Tγδ17和Tγδ22细胞在健康成人外周血中的比例

目的:观察健康成人外周血中αβT细胞和γδT细胞中辅助性T细胞17(TH17)样细胞和TH22样细胞的比例。方法:采集18名正常人外周血用荧光抗体染色后用流式细胞仪检测αβT细胞、γδT细胞中白细胞介素-22(IL-22)、IL-17和γ干扰素(IFN-γ)表达细胞的百分比。结果:将正常人外周新鲜全血中CD3+T细胞分成γδT细胞和αβT细胞两群。TH1样细胞在αβT细胞中比例为14.31%,明显低于在γδT细胞中的61.07%(P0.01),而TH17样细胞在αβT细胞中的比例为1.16%,明显高于在γδT细胞中的0.27%(P0.01),TH22样细胞在αβT细胞中与γδT细胞中的比例分别为1.06%和0.91%,差异无统计学意义(P0.05)。结论:在γδT细胞中存在IL-17和IL-22均阳性的Tγδ17细胞和仅产生IL-22的Tγδ22细胞,但比αβT细胞中的TH17样细胞和TH22样细胞少。     

The proportions of Tγδ17 cells and Tγδ22 cells in healthy adult peripheral blood

目的:观察健康成人外周血中αβT细胞和γδT细胞中辅助性T细胞17(TH17)样细胞和TH22样细胞的比例.方法:采集18名正常人外周血用荧光抗体染色后用流式细胞仪检测αβT细胞、γδT细胞中白细胞介素-22(IL-22)、IL-17和γ干扰素(IFN-γ)表达细胞的百分比.结果:将正常人外周新鲜全血中CD3+ T细胞分成γδT 细胞和αβT细胞两群.TH1样细胞在αβT细胞中比例为14.31%,明显低于在γδT细胞中的61.07%(P<0.01),而 TH17样细胞在αβT细胞中的比例为1.16%,明显高于在γδT细胞中的0.27%(P<0.01),TH22样细胞在αβT细胞中与γδT细胞中的比例分别为1.06%和0.91%,差异无统计学意义(P>0.05).结论:在γδT细胞中存在IL-17和IL-22均阳性的Tγδ17细胞和仅产生IL-22的Tγδ22细胞,但比αβT细胞中的TH17样细胞和TH22样细胞少.     

TCRγδ/δ2在结直肠癌患者外周血和肿瘤组织中的表达及相关性

目的 检测TCRαβ、TCRγδ及TCRδ2在结直肠癌患者外周血和肿瘤组织中的表达和相关性,为以γδT细胞为基础的免疫治疗提供依据.方法 使用流式细胞仪检测TCRαβ、TCRγδ及TCR δ2三者在结直肠癌患者外周血、正常肠道粘膜组织、癌旁组织及癌组织中的表达;分析结直肠癌患者外周血中TCRδ2与组织中TCRγδ和TCRδ2表达水平的相关性.结果 外周血中TCRγδ和TCRδ2在结直肠癌组中表达高于对照组（P＜0.05）.TCRγδ和TCRδ2在癌旁组织和癌组织中的表达高于正常肠道粘膜组织（P＜0.05）.当外周血TCRδ2升高到较高水平时,癌旁组织中TCRγδ和TCRδ2水平同步升高（P＜0.05）,而癌组织中TCRγδ和TCRδ2水平反而降低（P＜0.05）.结论 结直肠癌患者外周血Vδ2T细胞的水平与癌组织中浸润的γδT细胞和Vδ2T细胞具有相关关系,为Vδ2T细胞的局部介入治疗提供了理论依据.     

TCRγδ/δ2在结直肠癌患者外周血和肿瘤组织中的表达相关性

［摘要］目的　检测TCRαβ、TCRγδ及TCRδ2在结直肠癌患者外周血和肿瘤组织中的表达和相关性,为以γδT细胞为基础的免疫治疗提供依据．方法　使用流式细胞仪检测TCRαβ、TCRγδ及TCRδ2三者在结直肠癌患者外周血、正常肠道粘膜组织、癌旁组织及癌组织中的表达;分析结直肠癌患者外周血中TCRδ2与组织中TCRγδ和TCRδ2表达水平的相关性． 结果　外周血中TCRγδ和TCRδ2在结直肠癌组中表达高于对照组（P＜0.05）．TCRγδ和TCRδ2在癌旁组织和癌组织中的表达高于正常肠道粘膜组织（P＜0.05）．当外周血TCRδ2升高到较高水平时,癌旁组织中TCRγδ和TCRδ2水平同步升高（P＜0.05）,而癌组织中TCRγδ和TCRδ2水平反而降低（P＜0.05）．结论　结直肠癌患者外周血Vδ2 T细胞的水平与癌组织中浸润的γδ T细胞和Vδ2 T细胞具有相关关系,为Vδ2 T细胞的局部介入治疗提供了理论依据．     

MtbAg体外激活扩增的人γδT细胞表面L-选择素的动态变化

目的: 研究结核杆菌抗原(MtbAg)激活扩增的人外周血γδT细胞表面L-选择素(CD62L)的表达。方法: 用MtbAg和rIL-2刺激人外周血单个核细胞(PBMC)促使γδT细胞增殖,用CD3单克隆抗体(CD3mAb)和rIL-2刺激人PBMC促使αβT细胞增殖。取新鲜PBMC和刺激后培养3~21天的γδT细胞和αβT细胞,用多色荧光抗体标记,在流式细胞仪上检测γδT细胞表面CD62L的表达,并与αβT细胞作比较。结果: 新鲜未刺激PBMC中γδT细胞CD62L表达率为43.9%,明显低于αβT细胞的76.6%;用MtbAg或CD3Ab激活后培养第6天时CD62L在γδT细胞的表达(90.7%)和在αβT细胞表达(87.2%)均达到高峰;以后CD62L表达逐渐下降,15~21天γδT细胞CD62L的表达在低水平(16.2%~10.6%)维持,αβT细胞表面的CD62L表达(23.6%~17.5%)亦在低水平维持。结论: 新鲜PBMC中γδT细胞CD62L表达明显低于αβT细胞,但在激活后增殖过程中CD62L在γδT细胞的表达,与αβT细胞相似,呈现先上升再下降的趋势,最后稳定在低水平。     

外周血T细胞受体和CD25在大鼠心脏移植排斥反应中的变化

目的探讨T细胞受体(TCR)和IL-2受体α链(CD25)在大鼠心脏移植排斥中的作用及意义.方法用流式细胞术检测大鼠异位心脏移植术前和术后不同时间外周血淋巴细胞TCRαβ、TCRγδ和CD25的表达变化,结果心脏移植术后淋巴细胞TCRαβ和CD25的表达[(52.0±10.7)%、(2.1±1.9)%]显著高于术前[(41.7±9.2)%、(1.3±0.8)%](均P＜0.05);TCRαβ和CD25的表达变化与排斥反应的进程有关,术后第5天[(51.8±11.5)%、(2.0±1.5)%]显著高于术前(均P＜0.05),至第14天[(60.5±6.3)%、(3.1±1.6)%]仍维持在高峰平台,高于术前(均P＜0.05),此时移植物排斥反应多表现为2～3级.TCRδγ在外周血中的表达量较低,在术前和术后无显著变化.结论淋巴细胞TCR αβ和CD25在移植排斥反应中可能发挥重要的作用,动态监测外周血淋巴细胞TCR αβ和CD25的表达有助于临床移植排斥反应的评价.     

T细胞亚群研究进展

T细胞是一个不均一的细胞群体,分类方法有多种。按细胞表面分化抗原(CD)的不同。可分为CD4^ 和CD8^ 两大亚群;按T细胞表面受体(TCR)的不同,可分为αβT细胞γδT细胞;按功能可分为辅助性T细胞(Th细胞)、抑制性T细胞(Ts细胞)、     

神经酰胺对人γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用

目的: 观察神经酰胺对人γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用。方法: 用结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)和CD3单抗(CD3mAb)分别刺激正常人外周血单个核细胞,获得Mtb-Ag激活的T细胞(γδT细胞为主)及CD3mAb激活的T细胞(αβT细胞为主);用不同浓度的神经酰胺(C2-Cer)分别作用于γδT细胞和αβT细胞,培养3 h后收获细胞,应用Annexin-V-FITC/PI染色,流式细胞术检测不同亚群T细胞的凋亡,应用四甲基噻唑氮蓝(MTT)比色法检测T细胞的活性。结果: Mtb-Ag激活的T细胞中γδT细胞比例可达70%~90%,CD3mAb激活的T细胞中αβT细胞比例>90%;与对照组比较,低浓度的C2-Cer (≤ 10 μmol/L)对人γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用和细胞活性抑制作用均不明显(P>0。05);而高浓度的C2-Cer对γδT细胞和αβT细胞的诱导凋亡作用和细胞活性抑制作用存在显著差异:100 μmol/L的C2-Cer诱导γδT细胞、αβT细胞凋亡比例分别增加10。4%(P>0。05)及73。5%(P<0。01),活细胞区(R1区)的细胞比例分别为对照组的88。1%(P>0。05)和7。8%(P<0。01);而500 μmol/L时诱导γδT细胞和αβT细胞凋亡比例分别增加71。9%和73。8%(P<0。01),R1区的细胞比例分别为对照组的36。5%和2。7%(P<0。01)。结论: 神经酰胺能诱导活化的人γδT细胞和αβT细胞发生凋亡,诱导γδT细胞发生凋亡所需的C2-Cer浓度明显高于诱导αβT细胞所需浓度。     

人外周血γδT细胞激活后IL-2和IFN-γ表达的特点

目的: 探讨人外周血γδT细胞在不同刺激剂激活后产生Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ的不同特点。方法: 健康成人外周血单个核细胞(PBMC)用佛波醇酯(PMA)、离子霉素(ionomycin)和抗CD28单抗(mAb)以不同组合刺激6~8h后;用流式细胞术胞内细胞因子检测法测定γδT细胞和αβT细胞IL-2和IFN-γ的表达;或用结核杆菌抗原(Mtb-Ag)刺激γδT细胞加IL-2扩增3~8天后检测γδT细胞IL-2的表达。结果: PBMC经PMA+ionomycin刺激后,与αβT细胞中产生IL-2细胞(14.0%)相比,γδT细胞中极少数细胞(1.1%)表达IL-2;但分泌IFN-γ细胞在γδT细胞中(56.1%)明显多于αβT细胞(8.5%)。如加抗CD28mAb联合刺激后,IL-2产生细胞在αβT细胞中明显增加,但在γδT细胞中未见增加;而IFN-γ表达细胞在两类细胞中均有明显增加;PBMC用Mtb-Ag激活后扩增3天后在γδT细胞中开始检测到IL-2表达,第5~6天时达高峰,第8天时逐渐下降。结论: 多克隆短时刺激对PBMC中γδT细胞表达IFN-γ能力强于αβT细胞,但产生IL-2很少;MtbAg能诱导γδT细胞表达IL-2,但过程较慢。     

合并有难治性红皮病未确定的单克隆T细胞恶液质

红皮病是一种扩散的感染性皮肤病,很少情况下与恶性血液病如T细胞淋巴瘤(红皮性蕈样肉芽肿病)或T细胞白血病(Sézary综合征或T细胞白血病/淋巴瘤)相关。观察:作者筛选了30例红皮病患者(20例明确病因,10例是特发性红皮病),通过使用T细胞受体(TCR)γ基因特异的聚合酶链反应和自动D NA电泳对循环的单克隆T淋巴细胞进行分类,而且使用下列表面标记对外周血CD4阳性的淋巴细胞进行表型分析,包括CD3,CD7,CD8,CD25,CD26,CD27,CD28,CD29,CD30,CD45R O,CD45RA,CD56,CD134,H LA-D R,TCRαβ,TCRγδ和皮肤淋巴细胞抗原(CLA)。在…     

γδT细胞的分类及其功能特质研究的新进展

γδT细胞是一群不同于αβT细胞的T淋巴细胞群,其表面T细胞受体由γ链和δ链组成。而γδT细胞本身亦是一群高度异质性细胞,其亚类种类多、表型多变、功能丰富。γδT细胞除传统的Vδ1、Vδ2和Vδ3γδT细胞外,还可根据其功能差异分为调节性γδ、产生IL-17的γδ、产生干扰素的γδT细胞、人类错配修复基因2特异性γδT细胞以及白细胞介素6γδT细胞。γδT细胞各亚类间生物学特性各异,在机体肿瘤、感染及自身免疫性疾病等的发生、发展中均有重要作用,被认为是机体连接天然免疫与适应性免疫功能的桥梁。     

结核患者外周血αβT和γδT细胞亚群免疫亚型细胞分布的探讨

目的:检测健康成人和结核患者外周血αβT细胞亚群以及γδT细胞亚群分布情况.方法:采集健康成人及结核病患者外周血,用不同荧光素标记单抗染色后,用流式细胞术检测 αβT细胞免疫亚型CD45RA+CD27+初始型细胞(Tnaive)、CD45RA-CD27中央记忆型T细胞(Tcm)+、CD45RA-CD27-效应记忆型T细胞(Tem)和CD45RA+CD27-效应型T细胞(Teff);γδT细胞中Vδ1、Vδ2、Vδ1-Vδ2-(即Vδ3-8)4种免疫亚型的百分率.结果:与健康成人比较,结核患者CD4+αβT细胞中Tnaive、Teff细胞的百分率降低(P<0.01),Tem细胞的百分率升高(P<0.01),Tcm细胞差异无统计学意义(P>0.05).结核与健康成人比较,患者CD8+αβT细胞中Tnaive、Tcm细胞的百分率降低(P<0.01和P<0.05),Tem、Teff细胞的百分率升高(P<0.01).与健康成人比较,结核患者Vδ1γδT细胞中Tnaive、Tcm细胞的百分率降低(P<0.05),Tem细胞的百分率升高(P<0.05),Teff细胞差异无统计学意义(P>0.05);结核患者Vδ2γδT细胞中Tcm细胞的百分率降低(P<0.05),Tem、Teff细胞的百分率升高(P<0.05,P<0.01),Tnaive细胞差异无统计学意义(P>0.05);结核患者Vδ3-8γδT细胞中Tem细胞的百分率升高(P<0.05),Tnaive、Tcm、Teff细胞差异无统计学意义(P>0.05).结论:结核病患者外周血中αβT和γδT细胞亚群分布均有显著改变.     

CD4^＋T细胞肿瘤研究取得进展

上海交通大学医学院附属瑞金医院血液科、上海血液研究所研究小组与法国Joseph Fouria大学Michallon医院合作，开展CD4^＋T细胞的抗肿瘤能力研究取得进展，研究发现CD4^＋T细胞能够特异性地杀伤从自体淋巴瘤细胞衍生的细胞株，并进一步提示使用肿瘤杀伤性CD4^＋T细胞可进一步增强过继转移或免疫治疗的有效性，特别是在肿瘤逃避CD8^＋T细胞介导的免疫杀伤作用时，CD4^＋T细胞能起到替代作用。该研究小组利用1例滤泡B淋巴细胞淋巴瘤患者的外周血淋巴细胞，将缺乏人类白细胞抗原Ⅰ（HLA-Ⅰ）的恶性淋巴瘤细胞CH1细胞株作为唯一的刺激源，以梯度稀释法得到3种自体的、细胞毒性的、具有肿瘤杀伤特异性的CD4^＋T细胞克隆。结果3种T细胞克隆可以杀伤来自于新鲜恶性B细胞的自体HLA-Ⅰ分子缺乏的淋巴瘤细胞株，但却对EB病毒（EBV）阳性的正常B细胞或K562细胞无杀伤溶解作用。3种肿瘤特异杀伤的CD4^＋T细胞均为TCR Vβ17-Dβ1—Jβ1．2，并具有同样的互补决定区CDR3。     

多发性硬化患者外周血γδT细胞与CD_4~+CD_(25)~+Foxp3~+Treg细胞比例的变化

目的探讨多发性硬化(MS)患者外周血γδT细胞与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例的变化。方法采集37例MS患者(MS组)及25例健康对照者(NC组)的外周静脉血,分离外周血单个核淋巴细胞,以流式细胞术检测γδT细胞及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的比例。结果 MS组外周血γδT细胞比例较NC组显著升高,且活动性患者较非活动性患者进一步升高;MS组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例较NC组显著降低,而活动性患者较非活动性患者进一步降低。MS组外周血γδT细胞与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例呈显著负相关(P<0.05)。结论 MS患者外周血γδT细胞比例的升高可下调CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例,从而促进疾病的发生。     

佛波酯对人外周血DNT细胞表面抗原检测的影响及检测方法的探讨

目的探讨佛波酯(PMA)对人外周血淋巴细胞中TCRαβ+CD4-CD8-T细胞(DNT细胞)表面抗原检测的影响及检测方法的探讨。方法分离人外周血单个核细胞,分别在激活前后对细胞进行TCRαβ、CD4和CD8荧光单抗标记,流式细胞术计数DNT细胞。结果 A方法(先激活,再标记),淋巴细胞表面抗原CD4分子显著下调,DNT细胞与TCRαβ+CD4+CD8+T细胞、TCRαβ-CD4-CD8-T细胞和TCRαβ-CD4+CD8+T细胞间无法设门,与正常对照比较,DNT细胞计数显著增加;B方法(先标记,再激活),DNT细胞与其他细胞群设门清晰,与正常对照比较,对DNT细胞计数无明显影响;C方法(先标记,再联合激活),DNT细胞检测结果与B方法相同。结论采用A方法(常规方法),不能对活化后的DNT细胞进行准确计数;采用B和C方法(改进方法),可以对活化后的DNT细胞进行准确计数,避免了磁珠或(和)流式分选,为其计数和表面抗原检测提供了一种新的简便方法。     

外周血T淋巴细胞CD57与肺部细菌感染

目的：了解肺部细菌感染患者外周血T淋巴细胞表面CD57抗原的变化及意义。方法：以流式细胞仪测定正常人、肺部细菌感染患者、肿瘤患者和病毒性肝炎患者的外周血CD57^ 、CD4^ CD57^ 、CD8^ CD57^ T淋巴细胞亚群的百分比及其对ConA的反应性。结果：肺部感染和肿瘤组患者的外周血CD57^ 、CD8^ CD57^ T淋巴细胞显著高于正常对照组及病毒性肝炎组；ConA刺激后肺部感染组和正常对照组的外周血CD57^ 、CD4^ CD57^ 、CD8^ CD57^ T淋巴细胞均显著高于刺激前，但前者CD57^ T淋巴细胞百分比的改变显著低于后者。结论：CD57^ CD8^ CD57^ T淋巴细胞在细菌感染及肿瘤的病理过程中起一定作用，肺部感染组CD57^ T淋巴细胞对有丝分裂原的反应显著低于正常对照组可能是由于CD57增加的结果。     

不同结核杆菌抗原刺激外周血T细胞亚群产生干扰素的比较

目的：比较磷酸化抗原（HDMAPP）、结核杆菌耐热抗原（Mtb-HAg）和结核杆菌低分子耐热抗原Mtb-HAg（10 k）刺激外周血T细胞产生γ-干扰素（IFN-γ）的反应能力方面的特点及差异.方法：采集正常人外周血,分别用HDMAPP、Mtb-HAg和Mtb-HAg（10 k）刺激培养14 h,再加入莫能霉素继续培养6h,收集细胞,加入荧光标记单抗进行表面分子和胞内染色,然后在流式细胞仪上检测各实验组中CD3＋ αβ细胞和CD3＋ γδ细胞胞内IFN-γ的表达.结果：正常人各抗原实验组CD3＋ αβ细胞和CD3＋γδ细胞胞内产生IFN-γ＋细胞比率较阴性组对照组升高（P＜0.01）.各抗原刺激组CD3＋γδ细胞产生IFN-γ＋细胞比率明显高于CD3＋αβ细胞（P ＜0.05 ～P＜0.01）.3种抗原刺激组间CD3＋αβ细胞和CD3＋γδ细胞无明显不同（P＞0.05）.结论：HDMAPP、Mtb-HAg和Mtb-HAg（10 k）均可以刺激外周血中T细胞中αβ和γδ细胞群产生IFN-γ,均可特异性诱导刺激CD3＋γδ细胞产生IFN-γ,HDMAPP、Mtb-HAg（10 k）对CD3＋γδ细胞产生IFN-γ的表达量高于Mtb-HAg.     

人胎儿脾脏T细胞表型分析

本文研究了人胎儿脾脏T细胞的表型,结果显示:(1)胎儿脾脏T细胞比例偏低,TCRαβ+T细胞占CD 3+T细胞的84.5％;(2)CD4/CD8比值和胎龄成正相关,这提示抑制性T细胞在自身耐受形成中可能具有重要意义;(3)胎儿脾细胞的74％表达CD38抗原。     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群的测定分析

目的：探讨淋巴细胞亚群(T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞及T细胞亚群)在慢性乙型肝炎患者外周血中的变化意义。方法：通过流式细胞技术比较分析56例慢性乙型肝炎患者及30例键康正常人的外周血淋巴细胞亚群。结果：与正常对照组相比，慢性乙型肝炎患者组外周血CD3^ CD4^ 细胞降低，淋巴细胞CD4^ /CD8^ 比值下降。结论：慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能紊乱，存在辅助性T细胞减少及辅助性T细胞和细胞毒性T细胞比例失衡等异常表现。     

人 CD4+T细胞在肠道细菌抗原刺激前后CD25与FOXP3的表达

目的：探讨新鲜分离及自身肠道菌群抗原刺激后的人外周血CD4^＋T细胞CD25和FOXP3表达的相关性及变化规律．方法：分离人的外周血单核细胞和淋巴细胞，单核细胞经自身肠道菌群抗原刺激后与淋巴细胞混合培养，新鲜分离及混合培养14d的淋巴细胞用三色流式细胞术在单细胞水平同时检测CD4，CD25和FOXP3的表达．结果：新鲜分离的淋巴细胞约43．4％表达CD4，在CD4^＋T细胞中，约5．8％表达CD25，而高表达的只有1．9％，约5．2％表达FOXP3，CD25和FOXP3均表达的占3．3％，CD25^hi FOXP3^＋细胞占1．6％，CD4^-细胞几乎不表达FOXP3．经抗原刺激后，淋巴细胞总数均轻度增加（与未刺激组比较，平均增加21．0％，P〈0．001）．CD4^＋细胞的比例均明显上升（67．1％vs43．4％，P〈0．001），CD25^＋，FOXP3^＋及CD25^＋FOXP3^＋细胞的比例变化不大．CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋T细胞占CD4^＋CD25^＋T细胞的比例及CD4^＋CD25^hi FOXP3^＋T细胞占CD4^＋CD25^hiT细胞的比例在所有研究对象中均呈下降趋势（前者从59．8％降到52．0％，后者从86．3％降到77．9％，均P〈0．05）．结论：CD25和FOXP3的表达具有一定的相关性，但CD25及CD25^hi均不能很可靠地标记人类的调节性T细胞，尤其是在淋巴细胞受到抗原刺激以后．肠道菌群抗原作为外来抗原刺激自身的淋巴细胞后，活化增殖的细胞中主要是CD4^＋CD25^＋FOXP3^-反应性T细胞，而不是CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞．