兽疫链球菌摇瓶发酵法生产透明质酸

∶研究了Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｚｏｏｅｐｉｄｅｍ ｉｃｓＨ２３ 摇瓶发酵生产透明质酸的条件，并对发酵机制进行了初步探讨．研究发现，Ｈ２３ 在通风和厌氧条件下都能生产透明质酸．透明质酸的合成和菌体生长是偶联的，对不同的碳源质量浓度显示出不同的规律．酵母膏、葡萄糖是合适的氮源和碳源，初始质量浓度应分别为２ ｇ／ｄＬ、４ ｇ／ｄＬ． Ｍｇ２＋ 对发酵有很大的影响，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ 最佳质量浓度为０．２ ｇ／ｄＬ． 摇瓶条件如温度、通风等也影响透明质酸的形成，温度３３ ℃，摇瓶装液量４０ ｍ Ｌ时最有利于透明质酸合成．在较适合的条件下，透明质酸产量可以达到０．４７ ｇ／Ｌ，产物对碳源的转化率为２．１％ ．     

高产、大分子透明质酸突变菌株NUF-036的选育

对兽疫链球菌NUF-035进行紫外诱变,得到突变菌株NUF-036,使透明质酸的产量从1.8 g/L提高到3.0 g/L,相对分子质量从2.1×10~6提高到3.2×10~6,突变株经多次传代,透明质酸产量及相对分子质量保持稳定.     

发酵生产谷氨酰胺转胺酶的摇瓶条件

在摇瓶条件下， 以淀粉为碳源，蛋白胨及酵母膏为氮源，对Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｍ ｏｂａｒａｅｎｓｅ生产谷氨酰胺转胺酶（ＭＴＧ）的摇瓶发酵条件进行了探索．研究结果表明，发酵法生产谷氨酰转胺酶的适宜初始ｐＨ 值、淀粉质量浓度、接种量分别为６．１，２ ｇ／ｄＬ，１０％ ；ＭＴＧ酶活最高可达１．８３ ｕｍ ｏｌ／（ｍ ｉｎ·ｍ Ｌ）．初始加入硫酸铵对菌体生长影响不大，但对ＭＴＧ 的合成却产生抑制作用；初始加入纯氨基酸及胱氨酸母液不利于ＭＴＧ 酶活的提高．     

放射型根瘤菌WSH2601生产辅酶Q10的摇瓶发酵条件

以放射型根瘤菌 (Rhizobusradiobacterium ,WSH2 6 0 1)作为辅酶Q10 的生产菌株 ,研究了氮源、碳源、接种量、溶氧、初始 pH、发酵温度及添加物等因素对细胞生长与产物辅酶Q10 合成的影响 .结果表明 :玉米浆和酵母膏是较好的氮源 ,葡萄糖与蔗糖是辅酶Q10 发酵的较好的碳源 ,接种量对辅酶Q10 发酵的影响不大 ,为 4 % .适宜的初始 pH值为 7,番茄汁能较好地促进细胞的生长 ;添加玉米浆、L 甲硫氨酸、番茄汁和异戊醇有利于产辅酶Q10 ;溶氧对细胞生长与产物辅酶Q10 合成的影响较显著 .通过正交试验初步确定了发酵条件 :碳源为 1.5 g/dL葡萄糖和 2 .5 g/dL蔗糖混合物 ,酵母膏 0 .8g/dL ,初始pH 7,每 5 0 0mL装液量为 5 0mL .最后经综合优化条件 ,在摇瓶发酵条件下 :菌体生长量 (以干重计 )为 13.8g/L ,发酵液中辅酶Q10 产量达到 2 2 .7mg/L ,比优化前分别提高 34%和 5 3% .     

赖氨酸摇瓶发酵条件的优化

针对赖氨酸发酵的工业化要求,以黄色短杆菌（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ）ＷＳＨＬ１为产生菌进行了摇瓶条件下的赖氨酸发酵条件研究．通过正交实验得到了较佳氮源配比;经在发酵过程中添加几种氮源的试验,发现发酵中后期添加适量有机氮源有利于发酵;考察不同初始硫酸铵和葡萄糖浓度对发酵的影响,确定了适合工业生产的浓度范围;采用分批补料培养方式,最终赖氨酸盐酸盐质量浓度为８５．５ｇ／Ｌ     

重组大肠杆菌生产谷胱甘肽合成酶系的摇瓶发酵条件

研究了重组大肠杆菌E.coli Ⅱ-1 摇瓶发酵生产谷胱甘肽合成酶系的工艺条件，确定了E.coli Ⅱ-1 的最适产酶条件.最佳发酵培养基组成（g/L）为葡萄糖10, 蛋白胨5, 酵母膏2.5, K     

洛伐他汀转化菌株的筛选及发酵条件

利用薄层层析法和HPLC法对 30 0株放线菌进行筛选 ,结果发现一株菌ST4 8对洛伐他汀有转化作用 .研究其菌龄、菌体干重、分批加入底物及底物诱导等条件对转化率的影响表明 ,菌株ST4 8在预培养基中培养 4 8h后接入转化培养基 ( 5 %接种量 ) ,此时菌体量最高 ,加入 0 .3mL底物后 ,继续培养 4 8h转化率最高 ( 2 0 .78% ) .一次性加入底物和分批加入底物的转化率分别为2 0 .0 2 %和 2 0 .0 8% ,并且这种转化作用不需要底物诱导     

真养产碱杆菌利用葡萄糖生产聚β-羟基丁酸的摇瓶发酵条件

以葡萄糖为碳源，对真养产碱杆菌生产ＰＨＢ的摇瓶发酵条件进行了探索。研究结果表明，在摇瓶补料条件下，细胞干重和ＰＨＢ质量浓度可分别达到３５．１ｇ／Ｌ和２８．３ｇ／Ｌ，ＰＨＢ对葡萄糖的产率系数为０．３６ｇ／ｇ．     

聚γ-谷氨酸高产突变株的选育及摇瓶发酵条件

对地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)进行亚硝基胍和60Co诱变,获得一株γ PGA的高产菌株C9.γ PGA质量浓度由9.44g/L提高到19.76g/L,提高了109%.突变株传代10次,质量浓度保持基本稳定.通过正交试验和单因素试验对发酵培养基及发酵条件进行了优化.当发酵培养基中含柠檬酸12g/L、甘油80g/L、L 谷氨酸23g/L、氯化铵7g/L,pH7.0,装液量为50mL/250mL三角瓶,接种体积分数为5%时,37℃摇瓶发酵72h,γ PGA达到23.32g/L.     

提纯异麦芽低聚糖的酵母菌株筛选及发酵条件

酵母菌同化单糖的能力和速度高于低聚糖,因而可以消除异麦芽低聚糖产品中多余的葡萄糖.通过筛选驯化,得到较快发酵葡萄糖和麦芽糖的D酵母,并对该酵母的最适发酵条件和最佳培养基组成进行了研究,在优化培养基条件下,得到94.13%的高纯度异麦芽低聚糖.     

L-丝氨酸产生菌的分离筛选及发酵条件

在含50mL／L的甲醇、5g／L的甘氨酸的基本培养基平板上，从土壤中分离出130多株细菌，测定了它们利用甘氨酸生产L-丝氨酸的能力，获得了一株产L-丝氨酸较好的菌株A3，L-丝氨酸产量最高为1．4g／L，分类学鉴定为微球菌科(Micrococcaceae)，对菌株A3利用甘氨酸发酵生产L-丝氨酸的发酵条件进行了初步研究，包括甘氨酸和甲醇添加量，不同碳源、氮源，初始pH值以及发酵时间对产酸的影响．结果表明，菌株A3在不添加甲醇、只以甘氨酸为惟一碳源的发酵培养基中也能产L-丝氨酸，培养基中较高质量浓度的甘氨酸存在对L-丝氨酸生产是必需的．添加葡萄糖、甘油等外源碳源对菌体生长有利但不利于L-丝氨酸的生产。     

A型肉毒毒素影响透明质酸钠凝胶酶解反应的实验研究

目的:探讨A型肉毒毒素(Botulinum toxin type A,BTX-A)对透明质酸钠凝胶(Hyaluronic acid,HA)酶解反应的影响。方法:①分别取海薇和润百颜HA凝胶各5份,每份0.05ml,经2%甲苯胺蓝染色,实验组分别加入2.5U、5.0U、10.0U、20.0U BTX-A,对照组加入生理盐水1.0ml(0U BTX-A);再加入300.0U透明质酸酶,显微镜下观察HA凝胶的酶解状态并采集图片,采用Image J软件计算平均光密度值(OD)及其代谢率;②大鼠背部两侧皮下各注射润百颜HA凝胶0.25ml,左侧真皮层注射BTX-A 5.0U,右侧注射生理盐水0.1ml,分别在注射前(0d)、注射后3、7、14、30、60、90d对注射区域皮肤组织取材,检测透明质酸酶-1(HYAL-1)和透明质酸酶-2(HYAL-2)的表达。结果:①在0U、2.5U、5.0U、10.0U BTX-A作用下,随着BTX-A剂量的增加,HA凝胶的代谢率逐渐减小,润百颜分别在60min、70min、80min、100min达到酶解平衡状态,海薇分别在60min、70min、90min、100min达到酶解平衡状态;20.0U BTX-A对HA凝胶的抑制作用与10.0U BTX-A相似,两种HA凝胶均在100min达到酶解平衡状态。相同酶解条件下,在40min后,润百颜较海薇产品代谢速度增快(P<0.001);②注射后3、7d,BTX-A组大鼠皮肤组织中HYAL-1的表达较生理盐水组降低(P<0.05);注射后3、7、14d,BTX-A组HYAL-2的表达较生理盐水组降低(P<0.05)。结论:BTX-A对透明质酸酶的活性具有抑制作用,并可降低大鼠皮肤组织中HYAL-1、HYAL-2的表达。     

The Healing of Cartilage Injuries Under the Influence of Joint Immobilization and Repeated Hyaluronic Acid Injections: An Experimental Study

In an experimental animal model the influence of intraarticularly injected high-molecular hyaluronic acid on the healing of superficial and deep lesions of the articular cartilage in freely mobile and immobilized joints was investigated. In the right knee joint in 42 adult rabbits two intracartilaginous lesions were produced in one of the femoral condyles and an osteochondral lesion in the other. In half of the animals the injured knee joint was immobilized in plaster of Paris, while the other half were allowed to move the joint freely. Half of the injured joints in each group were then injected with high-molecular hyaluronic acid once a week for 8 weeks. After 2 months the knee joints were examined histologically, histochemically and microangio-graphically and the water content of the articular cartilage was determined. The intracartilaginous lesions remained unchanged in all knee joints. The wound margins of the osteochondral lesions showed better closure in the immobilized animals. As a rule the osteochondral lesion healed with fibrous connective tissue. In a few joints, however, hyaline cartilage, with production of chondroitin sulphate, developed during healing of the osteochondral lesion. In the vicinity of the joint surface this tissue was transformed into fibrocartilage. Immobilization of the joint invariably led to pannus formation. The hyaluronic acid injections appeared to have no effect, either positive or negative, on the healing of intracartilaginous and osteochondral joint lesions. In mobile joints, however, these injections prevented a reduction of the water content of the articular cartilage, which was regarded as favourable.     

透明质酸分区域分层次填充矫治眶下区凹陷疗效观察

目的:观察分区域分层次填充透明质酸矫治眶下区凹陷的临床效果。方法:选择2017年4月-2019年1月笔者医院收治的40例眶下区凹陷患者,在局部神经阻滞麻醉或者局部表面麻醉下利用分区域分层次的方法注射透明质酸矫正眶下区凹陷,改善面部老化,然后评价注射后效果与不良反应。结果:本组40例患者注射后对即刻效果均满意,注射后第2天部分患者有轻度肿胀、皮肤发红等现象;8例患者出现局部瘀青,7~10d自行消退;1例患者出现局部泪槽沟加深的现象;2例患者出现局部丁达尔反应。术后有效率达92.5%(37/40)。患者满意度调查,2例患者认为外形欠饱满,未达到自己期望效果;及3例出现不良反应的患者,总体满意率达87.5%(5/40)。术后随访1~6个月,泪槽沟与睑颊沟改善明显,下睑到颧颊区域呈现自然流畅、年轻特征的轮廓曲线,6个月内效果维持满意,部分患者4~6个月进行第二次补充注射。结论:透明质酸分区域分层次注射填充能根据眶下区的解剖特征来选择不同的注射方式进行填充,达到年轻化目的。     

Intra-articular Injections of Hyaluronic Acid and Other Drugs in the Knee Joint

Background:

Degenerative osteoarthritis of the knee (OA) affects 35% of persons older than 65 years. If pain persists after non-invasive treatment, some intra-articular drugs can be tried before surgical treatment.

Questions/Purposes:

The purpose of this article is to review the literature after 2006 with the aim of answering two questions: (1) Are intra-articular injections of corticosteroids (CS), hyaluronic acid (HA) and platelet-rich plasma (PRP) effective in painful knee OA? and (2) Which of these drugs is more effective?

Methods:

The search engines were MedLine and the Cochrane Library. The keywords used were: knee, osteoarthritis, and intra-articular injections. Eight hundred and forty-four articles were found but only 142 had been published after 2006. Of those, only 14 were selected and reviewed because they were strictly focused on the topic and the questions of this article.

Results:

The clinical efficacy of intra-articular injections of HA and CS in patients with knee OA has been demonstrated. Pain reduction after three to five weekly injections of HA lasts between 5 to13 weeks (sometimes up to 1 year). Pain reduction is less durable after CS injections (2 to 3 weeks). Recent reports indicate that PRP could have a better performance than HA in younger patients.

Conclusions:

Three to five weekly intra-articular injections of HA are recommendable in patients with knee OA before surgical treatment. CS injections have a very short effect. The efficacy and duration of PRP injections require further studies.     

应用关节镜清理和透明质酸钠注射治疗膝关节骨关节炎

目的：比较2例治疗膝关节骨关节炎方法的效果。方法：2组病人分别采用关节镜清理和透明质酸钠注射治疗膝关节骨关节炎，结果：术后随访2年以上，根据关节疼痛，积液肿胀，关节活动度，行走功能四个项目及综合评价。关节镜组随访结果，半年－1年，优良率为96．2％，1－2年，优良率84．6％，2年以上优良率为73％，透明质酸钠组随访结果：半年－1年，优良率为94．9％，1－2年，优良率86．4％，2年以上优良率为74．6％，。结论：关节镜清理和透明质酸钠注射治疗膝关节炎2种方法都有一定的效果，2组之间无明显差别。     

胃癌侵袭性和根治手术对患者血清透明质酸浓度的影响

为研究胃癌侵袭性和根治手术对患者血清透明质酸浓度的影响,通过应用酶联免疫吸附方法(ELISA)测定20例胃,8患者血清透明质酸(hyaluronic acid,HA)浓度,结果发现,胃癌组明显高于对照组(P<0.001),BorrmannⅢ、Ⅳ组或伴有淋巴结转移组分别显著高于Borrmann Ⅰ、Ⅱ组或无淋巴结转移组(P<0.001),切除瘤体后上述各组的HA均显著下降(P<0.01～0.001)。结果提示,血清HA可能与胃癌的浸润和转移密切相关。