阿片肽酿酒酵母工程菌摇瓶发酵工艺

研究了发酵培养基成分、补加方式及外源氨基酸对酿酒酵母发酵和表达的影响．结果表明，发酵前在液体发酵培养基中一次性补加酵母抽提物（YE）有利于目的产物的表达，发酵过程中补加YE不利于目的产物的表达，发酵中后期补加适量的葡萄糖有利于阿片肽的表达．添加外源氨基酸对酿酒酵母工程菌的生长有一定的促进作用，而且可以明显地影响阿片肽的表达．通过正交实验对酿酒酵母生长和表达条件进行优化，确定最优工艺参数为：培养基中酵母抽提物质量浓度为25g／L，C：N比2．8，培养基初始PH5．0，摇床转速220r／min．在最优条件下研究了酿酒酵母表达目的产物的情况，总蛋白质质量浓度为614．50mg／L．SDS-PAGE电泳和双波长凝胶扫描结果表明：目的阿片肽约占总分泌蛋白质的5％，其表达量为30．7mg／L，是优化前的1．49倍。     

基于遗传算法的木糖醇发酵培养基的优化

运用遗传算法，利用莫格假丝酵母由木糖生产木糖醇的发酵培养基进行优化，用40个实验样本完成了6种培养基成分、50个浓度水平的优化任务.实验结果表明利用遗传算法可优化培养基成分含量，取得更好的发酵效果.按照优化后的培养基组成，由50g／L木糖获得了29.7g／L木糖醇，理论转化率为65.1%，比优化前提高了3.5%.     

L-丝氨酸产生菌的分离筛选及发酵条件

在含50mL／L的甲醇、5g／L的甘氨酸的基本培养基平板上，从土壤中分离出130多株细菌，测定了它们利用甘氨酸生产L-丝氨酸的能力，获得了一株产L-丝氨酸较好的菌株A3，L-丝氨酸产量最高为1．4g／L，分类学鉴定为微球菌科(Micrococcaceae)，对菌株A3利用甘氨酸发酵生产L-丝氨酸的发酵条件进行了初步研究，包括甘氨酸和甲醇添加量，不同碳源、氮源，初始pH值以及发酵时间对产酸的影响．结果表明，菌株A3在不添加甲醇、只以甘氨酸为惟一碳源的发酵培养基中也能产L-丝氨酸，培养基中较高质量浓度的甘氨酸存在对L-丝氨酸生产是必需的．添加葡萄糖、甘油等外源碳源对菌体生长有利但不利于L-丝氨酸的生产。     

双液相发酵系统中氧传递机理的研究

以一种液态烷烃为油相，将其引入青霉素发酵过程以提高氧的传递。通过摇瓶和罐发酵对该双液相系统的发酵过程进行了研究，实验结果表明，油相分数为２％时，发酵体系中的传氧能力得到了最大程度的提高并最终导致了青霉素产量的提高。通过对体积传氧系数及油相与水相物理化学性质的研究，对油相引入后，发酵能力提高的现象作了初步的解释，并提出了双液相系统中氧从气泡传递到微生物细胞的宏规模型。     

利用Pseudoalteromonas elyakouii菌株发酵法生产褐藻胶寡糖培养基的改进

利用Pseudoalteromonas elyakouii菌株发酵降解相对分子质量10000左右的褐藻胶，制备褐藻胶寡糖．为了达到降低培养基成本和简化分离工艺的目的，使用（NH4）2SO4为氮源的发酵培养基来代替使用蛋白胨为氮源的发酵培养基．为了促进菌的生长和发酵产物褐藻胶寡糖的生成，在新发酵培养基中分别添加海带浸液、葡萄糖、乳糖、几种氨基酸和几种代谢中间产物（丙酮酸、柠檬酸、延胡索酸、尿素），并考察这些成分对菌生长和发酵产物褐藻胶寡糖生成的影响．研究发现：在基本培养基中和添加0．1g／L的L-谷氨酰氨、0．1g／L尿素或0．1g／L柠檬酸时可获得较高的产物浓度。     

气升式发酵罐发酵黄原胶的动力学

利用黄单孢菌研究了在50L气升式发酵罐发酵黄原胶的动力学,在logistic方程和Luedeking Piret方程的基础上,建立了两步发酵黄原胶的动力学模型,并对模型和实验数据进行了比较,进一步在200L相似结构的气升式发酵罐中的试验表明,该模型能较好的对发酵动力学进行描述.     

3种固态发酵生物量测定方法的比较

对固态发酵中生物量测定常用的3种细胞组分（核酸、麦角固醇、氨基葡萄糖）作为生物量测定指标的可行性进行了比较研究。结果表明：核酸组分在细胞中含量比较稳定，可较好地指示生物量的变化，氨基葡萄糖受培养基成分影响较大，只适舍固定成分培养基中生物量的表征，而麦角固醇在细胞中的含量不太稳定，不适合作为生物量测定的指标。运用核酸法对土曲霉田态发酵产lovastatin过程中的菌体量变化进行了描述。     

重组大肠杆菌产β-胡萝卜素的发酵条件

对重组大肠杆菌产β-胡萝卜素发酵条件进行了研究．在M9培养基中添加Span-200．7g／L有利于细胞生长和β-胡萝卜素表达，初始pH值6．0、接种体积分数5％、发酵温度28℃、抗生素氨苄青霉素质量浓度80μg／mL和氯霉素质量浓度40μg／mL为最佳发酵条件，在7L发酵罐进行发酵动力学试验表明，重组菌最适发酵周期为22h，细胞干重最高可达1．55g／L，β-胡萝卜素表达量可达0．75μg／mL。     

部分红曲霉菌株产桔霉素的研究

对中国各地收集到的数十个红曲米样品中的桔霉素进行了定性及定量测定 ,测定结果表明 ,除少数几个红曲米样品中未测出桔霉素外 ,其它红曲米样品都测出桔霉素 ,红曲红产品中也发现含有桔霉素 .用酵母膏蔗糖培养基 (能检测霉菌是否产生真菌毒素 )培养了近 4 0株红曲霉 ,从菌落形态特征看 ,大多数是Moanascusanka ,定性检测结果表明 ,大多数菌株的培养液中都检测出桔霉素 ,说明这些红曲菌种本身具有产生桔霉素的能力 .初步总结了定性和定量测定高色价红曲米中桔霉素的方法 .     

Brevibacterium sp.DGCDC-82发酵罐中生产胆固醇氧化酶

用Brevibacterium sp.DGCDC-82在7L发酵罐中分批培养.分别对添加剂吐温-80、培养温度、培养基的pH、通风量和搅拌速度在胆固醇氧化酶的生产中的影响进行了研究.结果显示以上条件均对产酶有影响.在不同的发酵阶段改变发酵操作条件,发酵20 h最高酶活可达1203U/L,生产强度可达60 U/(L·h).既有效地提高了胆固醇氧化酶的产量,又防止了发酵过程中的泡沫外溢.     

低产桔霉素红曲霉菌种筛选

对部分红曲霉菌种的液态发酵液和固态红曲米中桔霉素质量分数进行了测定 ,从中筛选了数株低产桔霉素的红曲霉菌种 ,重点对红曲霉ZK0A菌种生产的红曲米的色价及桔霉素质量分数进行了测定 .连续培养 3批该菌种 ,所生产的红曲米色价高于 10 0 0U / g ,桔霉素质量分数低于5mg/kg.而另一株红曲霉ZH 12生产的红曲米 (色价 170 0U/ g)中桔霉素质量分数则高达 1g/kg以上 .对这两株红曲霉菌种的菌落形态进行了鉴定 ,初步认定这两株菌种都是紫色红曲霉 .     

TLC及HPLC测定红曲产品中的桔霉素

阐述了定性及定量测定红曲产品中桔霉素含量的几种方法.采用板层析（TLC），在点样量为1mL、点样长度5cm条件下通过目视法，标准桔霉素溶液的最低检测质量浓度可达0.2mg/L，板层析可作为定性检验红曲产品中桔霉素的简便方法.根据红曲样品预处理方法及HPLC检测器的不同，确定了两套准确可靠的定量检测方法.高效液相色谱结合荧光检测的最低检测限为0.60ng.HPLC上样液最低可检测的质量浓度为0.1mg/L.在0.1～10mg/L的质量浓度范围内，标准桔霉素溶液的质量浓度与峰面积的线性关系良好，达到R2=0.998.红曲样品桔霉素的测定结果重复性较好.     

应用FISH技术对肝癌细胞系HCC-9903X染色体变异的研究

目的：研究人肝细胞肝癌细胞系HCC－9903X染色体畸变规律。方法：建立肝细胞肝癌细胞系HCC－9903，制备其染色体标本，用X染色体着丝粒特异DNA探针，对其X染色体进行荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH)，检测X染色体拷贝致畸变。结果：HCC－9903肝癌细胞系染色体变异发生率高，其中X染色体改变存在规律，拷贝数增多，以4拷贝为主，X染色体扩增率达99％，结论：X染色体拷贝数增多在肝癌细胞系中发生频率很高，证明在肝癌发病及发展过程中起到某种作用，其意义值得进一步探讨。     

人原发性胃恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立

目的为探讨胃恶性淋巴瘤的发病机制和治疗方法提供理想的动物模型。方法采用人胃恶性淋巴瘤术中原发灶和肝转移灶新鲜瘤组织植入裸小鼠胃黏膜下层,观察原位移植成瘤率,移植瘤的侵袭和转移率,进行形态学、染色体核型和流式细胞分析。结果13例人胃恶性淋巴瘤标本9例移植成功。依据WHO新分类标准,从中筛选出1株人胃原发性非霍奇金B细胞恶性淋巴瘤裸鼠原位移植肝转移模型HGBL-9903,1株人胃原发性非霍奇金B细胞恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型HGBL-9904和1株人胃原发性霍奇金B细胞恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型HGBL-9902。免疫组织化学示CD19、CD20、CD22、CD45和CD79a均阳性。染色体众数范围75~87条,流式细胞分析示DI值1.23~1.47,均为异倍体。3株模型分别传至83代、87代和89代,共移植裸鼠785只;自第3代起肿瘤的移植生长率和液氮冻存复苏成活率均为100%。HGBL-9903肝转移率为100%,脾转移率为36.7%,淋巴结转移率为57.6%。人胃恶性淋巴瘤在裸鼠胃壁内自主侵袭性生长,侵袭破坏胃壁各层组织结构。发生血液(肝,脾)转移,淋巴转移和腹腔内种植转移。结论HGBL-9904、HGBL-9903和HGBL-9902三株人胃原发性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型,移植瘤的组织病理学、超微结构、DNA含量测定及染色体核型分析结果与来源人胃恶性淋巴瘤细胞相一致。完整的模拟了人胃恶性淋巴瘤患者的自然临床过程。     

人肝细胞癌细胞系HCC-9903的建立及其生物学特性研究

目的 新建1株人体肝细胞肝癌细胞系,为肝癌研究提供新的、理想的实验模型。方法 以手术切除肝癌标本作原代培养,建立细胞系。通过光镜、电镜、倍增时间、生长曲线、双层软琼脂培养、流式细胞仪、染色体分析、刀豆球蛋白凝集试验、裸鼠接种、AFP、HBV及端粒酶检测,对其生物学特性进行分析。结果 第29天完成原代培养。形态学、增殖动力学及浸润性生长结果表明该细胞系符合恶性细胞特征。染色体数目分布在49－135,众数为60－67,1q^(i)和t(6,11)等为其标记染色体;有四射体和核内复制出现。裸鼠接种成瘤,瘤细胞形态与原病人的病理切片相似。端粒酶检测强阳性。结论 该细胞系符合建系标准,是1株新建的人体肝细胞肝癌细胞系,命名为HCC－9903。其生物学特性研究内容及检测手段较国内外已建肝恶性肿瘤细胞系更为全面。     

降胆固醇红曲霉菌种的筛选

∶固体培养基培养红曲霉，并对４０株红曲霉Ｍｏｎａｃｏｌｉｎ．Ｋ 的产生性能进行了研究．采用薄层层析法进行初筛，获得了８ 株可能具有Ｍｏｎｃｏｌｉｎ Ｋ产生能力的菌株．再用高压液相色谱法对初筛阳性菌进行检测，证实其中３株具有较强的Ｍｏｎａｃｏｌｉｎ Ｋ 生产能力．     

应用FISH技术对肝癌细胞系X染色体畸变的研究

目的 研究人肝细胞肝癌细胞系X染色体畸变规律。方法 制备三株新建人肝细胞肝癌细胞系HCC—9903、EGHC—9901、HCC—9810染色体标本，用X染色体着丝粒特异DNA探针，对其X染色体进行荧光原位杂交(FISH)，检测X染色体拷贝数畸变。结果 三株肝癌细胞系X染色体拷贝数均增多，以4拷贝为主。结论 X染色体拷贝数增多在肝癌细胞系中发生频率很高，证明在肝癌发病及发展过程中起到某种作用，其意义值得进一步探讨。这是以FISH技术对肝癌X染色体拷贝数研究的首次报告。     

Abnormal heme-protein patterns in hemorrhagic shock

Allegedly toxic heme pigments have been described in the serum of animals bled to hemorrhagic shock (5,7). In addition, Sears et al. (9), and Braun et al. (1) have shown that the products derived from the degradation of hemoglobin following intravascular hemolysis were toxic (heme carried by hemopexin and albumin). The accumulation of metabolites, caused by the impeded circulation, degrades free hemoglobin into heme pigments and their concentration then reaches a level which exceeds the normal heme-carrying capacity of serum proteins. We have already demonstrated the presence of abnormal heme pigments in clinical cases of shock using scanning spectrophotometry (3). We have endeavored to identify these pigments by serum electrophoresis, and to relate the appearance of some of these compounds to mortality rates. There were no deaths associated with the presence of haptoglobin-hemoglobin alone in serum. As shock deepened and mortality rose, hemopexin-heme and methemalbumin appeared. The highest mortality rate (4 out of 5 cases) was found when both hemopexin-heme and methemalbumin were present. It appears, therefore, that the administration of serum proteins in shock may reduce the toxicity of the products of degradation formed in low-flow states.     

Efficacy and safety of <Emphasis Type="Italic">Monascus purpureus</Emphasis> Went rice in subjects with secondary hyperlipidemia

BACKGROUND/AIMS: Nephrotic dyslipidemia is a risk factor for the development of systemic atherosclerosis; it may also aggravate glomerulosclerosis and enhance the progression of glomerular disease. We aimed to assess the efficacy and safety of Monascus purpureus Went rice versus fluvastatin therapy in the management of nephrotic dyslipidemia. METHODS: In total 72 patients with idiopathic persistent NS with secondary dyslipidemia were included. They were randomly allocated into three age- and sex-matched groups. The first group comprised 20 cases that were given M. purpureus Went rice in a dose of 600 mg twice per day for one month and then once daily. The second group comprised 30 cases that were given fluvastatin in a daily dose of 20 mg. The remaining 22 received no antidyslipidemic therapy and constituted a control group. All of these patients were subjected to thorough laboratory investigations, including renal function tests and lipograms. Moreover, neuromuscular status was evaluated with electromyography and nerve conduction velocity. RESULTS: Our results showed that both fluvastatin and M. purpureus Went rice were well-tolerated with no evidence of significant side effects, including on neuromuscular function. Both M. purpureus Went rice and fluvastatin significantly reduced cholesterol after six months and one year, respectively. CONCLUSION: Monascus purpureus Went rice is a safe, effective and economic treatment strategy for nephrotic dyslipidemia.     

Ocular fluorometry: principles, fluorophores, instrumentation, and clinical applications

Ocular fluorometry is rapidly evolving as a versatile technique for research and diagnosis in ophthalmology. The main reasons for this increasing success are 1) the ideal characteristics of the eye as an optical device for excitation of tissue fluorescence and for the detection of the fluorescent emission; 2) the development of novel fluorometric techniques, including differential and time-resolved fluorescence spectroscopy; and 3) the increasing use of coupling geometries with high-resolution and high spatial selectivity. Both endogenous and exogenous fluorophores are of interest to ocular fluorometry. The most significant among endogenous fluorophores are the fluorescing pigments of the lens and of the retinal pigment epithelium (RPE). The nature, topography, and fluorescence properties of such pigments depend on age and pathology and on the level of light exposure. Exogenous fluorophores of interest are both intentionally induced and unintentionally accumulated drugs (some of which are phototoxic). Laser-based fluorometric techniques play a leading role in ocular fluorometry. The peculiar properties of the laser for the excitation of fluorescence make this source a favorite candidate for ocular fluorometry both in vitro and in vivo.