自溶素基因与表皮葡萄球菌生物膜形成相关性研究

目的研究自溶素(atlE)基因与表皮葡萄球菌生物膜形成的相关性。方法收集2015年6月至2016年6月该院临床分离的表皮葡萄球菌64株进行研究,用生物膜形成试验检测细菌生物膜,采用聚合酶链反应扩增atlE基因,分析atlE基因与表皮葡萄球菌生物膜形成的相关性。结果检出生物膜阳性菌株24株,检出率为37.5%;检出atlE基因菌株31株,检出率为48.4%;atlE基因与表皮葡萄球菌生物膜形成有明显的相关性(P0.05)。结论表皮葡萄球菌有生物膜形成能力,atlE基因与表皮葡萄球菌生物膜形成相关。     

金黄色葡萄球菌生物膜形成及相关基因分析

目的探讨金黄色葡萄球菌生物膜表型与相关基因的关系。方法收集100株临床分离的金黄色葡萄球菌,用刚果红培养基法进行生物膜筛选;用电子显微镜观察生物膜的形成;用PCR方法检测生物膜相关基因。结果 100株金黄色葡萄球菌中,79株产生生物膜,阳性率为79.0%。ebh、icaA、icaD、fnbA的检出率分别为53.2%、94.9%、94.9%、81%。金黄色葡萄球菌生物膜阳性菌株和生物膜阴性菌株之间生物膜相关基因ebh、icaA、icaD、fnbA的阳性率差异有统计学意义(P0.01)。结论ebh、icaA、icaD、fnbA 4种基因与金黄色葡萄球菌生物膜形成密切相关。     

肺癌患者中心静脉导管相关表皮葡萄球菌icaA、icaD表达及转化生长因子β1与生物膜的关系

背景：研究证实,以生物材料为中心的感染细菌临床株致病力与其在中心静脉导管材料表面形成细菌生物膜的能力呈正相关。目的：分析肺癌患者中心静脉导管相关表皮葡萄球菌icaA、icaDmRNA表达及外周血转化生长因子β1水平与细菌生物膜形成的关系。方法：种属鉴定相关性血流感染肺癌患者表皮葡萄球菌类型后行细菌基因组DNA抽提,PCR法检测生物膜形成相关基因icaA、icaDmRNA表达及生物膜表型。酶联免疫吸附试验检测相关性血流感染与未感染肺癌患者血清转化生长因子β1水平。结果与结论：相关性血流感染肺癌患者表皮葡萄球菌操纵子icaA、icaD基因表达与生物膜形成呈正相关（P〈0.01）,且表皮葡萄球菌生物膜阳性患者外周血转化生长因子β1水平较无相关性血流感染肺癌患者高（P〈0.05）。表明置入中心静脉插管引起表皮葡萄球菌感染icaA、icaD基因表达阳性肺癌患者较易形成细菌生物膜,外周血高水平转化生长因子β1对细菌生物膜形成有积极作用。     

表皮葡萄球菌icaA和icaD基因表达及其与黏质物形成的关系

目的了解临床分离的表皮葡萄球菌所携带的icaA和icaD操纵子表达情况及其与黏质物形成之间的关系。方法收集1CU临床分离的表皮葡萄球菌62株,采用刚果红法检测其黏质物形成,PCR法检测icaA、icaD基因表达,卡方检验法进行统计学处理。结果62株表皮葡萄球菌中产黏质物菌株有26株（41．9％）;产黏质物菌株中icaA、icaD基因表达阳性的菌株分别为22株（84．6％）和19株（73．1％）,icaA、icaD基因表达均为阳性有17株（65．4％）,明显高于非产黏质物菌株（P〈0．01）;icaA、icaD基因表达均阴性为2株（7．7％）,明显低于非产黏质物菌株（P〈0．01）。结论icaA、icaD基因表达对表皮葡萄球菌的黏质物产生具有重要影响,但并不是其唯一的影响因素。     

表皮葡萄球菌附属基因调节子对生物膜形成的调节作用

目的研究表皮葡萄球菌agr对其生物膜形成的调节作用，并探讨其调节机制，以期发现新的生物膜形成调节途径，完善agr调节网络。方法用同源重组方法构建表皮葡萄球菌agr阴性突变株，从体外、体内不同角度观察agr阴性突变株与其agr阳性野生株生物膜形成能力和致病力的差异。结果表皮葡萄球菌agr阴性突变株与其agr阳性野生株相比，黏附能力、致病力均明显增强；在agr阴性突变株中许多蛋白表达是增加的，如ClpP（ATP—dependent Clp protease）、DadL（D—alanine—D—alanine ligase）等；在agr阴性突变株中基因clpP、atlE和dadL mRNA的表达分别是agr阳性野生株的6．4、7．6和3．9倍。而fbe、ica mRNA的表达在agr阴性突变株和agr阳性野生株中差异无统计学意义。结论agr基因可以下调表皮葡萄球菌生物膜的形成，是生物膜形成的抑制因子。agr基因对生物膜的下调作用可能不但通过下调atlE的表达，还可能同时下调clpP的表达；agr对生物膜的下调作用并不通过调节fbe和ica途径；首次发现agr可以通过调节dadL来调节细菌细胞壁的合成。     

高水平莫匹罗星耐药MRSA体外生物膜形成能力及相关基因检测

目的 了解高水平莫匹罗星耐药甲氧西林耐药金葡菌(MuH MRSA)体外生物膜形成能力及介导生物膜形成相关基因的分布.方法 对分离自上海和浙江省温州地区5所教学医院的803 株临床分离MRSA进行莫匹罗星纸片扩散法检测最低抑菌浓度(MIC),mupA基因PCR扩增筛选MuH MRSA,分光光度计检测MuH MRSA菌株体外生物膜的形成能力,PCR扩增生物膜形成相关基因(icaA、icaD、agr、sarA、sasG、bap和ccpA).结果 共筛选出53株MuH MRSA,其中仅5株(9.4%,5/53)具有体外形成生物膜的能力;基因检测显示,icaD和agr基因存在于全部MuH MRSA菌株中,而icaA、sarA、sasG和ccpA基因则分别存在于83.0%、86.8%、84.9%和92.5%的菌株中,仅有1株细菌携带bap基因.结论 大部分生物膜形成相关基因广泛分布于MuH MRSA菌株中,但仅agr基因可能是该类菌株体外生物膜形成能力的主要影响因素.     

4种方法检测表皮葡萄球菌生物膜形成能力的应用价值探讨

目的比较4种方法检测表皮葡萄球菌体外生物膜形成能力的应用价值,帮助临床选择检测生物膜形成能力的可靠方法。方法用刚果红实验、半定量粘附实验、扫描电镜实验、PCR扩增icaA分别检测临床分离的45株表皮葡萄球菌生物膜的形成能力,经行×列表χ2检验比较阳性检出率,并以扫描电镜检测法为＂金标准＂计算其他3种方法的灵敏度和特异性。结果 4种方法检出表皮葡萄球菌生物膜形成的阳性率分别为31.1%、40.0%、40.0%、28.9%,无统计学差异（χ2=1.80,P〉0.05）。刚果红实验、半定量粘附实验、PCR扩增icaA检测生物膜形成能力的灵敏度分别为77.8%、100%、77.2%,而特异性均为100%。结论 4种方法均可用于体外生物膜检测。     

3种液体培养基对表皮葡萄球菌生物膜形成的影响

目的探讨胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)、LB和M-H 3种肉汤培养基对表皮葡萄球菌生物膜形成的影响。方法通过96孔和6孔板构建细菌生物膜,结晶紫染色对其进行半定量分析和显微镜观察生物膜形态,探讨TSB、LB和M-H肉汤培养基对表皮葡萄球菌生物膜形成的影响;提取细菌总RNA,逆转录后进行实时荧光定量PCR检测3种培养基对表皮葡萄球菌粘附基因表达量的影响。结果与LB(0.149±0.047)和M-H(0.323±0.003)培养基相比,TSB(2.954±0.287)培养基能显著促进表皮葡萄球菌生物膜的形成(TSB vs LB,t=16.706,P0.01;TSB vs M-H,t=15.877,P0.01);与LB培养基相比,TSB培养基可显著促进表皮葡萄球菌ica A基因的表达(t=9.667,P0.01)并抑制icaR基因的表达(t=13.283,P0.01)。结论与LB和M-H肉汤培养基相比,TSB培养基能显著促进表皮葡萄球菌生物膜的形成和粘附基因ica A的表达。     

亚抑菌浓度红霉素对表皮葡萄球菌临床菌株的影响

目的探讨亚抑菌浓度红霉素对表皮葡萄球菌临床菌株的影响。方法收集该院表皮葡萄球菌临床菌株,按照临床实验室标准化协会推荐的方法进行药敏试验。采用免疫比浊法检测亚抑菌浓度红霉素对表皮葡萄球菌增殖的影响,并采用结晶紫染色法检测亚抑菌浓度红霉素对其生物膜形成的影响。最后,利用实时荧光定量PCR检测亚抑菌浓度红霉素对表皮葡萄球菌黏附基因表达的影响。结果共收集5株临床分离表皮葡萄球菌,最低抑菌浓度分别为16、32、16、64和32μg/mL。亚抑菌浓度的红霉素(8μg/mL)对表皮葡萄球菌浮游菌的增殖无影响(P0.05),但能显著抑制其生物膜的形成(P0.05)。8μg/mL的红霉素还能显著抑制黏附基因icaA和icaD基因的表达(P0.05)。结论亚抑菌浓度红霉素能抑制表皮葡萄球菌临床菌株生物膜的形成及黏附基因的表达。     

葡萄球菌生物膜的形成及影响因素

目的了解临床标本中葡萄球菌形成生物膜的状况，及葡萄糖、乙醇、氯化钠对生物膜形成的影响。方法采用刚果红、微量平板法检测生物膜形成及葡萄糖、乙醇、氯化钠对生物膜形成的影响。结果刚果红法检测金黄色葡萄球菌(金葡菌)、凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)生物膜阳性率分别为26．2％和12．7％；生物膜半定量法，金葡菌：普通肉汤、0．25％葡萄糖、2％、4％乙醇、2％、4％氯化钠阳性率分别为14．7％、29．6％、32．7％、19．6％、13．1％和14．6％；CNS分别为13．9％、27．8％、26．5％、18．5％和21．5％。结论临床标本葡萄球菌相当一部分能产生生物膜，葡萄糖、乙醇能促进生物膜形成。     

Commensal isolates of methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis are also well equipped to produce biofilm on polystyrene surfaces

OBJECTIVES: To study biofilm production and to detect icaAD, atlE and aap genes in 137 isolates of methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis (MRSE) obtained from healthy individuals from the community (35 isolates), from hospitalized patients at the Ant?nio Pedro University Hospital (25 isolates) and from individuals from a home-care system (HCS; 77 isolates). METHODS: Biofilm production was determined in vitro using polystyrene inert surfaces. icaAD, atlE and aap genes were detected using PCR. Hybridization experiments were also carried out to confirm some PCR results. Antimicrobial susceptibility testing was carried out using the NCCLS methods. RESULTS: Although many of the commensal MRSE isolates produced biofilms, the percentage of biofilm producers was significantly higher (P = 0.0107) among hospital isolates (76%) than among isolates from the community (60%) and from the HCS (57%). An association was observed between multiresistance and biofilm production for isolates obtained from healthy individuals from the community and from household contacts from the HCS (P < 0.0001). The concomitant presence of the ica operon and atlE and aap genes was associated with the strong biofilm-producer phenotype (P < 0.0001). CONCLUSION: Because many of the commensal MRSE isolates obtained from nares produced biofilms and carried icaAD, aap and atlE genes, biofilms or such genetic elements should not be used as markers for clinical significance. The biofilm environment seems to increase genetic exchanges and hence may contribute to multiresistance phenotypes.     

金黄色葡萄球菌生物膜产生及相关毒力因子研究

目的 金黄色葡萄球菌引起的感染遍及临床各科,人体各部位。对临床分离的金黄色葡萄球菌进行生物膜、生物膜相关因子及毒力因子检测；方法 刚果红培养基法进行生物膜筛选；用电子显微镜观察生物膜的形成；用PCR方法检测生物膜相关基因及毒力因子。结果 100株金黄色葡萄球菌中,63株产生生物膜,产生物膜率达63.0％,均产生与生物膜高度相关的icaA基因、icaD基因；还可产生ebh、sea、seb、pvl、hla、fnbA 等毒力因子；产生物膜的菌中MRSA菌株占51.2%,MSSA占48.8%；结论 产生物膜的金黄色葡萄球菌已经成为医院感染的致病因素之一,常产生各种毒力因子。     

Detection of biofilm-forming strains of Staphylococcus epidermidis and S. aureus

The formation of biofilm represents an important virulence factor of certain strains of Staphylococcus epidermidis and S. aureus. The ability of bacteria to aggregate, forming biofilms, is strictly related to the capacity of producing an extracellular mucoid substance often referred to as slime, whose main component is of polysaccharidic nature and consists of glycosaminoglycans. In recent years, new molecular techniques based on PCR have come alongside more traditional methods for identification of virulent biofilm-forming strains. The detection of the genes governing the production of such extracellular polysaccharide and, in particular, the icaA, the icaC and the icaD genes, provides us with a rapid and accurate technique for strain characterization. However, well-established methods, such as the Congo red agar test are still needed in order to confirm the phenotypic expression in the case of possible phase-variant strains. In future, the complete knowledge of the genetic mechanisms of phenotype modulation, comprehending all regulatory genes, could permit the characterization of the isolates just by molecular means in a single step.     

表皮葡萄球菌生物膜形成与细菌耐药性的相关性分析

目的探讨表皮葡萄球菌临床分离株生物膜的形成情况,分析其生物膜形成与细菌耐药性的相关性。方法收集2014年1月至2015年2月住院患者血标本分离出的表皮葡萄球菌62株,采用生物膜形成试验和聚合酶链式反应(PCR)扩增试验检测细菌生物膜,并采用纸片扩散法(K-B法)进行细菌药物敏感性试验。结果利用生物膜形成试验检出生物膜阳性菌株23株,检出率为37.1%;PCR扩增试验检出icaA基因27株,检出率为43.5%,差异无统计学意义(P0.05);两种方法同时阳性的菌株为14株。生物膜阳性菌株对所测抗菌药物的耐药率普遍高于生物膜阴性菌株,其中对庆大霉素、青霉素G、苯唑西林、左旋氧氟沙星、头孢西丁的耐药率比较差异有统计学意义(P0.05),所有菌株对万古霉素、利奈唑胺、奎奴普丁/达福普汀均敏感。结论两种方法对表皮葡萄球菌生物膜的检出率无明显差异,生物膜阳性菌株耐药率普遍高于生物膜阴性菌株。     

Assessment of biofilm-forming ability of coagulase-negative staphylococci isolated from contaminated platelet preparations in Canada

BACKGROUND: Coagulase-negative staphylococci (CoNS) are the most prevalent bacterial contaminants of platelet (PLT) preparations and have been implicated in adverse transfusion reactions worldwide. The most frequently identified contaminant is Staphylococcus epidermidis, which is noted for its ability to maintain chronic hospital-acquired infections by forming biofilms as a chief virulence mechanism. STUDY DESIGN AND METHODS: Strains of S. epidermidis isolated from contaminated PLT preparations in Canada were distinguished via gene-specific polymerase chain reaction (PCR) with divIVA as a marker. Biofilm-forming ability was assessed by the presence of the gene icaD, slime production on Congo red agar, and biofilm formation on polystyrene surfaces. Production of polysaccharide intercellular adhesin (PIA) was resolved by immunofluorescence. RESULTS: Eight of the 13 (62%) CoNS isolates under study were identified as S. epidermidis. Of these, four strains (50%) were classified as strong biofilm producers. Three of the four biofilm-positive strains (75%) produced slime, harbored the icaD gene, and had positive expression of PIA. CONCLUSIONS: Despite the presumable commensal origin of the CoNS isolates, a large proportion of S. epidermidis strains demonstrated a potential for enhanced virulence. Identification of contaminant staphylococci as biofilm producers is thus relevant and informative with regard to treatment approach in the circumstance of inadvertent infection of a PLT recipient.