多重PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的建立一种直接、快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的多重PCR方法。方法设计3对引物,在同一反应管中同时扩增检测mecA、femA和IS431基因,扩增产物经凝胶成像系统分析。结果9株MRSA菌株mecA、fe-mA和IS431均阳性,5株凝固酶阴性的耐甲氧西林的葡萄球菌mecA和IS431阳性,7株甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌femA和IS431阳性,11株甲氧西林敏感的凝固酶阴性葡萄球菌IS431阳性,而大肠杆菌、肺炎链球菌等非葡萄球菌mecA、femA和IS431均阴性;当MRSA茵浓度达102CFU／ml时就可检出。结论通过同时扩增mecA、femA和IS431基因的多重PCR技术,能准确、快速地鉴定耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性的葡萄球菌。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MecA基因的实时荧光定量PCR方法学评价

目的评估实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测临床标本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)MecA耐药基因的价值。方法选择该院2013年6~12月125份临床标本,包括血液40份,痰液52份,创面分泌物33份进行FQ-PCR检测和细菌鉴定,分析结果符合率,以检测FQ-PCR的灵敏度及特异性。结果FQ-PCR的灵敏度为0.159pg/μL,检测经细菌培养鉴定的菌株,特异性达到100%,与临床标本结果符合率为97.6%。结论 FQ-PCR检测MRSA的MecA基因更加方便、快速,且灵敏度和特异性等性能指标均比较理想,与细菌鉴定结果符合率较高,适合临床广泛应用。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌多重耐药基因检测

目的 了解金黄色葡萄球菌（金葡菌）β内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类抗生素耐药基因的分布特点，评估耐药性基因型与表型测定法的相关性。方法 聚合酶链反应（PCR）测定本地分离100株金葡菌的β内酰胺类耐药基因mecA、氨基糖苷修饰酶基因aae（6′）／aph（2″）、aph（3′）-Ⅲ、ant（4′，4″）、大环内酯类23s rRNA甲基化酶基因erm、四环素类核糖体保护蛋白基因tetM的发生率，纸片扩散法测定苯唑西林、庆大霉素、红霉素、四环素的耐药性。结果 100株受试菌中mecA阳性66株（MRSA），最常见的耐药基因是erm＋tetM，存在于89．4％的MRSA中，最少见的是ant（4′，4″），存在于4．5％的MRSA中，MRSA的aae（6′）／aph（2″）、aph（3′）-Ⅲ、erm、tetM检出率分别为97．.％、72．7％、100％、89．4％，明显高于MSSA的11．8％、2．9％、44．1％、8．8％；66株MRSA中，43株（65．2％）同时检出aae（6′）／aph（2″）、aph（3′）-Ⅲ、erm、tetM4种基因，58株（87．9％）同时检出aae（6′）／aph（2″）、erm、tetM3种基因，34株MSSA中，仅2株（5．9％）同时检出aae（6′）／aph（2″）、erm、tetM3种基因；苯唑西林、庆大霉素、红霉素、四环素与其相应的耐药基因mecA、age（6′）／aph（2″）、erm、tetM的符合率分别为96％、99％、96％、84％，81株红霉素表型耐药菌中79株（97．5％）为大环内酯．林可霉素．链霉菌素B（MLS8）结构型耐药。结论耐药基因在金葡菌中均可检出，金葡菌对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类抗生素耐药与苯唑西林耐药紧密相关，大环内酯类主要是结构型耐药，基因型与表型测定有较高的符合率。     

实时荧光PCR快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床评估

目的:采用实时荧光PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),并评价该方法在临床上的应用价值。方法:将临床分离的62株金黄色葡萄球菌(金葡菌)和35株非金黄色葡萄球菌同时采用分离培养及药物敏感试验(药敏试验)和实时荧光PCR法进行检测并比较,对2种方法检测结果不符的菌株辅以测序法进行最后鉴定,并确定实时荧光PCR法的检测灵敏度。结果:分离培养法与实时荧光PCR法对金葡菌检测的一致率为100%,都检测出了62株金葡菌阳性株。实时荧光PCR法与分离培养药敏试验法MRSA检测的符合率为96.77%,而分离培养药敏试验法检测为阴性而实时荧光PCR法检测为阳性的2株待检菌的测序结果显示为MRSA阳性株。最后确定实时荧光PCR法检测MRSA的临床灵敏度为1×103 cfu/mL。结论:实时荧光PCR法可用于临床对MRSA的快速检测,具有较高的临床价值。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌实时荧光PCR检测方法的建立和评价

目的建立实时荧光PCR快速筛查耐甲氧西林葡萄球菌株和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株的方法。方法以耐甲氧西林mecA基因的保守序列为模板设计特异性引物探针,建立一种能快速检测样本中耐甲氧西林葡萄球菌的实时荧光PCR方法,结合对金黄色葡萄球菌的特异性NUC基因进行实时荧光检测,可鉴定是否为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株。以纸片扩散法作为对照方法,对所建立的实时荧光PCR检测方法检测效果进行初步评价。结果该实时荧光PCR方法的整个检测过程只需要1.5h;对22例临床样本进行检测,所建立的荧光PCR方法比纸片法多检出2例耐甲氧西林菌株;对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测结果一致。结论本研究建立的实时荧光PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法不仅能实现耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的快速检测,更可能为指导临床用药提供有价值的参考。     

实时荧光定量PCR在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的应用评估

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的应用。方法采用头孢西丁纸片扩散法和mecA基因PCR检测法,将85株临床分离的金黄色葡萄球菌区分为MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),并采用实时荧光定量PCR对这些菌株进行检测,评价MRSA检测中实时荧光定量PCR与目前常规检测方法的一致性。结果根据头孢西丁纸片扩散法和mecA基因扩增结果进行分组,85株金黄色葡萄球菌中MRSA组菌株45株,MSSA组菌株40株;实时荧光定量PCR检测结果与上述结果完全一致,符合率为100%。结论实时荧光定量PCR检测MRSA的结果与常规方法一致性好,且具有操作简便、耗时短等特点。作为一种快速检测方法,实时荧光定量PCR能将金黄色葡萄球菌的鉴定和MRSA的筛选结合起来,对于指导临床用药及MRSA医院感染控制具有重要意义。     

快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的PCR方法学评价

摘要：目的：对PCR法直接检测标本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐药基因mecA的可靠性进行评估。 方法：用经细菌表型鉴定的70株临床标本分离株进行方法学评估,其中MRSA 22株,非MRSA 48株,检测其最低检测限、重复性、灵敏度和特异性。同时对269份临床标本,包括67份痰液、82份血液、68份尿液以及52份无菌体液进行PCR检测和细菌表型鉴定,分析结果符合率。 结果：PCR法的最低检测限为5×10⁴ CFU/mL;菌数5×10⁶和5×10⁴ CFU/mL标本的批内变异系数（CV）为0.81%、0.94%,批间CV为1.48%、2.03%;检测经表型鉴定的菌株,敏感性和特异性均达到100%。痰液标本PCR检测和细菌表型鉴定符合率为98%,血液、尿液和其他体液标本均为100%。 结论：PCR法检测mecA耐药基因,方便、快速且最低检测下限和重复性等性能指标均比较理想,与表型鉴定符合率较高,适于临床应用。     

多重聚合酶链反应检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的应用一种敏感快速的多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）,检测耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）和凝固酶阴性葡萄球菌（ＭＲＣＮＳ）。方法临床分离的北京地区金黄色葡萄球菌１２３株,ＭＲＣＮＳ１２２株,用溶壁素和蛋白酶Ｋ制备模板ＤＮＡ,设计葡萄球菌甲氧西林耐药的决定基因,金黄色葡萄球菌独有的一个辅助基因和细菌中均有的１６ＳｒＲＮＡ基因引物,通过多重ＰＣＲ技术对标本进行扩增。结果１２３株金黄色葡萄球菌的ｆｅｍＡ基因１００％（１２３／１２３）阳性,ｍｅｃＡ基因阳性的占１８．７％（２３／１２３）,１２２株ＭＲＣＮＳ的ｆｅｍＡ１００％（１２２／１２２）阴性,ｍｅｃＡ阳性的占２４．６％（３０／１２２）。１６ＳｒＲＮＡ基因片断在多重ＰＣＲ中作为内部参照避免了假阴性结果的出现。结论建立的多重ＰＣＲ技术检测ＭＲＳＡ和ＭＲＣＮＳ具有敏感、快速、特异的特点,是一种可靠的实验诊断手段。     

多重聚合酶链反应检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的 应用一种敏感快速的多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）,检测耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）和凝固酶阴性葡萄球菌（ＭＲＣＮＳ）。方法 临床分离的北京地区金黄色葡萄球菌１２３株,ＭＲＣＮＳ１２２株,用溶壁素和蛋白酶Ｋ制备模板ＤＮＡ,设计葡萄球菌甲氧西林耐药的决定基因,金黄色葡萄球菌独有一个辅助基因和细菌中均为有１６ＳｒＲＮＡ基在引物,通过多重ＰＣＲ技术对标本进行放增。结果 １２３株金黄色葡萄球菌的     

应用DNA探针检测甲氧西林耐药葡萄球菌

目的建立一种快速检测葡萄球菌和甲氧西林耐药葡萄球菌的斑点杂交技术。方法设计金黄色葡萄球菌nuc基因、甲氧西林耐药mecA基因、葡萄球菌tuf基因的特异引物,用聚合酶链反应合成其特异DNA探针,并用生物素标记,分别与固定在硝酸纤维素膜上的标准菌株和临床分离株模板DNA杂交,观察其敏感性和特异性。结果3对引物分别扩增出270bp、310bp、370bp3种DNA探针,均具有高度特异性。50株金黄色葡萄球菌tuf、nuc基因均为阳性：mecA基因阳性者22株。30株表皮葡萄球菌tuf基因均为阳性,nuc基因均为阴性,mecA基因阳性者9株。而其他非葡萄球菌与3种DNA探针杂交结果均为阴性。该方法可检测出1 ng细菌DNA。结论斑点杂交技术检测耐甲氧西林葡萄球菌快速、有效,具有较高的应用价值。     

PCR鉴定耐甲氧西林葡萄球菌

耐甲氧西林葡萄球菌(MRSA)可产生低亲和力的青霉素结合蛋白(PBP2′或PBP2a),结构     

实时荧光定量PCR在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的评价与应用

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的临床应用价值。方法经培养鉴定的70例已知细菌中22例为MRSA,48例为非MRSA,对已知细菌用实时荧光定量PCR进行检测,了解该方法的特异性和敏感性。对临床88例医护人员和患者的鼻拭子进行实时荧光定量PCR检测,了解医院内MRSA的携带情况。结果培养为MRSA,实时荧光定量PCR检测结果均为MRSA,敏感性为100%;培养为非MRSA,实时荧光定量PCR检测结果均为非MRSA,特异性为100%。实时荧光定量PCR检测MRSA的敏感性可确定为1×103cfu/mL。48例患者的鼻拭子mecA耐药基因阳性26例,金黄色葡萄球菌阳性28例,两者同时阳性(即为MRSA)20例,MRSA阳性检出率为41.6%;40例医护人员鼻拭子mecA耐药基因阳性12例,金黄色葡萄球菌阳性13例,两者同时阳性(即为MRSA)9例,MRSA阳性检出率为22.5%。结论实时荧光定量PCR可用于临床对MRSA的快速检测。     

甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的定量分析

美国疾病预防与控制中心主办的细菌感染实时监测网络计划对美国9个社区的侵袭性MRSA感染报道进行了分析。在8987例确诊病例中,13.7%为社区获得性,其余为医疗保健机构相关。在7639例医疗保健机构相关病例中,5250例(68.7%,占病例总数的58.4%)为社区发病,1234例(16.2%,占总数的13.7%)为医院发病。标化发病率为31.8例/10万人,发病率在>65岁、男性和黑人中最高(分别为127.7、37.5和66.5例/10万人)。5~17岁的人群发病率最低(1.4例/10万人)。不同区域间差异很大,最少的县为19.2/10万人;最多者为116.7/10万人。USA300(一种美国CA-MRSA的流行株)占150株社区获得菌株的66.6%,占485株医疗保健机构获得菌株的22.2%,及216株医疗保健机构菌株并有医院发病病例中的15.7%。在感染病例中血流感染占75.2%,肺炎13.3%,蜂窝织炎9.7%,骨髓炎7.5%,心内膜炎6.3%,感染性休克4.3%。标化死亡率为6.3例/10万人。据作者估计,2005年美国共发生94360例侵袭性MRSA感染,其中18650例死亡。美国住院患者中金葡菌感...     

多重PCR直接鉴定临床标本中的耐甲氧西林葡萄球菌

目的：应用多重PCR直接鉴定临床标本中的耐甲氧西林葡萄球菌（MRS），利于迅速的诊断和治疗。方法：采用QiaAmpDNABlood MiniKit，从血培养瓶、尿液、穿刺液的肉汤增菌液、脓汁、痰、阴道及子宫颈分泌物直接迅速提取制备模板DNA：通过多重PCR技术扩增标本的meca基因和葡萄球菌16SrRNA基因。结果：287例葡萄球菌感染的临床标本中，金黄色葡萄球菌的meca基因阳性率为54．4％（55／101），凝固酶阴性葡萄球菌meca基因阳性率为58．6％（109／186）。从模板DNA制备到多重PCR产物的检测不到4h。结论：建立的基于DNA分离和多重PCR检测MRS的技术具有敏感、快速、特异的特点，是一种可靠的实验诊断手段。     

胶体金法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法学评估

目的 评估胶体金法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的意义.方法 以胶乳凝集法作为对照,比较头孢西丁纸片扩散法、Vitek32全自动微生物鉴定/ 药敏系统和胶体金层析技术检测MRSA 的敏感度和特异度.结果 采用胶乳凝集法检测出MRSA 113株,阳性检出率为77.9%(113/145);纸片扩散法检出MRSA 111株,阳性检出率为76.6%(111/145);Vitek32 全自动微生物鉴定/药敏系统检出MRSA 111株,阳性检出率为76.6%(111/145);胶体金法检出MRSA 112株,阳性检出率为77.2%(112/145).结论 胶体金层析技术适用于临床微生物实验室.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药机制及检测

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是医院内感染和社区感染的重要病原菌之一，其检出率逐年增高，耐药性不断增强，对临床治疗提出严峻挑战。阐明MRSA的耐药机制以及快速准确地检测MRSA是预防和控制MRSA感染的基础和重要环节，也是当前MRSA研究的热点。现就MRSA的耐药机制及其检测方法的研究进展作一综述。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药机制及检测

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是医院内感染和社区感染的重要病原菌之一,其检出率逐年增高,耐药性不断增强,对临床治疗提出严峻挑战。阐明 MRSA的耐药机制以及快速准确地检测MRSA是预防和控制MRSA感染的基础和重要环节,也是当前 MRSA研究的热点。现就MRSA的耐药机制及其检测方法的研究进展作一综述。     

耐甲氧西林葡萄球菌的检测

耐甲氧西林葡萄球菌（ＭＲＳ）不仅对β内酰胺类抗生素耐药,还对氨基糖甙类等多种抗生素耐药,是现有抗生素难以控制的医院感染菌［１］。寻找适合医院临床实验室检测ＭＲＳ的简易、精确的方法,是控制ＭＲＳ感染的关键。我们对临床分离的１００株葡萄球菌用聚合酶链反...     

社区获得甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌

金葡菌是引起感染性疾病的重要致病菌，侵袭性金葡菌感染常可导致患者死亡。上世纪40年代青霉素应用于临床后患者的预后获显著改善，但不久便出现产青霉素酶的耐药菌株，甲氧西林等耐酶青霉素能有效抑制该耐药株。随后迅即出现遍布世界各地医院的耐甲氧西林金葡菌（MRSA），该菌对所有β内酰胺类抗生素耐药，但迄今MRSA在社区中仍很少发现。