黑色素瘤抗原—1基因在胃癌组织中的表达

目的：检测黑色素瘤抗原－1（MAGE－1）基因在胃癌组织中的表达，为应用MAGE－1基因产物对胃癌病人进行特异性抗肿瘤免疫治疗提供理论依据。方法：用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）检测30例胃癌组织及相应癌旁组织中MAGE－1基因的表达，并对1例RT－PCR阳性扩增产物进行DNA序列测定。结果：30例胃癌组织标本中有14例（46．7％）表达MAGE－1基因，而相应的癌旁组织均不表达MAGE－1，两组比较差异有显著性（P＝0．001）；DNA序列测定证实1例RT－PCR扩增产物中的目的基因片段为MAGE－1cDNA序列。结论：MAGE－1基因在胃癌组织中有较高表达，这使得以该基因编码蛋白作为疫苗用于胃癌的免疫治疗成为可能。     

肾及膀胱肿瘤组织中MAGE基因及其产物的表达

目的:观察肿瘤特异性抗原MAGE-1、MAGE-3基因及MAGE-3抗原在肾及膀胱肿瘤组织中的表达状况,以评价这些基因或基因产物作为肾及膀胱肿瘤组织中的免疫学检测和免疫治疗、基因治疗分子标志物的可行性.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法分别测定39例肾及膀胱肿瘤患者癌组织与10例相应的癌旁组织MAGE-1、MAGE-3基因.应用免疫组织化学方法测定121例肾及膀胱肿瘤患者癌组织与10例相应的癌旁组织MAGE-3抗原表达.结果:39例肾及膀胱肿瘤中有23例MAGE-1 mRNA呈阳性表达(59.0%),有22例MAGE-3mRNA呈阳性表达(56.4%),其中肾细胞癌14例中MAGE-1 mRNA及MAGE-3 mRNA阳性表达均为8例.肾盂与膀胱移行细胞癌25例中MAGE-1 mRNA及MAGE-3 mRNA阳性表达分别为15例及14例.同时表达MAGE-1及MAGE-3的肾及膀胱肿瘤为18例(46.2%),所有10例癌旁组织均不表达MAGE-1及MAGE-3.免疫组织化学检测121例肾及膀胱肿瘤中56例MAGE-3抗原表达阳性(46.3%),包括肾细胞癌13例,MAGE-3抗原表达率为30.8%;肾盂与膀胱移行细胞癌108例,MAGE-3抗原表达率为48.1%.10例相应的癌旁组织MAGE-3抗原均不表达.根据Logistic回归检验分析MAGE-3抗原的表达与患者的临床分期及病理分级无明显关系.结论:MAGE基因有可能作为肾及膀胱恶性肿瘤组织免疫学检测的分子标志物,并且具有作为免疫治疗、基因治疗特异性靶位的潜在价值.     

肺癌组织中黑色素瘤抗原-3基因mRNA的表达

目的：检测肺癌组织中黑色素瘤抗原－3基因（MAGE－3）mRNA的表达，方法；用逆转录－套式聚合酶链反应（RT－PCR）对31例肺癌患者癌组织和相应癌旁组织MAGE－3 mRNA表达情况进行测定；PE－377DNA测序仪对5例10个RT－PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA序列测定。结果：31例肺癌患者癌组织中26例表达MAGE－3 mRNA，阳性率为83.9%；相应的癌旁组织均未表达。DNA序列测定证明PCR扩增产物中目的基因片段均为MAGE－3 cDNA序列，所测5例样本中4例样本有2个相同位置的碱基发生了点突变，导致一个氨基酸残基改变。结论：（1）MAGE－3 mRNA在肺癌中呈高比例表达，提示此抗原有可能作为肺癌患者免疫治疗的靶抗原；（2）我国肺癌患者中存在MAGE-3基因个别位点的变异。     

黑色素瘤抗原-1、3基因在肝内胆管细胞癌中的表达及临床意义

目的研究黑色素瘤抗原(MAGE)-1和MAGE-3基因在肝内胆管细胞癌(IHCC)组织中的表达,探讨MAGE-1、MAGE-3基因与IHCC患者临床指标的关系。方法RT-PCR方法检测20例IHCC患者癌组织及相应癌旁组织MAGE-1、MAGE-3基因表达,对全部RT-PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA测序以证实其为MAGE-1、MAGE-3基因。分析MAGE-1、MAGE-3基因表达与患者性别、年龄、肿瘤直径、有无包膜、肿瘤形态以及乙肝病毒表面抗原等临床指标的关系。结果20例IHCC患者癌组织中MAGE-1、MAGE-3基因表达的阳性率分别为35%和45%,显著高于癌旁组织(0)(P<0·01)。IHCC患者癌组织中MAGE-1、MAGE-3基因表达的阳性率与患者性别、年龄、肿瘤直径、有无包膜以及乙型肝炎病毒感染等指标均无关(P>0·05);MAGE-3基因表达的阳性率与肿瘤形态有关(P<0·05)。结论MAGE-1、MAGE-3基因在IHCC患者肝癌组织中特异性高表达,MAGE-1、MAGE-3基因可能成为IHCC患者免疫治疗的攻击靶点。     

胃癌组织中黑色素瘤抗原基因-1,3基因的表达及其意义

目的 了解胃癌组织中黑色素瘤抗原基因(MAGE)-1、3基因的表达，并探讨其作为免疫治疗的靶抗原在胃癌中的应用价值。方法 采用RT—PCR法检测36例胃癌患者的肿瘤组织和相应的癌旁“正常”黏膜中MAGE-1、3基因的表达情况，并以37例慢性胃炎患者的胃镜活检组织和4株胃癌细胞株作为对照。结果 36例胃癌组织中，MAGE-1表达阳性率为72．22％(26／36例)，MAGE-3表达阳性率为69．44％(25／36例)，MAGE-1、3表达双阳性率为52．78％(19／36例)，MAGE-1、3任一基因表达阳性者32例，阳性率为88．89％(32／36例)。癌旁“正常”黏膜中MAGE-1、3基因表达阳性率分别为47．22％(17／36例)和44．44％(16／36例)，MAGE-1、3表达双阳性率为30．56％(11／36例)。37例慢性胃炎组织中，MAGE-1、3表达阳性率分别为29．73％(11／37例)和27．03％(10／37例)，MAGE-1、3表达双阳性率为8．11％(3／37例)。胃癌组织MAGE-1、3基因表达阳性率均高于癌旁“正常”黏膜组织和慢性胃炎患者。4株胃癌细胞株MAGE-1、3基因表达均为阳性。结论 基于MAGE-1、3基因在胃癌中的高表达率，可利用其作为靶分子进行免疫治疗，同时也可作为一种有临床价值的随访指标。     

黑色素肿瘤抗原基因-1、3在直肠癌肝转移组织的表达

目的探索黑色素肿瘤抗原基因-1、-3（MAGE-1、MAGE-3）在直肠癌肝转移组织中的表达与直肠癌肝转移的相关性。方法采用RT-PCR法,对30例直肠癌肝转移患者的癌组织和30例直肠癌非肝转移患者的癌组织的MAGE-1、MAGE-3的表达情况进行检测,并对RT-PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA测序验证。结果30例直肠癌肝转移患者癌组织中,MAGE-1基因的表达阳性率为46．67％,MAGE-3基因的表达阳性率为56．67％,MAGE-1、MAGE-3都表达的阳性率为36．67％,至少表达其中一种的阳性率为66．67％;30例直肠癌非肝转移患者癌组织中,MAGE-1基因的表达阳性率为26．67％,MAGE-3基因的表达阳性率为40．00％,MAGE-1、MAGE-3都表达的阳性率为23．33％,至少表达其中一种的阳性率为43．33％。直肠癌肝转移患者癌组织中MAGE-1、MAGE-3基因表达阳性率均显著高于直肠癌非肝转移患者癌组织（P〈0．05）。结论MAGE-1,MAGE-3有望作为一种新的指标用于直肠癌的转移和预后监测。     

黑素瘤抗原-a基因在煤焦沥青烟气诱发小鼠肺癌组织中的表达及其意义

目的：探讨煤焦沥青（CTP）烟气诱发小鼠肺癌组织中黑素瘤抗原－a(mage-a)基因mRNA的表达及其意义。方法：CTP烟气诱发小鼠肺癌，提取癌组织中RNA，用逆转录－巢式聚合酶链反应（RT－PCR）方法对癌组织和相应癌旁组织mage-a mRNA表达情况进行研究；pUC18质粒克隆，大肠杆菌DH5α转化；PE－377DNA测序仪对2个阳性克隆中的目的基因片段进行DNA序列测定。结果：实验组29只小鼠中8只诱发出肺癌（8／29）；8只小鼠肺癌中，有5只癌组织mage-a mRNA表达阳性（5／8）；相应的癌旁组织均未表达。DNA序列测定证明扩增产物中目的基因片段均为mage-a cDNA序列。结论：小鼠肺癌组织中mage-a mRNA呈高比例表达，CTP烟气诱发小鼠肺癌可能是MAGE－A抗原肺癌免疫治疗的理想模型。     

膀胱癌肿瘤/睾丸抗原相关基因的表达

目的：检测多种肿瘤／睾丸抗原相关基因在膀胱癌中的表达状况．方法：用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法对33例膀胱癌患癌组织和癌旁正常膀胱组织进行MA-GEA1,SSX2,NY-ESO-1,MAGEC1,MAGEE1和HAGE的mRNA表达检测．随机抽取每种CTA基因的3例阳性RT-PCR扩增产物的目的片段进行DNA序列测定．结果：33例膀胱癌标本中MAGEA1,SSX2,NY-ESO-1,MAGEC1,MAGEE1和HAGE的表达频率分别为21．2％(7／33),39．4％(13／33),69．7％(23／33),42．4％(14／33),36．4％(12／33)和24．2％(8／33)．正常膀胱组织中6种CTA基本无表达．肿瘤组织中6种基因至少有1种表达的频率是75．8％(25／33),两种或两种以上同时表达几率是69．7％(23／33)．测序结果表明RT-PCR产物确为CTA目的基因序列．结论：CTA在膀胱癌主动免疫治疗中是一种合适的、有前景的攻击靶点．同时,多种CTA的联合表达为多效价CTA疫苗在膀胱癌免疫治疗中的应用提供了理论基础．     

基质金属蛋白酶组织抑制物-1 mRNA在胃癌组织中的表达

①目的　检测基质金属蛋白酶组织抑制物 1(TIMP 1)基因在胃癌及其癌旁组织中的表达 ,以探讨TIMP 1在胃癌发生发展中的作用。②方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测胃癌及相应癌旁组织中TIMP 1基因的表达。③结果　 30例胃癌组织中有 16例表达TIMP 1基因 ,阳性率为 5 3.3% ,30例癌旁组织中有14例表达TIMP 1基因 ,阳性率为 4 6 .7% ,TIMP 1基因在胃癌和癌旁组织中的表达无显著性差异 (χ2 =0 .2 6 7,P >0 .0 5 )。④结论　TIMP 1是一种肿瘤生长、侵袭、转移双向调节因子。     

Wnt2B基因在胃癌组织及相应癌旁组织中的表达

目的:探讨Wnt2B基因在胃癌组织及相应癌旁组织中的表达及其意义。方法:采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术检测胃癌组织及相应癌旁组织中Wnt2B基因mRNA的表达水平。结果:Wnt2B基因在37例人类胃癌组织及相应癌旁组织中均有表达,阳性率达100%;Wnt2B基因在胃癌组织中的表达水平明显高于相应癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:Wnt2B基因可能参与了胃癌的发生发展过程,在胃癌组织中表达上调可能有助于胃癌的早期诊断。     

MAGE-12 mRNA在肺癌中的表达及其意义

目的　探讨肺癌组织中MAGE 12mRNA的表达及其意义。方法　采用RT PCR技术 ,检测了MAGE 12在 5 0例临床病人肺癌标本中mRNA水平的表达。结果　 5 0例临床肺癌标本中有 17例表达 (17 5 0 ,3 4% ) ,且肺鳞癌 (15 3 3 ,45 5 % )与肺腺癌 (2 17,11 8% )有显著差异 (P <0 0 5 )。结论　MAGE 12基因在肺癌有较高的表达率 ,基于MAGE 12基因及其产物作为新的疫苗可能是一个有前途的治疗肺癌的免疫治疗方法     

胃癌组织中p16基因mRNA和p16蛋白的表达及临床病理意义

目的 探讨ｐ１６基因在胃癌发生发展及预后判断上的意义。方法 应用原位杂交和免疫组化方法检测６１例胃癌组织和４９例癌旁正常胃粘膜的ｐ１６ｍＲＮＡ和ｐ１６蛋白的表达。结果 （１）胃癌组织中ｐ１６ ｍＲＮＡ和ｐ１６蛋白的阳性率分别为５０．８％（３１／６１）,７０．５％（４３／６１）,而癌旁正常胃粘原阳性率均为１００％（４９／４９）,１０例早期胃癌均有ｐ１６ ｍＲＮＡ的蛋白,而分化较差、浸润深层的癌细胞则     

黑色素瘤抗原-1基因在肝细胞癌中的表达

目的 检测黑色素瘤抗原－１（ＭＡＧＥ－１）ｍＲＮＡ在肝细胞癌（ＨＣＣ）中的表达,为用ＭＡＧＥ－１基因编码蛋白作为疫苗对ＨＣＣ患者进行免疫治疗提供依据。方法 用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法对４５例ＨＣＣ患者组织和相应癌旁肝组织以及１６例肝硬化组织和１２例正常肝组织的ＭＡＧＥ－１ｍＲＮＡ表达情况进行了研究,对６例ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物的目的基因片段进行ＤＮＡ序列测定,并以测序证实为ＭＡＧＥ－     

膀胱移行细胞癌组织中MAGE-A基因的表达

目的:研究膀胱移行细胞癌中黑色素瘤抗原(MAGE)基因mRNA的表达及其临床意义。方法:采用逆转录聚合酶链反应技术检测35例膀胱移行细胞癌患者癌组织(新鲜标本)MAGE-A1、MAGE-A3及MAGE-A12基因mRNA表达。结果:35例膀胱膀胱移行细胞癌组织中全部(100%)至少表达1种MAGE-A基因,21例MAGE-A1阳性,19例MAGE-A3阳性,24例MAGE-A12阳性,三者均阳性17例。结论:MAGE基因在膀胱膀胱移行细胞癌中有较高表达,可望成为膀胱移行细胞癌免疫治疗的靶基因。     

喉鳞状细胞癌中RASSF1A基因启动子区甲基化及蛋白表达

目的：探讨RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的关系。方法：运用甲基化特异性PCR,检测RASSF1A基因在48例喉癌组织、相对应癌旁组织及48例正常人外周血中的启动子区甲基化情况。用Western blotting方法检测喉癌组织、癌旁组织及正常人外周血中RASSF1A表达情况。结果：在48例喉癌组织、相对应的癌旁组织和48份正常人外周血中,RASSF1A基因启动子区分别有34例（70.83%）、11例（22.92%）和6例（12.50%）发生了甲基化, 喉癌组织甲基化程度明显高于癌旁组织和正常人外周血（P<0.05）。在48例喉癌组织中27例（56.25%）不能正常表达RASSF1A蛋白,而相对应癌旁组织中仅有8例（16.67%）,喉癌组织中RASSF1A蛋白的表达程度明显低于癌旁组织(P<0.01)。启动子区发生甲基化的34例喉癌组织中共有25例（73.53%）呈弱阳性,而7例未发生甲基化的喉癌组织中为1例（14.29%）,两组间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论：RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的发生有关,有望成为喉癌诊断的分子标志。     

胃肠道恶性肿瘤端粒酶活性的表达与意义

目的 探讨端粒酶在胃肠道恶性肿瘤癌组织和癌旁正常组织中的表达及其临床意义。方法 应用端粒酶PCR-ELISA检测法检测胃癌11例、结肠癌14例及25例癌旁正常组织中的端粒酶活性。结果 25例胃肠道肿瘤组织中21例端粒酶呈阳性（84.0%);25例癌旁正常组织 5例阳性（20.0%)。癌组织和癌旁正常组织中端粒酶的表达均与肿瘤临床病理特征无关,癌旁正常组织存在端凿酶阳性表达的病例,病理上多伴有不典型增生或癌细胞的浸润转移。结论 端粒酶可作为实质性肿瘤早期诊断的辅助指标。对癌旁正常组织中端粒酶阳性的患者加强观察,有助于早期发现某些胃肠道恶性肿瘤的术后再发或复发。     

HERG K+ channels expression in gastric cancers and analysis of its regulation in tumor cell proliferation and apoptosis

Objective: To investigate the expression of herg 1 gene in tumor tissues from gastric carcinomas and gastric carcinoma cell lines, and study the relationship between HERG K+ channel expressions and tumor cell proliferation and apoptosis. Methods: RT-PCR and PCR assays were used to detect the expression of herg 1 gene in 64 gastric carcinomas and the gastric cancer cell line SGC-7901. Blocking the HERG K+ channels was used to evaluate their effects on tumor cell proliferation and apoptosis. Results:The statistically significant expression of herg 1 gene was detected in all the gastric cancers and SGC-7901 cells, but not in normal tissues. The HERG K+ channel blocker, E-4031, increased the cell population in G0/G1 (P＜0.05) and the number of apoptotic tumor cells(P＜0.05). Conclusion: HERG K+ channels were expressed in all gastric carcinomas tested and these channels appear to modulate tumor cell proliferation and apoptosis.     

胃癌中肿瘤/睾丸抗原的表达研究及NY-ESO-1蛋白的自身抗体检测

目的:分析胃癌中11种CT抗原(cancer/testis antigen)基因的表达分布及NY-ESO-1蛋白引发的自身体液免疫应答,为胃癌的特异性肿瘤疫苗治疗提供依据.方法:利用RT-PCR方法,检测101例胃癌患者肿瘤标本和对应正常胃黏膜中11种CT抗原基因的表达.ELISA方法检测抗NY-ESO-1抗体.利用NY-ESO-1的单抗E978,应用免疫组化方法检测组织切片中NY-ESO-1抗原物质.结果:101例胃癌患者中,74.3%的患者至少表达1种检测的CT抗原基因.12例患者表达NY-ESO-1 mRNA,5例可以检测到NY-ESO-1抗原蛋白以及针对NY-ESO-1抗原的体液免疫反应.结论:胃癌中表达多种CT抗原基因,表达率较高的MAGE-3,SSX-4和NY-ESO-1/LAGE-1蛋白等可作为肿瘤疫苗的备选抗原,其中NY-ESO-1蛋白的免疫原性得到验证.CT抗原的多价肿瘤疫苗在胃癌治疗中具有一定的可行性.     

重组原核表达载体pGEX-4T-1-MAGE-1的构建及表达

目的:构建人肿瘤相关抗原MAGE-1基因原核表达载体.方法:从人肝细胞性肝癌组织中提取总RNA,RT-PCR扩增出MAGE-1基因.酶切鉴定后,将其插入pGEM-T载体,再克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-MAGE-1.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导4 h,SDS-PAGE及凝胶密度扫描分析目的蛋白的表达情况.结果:RT-PCR扩增出长度为927 bp的MAGE-1基因.重组表达质粒pGEX-4T-1-MAGE-1转化大肠杆菌BL21(DE3)后经诱导表达,目的蛋白约57 000,占菌体总蛋白的23%.结论:成功构建出重组原核表达载体pGEX-4T-1-MAGE-1,该载体在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达.