肠三叶因子对胃黏膜上皮细胞增殖的影响及其信号转导机制的研究

目的：肠三叶因子（ intestinal trefoil factor , ITF）对胃黏膜具有保护作用,但其机制尚不明确。文中探讨重组ITF对胃黏膜上皮细胞增殖能力的影响及其可能作用的分子机制。方法将体外培养的GES-1细胞分为3组,其中1组作为细胞增殖活力实验空白对照组,其他2组分别加入浓度为100和500 ng/mL的人重组ITF形成低浓度ITF组和高浓度ITF组。光镜下观察细胞形态,并采用CCK-8试剂盒检测GES-1细胞的增殖活力。体外培养的GES-1细胞株分别用100 ng/mL的ITF和浓度为15μmol/L的PI3 K/Akt 信号通路抑制剂LY294002进行处理,分为信号通路蛋白表达实验空白对照组、ITF组、LY294002组和ITF＋LY294002组,光镜下观察细胞形态。随后采用CCK-8试剂盒检测GES-1细胞处理后的增殖活力,采用Western blot检测PI3K/Akt信号通路中p-Akt和Akt蛋白的表达情况。结果与空白对照组相比, ITF刺激下GES-1细胞增殖活力明显增强,且ITF浓度越高、增殖活力越强。使用LY294002处理后,能够显著抑制ITF刺激的细胞增殖。 Western blot检测结果表明,ITF提高了p-Akt蛋白的表达水平,激活PI3K/Akt信号通路。结论 ITF促进GES-1细胞的增殖,推测其分子作用机制主要是通过激活PI3K/Akt信号通路促进细胞增殖。     

LY294002抑制PI3K/Akt信号通路对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的探讨低氧环境下PI3K抑制剂2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮（LY294002）对人胃癌SGC-7901细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）／丝氨酸苏氨酸激酶（Akt）信号通路、细胞生长、细胞凋亡及低氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA表达的影响。方法应用LY294002作用于低氧环境中的人胃癌SGC-7901细胞（低氧＋LY294002组）,采用CCK-8试剂盒检测SGC-7901细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡百分比;Western blotting检测P13K和p-Akt蛋白表达;RT—PCR检测HIF-1α mRNA表达。以低氧环境中未加LY294002的细胞作为对照（低氧组）。结果LY294002能抑制低氧环境中SGC-7901细胞增殖,抑制效果在药物作用后第2～6天时最为明显（P〈0．05）,低氧＋LY294002组中细胞凋亡百分比明显高于低氧组（P〈0．01）。LY294002能明显抑制PI3K、p-Akt蛋白以及HIF-1α mRNA的表达,与低氧组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论LY294002能抑制低氧环境中人胃癌SGC-7901细胞生长,促进细胞凋亡,抑制PI3K／Akt信号通路及其下游HIF-1α mRNA的表达。     

初步探讨乙型肝炎病毒X蛋白激活PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)激活磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响.方法 利用稳定表达HBx基因的肝癌细胞模型HepG2-HBX、Huh-7-HBX,运用阻断剂LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,采用Western blot方法分析HepG2-HBX和Huh-7-HBX细胞中p-Akt蛋白的表达水平的情况;采用CCK-8增殖实验和划痕愈合实验观测HepG2-HBX和Huh-7-HBX细胞的增殖和迁移能力.结果 与阴性对照肝癌细胞相比,稳定转染HBx基因的肝癌细胞中的p-Akt蛋白的表达增多(P<0.05),运用阻断剂LY294002阻断PI3K信号通路后,稳定转染HBx基因的肝癌细胞内的p-Akt蛋白表达降低(P<0.05).CCK-8增殖实验和划痕愈合实验结果均显示,与阴性对照肝癌细胞相比,稳定转染HBx基因的肝癌细胞的增殖能力和迁移能力增加(P<0.05).经阻断剂LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,稳定转染HBX的肝癌细胞的增殖和迁移能力减弱(P<0.05).结论 HBx可通过激活PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞增殖和迁移.     

IGF-1R对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞合成HA的影响及其作用机制

目的 探讨胰岛素样生长因子1受体（IGF1R）对甲状腺相关眼病（TAO）眼眶成纤维细胞合成透明质酸（HA）的影响及其作用的信号通路。方法 体外培养19例（23只眼）TAO患者（TAO组）及5例（5只眼）正常对照（对照组）眼眶成纤维细胞,并采用免疫荧光染色进行鉴定;细胞培养液中分别加入不同浓度重组人IGF1,ELISA检测细胞培养上清液中HA质量浓度;细胞培养液中分别加入IGF1受体阻断剂1H7、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）阻断剂LY294002或蛋白激酶B(PKB)抑制剂（即Akt抑制剂）Ⅳ对细胞进行预处理,再加入重组人IGF1,ELISA检测培养上清液中HA质量浓度,Western blot检测PI3K、Akt及pAkt蛋白表达情况。结果 TAO组HA质量浓度在重组人IGF1 0~5 nmol/L处理时逐渐增加,在IGF1 10 nmol/L时达到最大值,随后在IGF1 20~50 nmol/L时出现波动。与正常对照组相比,0~50 nmol/L重组人IGF1处理的TAO组HA质量浓度均增高,差异有统计学意义（ P<0.01）。IGF1受体阻断剂1H7和Akt抑制剂Ⅳ对细胞预处理后,再加入重组人IGF1,其细胞培养上清液中的HA质量浓度较对照组降低,差异有统计学意义（ P<0.01）,PI3K阻断剂LY294002预处理后,细胞培养上清液中HA质量浓度约有降低,但差异无统计学意义（ P=0.390）。与空白对照组相比,IGF1处理组细胞pAkt蛋白表达水平升高,而对PI3K和总Akt蛋白表达无明显影响;1H7和LY294002可降低PI3K及pAkt蛋白的表达水平,对总Akt蛋白表达的抑制作用不明显;Akt抑制剂Ⅳ处理组,PI3K、Akt及pAkt蛋白表达水平均较对照组明显降低。结论 TAO患者眼眶成纤维细胞合成HA增加,IGF1能促进HA合成,且这种促进作用部分通过PI3K/Akt信号通路实现。     

苦参碱联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 探究苦参碱（Mat）联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能机制。方法 采用CCK-8法检测不同浓度Mat单药和联合LY294002对K562细胞增殖的影响;将K562细胞分为对照组、Mat组、LY294002组和Mat+LY294002组,分别采用0.4 g/L Mat及10μmol/L LY294002单独或联合干预48 h后,应用光学显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术annexinⅤ-FITC/PI双标记检测细胞凋亡,PI单标记检测细胞周期变化,Western blot法检测Mat联合LY294002对K562细胞p-mTOR、p-PI3K、Akt、p-Akt、CyclinD1、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达的影响。结果 CCK-8结果显示,不同浓度Mat单药和联合LY294002均可抑制K562细胞的增殖,具有时间和浓度依赖性,且联合组增殖抑制率比单药组明显升高（P<0.01）。形态学检查显示,联合用药组比单药组凋亡表现更明显。流式细胞结果显示,与对照组及单药组相比,联合组显著促进细胞凋亡[（42.50±2.63）%,P...     

氯通道阻滞剂对大鼠心肌缺血再灌注损伤致心肌细胞凋亡的作用

目的本研究应用大鼠在体心肌缺血再灌注损伤（I/RI）动物模型,观察氯通道阻滞剂DIDS（4,4＇-disothiocya-nostibibene-2,2＇-disulfonic acid）对心肌细胞凋亡的作用以及与磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B（PI3K-Akt）信号通路可能存在的相互作用,明确DIDS心肌保护作用的可能机制。方法 75只大鼠随机分成5组：假手术组,I/RI组,I/RI＋DIDS（14 mg/kg）,I/RI＋LY294002（PI3K-Akt特异性阻断剂）,I/R＋DIDS＋LY294002组。TTC染色检测心肌梗死范围;TUNEL法测定细胞凋亡;Caspase-3试剂盒检测caspase-3活性;免疫印迹法检测p-Akt水平。结果与I/R组比较DIDS可以减少心肌梗死范围（各组n=4,P〈0.01）,可以明显抑制心肌细胞凋亡（各组n=5,P〈0.01）,降低凋亡效应子caspase-3活性（各组n=5,P〈0.01）,提高I/RI心肌的p-Akt水平（各组n=5,P〈0.01）,LY294002可以部分阻断这些作用,LY294002自身并无减少心肌梗死范围的作用。结论氯离子通道阻滞剂DIDS对缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用,其作用部分是通过PI3K/Akt信号通路来实现的。     

RhoGDI2调控PI3K/Akt信号通路促进气道上皮间质转化研究

目的：探讨PI3K/Akt信号通路活化在RhoGDI2诱导的气道上皮-间质转化（EMT）中的作用。方法：体外培养人气道上皮细胞16HBE,通过质粒转染过表达RhoGDI2,然后加入PI3K抑制剂LY294002,荧光显微镜观察质粒转染后不同时间的细胞形态变化,评估转染效率。Western blot法检测RhoGDI2、EMT标记蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Snail）以及PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果：细胞转染36小时后荧光表达量达到高峰,转染效率70%~80%。转染组RhoGDI2表达量明显高于正常组和空载组,证明转染成功（P<0.001）;转染组PI3K、Akt及p-Akt表达较正常组、空载组明显升高（P<0.001）,表明PI3K/Akt信号通路被激活。PI3K抑制组PI3K（P<0.01）、Akt（P<0.05）及p-Akt（P<0.01）表达量较转染组明显下降,说明PI3K/Akt信号通路被成功抑制。与正常组、空载组比较,转染组E-cadherin表达明显减少（P<0.001）,N-cadherin（P<0.01）、Snail（P<0.001）表达明显升高,差异均有统计学意义,表明RhoGDI2可以促进气道上皮细胞间质转化;与转染组比较,LY294002抑制组E-cadherin蛋白表达明显升高（P<0.001）,N-cadherin（P<0.05）、Snail（P<0.001）表达明显降低,差异均有统计学意义,表明阻断PI3K/Akt信号通路可有效控制EMT过程。结论：RhoGDI2可以通过调控PI3K/Akt信号通路促进气道上皮-间质转化。     

CTGF诱导的人胚肺成纤维细胞转分化中PI3K/Akt与p38MAPK磷酸化的关系

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-I)转分化中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路的活动状态以及相关性的研究.方法 将体外培养的HFL-I分成4组:(1)CTGF处理组(20 ng/ml);(2) LY294002(10 μmol/L)预处理60min,再行CTGF刺激(20 ng/ml):(3)SB203580 (10 μmol/L)预处理60 min,再行CTGF刺激(20 ng/ml); (4)LY294002(10 μmol/L)和SB203580(10 μmol/L)联合作用60 min,再加入CTGF(20 ng/ml).选取不同时相点,Western blot测定平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、p-Akt和Akt的蛋白表达:RT-PCR检测PI3K和p38MAPKmRNA表达.结果 与对照组相比,CTGF诱导15 min后p-Akt水平升高,30 min时达至顶峰(P＜0.01).CTGF诱导24h后α-SMA表达显著升高(P＜0.01),可被LY294002阻断.LY294002和SB203580单独或联合预处理后,显著抑制CTGF诱导的p-Akt活化(P＜0.01).结论 CTGF诱导的成纤维细胞-肌成纤维细胞转分化中有PI3K/Akt通路的激活,PI3K和p38MAPK均可以调节Akt的活性,其特异性抑制剂均可阻断Akt的磷酸化.     

靶向抑制 PI3K 对PDK-1/Akt信号通路调控成骨细胞分化的影响

目的 通过观察磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)特异性抑制剂LY294002在成骨细胞分化过程中的影响,探讨PI3K通过调控PDK-1 /Akt信号通路对成骨细胞分化影响的分子机制。方法 采用体外培养C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)。通过CCK-8检测LY294002的最大安全浓度。对照组使用成骨细胞诱导培养基(OBM)处理BMSC,干预组在OBM中添加LY294002。检测两组细胞碱性磷酸酶（ALP）活性和细胞矿化能力,并分别采用Western-Blot和RT-PCR检测PDK-1 /Akt信号通路及下游蛋白和转录因子基因的表达水平。结果 CCK-8结果提示,在3.2 μM及以下浓度对BMSC的增殖没有影响;LY294002对成骨细胞分化的影响呈剂量依赖性（P＜0.05）;干预组ALP阳性细胞和细胞外基质矿化较对照组明显减少 (P＜0.05); Western-Blot 检测结果显示,干预组p-PDK 1和p-Akt蛋白表达水平较对照组明显降低 (P＜0.05);RT-PCR 结果提示,干预组成骨细胞相关基因ALP和骨钙素（OCN）mRNA较对照组表达明显下降 (P＜0.05)。结论 靶向抑制PI3K可通过PDK-1 /Akt信号通路明显下调成骨细胞相关基因ALP和OCN的表达,并抑制成骨细胞的分化。     

1，25（OH）2D3对人系膜细胞增殖及PI3K/Akt信号通路的影响

目的 观察1,25-二羟维生素D3〔1,25（OH）2D3〕对人系膜细胞（HMC）增殖及Akt、mTOR表达的影响,探讨PI3K/Akt信号通路在1,25（OH）2D3对HMC增殖调控中的作用。方法 体外培养HMC,取传代培养至第3～7代细胞分为4组：正常对照组（N组）、1,25（OH）2D3组（10-8 mol/L,VD组）、PI3K抑制剂干预组（LY294002 2 μg/ml,LY组）,LY294002（2 μg/ml）联合1,25（OH）2D3组（10-8 mol/L）组（LY+VD组）,干预48 h,倒置相差显微镜观察各组细胞生长,CCK-8法检测各组细胞增殖,流式细胞术检测各组细胞周期时相分布,Western blotting检测各组Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR表达的情况。结果 各实验组吸光度值（A值）比较,差异有统计学意义（F=281.641,P＜0.01）,其中VD组、LY组和LY+VD组A值均低于N组,LY+VD组A值均分别低于VD组和LY组,差异均有统计学意义（P＜0.01）。各实验组G2/M期比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。各实验组G1期、S期和PI比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;其中VD组、LY组和LY+VD组G1期均高于N组,S期和PI均低于N组,LY+VD组G1期均高于VD组,S期和PI均低于VD组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。各实验组Akt/β-actin、mTOR/β-actin灰度值比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。各实验组p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR灰度值比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;其中VD组、LY组和LY+VD组p-Akt/Akt、p-nmTOR/mTOR灰度值均低于N组,LY+VD组p-Akt/Akt、p-nmTOR/mTOR灰度值均低于VD组和LY组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 1,25-（OH）2D3可通过PI3K/Akt信号通路抑制体外培养HMC的增殖。     

Ghrelin对脂肪间充质干细胞神经分化的影响

目的：探讨Ghrelin联合LY294002对脂肪间充质干细胞(ADSCs)神经分化的影响,并阐明其作用机制。方法：倒置相差显微镜下观察ADSCs形态表现,流式细胞术鉴定ADSCs表面抗体阳性表达率,将第4代ADSCs分为对照组(不进行干预)、LY294002组[给予40μmol·L^-1磷酸酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B (Akt)通路特异抑制剂LY294002]、Ghrelin组(给予0.1μmol·L^-1Ghrelin)、Ghrelin+LY294002组(给予40μmol·L^-1LY294002+0.1μmol·L^-1Ghrelin)。倒置相差显微镜下观察各组ADSCs神经分化后的形态表现,免疫荧光染色法检测各组ADSCs中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞百分率,Western blotting法检测各组ADSCs中PI3K/Akt通路蛋白表达水平,并计算磷酸化PI3K (p-PI3K)/PI3K和磷酸化Akt (p-Akt)/...     

肝癌细胞PI3K/Akt信号通路在干扰素2α上调ISG15表达中的作用

目的 探讨肝癌细胞中干扰素2o(IFN-2α)通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路上调ISG15表达的机制.方法 向培养的肝癌细胞HepG2细胞系中加入IFN-2α和/或PI3K抑制剂(LY294002).采用蛋白免疫印迹检测各组Akt、磷酸化-蛋白激酶B(p-Akt)和干扰素刺激基因15(...     

黄芪甲苷基于PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路对PC12 细胞OGD/R 损伤的保护机制研究

目的：探究黄芪甲苷（astragaloside IV,AS-IV）对大鼠嗜铬细胞瘤（pheochromocytoma 12,PC12）细胞缺氧缺糖复供（oxygen deprivation reoxygenation,OGD/R）损伤的保护作用及基于磷脂酰肌醇3 激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）/ 蛋白激酶B（protein kinase B,PKB,又称Akt）及B 细胞淋巴瘤-2 蛋白（B-cell lymphoma-2,Bcl-2） PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路的机制研究。方法：体外培养 PC12 细胞,细胞随机分为空白对照组、模型组（OGD/R）,尼莫地平阳性对照组（5 μmol·L-1）和黄芪甲苷组（1.00、0.10、0.01 μmol·L-1）,除空白组外其余各组均建立体外PC12 细胞OGD/R 模型。CCK-8 试剂盒法检测PC12 细胞存活率;乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）试剂盒法测定乳酸脱氢酶的漏出量;采用Hoechst33342 和碘化丙啶（propidium iodide,PI） 双染法检测各组细胞凋亡与坏死情况;Western blot 检测各组细胞Akt、p-Akt、Bcl-2、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3 （cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3）的蛋白表达情况。结果：黄芪甲苷提高PC12 细胞OGD/R 损伤的细胞存活率,降低LDH 漏出量和细胞凋亡。黄芪甲苷浓度依赖性上调p-Akt/Akt、Bcl-2 的蛋白表达和下调促凋亡蛋白Bax、Caspase-3 的表达。PI3K/Akt 通路的抑制剂LY2940002 能抑制黄芪甲苷对OGD/R 损伤的PC12 细胞中凋亡相关蛋白的影响。结论：黄芪甲苷对OGD/R 损伤的PC12 细胞具有保护作用,且其保护作用机制可能与PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路有关。     

PI3K/Akt信号通路在缺氧性肺血管收缩中的机制

目的：探讨15-羟基二十碳四烯酸（15-HETE）致大鼠肺动脉收缩的信号转导途径,阐明15-HETE引起慢性缺氧性肺动脉收缩作用的可能机制。方法：采用组织浴槽血管环方法观察15-HETE对缺氧和正常组大鼠血管收缩的作用,同时观察PI3K/Akt抑制剂LY294002对肺动脉环收缩强度的改变,明确PI3K/Akt信号转导途径在15-HETE收缩肺动脉中的作用。结果：15-HETE对正常组和缺氧模型组大鼠血管环均有收缩作用,加入AKT抑制剂LY294002可明显阻断15-HETE对缺氧大鼠肺动脉的收缩作用（P〈0.05）。结论：15-HETE通过AKT信号转导途径收缩慢性缺氧性大鼠肺动脉。     

LY294002通过PI3K/Akt/Mtor对CD133+CD44+结直肠癌干细胞自我更新、增殖能力的影响

目的:探讨LY294002对CD133+CD44+结直肠癌干细胞自我更新、增殖能力的影响及其机制.方法: 通过流式细胞术从人结直肠癌HCT116细胞中分选CD133+CD44+的肿瘤干细胞(CSCs),不同浓度(10、20、30 μmol/L)LY294002作用CSCs,对照组不使用药物.成球实验及有限浓度稀释法检测细胞自我更新能力,细胞活性计数法及平板克隆实验检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,实时定量PCR及流式细胞术检测PI3K/Akt/mTOR信号通路基因Akt、磷酸化Akt、诱骗受体3(DcR3)、B淋巴细胞瘤-2(Bc--2)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达变化.结果: 与对照组相比,30 μmol/L LY294002作用实验组成球能力明显削弱(P＜0. 01),CSCs比例明显下降(P＜0. 05),增殖能力明显削弱(P＜0. 01),G0G1期细胞周期受到阻滞(P＜0. 01);磷酸化Akt表达降低(P＜0. 01),DcR3、Bcl-2、mTOR及Cyclin D1表达量下调(P＜0. 01).结论: LY294002可能通过PI3K/Akt/mTOR通路导致结直肠癌CSCs周期阻滞、抑制其自我更新、增殖能力.     

黄芪甲苷对脂多糖诱导的MC3T3-E1细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的：探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对脂多糖(LPS)诱导的成骨细胞前体细胞MC3T3-E1氧化损伤的保护作用,阐明其相关机制。方法：将对数生长期MC3T3-E1细胞分为对照组、LPS组和不同浓度(10、25、50及100 mg·L^-1)AS-Ⅳ组,采用CCK-8法检测各组细胞活性。将对数生长期MC3T3-E1细胞分为对照组、LPS组、AS-Ⅳ组和AS-Ⅳ+LY294002 [磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂]组,采用流式细胞术检测各组细胞中活性氧(ROS)水平,采用相关试剂盒检测各组细胞中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中血红素加氧酶1 (HO-1) mRNA表达水平,采用Western blotting法检测各组细胞中HO-1、 PI3K、磷酸化Akt (p-Akt)、核因E2相关因子2(Nrf2)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。结果：CCK-8法检测,与对照组比较,LPS组细胞活性明显降低(P...     

Prostate specific membrane antigen knockdown impairs the tumorigenicity of LNCaP prostate cancer cells by inhibiting the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt signaling pathway

Background Prostate specific membrane antigen （PSMA） can facilitate the growth,migration,and invasion of the LNCaP prostate cancer cell lines,but the underlying molecular mechanisms have not yet been clearly defined.Here,we investigated whether PSMA serves as a novel regulator of the phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K）/Akt signaling by employing PSMA knockdown model and PI3K pharmacological inhibitor （LY294002） in LNCaP prostate cancer cells.Methods PSMA knockdown had been stably established by transfecting with lentivirus-mediated siRNA in our previous study.Then,LNCaP cells were divided into interference,non-interference,and blank groups.We first testified the efficacy of PSMA knockdown in our LNCaP cell line.Then,we compared the expression of PSMA and total/activated Akt by Westem blotting in the above three groups with or without LY294002 treatment.Furthermore,immunocytochemistry was performed to confirm the changes of activated Akt （p-Akt,Ser473） in groups.Besides,cell proliferation,migration,and cell cycle were measured by CCK-8 assay,Transwell analysis,and Flow cytometry respectively.Results After PSMA knockdown,the level of p-Akt （Ser473） but not of total-Akt （Akt1/2） was significantly decreased when compared with the non-interference and blank groups.However,LY294002 administration significantly reduced the expression of p-Akt （Ser473） in all the three groups.The results of immunocytochemistry further confirmed that PSMA knockdown or LY294002 treatment was associated with p-Akt （Ser473） down-regulation.Decrease of cell proliferation,migration,and survival were also observed upon PSMA knockdown and LY294002 treatment.Conclusions Taken together,our results reveal that PI3K/Akt signaling pathway inhibition may serve as a novel molecular mechanism in LNCaP prostate cancer cells of PSMA knockdown and suggest that Akt （Ser473） may play a critical role as a downstream signaling target effector of PSMA in this cellular model.     

蛇床子素通过激活 PI3K/Akt 通路减轻谷氨酸诱导的海马神经元损伤

目的：研究蛇床子素(osthole,OST)减轻谷氨酸诱导的HT22细胞损伤的机制。方法：建立谷氨酸诱导的 HT22细胞损伤模型;HT22损伤细胞经OST处理,MTS法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放 实验检测HT22细胞LDH漏出率;caspase-3活性检测试剂盒测定各组caspase-3活性;Western印迹法测定细胞内磷脂酰肌 醇(-3)激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K),蛋白激酶B(protein kinase B,Akt),磷酸化PI3K(p-PI3K)和磷酸化Akt(p- Akt)蛋白表达情况。结果：OST在0~10 mmol/L范围内呈剂量依赖性提高谷氨酸诱导的HT22细胞活力,降低LDH漏出 率,改善HT22细胞损伤。此外,OST显著上调谷氨酸损伤细胞p-PI3K和p-Akt蛋白表达,而PI3K抑制剂LY294002明显 抑制OST谷氨酸损伤细胞p-Akt蛋白表达的上调作用。结论：OST对谷氨酸损伤的HT22细胞具有保护作用,其保护作 用机制可能是通过激活PI3K/Akt信号通路来实现的。