重组质粒载体pCMV-LRIG2转染BIU-87细胞株的效应研究

目的研究携带有LRIG2基因的重组质粒载体pCMV-LRIG2对膀胱癌细胞株BIU-87生物学行为的影响。方法用脂质体介导的基因转染技术，将携带有LRIG2基因的重组质粒载体pCMV-LRIG2转染至膀胱癌细胞株BIU-87，用G418筛选出抗性克隆后，Western blot检测转染前后LRIG2和EGFR蛋白表达水平变化，MTT法绘制转染前后细胞生长曲线，Transwell法检测转染前后细胞侵袭力，同质黏附实验观察转染前后细胞黏附能力。结果转染pCMV-LRIG2组LRIG2蛋白表达水平显著高于末转染组和空载体转染组；转染pCMV-LRIG2组细胞生长速度较未转染组和空载体转染组明显减慢，侵袭力显著低于未转染组和空载体转染组，而黏附能力显著高于未转染组和空载体转染组。结论LRIG2有类似于抑癌基因的作用，通过对EFG-EGFR信号转导途径发挥负反馈抑制作用，从而抑制BIU87细胞的生长、侵袭和转移。     

RNAi表达载体对膀胱癌细胞Livin基因表达的抑制作用

目的观察RNA干扰（RNAi）表达载体对膀胱癌BIU-87细胞Livin基因的抑制作用。方法构建针对Livin基因的RNAi质粒表达载体，脂质体法转染膀胱癌BIU-87细胞株，应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot检测其对Livin mRNA及蛋白表达的影响。结果构建的表达质粒在膀胱癌BIU-87细胞株中均抑制了Livin mRNA及蛋白表达。与空白载体组细胞作对照，前者产生的小干扰RNA（siRNA）在对Livin mRNA的抑制率24、48h分别为（81．28±9．21）％、（55．88±6．27）％，蛋白抑制率24h为（64．75±7．55）％。结论RNAi表达载体可以有效地抑制膀胱癌细胞Livin基因的表达。     

抑癌基因LRIG1对膀胱癌细胞BIU87生物学特性的影响

质粒转染人膀胱癌BIU87细胞，用G418（800mg／L）筛选出抗性克隆。Western blot检测转染前后LRIG1和EGFR蛋白水平的变化；MTT法绘制转染前后细胞的生长曲线；Boyden小室和同质黏附实验观察转染前后细胞侵袭和黏附能力的变化。结果转染pLRIG1-GFP组LRIG1蛋白表达水平较对照组和转染空载体组明显升高，而EGFR蛋白表达水平较对照组和转染空载体组显著降低；转染pLRIG1-GFP组细胞的生长速度较对照组和转染空载体组明显减慢；转染pLRIG1-GFP后的BIU87细胞侵袭目的研究抑癌基因LRIG1对膀胱癌细胞BIU87生物学特性的影响。方法用脂质体介导的基因转染技术，将pLRIG1-GFP和黏附能力显著降低（P〈0．05）。结论LRIG1是一种抑癌基因，通过参与形成EGFR的负反馈环路，对膀胱癌细胞BIU87的生长、侵袭和转移有显著的抑制作用。     

稳定表达LRIG1基因的人膀胱癌细胞株BIU87-LRIG1的建立和鉴定

目的 建立稳定表达外源性LRIG1基因的人膀胱癌细胞株BIU87-LRIG1.方法 利用脂质体介导的基因转染技术将质粒转染人人膀胱癌细胞株BIU87,实验分为3组:BIU87-LRIG1组(转染pLRIG1-GFP)、BIU87组(未转染质粒)和BIU87-neo组(转染pEGFP-N1).经用G418筛选3周后出现抗性克隆,对其扩大培养后,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分析各组中LIRG1 mRNA及其蛋白表达.结果 RT-PCR结果 表明,BIU87-LRIGl组中LRIG1 mRNA的表达水平(2.352 ±0.133)较BIU87-neo组(0.642±0.091)和BIU87组(0.516±0.045)明显升高;Western blot结果 显示,BIU87-LRIG1组LRIG1蛋白表达水平(2.120±0.113)较BIU87组(0.946±0.075)和BIU87-neo组(1.132±0.076)明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 成功建立了稳定表达外源性LRIG1基因的人膀胱癌细胞株BIU87-LRIG1.     

LRIG2基因在膀胱癌中的表达及临床意义

目的:了解LRIG2基因及其产物在膀胱癌中的表达情况及其与肿瘤分级分期的关系。方法:采用逆转录-聚合酶链反应和Western-blot技术检测了38例膀胱癌组织和16例正常膀胱黏膜组织中LRIG2mRNA和蛋白的表达情况。结果:膀胱癌组织中LRIG2mRNA和蛋白的表达水平显著低于正常膀胱黏膜组织;且分级和分期越高,LRIG2mRNA和蛋白的表达水平越低。结论:LRIG2基因有可能是一种新的抑癌基因,其缺失或表达水平下调会导致肿瘤细胞生长分化,提示其有可能成为肿瘤基因治疗的又一靶点。     

靶向沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨沉默Notch1基因对人膀胱癌细胞生物学行为的影响. 方法 将靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA Notch1-1转染膀胱癌细胞株T24和BIU-87,噻唑盐法、流式细胞术检测沉默Notch1后膀胱癌细胞生长、细胞周期和凋亡情况.RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后Notch1基因mRNA和蛋白表达的变化. 结果 转染后72 h,T24和BIU-87细胞G0/G1期细胞比例明显增加,分别为(80.13±2.69)%和(69.44±2.41)%,与T24对照组(23.89±1.32)%和BIU-87对照组(24.63±1.68)%比较差异有统计学意义(P值均<0.05).转染后72 h,T24和BIU-87细胞凋亡率分别为(13.75±1.23)%和(8.72±1.01)%,与T24对照组(1.28±0.14)%和BIU-87对照组(1.01±0.27)%比较差异均有统计学意义(P值均<0.05).转染后24 h细胞生长明显受到抑制,该抑制作用持续到转染后96 h.转染后72 h,T24和BIU-87细胞中Notch1基因mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05). 结论 Notch1在膀胱癌细胞株中可能起致癌作用.沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖.     

PTEN基因对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响

目的 研究抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞系BIU-87化疗敏感性的影响.方法 将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定;pBp-PTEN体外转染BIU-87细胞(pBp-PTEN-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU-87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU-87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况,应用MTT法分别研究转染前、后膀胱癌细胞对不同浓度抗癌药物丝裂霉素(MMC)、羟基喜树碱和吡柔比星的敏感性变化. 结果 RT-PCR证实PTEN在转染的BIU-87细胞中能稳定表达.PTEN转染后,BIU-87细胞对MMC的药物敏感性明显提高.对吡柔比星和羟基喜树碱的药物敏感性无明显变化. 结论 PTEN基因转染能提高人膀胱癌细胞系BIU-87对抗癌药物MMC的敏感性.     

DNMT1、DNMT3bsiRNA重组质粒转染对人膀胱癌细胞DNMTs表达的影响及其生物学效应

目的：探讨DNMT1、DNMT3b基因在膀胱癌发生发展中的作用。方法：①将DNMT1、DNMT3bsiRNA重组质粒分别单独和共同转入人膀胱癌细胞系Nu87;②半定量RT—PCR和WesternBlot分别检测DNMT1和DNMT3b基因mRNA和蛋白水平的变化;③用MTT法观察各组细胞生长曲线,流式细胞术观察细胞生长周期及凋亡率的变化。结果：单独和共同转染DNMT1（或DNMT3b）mRNA、蛋白表达量明显下降,能影响BIU一87的生长曲线,使细胞增殖减慢,并使细胞周期阻滞于G1期,明显提高细胞调亡率;转染空质粒和单独转染DNMT3bsiRNA重组质粒对BIU-87细胞的生长和增殖无明显影响。结论：联合转染DNMT1、DNMT3bsiRNA重组质粒,可同时下调DNMT1和DNMT3b在BIU87细胞中的表达,并能在体外抑制BIU-87细胞生长,促进细胞凋亡发生,其效果优于单独转染的重组质粒。单独转染DNMT3bsiRNA重组质粒对BIU-87细胞的生长和增殖无明显影响。     

LRIG1基因对膀胱癌细胞侵袭力的影响

目的探讨抑癌基因LRIG1对膀胱癌细胞BIU87侵袭能力的影响。方法用脂质体介导的基因转染技术,将pLRIG1-GFP质粒转染人膀胱癌细胞BIU87,用G418筛选出抗性克隆。用Boyden小室观察转染前后细胞侵袭能力的变化,并用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）法和Western—blot检测转染前后LRIG1和表皮生长因子受体（EGFR）的mRNA和蛋白表达水平。结果转染pLRIG1-GFP后的BIU87细胞侵袭能力显著降低,LRIG1的mRNA和蛋白表达水平明显升高,而EGFR的mRNA和蛋白表达水平则显著降低（P〈0．01）。结论LRIG1对膀胱癌细胞BIU87的侵袭能力有显著的抑制作用。     

PTEN基因转染对人膀胱癌细胞BIU-87中PI3K-Akt信号通路的影响

目的 研究抑癌基因PTEN转染对人膀胱癌细胞BIU-87中PI3K-Akt信号通路的作用.方法 将携有PTEN基因的重组真核表达质粒pBp-PTEN转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pBp-PTEN体外转染BIU-87细胞(pBp-PTEN-BIU87),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pBp的BIU-87细胞(pBp-BIU87)和正常BIU-87细胞为对照,用RT-PCR检测PTEN的表达情况.将PTEN基因的真核表达质粒转染膀胱癌细胞BIU-87(pBp-PTEN-BIU87),以BIU87细胞和pBp-BIU87细胞为对照,应用Wester blot方法 检测三组细胞P110(PI3K的催化亚单位)、磷酸化P110、Akt和磷酸化Akt表达的情况.结果 3种细胞P110和Akt蛋白总水平没有变化,但磷酸化P110和磷酸化Akt在PTEN转染细胞中的表达明显弱于对照组.结论 PTEN是通过对PI3K-Akt信号传导途径的负调控而抑制肿瘤的形成.PTEN-PI3K-Akt途径可能是PTEN抑癌作用的重要机制.     

Primary bladder closure and bladder neck reconstruction in classical bladder exstrophy

The surgical results of 28 consecutive initial bladder closures and 25 consecutive initial bladder neck reconstructions performed for classical bladder exstrophy at our hospital between 1975 and 1982 are presented. Partial bladder prolapse occurred in 2 cases and complete wound dehiscence never occurred following the initial primary bladder closure. Urinary continence following bladder neck reconstruction was assessed from parental interviews. An excellent surgical result was defined either as achievement of a daytime dry interval for more than 3 hours or less than 1 incontinent episode per day. According to these parameters, an excellent surgical result was achieved in 86 and 80 per cent of children, respectively. In 21 children evaluated with excretory urograms between 1/2 and 6 years after bladder neck reconstruction 10 per cent of the renal units showed significant hydronephrosis and deterioration of function. The 2 patients who had upper tract deterioration were not followed postoperatively at our institution and the diagnosis of bladder outlet obstruction was delayed when excretory urograms were not obtained during the first postoperative year. This review of the surgical results following primary bladder closure and bladder neck reconstruction for classical bladder exstrophy demonstrates that secure abdominal wall closure and urinary continence can be achieved with minimal morbidity and with infrequent deterioration of renal function following staged functional bladder closure.     

Leiomyoma of the urinary bladder with bladder stone

Leiomyoma of the urinary bladder is a rare benign mesenchymal tumour. We describe here a case of leiomyoma of the urinary bladder in a 65-year-old gentleman who presented with haematuria, passage of clots and combined obstructive and irritative urinary symptoms. The investigations revealed a vesical calculus and a mass on the left lateral wall of the urinary bladder. Cystolitholapaxy and transurethral resection of the tumour was performed. Histopathological report of the resected tumour revealed a leiomyoma of the urinary bladder. So far, a leiomyoma of the urinary bladder and a concomitant vesical calculus have not been described in literature.     

Lipomatosis of the bladder presenting as bladder cancer

A case of bladder lipomatosis in an 81-year-old man is presented. The preoperative diagnosis was bladder tumor. A transurethral resection of the bladder was performed and a pathological examination revealed lipomatosis of the bladder. This entity is extremely rare and, to our knowledge, this is the second case reported in the English published works.     

膀胱癌术后膀胱灌注的应用和探讨

膀胱癌是常见的泌尿系统肿瘤,在西方国家发病率仅次于前列腺癌,其发病率正逐年上升,年新增病例仅美国就超过了60 000例[1],而在我国其发病率和病死率均占泌尿男生殖系统肿瘤的首位,其中有70%～80%为非肌层浸润性膀胱癌[2].膀胱癌有易复发和易进展的特点,复发率高达60%～85%,其中有30%发展为浸润性癌[3].经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBT)术后有10%～67%的患者会在12个月内复发,术后5年内有24%～84%的患者复发,可能与新发肿瘤、肿瘤细胞种植或原发肿瘤切除不完全有关[4].因此,对膀胱癌患者术后进行合理有效的膀胱灌注不仅是治疗过程中非常重要的环节,可预防肿瘤的复发和进展,避免膀胱全切,降低膀胱肿瘤的死亡率[5],也是预防术后肿瘤复发和进展的主要措施.由此可见,术后膀胱灌注是保留膀胱后必不可少的治疗.