人MBL相关丝氨酸蛋白酶-1 cDNA的克隆与鉴定

目的 获得人甘露聚糖结合凝集素（ＭＢＬ）相关丝氨酸蛋白酶－１（ＭＡＳＰ－１）基因。方法 以人胎肝组织总ＲＮＡ为模板,采用ＲＴ－ＰＣＲ获取目的ｃＤＮＡ片段,克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体,进行酶切图谱分析和测序鉴定。结果 以ＲＴ－ＰＣＲ方法获得了含信号顺序的全长ＭＡＳＰ－１ｃＤＮＡ,将其与ｐＧＥＭ－Ｔ载体连接,转化大肠杆菌ＴＧ１,建立了ＭＡＳＰ－１的ｃＤＮＡ克隆,酶切图谱与微机分析结果一致。序列分析表明。与     

抗bFGF McAb制备,鉴定及轻链可变区基因克隆和序列析

目的：以重组人碱性成纤包生长因子为抗原免疫小鼠,建立多株稳定分泌ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞。半对ｂＦＧＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）可变区基因进行扩增及序列分析。方法：采用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法和免疫沉淀法对抗体特异性和ｌｇ类型进行鉴定,同时,应用分子生物学技术,对Ｖｋ基因的ＤＮＡ片段进行克隆,并对４ａ２Ｖｋ基因进行序列测定。结果：ｂＦＧＦ单克隆抗体可特异性结合人重组ｂＦＧＦ抗原,且     

U937细胞表达成纤维细胞生长因子受体

以逆转录－ＤＮＡ聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）自Ｕ９３７细胞钓出了两条ｃＤＮＡ片段。将其克隆入ＴＡ克隆载体后进行ＤＮＡ测序。结果证明ｃＤＮＡ片段分别是人成纤维细胞生长因子受体１（ＦＧＦＲ１）的细胞外段和细胞内段ｃＤＮＡ。这一结果表明，Ｕ９３７细胞可以表达ＦＧＦＲ１ｍＲＮＡ。     

发现2个FGFR1细胞外段同源的cDNA片段

目的：克隆表达人成纤维细胞生长因子受体。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ法,结果：在钓取人ｃＤＮＡ的过程中,意外地钓取到２个与ＦＧＦＲ１细胞外段同源的ｃＤＮＡ片段,经克隆和ＤＮＡ序列分析发现它们是ＦＧＦＲ１细胞外源的ｃＤＮＡ片段,。结论：虽然对这个２个ｃＤＮＡ片段的功能尚不明确,但这种抓住新现象并进行探究的意识对科研很重要。     

大鼠重组中枢型乙酰胆碱转移酶单克隆抗体的制备(英文)

利用分子生物学方法制备了大鼠中枢型乙酰胆碱转移酶（ｃＣｈＡＴ）的单克隆抗体并利用免疫组织化学等方法进行了检测。以大鼠纹状体ｃＤＮＡ 为模板，扩增出长度为７１５ ｂｐ 的大鼠ｃＣｈＡＴ 基因片段（含外显子６～１０）。将该片段克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ 载体中进行测序，将碱基序列正确的ｃＣｈＡＴ ｃＤＮＡ 片段定向插入ｐＭ ＡＬ－ｃ２ 载体中，构建成表达载体。利用ＤＮＡ测序对连接部位的阅读框架进行分析，未出现移码突变。将表达载体转化大肠杆菌并经诱导表达了分子量为６９ ｋＤａ 的融合蛋白，其大小与用表达载体的氨基酸序列所推导的分子量一致。用纯化后的融合蛋白作为抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠，并获得了Ｍ ａｂ６７６ 克隆。利用Ｗ ｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ方法对其进行分析表明该克隆能识别大鼠脑组织提取物中分子量为６２ ｋＤａ 的蛋白成分，这与大鼠脑中ＣｈＡＴ 分子量的大小一致。利用此单克隆抗体进行免疫组织化学反应的阳性结构见于纹状体、苍白球、Ｂｒｏｃａ氏斜角带核、无名质、内侧隔核以及脑干的脑神经运动核等胆碱能神经元的聚集区。上述结果表明本研究所制备的单克隆抗体具有识别大鼠ｃＣｈＡＴ 的特异性。     

大鼠Fas配体基因的克隆

目的 研究Ｆａｓ配体（Ｆａｓ ｌｉｇａｎｄ,ＦａｓＬ）在移植免疫方面的作用,克隆其编码的全部ｃＤＮＡ序列,并添加Ｋｏｚａｋ序列,以便在直核细胞高效表达大鼠ＦａｓＬ。方法 从大鼠的睾丸组织中提取总ＲＮＡ。下游引物以ＲＴ－ＰＣＲ的方法扩增出－９３１ｂｐ的ＤＮＡ征段,将这一片段重组于ｐＢＲ－ＲＳＶ载体中,酶切鉴定插人片段正确后进行全列分析。结果 证实该研究所克隆的ｃＤＮＡ是编码正确的大鼠ＦａｓＬ基因,与     

恶性疟原虫六个保护性抗原表位基因的化学合成及克隆

本文设计并化学合成一条含有恶性疟原虫裂殖子表面抗原（ＭＳＡ１、ＭＳＡ２）、环子孢子蛋白（ＣＳＰ）、环状体感染红细胞表面抗原（ＲＥＳＡ）等不同生活史期的４种抗原，共６个表位的复合基因（ＰｆＣＭＲ）。该基因含２个粘性未端，共分８个片段，采用“缺口填补法”接成双链ＤＮＡ，再与噬菌体Ｍ１３ｍｐ１８分别经ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ双酶切后回收、纯化、重组，并转化ＥｃｏｌｉＪｍ１０９，经ＰＣＲ和酶切鉴定，ＤＮＡ序列分析测定，证实阳性克隆子Ｍ１３ｍｐ１８－Ａ４与预设计基因顺序完全一致。     

人补体膜辅助调节蛋白MCP的基因克隆及共真核表达的研究

目的 克隆获得编码人补体膜辅助调节蛋白（ＭＣＰ）的ｃＤＮＡ，并对其在真核细胞的表达及功能进行研究。方法 应用ＲＴ－ＰＣＲ 方法，从Ｕ９３７细胞总ＲＮＡ中扩增编码人ＭＣＰ分子的ｃＤＮＡ片段，快速克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ载体，测定共序列。将该片段重组于ｐＬＸＳＮ载体，电穿孔转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，经ＦＡＣＳ检测筛选表达ＭＣＰ的阳性细胞克隆，用补体容破试验鉴定其抑制人补体溶破的功能。结果 ＲＴ－ＰＣＲ     

动脉粥样硬化斑块形成时血管平滑肌细胞增生相关基因的cDNA全 …

目的 克隆动脉粥样硬化斑块形成血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增生相关基因的ｃＤＮＡ全长,并对其功能进行初步探讨。方法 选用氧化低密度脂蛋白作为刺激物作用于培养的人主动脉ＳＭＣ,利用减除杂交技术构建减除文库,克隆相关基因片段,在全长文库构建的基础上筛选相关基因的ｃＤＮＡ全长。并进行原核系统内蛋白表达及量效关系检测。结果 发现了４个新基因片段,克隆了一个新基因ｃＤＮＡ全长,该基因在原核系统内有约相对分子质量     

人补体膜辅助调节蛋白MCP的基因克隆及其真核表达的研究

目的　克隆获得编码人补体膜辅助调节蛋白（ ＭＣＰ） 的ｃＤＮＡ,并对其在真核细胞的表达及功能进行研究。方法　应用ＲＴＰＣＲ 方法,从Ｕ９３７ 细胞总ＲＮＡ 中扩增编码人ＭＣＰ 分子的ｃＤＮＡ片段, 快速克隆于ｐＧＥＭＴＥａｓｙ 载体,测定其序列。将该片段重组于ｐＬＸＳＮ 载体,电穿孔转染ＮＩＨ３Ｔ３ 细胞,经ＦＡＣＳ 检测筛选表达ＭＣＰ 的阳性细胞克隆,用补体溶破试验鉴定其抑制人补体溶破的功能。结果　ＲＴＰＣＲ 扩增得到１ １４４ｂｐ 的编码人ＭＣＰ 分子的ｃＤＮＡ 片段,序列分析表明该ｃＤＮＡ编码的蛋白为ＳＴＣ＋ ＣＹＴ２ 亚型。细胞转染筛选获得多个表达ＭＣＰ 的ＮＩＨ３Ｔ３ 阳性细胞克隆,补体溶破试验证实其具有抑制人补体经典途径和旁路途径溶破的功能。结论　本研究为进一步探讨不同亚型结构的ＭＣＰ 分子与功能的关系及其应用奠定了基础。     

人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)cDNA的克隆

为了研究人碱性成纤维细胞生长因子在治疗神经系统疾病中的作用 ,克隆其 c DN A序列 ,并添加 K ozak序列 ,以用于真核细胞表达。本实验提取我国自建的脑胶质瘤细胞系 BT32 5总 RN A,设计上、下游引物用逆转录 PCR法扩增 c DNA片段 ,然后重组于 p GEM- 3zf( + )载体 ,酶切鉴定插入片段正确后测序。结果 :RT- PCR扩增到 4 73bp的带有 K ozak序列的 c DN A片段。显示 :克隆到碱性成纤维细胞生长因子 c DN A片段 ,可用于真核细胞表达     

地高辛标记的大鼠nNOS mRNA探针的制备和应用

目的　制备大鼠神经元型一氧化氮合酶 (neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)地高辛 (digoxigenin)标记的RNA探针 ,探讨nNOS在脊髓中的表达定位。方法　采用RT PCR方法 ,从大鼠脑组织中扩增nNOS基因mRNA部分片段 ,并经序列测定。以dig nNOSmRNA为探针 ,采用原位杂交观察成年大鼠脊髓组织中nNOSmRNA表达。结果　RT PCR法扩增出一特异产物与预期长度 2 4 0bp相符 ,T载体克隆测序与nNOS基因 10 0 %同源。原位杂交结果显示阳性信号出现在成年大鼠脊髓组织中。结论　采用RT PCR和T载体技术获得了大鼠脑组织nNOS基因克隆 ,dig nNOSmRNA探针原位杂交显示正常SD大鼠腰段脊髓组织中表达nNOSmRNA。     

人CD38抗原胞外段基因克隆及表达

目的 克隆并表达人CD38抗原分子的胞外估基因。方法 采用RT－PCR法，从高表达CD38抗原的Daudi细胞系中，扩增CD38全长cDNA，并将其插入pGEM-T载体中。重新设计引物，从重组pGEMT载体中，扩增CD38抗体分子的胞外段基因，再亚克隆到表达载体pET28a( )，转化大肠杆菌BL21，用IPTG诱导表达。结果 经酶切鉴定及序列分析表明，克隆的CD38外段基因的序列与文献^[1,2]的报道完全一致。将该片段亚克隆到表达载体pET28a( ) ,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21中获得表达。结论 获得了人CD38抗原分子胞外段基因及其原核表达产物，对进一步制备单克隆抗体，研究CD38分子的功能具有重要的意义。     

人白细胞介素13cDNA的克隆及序列测定

用反转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术从中国人外周血淋巴细胞中克隆了ＩＬ－１３ｃＤＮＡ，序列测定表明克隆的ＩＬ－１３ｃＤＮＡ含成熟的ＩＬ－１３蛋白全部编码，且存在编码第９８位Ｇｌｎ的密码子ＣＡＧ，这为进一步表达ＩＬ－１３并深入探究功能奠定了基础。     

大鼠代谢型谷氨酸受体第5亚型基因片段的克隆

从大鼠的尾壳核组织中提取总 RNA,以 RT-PCR方法扩增出大鼠 m Glu R5 长度约 43 5 bp的 c DNA片段。将这一片段克隆到 PGEM-T载体中进行序列分析 ,结果证实所克隆的 c DNA是编码正确的大鼠 m Glu R5 的一段基因序列。克隆的这段大鼠m Glu R5 特异性基因片段可用于制作探针 ,利用原位杂交技术检测其 m RNA在正常或异常状况下的表达 ;也可制作反意 c DNA或反意 m RNA以研究 m Glu R5 在生理或病理状态下的作用 ;还可进行反意 c DNA或反意 m RNA基因治疗。总而言之 ,克隆的这段基因 ,对研究 m Glu R5 在生理及病理条件下的功能变化 ,以及对与其有关疾病的基础研究和临床应用具有重要意义     

致倦库蚊后期胰蛋白酶cDNA克隆与序列分析

应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从吸血24h的致倦库蚊广州株蚊虫总RNA中反转录合成后期胰蛋白酶cDNA第1链.采用自动DNA分析仪进行序列分析,并与其他胰蛋白酶进行同源性比较.结果表明致倦库蚊后期胰蛋白酶cDNA部分序列分别长216bp、229bp和270bp,命名为Ctry1、Ctry2和Ctrt3.Ctry1和Ctry2均可编码50个氨基酸(1～150bp),氨基酸组成完全相同.Ctry1、Ctry2与致倦库蚊美国株后期胰蛋白酶前体物氨基酸同源性达86%.催化中心位点高度保守(Ser-5),具胰蛋白酶特异位点(G1y-24,Gly-32).而Ctry3可编码76个氨基酸(1～228bp).Ctry3编码的氨基酸与果蝇胰蛋白酶前体物的同源性为68%.催化中心位点高度保守(Ser-5),具胰酶特异位点(Gly-24,Gly-32).以上表明已克隆出致倦库蚊后期胰蛋白酶cDNA.     

中国人MBL cDNA的克隆与序列分析

从中国汉族人胎肝组织提取ＲＮＡ,以ＲＴ－ＰＣＲ方法获得了编码含号顺序的全长甘露聚糖结合凝集素肽链的ｃＤＮＡ片段,将其与ｐＧＥＭ－Ｔ载体连接,转化大肠杆菌ＴＧ１,     

跨膜型CD59分子的构建及其在小鼠NIH3T3和EL-4细胞表达的研究

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法,从Ｕ９３７细胞总ＲＮＡ中扩增得到编码人ＣＤ４６分子跨膜区和膜内区ｃＤＮＡ片段,用ＰＣＲ方法扩增得到编码成熟的ＣＤ５９胞外区蛋白的ｃＤＮＡ片段,连接并构建了跨膜型的ＣＤ５９分子ｃＤＮＡ。快速克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ载体进行序列测定,证实了其阅读框的完整和序列的正确性。     

微透析技术在建立灵长类帕金森病模型中的应用

为了检测单侧注射ＭＰＴＰ制备的帕金森病恒河猴模型纹状体内多巴胺及其代谢产物的含量变化,本研究采用脑内微透析技术和高效液相色谱－ 电化学方法检测了双侧尾状核头部多巴胺及其代谢产物３,４－二羟基苯乙酸和高香草酸的含量。结果证明,ＭＰＴＰ注射侧与注射对侧相比,多巴胺、３,４－二羟基笨乙酸和高香草酸的含量分别降低８５．７％ , ９５．１％ 和６７．８％ 。这与动物呈现单侧帕金森病症状,核磁共振检查显示单侧黑质区域密度减低、面积缩小以及经抗酪氨酸羟化酶免疫组化方法显示脑切片单侧多巴胺能神经元明显减少等现象一致。以上结果表明,脑内微透析技术是活体检测脑内神经递质含量变化的有效方法,可以反映模型的病程变化,可用于评价帕金森病的治疗效果。