正常家兔左心室三层心肌Cx43表达的异质性研究

目的 观察正常家兔三层心肌间跨室壁缝隙连接蛋白43 (Cx43)分布的差异,探讨恶性室性心律失常(MVA)的发生机制.方法 检测并对比正常家兔左心室三层心肌间的单相动作电位复极90%时程(APD90)以及Cx43蛋白(Cx43-pro)和mRNA(Cx43-Cq)的表达差异.结果 (1)正常家兔三层心肌间APD90存在差别,中层心肌(233.80±19.37)组织APD90均长于心内膜(201.20±18.72)和心外膜下(202.70±19.91)心肌组织(P<0.05),说明家兔三层心肌间存在跨室壁复极的离散;(2)正常家兔三层心肌间的Cx43-pro [(0.58±0.08) vs (0.47±0.04) vs (0.57±0.07)]与Cx43-Cq [(24.61±2.82) vs (22.18±2.62) vs (24.43±3.31)]差异均有统计学意义(P<0.05),中层心肌较心内膜与心外膜下心肌组织表达减少,表明家兔三层心肌间存在跨室壁Cx43表达的异质性.结论 正常家兔中层心肌与心内外膜下心肌间存在Cx43蛋白表达不均一,这是左心室存在心肌横断面上复极离散的蛋白基础.     

升主动脉缩窄大鼠左室心肌细胞结蛋白重构

目的：通过观察左室心肌细胞结蛋白在升主动脉缩窄后心肌肥厚期和心力衰竭期的表达，探讨心肌肥厚和心力衰竭发生的机理。方法：制作大鼠升主动脉缩窄动物模型，间接免疫荧光技术检测游离心肌细胞内结蛋白的分布，Western Blot技术检测新鲜心肌组织中结蛋白的表达。结果：心肌肥厚组和心力衰竭组左室心肌结蛋白表达与对照组相比明显增多；心力衰竭组结蛋白纤维在心肌细胞内的分布与对照组相比无明显差异。结论：心肌细胞结蛋白表达的改变是慢性后负荷性心肌肥厚向心力衰竭转变的重要因素。     

PPARγ基因在结直肠癌伴高脂血症患者中的临床意义

目的 探讨结直肠癌伴或不伴有高脂血症患者中PPARγ基因变化的临床意义，进一步明确PPARγ基因在结直肠癌发生发展及预后中的意义。 方法 回顾性调查2016年6月—2018年6月湖州市中心医院收治的315例结直肠癌患者和109例健康人群的脂质代谢水平，对2组患者的脂质代谢水平进行统计学分析。选择2017年7月—2018年5月83例结直肠癌患者，对51例结直肠癌伴有高脂血症患者和32例结直肠癌不伴有高脂血症患者采用PCR检测和酶联免疫分析(ELISA)测定患者的PPARγ基因表达量和蛋白表达水平；进一步应用PCR检测和酶联免疫分析(ELISA)测定35例结直肠癌伴有肝转移患者和48例结直肠癌不伴有肝转移患者的PPARγ基因表达量和蛋白表达水平。 结果 在回顾性调查中显示，结直肠癌患者伴有高脂血症的患者多于健康人群(P<0.05)。在PCR检测和ELISA测定中显示，与结直肠癌不伴有高脂血症组相比，结直肠癌伴有高脂血症组患者的血清和肿瘤组织中PPARγ基因表达量和蛋白表达水平更高(P<0.05)；与结直肠癌不伴有肝转移患者相比，结直肠癌伴有肝转移患者的PPARγ基因表达量和蛋白表达水平更低(P<0.05)。 结论 结直肠癌伴有高脂血症患者的血清和肿瘤组织中PPARγ基因和蛋白表达水平更高，结直肠癌伴有肝转移患者的PPARγ基因和蛋白表达量更低。PPARγ基因可能参与了结直肠癌患者的脂质代谢。      

缺血再灌注大鼠心肌Fos蛋白表达及川芎嗪的作用

目的：研究大鼠心肌缺血再灌注（ＭＩＲ）时Ｆｏｓ蛋白表达与其病理组织学改变,并观察川芎嗪（ＴＭＰ）对ＭＩＲ时Ｆｏｓ蛋白表达的作用。方法：采用大鼠ＭＩＲ模型,用免疫组化ＡＢＣ法检测ＭＩＲ过程中不同时期Ｆｏｓ蛋白表达并与病得组织学改变进行对照分析．结果：（１）非缺血心肌无Ｆｏｓ蛋白表达,ＭＩＲ６０ｍｉｎ可诱导Ｆｏｓ蛋白表达,９０ｍｉｎ时达高峰,主要分布在心外膜侧。（２）与ＭＩＲ大鼠相比,ＴＭＰ干预缺血心     

血吸虫极低密度脂连结蛋白的表达及免疫原性鉴定

目的：在大肠杆菌中表达日本血吸虫特异性极低密度脂连结蛋白(SVLBP)，纯化并鉴定其免疫活性。方法：SVLBP基因克隆菌在IPTG诱导下大肠杆菌中以6个组氨酸融合蛋白形式大量表达；非变性条件下制备克隆菌裂解液，离心后上演液经凝胶亲和层析纯化重组蛋白，已纯化的重组SSVLBP免疫家兔制备特异性抗血清，用SDS—PAGE和Western blot鉴定其免疫活性。结果：克隆菌在IPIG诱导下能大量表达重组蛋白SVLBP；重组SSVLBP蛋白能诱导家兔产生单特异抗体，琼脂双扩散法测抗体滴度＞1：16；表达产物能与血吸虫病人血清反应；单特异抗血清能识别天然成虫可溶性膜抗原的单一蛋白。结论：SVLBP能在克隆菌中大量表达并且具有较好的免疫原性。     

牛磺酸对大鼠缺血心肌Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的：探讨大鼠心肌缺血损伤与凋亡相关基因bcl-2和bax表达的关系及牛磺酸的影响。方法：结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血模型。检测心肌线粒体中超氧化物歧化酶（SOD）、Ca^2 -ATPase活性及MDA（丙二醛）含量，用免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白在心肌中的表达量。结果：结扎冠脉左前降支可致心肌线粒体MDA含量升高，SOD和Ca^2 －ATPase活性下降；缺血心肌Bax蛋白表达呈显著升高；牛磺酸能明显减少缺血心肌线粒体MDA的生成，降低心肌Bax蛋白的表达，增加Bcl-2蛋白的表达。结论：结扎大鼠冠状动脉左前降支导致的心肌缺血损伤与Bcl-2和Bax蛋白的表达有关。     

降脂消斑片对兔高脂血症合并动脉粥样硬化血脂的影响

目的研究降脂消斑片对高脂血症脂质代谢的影响。方法高脂饲料喂养4个月加免疫损伤制备家兔高脂血症合并动脉粥样硬化模型。用降脂消斑方口服给药治疗8周,检测血TC、TG、LDC-C、HDL-C、ApoA、ApoB,并计算动脉硬化指数（AI）。结果与模型组比较,降脂消斑方明显降低血清TC、TG、LDL-C、Apo-B及AI,差异均具有统计学意义（P〈．05）。结论降脂消斑片有降低血脂的作用,能改善高脂血症的血脂代谢,降低动脉粥样硬化风险指数。     

肝螺杆菌甲基基团趋化信号转导蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备肝螺杆菌甲基基团趋化信号转导蛋白多克隆抗体。方法将我室保种的重组质粒pET22b+/MCP转化大肠杆菌感受态BL21(DE3),IPTG诱导表达His-rhMCP融合蛋白,将表达的融合蛋白纯化后,免疫家兔制备抗体,间接ELISA法测定抗体效价,以制备的菌体外膜蛋白(肝螺杆菌、胆型螺杆菌及幽门螺杆菌)采用Western blot鉴定抗体的特异性。结果大肠杆菌成功表达His-rhMCP融合蛋白,ELISA法检测抗体的效价达到1∶32000,Western blot检测结果显示抗体可与肝螺杆菌菌体外膜蛋白及His-rhMCP特异结合。结论制备了高效价、高特异性的rhMCP抗体,为进一步研究肝螺杆菌的流行病学奠定了基础。     

普伐他丁、维生素E、卡托普利对家兔高脂血症、动脉粥样硬化和脂肪肝形成的影响

目的：寻找能兼顾防治高脂血症、动脉粥样硬化和脂肪肝的有效药物。方法：观察普伐他丁、维生素Ｅ、卡托普利对家兔高脂血症、动脉粥样硬化和脂肪肝形成的影响。结果：普伐他丁可显著降低血脂和改善动脉粥样硬化病变，并有抗脂肪肝作用，联用维生素Ｅ可减轻其潜在的肝毒性；卡托普利有一定的抗动脉粥样硬化作用，且不影响血脂和肝脂质代谢。结论：普伐他丁联用维生素Ｅ、卡托普利可安全用于高脂血症、动脉粥样硬化和脂肪肝患者的治疗     

心肌缺血-再灌注所致单相动作电位振幅改变与心肌损伤程度的相关性研究

目的:研究心肌缺血-再灌注所致单相动作电位振幅(MAPA)改变与心肌损伤程度的相关性。方法:选择新西兰家兔作为实验动物并随机分为对照组和缺血再灌注组(I/R组),建立心肌缺血再灌注损伤模型后分离心脏并在Langendorff灌流系统内测定心肌内膜层、中膜层、外膜层的MAPA;另取血清标本及心肌组织,测定心肌损伤分子的含量。结果:I/R组动物心肌内膜层、中膜层、外膜层的MAPA水平均显著高低于对照组;I/R组动物血清中CK-MB、cTnI、cTnT、MDA的含量以及心肌组织中Bax、Caspase-3、Caspase-9的mRNA表达量均显著高于对照组且与心肌内膜层、中膜层、外膜层的MAPA水平呈负相关,血清中SOD、GSH-Px、HO-1的含量以及心肌组织中Bcl-2、Bcl-xL的mRNA表达量显著低于对照组且与心肌内膜层、中膜层、外膜层的MAPA水平呈正相关。结论:心肌缺血-再灌注会引起MAPA降低且与心肌氧化应激损伤及凋亡密切相关。     

小鼠胸腺的胞外基质发育

目的：探讨胞外基质（ECM）在胸腺发育中的作用及与T细胞发育分化的关系。方法：用抗纤粘连蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原抗体，以免疫组织化学ABC法对所用胸腺切片染色。结果：13d服鼠胸腺内有点状、串珠状ECM阳性区。胸腺内ECM表达，从鼠胚13d到19d渐增强，主要分布于被膜、小叶间隔、血管壁及部分实质细胞间；以后渐减弱且集中在血管壁。结论：ECM表达的变化与胸腺细胞进入胸腺并在胸腺内发育分化最后释放入血有关。     

普伐他丁,维生素E,卡托普利对家兔高脂血症动脉粥样硬化和脂肪肝 …

目的：寻找能瘘顾防治高脂血症、动脉粥样硬纶和脂肪肝的有效药物。方法：观察普伐他丁、维生素Ｅ、卡托普利对家兔高脂血症、动脉粥样硬化和脂肪肝形成的影响。结果：普伐他下可显著降低血脂和动脉粥样硬化病变，并有抗脂肪肝作用，联用维生素Ｅ可减轻其潜在的肝性；卡托普利有一定的抗动脉粥样硬化作用，且不影响血脂和肝脂质代谢，结论：普伐他丁联用维生素Ｅ、卡托普利可安全用于高脂血症、动脉粥样硬化和脂肪肝患者的治疗。     

氯沙坦对动脉粥样硬化早期家兔血管增生及MAPK表达的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂氯沙坦对加速性动脉粥样硬化(AS)早期家兔血管增生及MAPK蛋白表达的影响.方法采用组织学和免疫细胞化学方法评价加速性AS早期家兔血管组织学、PCNA及MAPK蛋白表达的改变.结果 AS组血管内膜与中膜厚度比值、内膜PCNA阳性细胞数及MAPK蛋白表达平均光密度积分值均显著增加,氯沙坦干预组内膜与中膜厚度比值较AS组显著下降,PCNA阳性细胞数明显减少,血管壁MAPK蛋白表达水平明显下降(P值均<0.001).结论氯沙坦干预可抑制血管增生时MAPK蛋白表达,减轻加速性AS病变血管内膜增生,从而可能在防治AS过程中起重要作用.     

布鲁氏菌猪种标准株外膜蛋白OMP25的原核表达

目的克隆布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因并构建基因的原核表达系统。方法用聚合酶链反应技术扩增得到布鲁氏菌基因组，得Omp25基因片段，T—A克隆后测定核苷酸序列，将目的基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1，经双酶切和DNA测序测定，将构建的重组质粒转化大肠杆菌（E．coli HB101，TOP10），经IPTG诱导后，用SDS—PAGE检测重组蛋白rOrap25表达情况。结果经DNA测序显示Omp25DNA序列和插入位点正确，成功构建了重组质粒DGEX-4T-1-Omp25，经IPTG诱导，特异性表达出以包涵体形式存在48kDa的Omp25融合蛋白。结论制备、克隆了布鲁氏菌外膜蛋白Omp25基因片段，并在大肠杆菌中表达出Omp25融合蛋白。     

小鼠胸腺的胞外基质发育

目的；探讨胞外基质在胸腺发育中的作用及与Ｔ细胞发育分化的关系。方法：用抗纤粘连蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原抗体，以免疫组织化学ＡＢＣ法对所用胸腺切片染色。结果：１３ｄ胎鼠胸腺内有点状、串珠状ＥＣＭ阳性区。胸腺内ＥＣＢ表达，从鼠胚１３ｄ到１９ｄ渐增强，主要分布于被膜、小叶间隔、血管壁及部分实质细胞间；以后渐砬弱且集中在血管壁。结论：ＥＣＭ表达的变化与胸腺细胞进入胸腺并在胸腺内发育分化最后释放人血有关。     

兔抗mLAIR-1胞外区抗体的制备、纯化和鉴定

目的：表达并纯化小鼠白细胞相关免疫球蛋白样受体-1（mLAIR-1）胞膜外区与人IgG Fc段的融合蛋白，制备兔抗mLAIR-1胞膜外区的抗体．方法：构建真核表达载体，表达并纯化mLAIR-1-Fc融合蛋白．以mLAIR-1-Fc融合蛋白免疫家兔，用偶联mLAIR-1-Fc融合蛋白的Sepharose-4B亲和层析柱纯化多克隆抗体．用间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定多克隆抗体的特异性．结果：表达并纯化了mLAIR-1-hIgFc融合蛋白．以其免疫家兔，用亲和层析的方法纯化得到兔抗mLAIR-1胞膜外区的抗体，能与转染细胞和细胞表面天然mLAIR-1分子结合．结论：成功地构建了mLAIR-1胞膜外区基因的真核表达载体，表达并纯化了mLAIR-1-Fc融合蛋白．用偶联mLAIR-1-Fe融合蛋白的Sepharose-4B亲和层析柱纯化的兔抗mLAIR-1胞外区抗体，具有高特异性和高效价，为进一步研究mLAIR-1分子的结构和功能提供了新的手段．     

11β⁃HSD1抑制剂BVT.2733对肥胖小鼠多器官组织代谢与炎症相关基因表达的影响

目的：评估11β?羟基类固醇脱氢酶1（11β?hydroxysteroid dehydrogenase type 1,11β?HSD1）抑制剂BVT.2733对肥胖小鼠骨骼肌、肝脏、肾脏、心肌和脾脏中代谢和炎症相关基因表达的影响。方法：构建高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型,分为正常饮食组、高脂饮食组和高脂饮食+BVT.2733处理组。采用RT?PCR检测骨骼肌、心肌、肝脏、肾脏和脾脏中的代谢及炎症相关基因的表达。结果：在代谢方面,BVT.2733可促进骨骼肌和心肌的代谢指标UCP2和GLUT4的表达,同时,BVT.2733可抑制肝脏的脂质合成关键酶SREBP和FAS的表达,并可以使肾脏的葡萄糖重吸收蛋白SGLT1和SGLT2表达降低。在炎症方面,BVT.2733可显著抑制脾脏的IFN?γ、IL?13、IL?4和IL?5的表达,同时可减少骨骼肌和心肌炎症因子的表达。结论：BVT.2733对肥胖小鼠的骨骼肌、肝脏、肾脏、心肌和脾脏的代谢及炎症相关基因的表达有显著影响。     

碘化N-正丁基氟哌啶醇减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤作用的机制研究

目的：探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇（F2）减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的分子生物学机制。方法：用大鼠在体心肌缺血再灌注模型，通过测定血清中肌酸激酶、乳酸脱氢酶的活性观察心脏损伤的情况；通过测定心肌组织中髓过氧化物酶、超氧化物歧化酶、丙二醛的变化，观察中性粒细胞浸润、氧自由基及脂质过氧化的情况。Westemblot法测定心肌缺血组织中早期生长反应基因-1（Egr-1）蛋白水平的变化。结果：与对照组比，反义核苷酸组及反义核苷酸＋F2组Egr-1蛋白表达明显减少（P〈0．05），炎症反应及心肌损伤程度明显减弱（P〈0．05）；反义核苷酸＋F2组与反义核苷酸组比。Egr-1蛋白表达无统计学意义（P〉0.05），心肌损伤及炎症反应程度明显减轻（P（0．05）。结论：F2可通过抑制Egr-1蛋白表达，起到减轻心肌缺血再灌注损伤的作用，除抑制Egr-1蛋白的高表达外，F2还可通过其他机制起到抗心肌缺血再灌注的作用。     

缺血后处理对家兔缺血再灌注心肌窦房结细胞凋亡的影响

目的：在家兔急性心肌梗死模型中观察缺血后处理对家兔心肌窦房结细胞缺血再灌注（IR）的作用及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法：在体成年家兔右冠状动脉缺血再灌注模型分4组：正常对照组、IR组、缺血预处理（IPC）组、缺血后处理组。观察缺血后处理对家兔在体窦房结细胞IR损伤及Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果：对照组细胞凋亡、Bcl-2和Bax蛋白表达极少;IPC、缺血后处理组较IR组窦房结细胞凋亡数目显著减少,Bcl-2蛋白表达显著增强,Bax蛋白表达显著减弱;IPC组与缺血后处理组细胞凋亡数目、Bcl-2和Bax蛋白表达无显著差异。结论：IR损伤可诱导窦房结细胞凋亡,IPC、缺血后处理可通过提高Bcl-2蛋白表达同时下调Bax蛋白表达水平从而减少窦房结细胞凋亡,但两组干预效果无明显差异。     

小肠与脂蛋白代谢

肝与肠是人体内与脂质代谢密切相关的两大器官。肠通过合成APO及脂质转运入淋巴液与血液中由肝合成的脂蛋白颗粒进行成分交换,形成稳定的血脂蛋白。所以说肠在脂代谢中不只是吸收器官,其对于维持血液脂质代谢平衡起着十分重要的作用。因此深入研究肠的脂质代谢对于高脂血症及动脉粥样硬化的防治有着重要意