响

目的本实验旨在探讨高糖对。肾小管上皮细胞Toll样受体4（TLR4）表达的影响及其在糖尿病。肾病中的意义。方法体外培养。肾小管上皮细胞（NRK-52E），分成LG组（给予5mmol／L葡萄糖的DMEM培养）和HG组（给予25mmol／L葡萄糖的DMEM培养），不同时间收集细胞，采用细胞免疫化学、Rt—PCR、WesternBlot检测TLR4蛋白和mRNA表达情况，同时取细胞培养上清液用Elisa法检测IL-6、TNF-α水平。结果在高糖刺激6hTLR4mRNA出现表达明显增高，维持较高表达至274h，而48h后表达有所下降（P〈0．05）。HG组培养24hTLR4蛋白升高，48hTLR4蛋白表达进一步升高，与LG组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。HG组NRK-52E上清液IL-6、TNF一仅的表达较LG组明显升高（P〈O．05），并与TLR4蛋白呈正相关（r=0．799，0.820）。结论高糖可能通过上调NRK-52E的TLR4的表达，导致TNF-α、IL-6等炎性因子表达升高，TLR4参与了糖尿病肾病的进展。     

乙酰左旋肉碱改善肿瘤坏死因子-α诱导大鼠L6细胞胰岛素抵抗的实验研究

目的研究乙酰左旋肉碱(ALC)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的大鼠肌细胞胰岛素抵抗的影响。方法分化好的L6肌细胞分为6组,分别为对照组、100nmol/L胰岛素组、100nmol/L胰岛素+10ng/ml TNF-α组、胰岛素+TNF-α+三个不同浓度ALC组(浓度分别为0.1、0.3、0.6mmol/L),继续培养24h。实验结束后分别用葡萄糖消耗实验、葡萄糖转运实验检测胰岛素刺激下L6细胞对葡萄糖的消耗和利用情况,Western blot检测细胞胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)的蛋白表达水平。结果与100nmol/L胰岛素组比较,10ng/ml TNF-α作用24h后胰岛素刺激下细胞上清液中葡萄糖的残存量显著增加和细胞内葡萄糖转运量明显减少(P0.05),而ALC作用后明显改善TNF-α的抑制作用(P0.05),并呈剂量-反应关系。Western blot结果显示,与胰岛素组相比,TNF-α增高IRS-1的Ser307磷酸化表达,而ALC作用后减少IRS-1的Ser307磷酸化表达。结论10ng/ml TNF-α作用24h能诱导L6肌细胞的胰岛素抵抗,而ALC能改善这种胰岛素抵抗,可能是通过减少IRS-1的Ser307磷酸化表达来实现的。     

槲皮素通过促进大鼠肝细胞转硫化途径降低同型半胱氨酸水平的研究

目的探讨槲皮素对大鼠肝细胞同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)代谢的影响。方法实验1:培养的大鼠肝细胞分成2组,对照组和5μmol/L槲皮素组,分别用DMEM培养液和含有5μmol/L槲皮素的DMEM培养液培养;实验2(治疗性模型):培养的细胞分成4组:对照组、5μmol/L槲皮素组、50mmol/L蛋氨酸(methionine,Met)组和5μmol/L槲皮素+50mmol/L Met组,分别用空白DMEM培养液,含有5μmol/L槲皮素、50mmol/L Met以及5μmol/L槲皮素+50mmol/L Met的DMEM培养液培养24h,随后收集培养液检测Hcy;实验3(预防性模型):培养的细胞分成4组:对照组、5μmol/L槲皮素组、50mmol/L Met组和5μmol/L槲皮素+50 mmol/L Met组。在前23h,5μmol/L槲皮素组、5μmol/L槲皮素+50mmol/L Met组用含有5μmol/L槲皮素的DMEM培养液处理,其余两组用空白培养液处理;在实验结束前的1h,所有组均换液,分别用空白培养液,含有5μmol/L槲皮素、50 mmol/L Met和5μmol/L槲皮素+50mmol/L Met的培养液处理细胞1h。实验结束,收集各组培养液和肝细胞,检测培养液Hcy水平,肝细胞内谷胱甘肽(GSH)含量以及胱硫醚-β合成酶(CBS)活性和表达。结果在槲皮素处理组,槲皮素和甲基化槲皮素的含量分别为(36.74±0.05)μg/L和(31.57±0.03)μg/L。在实验2和实验3中,Met处理后Hcy水平显著增加,在实验3中槲皮素处理能够降低Hcy水平。实验3中槲皮素组及其槲皮素+Met处理组GSH含量增加,CBS活性显著增加。结论在Met负载大鼠肝细胞,槲皮素能通过促进转硫化途径来降低Hcy水平。     

全反式维甲酸对高糖诱导HK-2细胞FN、LN表达的影响

目的观察全反式维甲酸（ATRA）对高糖诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）纤维连接蛋白（FN）、层粘连蛋白（LN）表达的影响,探讨ATRA延缓糖尿病肾病肾间质纤维化的发生机制。方法体外培养的HK-2细胞随机分为正常对照组（NG组,含5.5mmol/LD-glucose）;高糖组（HG组,含30mmol/LD-glucose）;渗透压对照组（MG组,含5.5mmol/LD-glucose＋24.5mmol/Lmannitol）;全反式维甲酸低浓度组（ATRA1组,HG＋10^-7mol/LATRA）;全反式维甲酸中浓度组（ATRA2组,HG＋10^-6mol/LATRA）;全反式维甲酸高浓度组（ATRA3组,HG＋10^-5mol/LATRA）;药物溶剂无水乙醇组（HG＋10^-2mol/L无水乙醇）;卡托普利组（HG＋10^-5mol/Lcaptopril）。各组细胞分别培养24h、48h和72h后收集细胞上清液。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养细胞上清液FN、LN的浓度。结果高糖可增加HK-2细胞培养上清的FN、LN的水平（P〈0.01）,ATRA可以部分抑制高糖的作用（P〈0.01）。结论高糖可以促进体外培养的HK-2细胞FN、LN的表达,ATRA可以抑制高糖的作用,这可能是ATRA延缓糖尿病肾病肾间质纤维化进展的机制之一。     

肿瘤坏死因子-α诱导大鼠L6细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的采用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)体外诱导培养法建立大鼠骨骼肌细胞胰岛素抵抗(IR)模型,为研究IR的发生机制及筛选改善IR的药物和功能食品提供一种简便可靠的IR细胞模型。方法以大鼠肌细胞系L6细胞为研究对象,在含10ng/ml小鼠TNF-α培养液中培养24h,同时设立空白对照组和胰岛素对照组。之后各组细胞分别加入100nmol/L胰岛素。采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD)法检测培养液中残存葡萄糖含量,[3H]标记的脱氧葡萄糖转运检测细胞内葡萄糖的摄取量评价模型建立的效果。结果在无胰岛素刺激下,TNFα诱导组培养液中残存葡萄糖含量和细胞内的葡萄糖摄取量,与空白对照组比较没有差异(P0.05);在胰岛素刺激下,TNFα诱导组培养液中残存葡萄糖含量和细胞内的葡萄糖摄取量,与胰岛素对照组比较差异具有显著性(P0.05)。结论用含10ng/ml TNFα的培养液培养24h的L6细胞产生胰岛素抵抗,作为IR肌细胞模型可广泛用于胰岛素抵抗的机制研究和筛选辅助降血糖的药物或功能食品的功能评价。     

硒对肿瘤坏死因子-α诱导的AC16心肌细胞炎性损伤的影响

目的探讨硒对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的AC16心肌细胞炎性损伤的影响。方法将体外培养的AC16心肌细胞分为对照组、硒预处理组(100 μg/L亚硒酸钠预处理4 h)、50 μg/L TNF-α组、硒预处理+ 50 μg/L TNF-α组、100 μg/L TNF-α组、硒预处理+ 100 μg/L TNF-α组。各组分别培养24 h后, 收集细胞培养液和细胞进行检测。Griess法检测细胞培养液一氧化氮(NO)含量;荧光倒置显微镜观察细胞Hoechst 33342核染色, 分析核固缩比例;实时荧光定量PCR检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平, 蛋白质印迹法检测核因子-kappa B(NF-κB)p65、NF-κB抑制蛋白-α(IκB-α)蛋白表达水平。结果对照组、硒预处理组、50 μg/L TNF-α组、硒预处理+ 50 μg/L TNF-α组、100 μg/L TNF-α组和硒预处理+ 100 μg/L TNF-α组细胞培养液NO含量分别为(10.58 ± 2.32)、(9.07 ± ...     

不同剂量胰岛素联合生长激素对内毒素刺激后单核细胞分泌细胞因子的影响

目的:通过体外培养,观察胰岛素协同生长激素(GH)对内毒素刺激后的单核细胞分泌细胞因子的影响。方法:分离8名健康志愿者外周血单核细胞,用内毒素刺激后,根据GH与胰岛素浓度不同分为五组,即对照组;GH组(GH为100 ng/ml,无胰岛素);GH+胰岛素500μU/ml组、GH+胰岛素1 000μU/ml组和GH+胰岛素2 000μU/ml组。以上各组培养24 h后,采用双抗夹心ELISA法检测单核细胞分泌促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)和抗炎细胞因子(IL-4、IL-1)含量的变化。结果:当培养液中加入100 ng/ml的GH时,TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度较对照组明显升高(P0.01);同时IL-4和IL-10也明显升高(P0.01)。当不同剂量胰岛素加入培养液后,IL-1β和IL-6浓度均明显低于GH组(P0.01),并随胰岛素剂量的增加而不断下降;与GH组相比,IL-4的含量在GH+胰岛素1 000μU/ml组和GH+胰岛素2 000μU/ml组中均明显升高(P0.01);而IL-10仅在GH+胰岛素2 000μU/ml组中升高显著(P0.01)。结论:GH具有明显促进内毒素刺激后的单核细胞分泌促炎与抗炎细胞因子的效应;而胰岛素联用GH后,促炎细胞因子明显降低,而抗炎细胞因子则进一步升高。     

α-硫辛酸对高糖诱导下乳鼠心肌细胞作用

目的 探讨α-硫辛酸对高糖诱导的乳鼠心肌细胞肥大保护作用及其机制.方法 取出生1～3d乳鼠心尖部心肌细胞原代培养,用低糖培养基培养48 h后分为对照组、高糖组(25.5 mmol/L)、α-硫辛酸组(高糖+50、100、200、300 mg/L)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂组(高糖+PKC抑制剂50 nmol/L)、核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂组(高糖+ NF-κB抑制剂5 mmol/L);细胞培养48 h,检测细胞表面积以及蛋白含量,Wesrtern blot法检测PKC-α、NF-κB、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、立早基因c-fos蛋白表达.结果 与对照组比较,高糖组乳鼠心肌细胞肥大、细胞表面积增大、蛋白含量增多,心肌细胞内PKC-α(0.89±0.03)、NF-κB(0.88±0.14)、c-fos(0.62±0.14)、TNF-α(0.85±0.05)蛋白表达均升高(P＜0.05);α-硫辛酸能够减轻乳鼠心肌细胞肥大,使心肌细胞表面积减小、蛋白含量减少(P＜0.05),与高糖组比较,α-硫辛酸300 mg/L组细胞内PKC-α(0.44±0.07)、NF-κB(0.24±0.03)、TNF-α(0.39 ±0.05)、c-fos(0.15 ±0.06)蛋白表达均下降(P＜0.05).结论 α-硫辛酸可抑制高糖诱导的乳鼠心肌细胞肥大,其机制可能与抑制PKC/NF-κB/TNF-α/c-fos的信号转导通路有关.     

黄绿青霉素对肿瘤坏死因子α诱导的血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1和白细胞介素的影响

目的观察黄绿青霉素(CIT)对血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-lβ)、IL-6和IL-8等细胞因子的影响,以及CIT上调肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的内皮细胞表达MCP-1、IL-lβ、IL-6和IL-8的作用。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),选择第5～6代进行试验,待细胞融合80%后随机分组,加入TNF-α(10μg/L)、CIT(2μmol/L)建立TNF-α组、CIT组、TNF-α+CIT联合处理组和空白对照组,处理时间24h。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8及MCP-1的含量;免疫荧光染色法测定细胞核转录因子κB(NF-κB)的激活表达;RT-PCR检测各组MCP-1 mRNA表达。结果在TNF-α组和TNF-α+CIT组,细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8、MCP-1浓度,细胞MCP-1 mRNA表达量,NF-κB P65蛋白表达量均高于空白对照组(P<0.05);且TNF-α+CIT组均高于TNF-α组(P<0.05)。结论 CIT可明显上调TNF-α诱导的内皮细胞MCP-1、IL-lβ、IL-6、IL-8表达和NF-κB的激活。     

Zn~(2+)对人Ⅱ型肺泡上皮A549细胞IL-8和TNF-α mRNA和蛋白表达水平的影响

目的研究Zn2+对人Ⅱ型肺泡上皮细胞炎性细胞因子IL-8和TNF-α mRNA和蛋白表达水平的影响。方法用含0、50、100和250μmol/L Zn2+的F-12培养基培养人Ⅱ型肺泡上皮A549细胞,分别于3h和24h用RT-PCR半定量IL-8和TNF-α mRNA表达量,用RIA测定培养上清液中IL-8和TNF-α蛋白浓度。结果A549细胞染Zn2+3h时A549细胞以浓度依赖方式高表达IL-8和TNF-α mRNA和蛋白;24h时IL-8和TNF-α蛋白表达量进一步增高,IL-8 mRNA表达下降,TNF-α mRNA继续保持高表达。结论Zn2+显著提高A549细胞IL-8和TNF-α表达量,Ⅱ型肺泡上皮细胞可能是Zn2+导致的呼吸系统损伤中炎性细胞因子的重要来源。     

1-脱氧野尻霉素对高糖培养小鼠系膜细胞增殖及细胞外基质合成作用研究

目的观察1-脱氧野尻霉素(DNJ)对高糖培养小鼠系膜细胞增殖、合成细胞外基质(ECM)的影响。方法体外培养小鼠系膜细胞,用MTT法检测细胞增殖,用ELISA法测定细胞上清液中Ⅳ型胶原、小鼠纤维连接蛋白(FN)含量,用半定量RT-PCR法检测TGF-β_1mRNA、PPARγmRNA表达。结果 (1)高糖组(HG)48 h促细胞增殖(P0.05);HG 72 h、96 h均抑制细胞增殖(P0.05)。甘露醇组(MG)与正常糖组(NG)比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)DNJ抑制高糖培养细胞增殖作用呈剂量和时间依赖性。选定HG+5 mmol/L DNJ作用48 h进一步实验。(3)高糖组Ⅳ型胶原、FN合成、TGF-β_1mRNA、PPARr mRNA表达均显著升高(P0.05或P0.01)。NG与MG相比差异无统计学意义(P0.05)。(4)HG+DNJ 5 mmol/L组显著抑制高糖组Ⅳ型胶原、FN合成、TGF-β_1mRNA表达升高(P0.05),对PPARγmRNA表达升高无影响。结论 DNJ可抑制高糖培养系膜细胞增殖及ECM合成增多,其机制与DNJ降低高糖培养系膜细胞TGFβ_1mRNA表达升高有关。     

替米沙坦联合辅酶Q10对高血压性心脏病患者心功能和炎症水平的影响

目的探讨替米沙坦联合辅酶Q10对高血压性心脏病患者心功能和炎症水平的影响。方法选取2017年3月至2019年5月间本院收治的高血压性心脏病患者140例,根据治疗方案随机分为替米沙坦组、联合治疗组,每组70例。分别于服药前和服药3个月后进行超声心动图检查,记录左心室射血分数(LVEF)、舒张早期峰值(E峰)、舒张晚期峰值(A峰),计算E/A值;同时采集外周静脉血3 ml,检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白水平。结果与治疗前相比,治疗3个月后两组LVEF、E峰、E/A均明显升高,A峰明显降低,差异均有统计学意义(均P0.05);治疗3个月后,联合治疗组LVEF、E峰、E/A明显高于替米沙坦组,A峰明显低于替米沙坦组,差异均有统计学意义(均P0.05)。与治疗前相比,治疗3个月后两组血清IL-6、TNF-α、C反应蛋白水平均明显降低,差异均有统计学意义(均P0.05);治疗3个月后,联合治疗组患者血清IL-6(23.20±7.14)ng/L、TNF-α(9.67±4.30)ng/L、C反应蛋白(6.09±0.97)mg/L明显低于替米沙坦组,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论替米沙坦联合辅酶Q10能够明显改善高血压性心脏病患者的心功能,降低炎症水平。     

不同类型脂肪酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的作用及Toll样受体4表达的影响

目的观察不同类型脂肪酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的作用及探讨可能的作用机制。方法 250μmol/L的棕榈酸(PA)、花生四烯酸(AA)以及二十碳五烯酸(EPA)分别与HepG2细胞共同培养24 h,葡萄糖氧化酶法测定细胞上清液中葡萄糖含量,酶联免疫吸附法测定炎性因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,以及实时聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达。结果 PA组培养液中葡萄糖含量显著高于空白对照组(P<0.05),EPA组可增加葡萄糖消耗量,与PA组及AA组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。各脂肪酸干预组细胞上清液中炎性因子IL-6和TNF-α含量均增加,EPA组增加量最低,PA组和AA组上清液中IL-6含量与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05)。各脂肪酸干预组与空白组比较TLR4 mRNA表达量均增加(P均<0.05),EPA组增加量最低。结论高浓度PA降低了HepG2细胞对胰岛素的敏感性,能够引起胰岛素抵抗,AA具有降低胰岛素敏感性的趋势,而EPA则具有增加胰岛素敏感性的趋势,TLR4信号转导通路及其启动的炎症反应可能是其重要的作用机制。     

茶多酚影响同型半胱氨酸对内皮细胞的作用

目的:探讨茶多酚能否减弱同型半胱氨酸(HCY)对内皮细胞(EC)的损伤作用。方法:体外培养牛主动脉内皮细胞,随机分为5组,正常对照组,用含20%小牛血清DMEM培养液培养;0.25 mmol/L HCY组,培养液中加入HCY使其终浓度为0.25 mmol/L;1 mg/L茶多酚 +0.25 mmol/L HCY组;2 mg/L茶多酚 +0.25 mmol/L HCY组;4 mg/L茶多酚 +0.25 mmol/L HCY组。培养72h后,用流式细胞仪检测细胞周期,观察细胞生长情况,同时检测培养液中的一氧化氮(NO)、 一氧化氮合酶(NOS)、内皮素(ET)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)浓度或活性。结果:浓度为1、2、4、8 mg/L茶多酚组与HCY组相比,(1)细胞形态规则性增强,立体感增加,细胞内颗粒减少;(2)细胞周期检测提示茶多酚组细胞S期比例增多;(3)功能实验提示,茶多酚组EC释放的血管舒张因子NO浓度较HCY组高;而血管收缩因子ET低;(4)MDA含量和GS H-Px活性无明显改变。结论:茶多酚有抑制HCY对EC的损伤作用。     

胰岛素强化治疗对危重病患者外周血非特异炎性因子的影响

目的 观察胰岛素强化治疗对危重病合并高血糖患者外周血非特异炎性因子C反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平的影响及不良反应的发生率.方法 将209例危重病合并高血糖患者按随机数字表法分为胰岛素强化治疗组(106例,静脉血糖控制在4.4～6.1 mmol/L)和胰岛素常规治疗组(103例,静脉血糖控制在9.0～11.1 mmol/L).分别于转入ICU即刻及治疗后24、48、72 h检测并比较两组血清CRP、IL-6、TNF-α水平.结果 两组血糖水平均达到目标控制,低血糖发生率胰岛素强化治疗组为6.60%(7/106),与胰岛素常规治疗组的4.76%(3/63)比较差异无统计学意义(P>0.05).治疗后72 h,胰岛素强化治疗组血清CRP水平明显低于胰岛素常规治疗组(P<0.05);治疗后24、48、72 h,胰岛素强化治疗组血清IL-6水平均明显低于胰岛素常规治疗组(P<0.05);治疗后48、72 h,胰岛素强化治疗组血清TNF-α水平亦明显低于胰岛素常规治疗组(P<0.05).结论 胰岛素强化治疗可以降低危重病合并高血糖患者外周血非特异炎性因子的水平,有益于病情恢复.     

游离脂肪酸引起肝细胞胰岛素抵抗及缺陷位点研究

目的研究游离脂肪酸诱导人肝细胞(HepG2)引起胰岛素抵抗及信号转导缺陷位点。方法用含0.25mmol/L的软脂酸(PA)或100nmol/L胰岛素的DMEM培养基培养HepG2细胞24h后,用100nmol/L胰岛素刺激不同时间后,分别测定培养液的葡萄糖浓度,细胞内的糖原含量,磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性以及磷酸化的蛋白激酶B(P鄄Ser473PKB)的蛋白水平。磷酯酰肌醇3激酶(PI鄄3K)的抑制剂Wortmannin加入培养基,终浓度10-6mol/L。结果与正常对照组相比,PA处理组和高胰岛素组培养液中葡萄糖含量增高(P<0.05);PA处理组胰岛素刺激的PEPCK活性高于正常对照组(P<0.01),P鄄Ser473PKB蛋白水平低于正常对照组(P<0.01)。用Wortmannin处理后,正常对照组中PEPCK活性差别有统计学意义(P<0.01),PA处理组中的PEPCK活性差别无统计学意义(P>0.05);正常对照组和PA处理组中P鄄Ser473PKB差别均有统计学意义(P<0.01)。结论0.25mmol/L的AP培养24h后,细胞产生了胰岛素抵抗并且胰岛素信号转导途径存在障碍,可能蛋白激酶B(PKB)及下游分子缺陷参与了肝胰岛素抵抗的形成。     

胰岛素葡萄糖钾盐与胰岛素体外抗炎效果比较研究

目的: 观察葡萄糖钾盐是否具有协同增强胰岛素对外周血单个核细胞群(PBMCs)分泌促炎细胞因子和抗炎细胞因子的作用. 方法: 用Ficoll-Hypaque液分离10例健康人PBMC,随机分为胰岛素葡萄糖钾盐(GIK)组、胰岛素(INS)组、葡萄糖钾盐(GK)组和基础对照(C)组. 四组PBMC培养24 h后,加脂多糖继续培养48 h后,离心收集培养上清液.用ELISA法检测TNF-α,IL-6和IL-4,IL-10含量. 结果: GIK组和INS组TNF-α,IL-6含量均明显低于C组(P<0.01),IL-4和IL-10含量却均明显高于C组(P<0.01);GIK组IL-4和IL-10含量明显高于INS组(P<0.01),但GIK组TNF-α和IL-6含量降低,与INS组比较无统计学意义(P>0.05). 结论: 胰岛素葡萄糖钾盐和胰岛素均能直接抑制内毒素刺激的PBMCs分泌促炎细胞因子,同时提高内毒素刺激的PBMC分泌抗炎细胞因子水平.葡萄糖钾盐对胰岛素促进PBMCs分泌抗炎细胞因子有协同增强作用.     

碘过量对胰岛β细胞功能的影响及机制

目的探索碘过量暴露对小鼠胰岛素瘤细胞系β-TC-6胰岛素分泌功能影响及机制。方法β-TC-6细胞在对数生长期暴露于0、0.01、0.1、1、10和100 mmol/L碘24 h,采用四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率。细胞经0.01、1、和100 mmol/L碘干预24 h后,用5.6 mmol/L葡萄糖刺激细胞1 h,酶联免疫分析(ELISA)法检测上清胰岛素含量。蛋白印迹法(Western blot)检测GRP78、IRE1α、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,1~100 mmol/L碘处理组细胞存活率显著降低(P<0.05);1 mmol/L组细胞胰岛素分泌量显著增加(P<0.05),100 mmol/L组细胞胰岛素分泌量显著下降(P<0.05),1和10 mmol/L组GRP78、IRE1α和Bax蛋白表达量显著增加(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。5.6 mmol/L葡萄糖+0 mmol/L碘组、5.6 mmol/L葡萄糖+0.01 mmol/L碘组和5.6 mmol/L葡萄糖+1 mmol/L碘组分别与相应对照组比较,细胞胰岛素分泌量组间差异显著(P<0.05)。结论过量碘可降低β-TC-6细胞胰岛素分泌量,损害胰岛素分泌功能,其机制很可能与内质网应激和Bcl-2/Bax蛋白表达比例失衡密切相关。     

肿瘤坏死因子和干扰素对肠上皮紧密连接的破坏作用

目的:了解肿瘤坏死因子(TNF-α)和干扰素(IFN-γ)对上皮细胞功能的作用,研究TNF-α和IFN-γ与上皮细胞屏障功能的关系. 方法:T84细胞株用加有5%胎牛血清的DMEM/F-12 混合培养液培养.实验分为四组:即对照组、TNF-α处理组、IFN-γ处理组和TNF-α与IFN-γ联合处理组.TNF-α处理组和IFN-γ处理组细胞分别用加有10 ng/mL TNF-α和100 U/mL IFN-γ的培养液处理72 h.各细胞因子联合处理组用100 U/mL IFN-γ处理19 h后,再加入10 ng/mL TNF-α.用EVOM电压电阻仪测定细胞跨膜电阻抗(TER)变化,用透射电镜观察细胞紧密连接的形态改变. 结果:IFN-γ单独处理48 h后,TER降低至78.06%,培养至72 h降低为59.31%.在单一TNF-α作用下,24 h后TER值逐渐降低,72 h 降低至56.82%.与对照细胞相比,TNF-α和IFN-γ联合处理的T84细胞株TER值显著降低,72 h TER值为20.88%,表明细胞紧密连接的结构破坏. 结论:TNF-α和IFN-γ损伤T84细胞株的紧密连接屏障功能,两者具有协同作用.     

白藜芦醇对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎性因子生成的调控

目的探讨白藜芦醇(Res)对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化及炎性细胞因子[肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)]基因表达的调节。方法分别用1mg/LLPS或25mmol/LRes+1mg/LLPS处理体外培养的小鼠巨噬细胞,采用电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测细胞中NF-κB活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA和蛋白的表达。结果LPS组NF-κB活性和TNF-α、IL-1β、IL-6含量在刺激后6～12h明显高于正常对照组(P<0.001),而Res+LPS组NF-κB活性和TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著低于LPS组(P<0.005)。结论LPS可诱导巨噬细胞NF-κB活化,导致TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达增强,而Res能抑制NF-κB活化而调节TNF-α、IL-1β、IL-6基因的表达。