一例急性早幼粒细胞白血病同时伴有ins(15;17),t(2;17;20)和三体8异常

目的 对1例伴有ins(15;17),t(2;17;20),+8复杂异常的急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytie leukemia,APE)病例进行细胞和分子遗传学研究.方法 按常规制备染色体,以R显带技术进行核型分析,并先后作多色荧光原位杂交(multiplex fluoresence in situ hybridization,M-FISH)、染色体涂染和PML-RARa双色FISH检测.结果 R显带核型分析为47,XY,2q-,+8,17q+,20p+;M-FISH检测为:47,XY,t(2;17;20)(q24;q21;p13),+8;染色体涂染证实了2qZ4以下片段易位到17q21上和17q21以下片段易位到20p13上;双色FISH示17号染色体上RARa(retinoic acid receptora,RARe)基因部分片段插入到15号染色体形成PNL-RARa融合基因,即ins(15;17)(q22;q21.1q21.3).结论 FISH技术是明确隐匿/插入易位的可靠手段,凡形态学拟诊为APL而常规核型分析未发现t(15;17)者均应进行FISH检测.     

多重荧光原位杂交技术体系的建立及其在检测白血病复杂核型异常中的应用

目的：建立多重荧光原位杂交技术（multiplex fluorescence in situ hybridization，M-FISH）体系，探讨其在检测白血病复杂核型异常中的应用。方法：联合应用常规核型分析、染色体涂抹（chromosome painting，CP）、染色体荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）和M-FISH方法分析了两例白血病复杂核型。结果：对其中1例常规核型分析显示为46，XY，der(9)t(9；12)的急性淋巴细胞白血病-L2型病例，M-FISH检出其具有复杂的染色体易位；46；XY，der（2）t(2；9)，der(9)t(9；12；22)。对另1例常规核型难以分析的急性单核细胞白血病-M5型病例，M-FISH检出其复杂核型是46，XY，der(2)t(2；17)，der(10)t(10；11；17)，der(11)t(11；？)。进下不用染色体涂抹和双色FISH证实了M-FISH的结果，并发现MLL基因（mixed lineage leukemia gene）受累。结论：M-FISH是筛选白血病复杂染色体异常的理想方法，对阐明所有白血病、乃至其它肿瘤性疾病和遗传性疾病的染色体易位和基因改变有广阔的应用前景。     

荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤复杂核型异常

目的探讨多重荧光原位杂交(multiplex fluorescence in situ hybridization,M-FISH)技术联合荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术在检测多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)染色体异常中的应用价值及13q14缺失、IgH相关易位和17p13缺失的发生率。方法联合应用常规细胞遗传学(conventional cytogenetics,CC)方法及M-FISH和一组包括13q14(D13S319),14q32(IgH基因)和17p13(p53基因)探针的FISH技术分析了7例伴有复杂染色体异常的MM患者骨髓标本。结果M-FISH明确了CC分析中没有明确的异常,共检出12种染色体数目异常和29种结构异常,其中,1号染色体异常、13号染色体缺失和与14q32相关的易位最为多见。FISH检出6例伴有13q14缺失;4例伴有17p13缺失;5例伴有一个14q32相关易位,两例还伴有涉及两个14q32的易位。结论M-FISH联合FISH技术可以明确CC分析中复杂染色体异常,并发现和纠正CC分析中漏检及误检的异常,为MM染色体异常的研究提供了一种理想的     

多重荧光原位杂交结合染色体涂抹技术检测骨髓增生异常综合征复杂核型异常

目的探讨多重荧光原位杂交(multiplex fluorescence in situ hybridization,M-FISH)及全染色体涂抹(whole chromosome painting,WCP)技术在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)复杂核型异常检测中的价值。方法对7例常规R显带具有复杂染色体异常的MDS患者应用M-FISH技术确定复杂染色体的重排及标记染色体的组成,识别微小易位。并进一步采用双色WCP技术验证M-FISH检测的结果。结果M-FISH不仅证实了R显带的结果,而且确定了R带核型分析没有确定的6种标记染色体、9种有不明来源的额外物质增加的染色体、5种衍生染色体的组成和来源及4种被忽略的微小易位。涉及17号染色体的异常及-5/5q-是MDS最为常见的两种染色体异常。WCP技术纠正了一些M-FISH漏检及误检的异常。结论M-FISH是明确复杂染色体异常的很有用的分子生物学工具,WCP是M-FISH技术的重要补充,R带核型分析结合分子细胞遗传学工具M-FISH和WCP可以更加准确地描述复杂染色体异常。     

急性单核系白血病M4/M5中MLL基因重排的间期荧光原位杂交研究

目的　探讨间期荧光原位杂交 ( fluorescence in situ hybridization,FISH)技术对混合谱系白血病 ( mixed lineage leukemia,ML L)基因重排检测的价值 ;评估 ML L 重排在急性单核系白血病 M4 / M5中的发生率和预后意义。方法　采用骨髓直接法或短期培养法制备染色体 ,应用 R显带技术进行核型分析。采用地高辛标记的跨越 11q2 3断裂位点的单色 ML L探针和间期 FISH技术对 2 3例急性单核系白血病M4 / M5病例进行 ML L重排检测。结果　 R显带揭示 2 3例中 7例有涉及 11q2 3的易位 ,5例有其他核型异常 ,10例核型正常 ,1例核型分析失败。 FISH研究显示 12例有 ML L重排 ,包括 R显带检出 11q2 3异常的7例。结论 FISH技术检测 ML L重排的敏感性明显高于常规细胞遗传学技术 ;ML L重排与急性单核系白血病 M4 / M5高度相关 ,是预后不良的指标     

应用FISH、FCM检测APL PML/RARA融合基因及临床应用的研究

目的　研究应用荧光原位杂交技术 (FISH)、流式细胞技术 (FCM)检测急性早幼粒细胞白血病 (APL)PML/RARa融合基因及残留白血病细胞的意义。方法　应用CG、M -FISH、FCM对 30例APL患者初发和缓解期的骨髓标本进行分析 ,分别检测t(15 ;17)易位和PML/RARa融合基因及残留白血病细胞的存在。结果　对初发期骨髓标本进行CG和FISH分析发现 ,10 0 %具有t(15 ;17)易位 ,阳性核型占 6 8%～ 10 0 % ,其中有 8例还伴有其他异常 ;10 0 %具有PML/RARa融合基因 ,且阳性中期相的比例高达 96 %～ 10 0 % ;结果具有显著差异 (P <0 0 0 1)。对CR期的骨髓标本进行CG、FISH分析 ,CG为正常核型 ,FISH仍可检出 0 %～ 4 5 %的PML/RARa融合基因。对CR后 12个月的标本进行CG、FISH分析 ,CG均为正常核型 ;FISH仍可检出 0 %～ 37%的PML/RARa融合基因 ,较CR期有所降低。对这 30例APL患者初发期、完全缓解期及完全缓解后 12个月时进行了FCM检测 ,并得出定性结果。完全缓解期检测结果与M -FISH分析一致 ;对完全缓解后 12个月时M -FISH结果进行定性分析发现 30例患者中有 6例为融合基因阴性 ,相应的FCM定性分析结果却发现只有其中的 2例呈现阴性 ,其余 4例仍然为阳性。随访至CR后 2年 ,发现 7例PML/RARa融合基因阳性中期相比例较高 (CG分     

荧光原位杂交技术在诊断变异Ph易位及Ph(一)慢性髓细胞白血病中的应用

目的 探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术在诊断变异Ph易位及Ph(-)慢性髓细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)中的应用价值.方法 应用常规R显带方法,对9例伴有变异Ph易位和2例Ph(-)CML患者采用双色双融合bcr/abl探针进行FISH检测.结果 9例变异Ph易位CML患者异常核型除涉及9和22号染色体外,还涉及1、3、5、12、13、15、17、21号染色体,且部分类型为重现性异常,FISH结果均为阳性,信号特征为2R2G1Y;2例Ph(-)CML患者核型正常,FISH结果阳性,信号特征分别为1R1G2Y和1R1G1Y.结论 FISH技术对伴有变异Ph易位及Ph(-)CML患者的诊断更具有优势,可根据阳性细胞信号特征分析其异常核型,判断标记基因异常改变情况,是常规染色体显带分析的有益补充.     

联合间期和中期荧光原位杂交检测发现11q23异常伴D13S319缺失急性髓系白血病一例

目的对1例出现11q23异常伴D13S319缺失的罕见急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者进行多途径细胞遗传学分析,为诊断、治疗及预后分层提供依据。方法应用G+R显带技术对患者24 h培养后的中期分裂相进行染色体核型分析,联合分裂间期和中期荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术对患者染色体的特定位点进行检测,明确复杂易位和微小缺失片段。结果患者存在混合系白血病基因(mixed lineage leukemia,MLL)重排,形成了MLL-AF10融合基因,并伴有13号染色体D13S319位点的缺失。结论MLL基因重排合并D13S319位点缺失在急性白血病中是否具有双重打击效应应引起临床的重视。在AML患者核型中发现13q-、del(13)(q14)、-13或der(13)任意一种克隆性异常时,应行FISH检测论证及明确缺失片段的大小,以便进行靶向治疗。     

FISH在免疫表型特殊的急性早幼粒细胞白血病诊断中的应用

为探讨荧光原位杂交(fluoresence in situ hybridization,FISH)技术在免疫表型特殊的急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)诊断中的应用,作者用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测APL患者骨髓中单个核细胞的免疫表型,并用FISH检测患者是否存在PML/RARα融合基因.结果发现,少数APL患者免疫表型为CD13 ,CD33 ,CD34-和HLA-DR ,而利用FISH技术检测后,发现存在PML/RARα融合基因,与典型的APL患者HLA-DR-、PML/RARα融合基因( )的结果不同,提示临床上不能只将免疫表型作为诊断白血病的独立指标,而应该结合传统的FAB分型及新兴的分子诊断技术如FISH、PCR等来协助诊断.     

多重荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤复杂核型异常

目的 探讨多重荧光原位杂交(multiplex fluorescence in situ hybridization,M-FISH)技术在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)复杂核型异常(complex chromosomal aberrations,CCAs)检测中的价值.方法 对10例常规细胞遗传学(conventional cytogenetics,CC)方法检测具有复杂核型的MM患者应用M-FISH技术确定复杂染色体的重排及标记染色体的组成.结果 M-FISH证实了CC显示的29种结构异常,并进一步明确了1p-、6q-、9q-、9q+、+8q+×2、14q+、?14q、der(4)、der(22)、der(1)t(1;?)(q10;?)、der(3)、del(7)的具体来源;同时也发现CC分析没有发现或不能识别的21种异常,其中t(2;15)(q33;q22)、t(6;7)(q23;q34)、t(8;11)(q24;q23)、t(1;14)(q10;q32)和t(X;1)(q26;q25)是新发现的核型异常.这10例随访的MM患者病例资料中9例已死亡,中位生存期仅为23个月,较公认的MM患者的平均生存期34个月明显缩短.结论 对伴有CCAs的MM患者,M-FISH技术可以明确CC分析中复杂染色体异常,并发现和纠正CC分析中漏检及误检的异常,为MM的染色体异常研究提供了一种重要的方法,已经成为精确染色体核型分析所不可缺少的手段之一.     

伯基特白血病的细胞遗传学研究

目的 研究伯基特白血病(Burkitt leukemia,BL)的细胞遗传学特点.方法 采用常规细胞遗传学(conventional cytogenetics,CC)技术检测17例初诊BL的染色体核型异常,同时应用三色间期荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术检测其中t(8;14)(q24;q32)的发生率,并与CC作比较.结果 17例BL中CC检出7例核型异常,染色体异常发生率为41.2%.包括单纯t(8;14)(q24;q32)、伴有t(8;14)(q24;q32)的复杂异常、t(8;22)(q24;q11)、t(12;22)(?;?)、t(2;13)(?;?)和+12、复杂核型异常及附加两条标记染色体各1例.FISH检测8例为t(8;14)(q24;q32),其中2例检测结果与CC一致,有6例为CC未检出,检测阳性率高于CC;8例中5例为2A1G102F(间期核内两蓝一绿一桔两黄信号),3例为2A1G101F(间期核内两蓝一绿一桔一黄信号).结论 8q24上c-Myc基因断裂点在散发性BL中有两种不同的位置.间期FISH检测t(8;14)(q24;q32)的敏感性高于常规核型分析,对CC是一个重要补充,应作为BL诊断的常规检查手段.     

伴变异型Ph易位的慢性髓细胞白血病的分子遗传学研究

目的探讨荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）及多重荧光原位杂交（multiplex FISH．M-FISH）技术在检测伴变异型Ph易位（variant philadelphia translocation，vPh）的慢性髓细胞自血病（chronic myeloid leukemia，CML）中遗传学改变的意义。方法对10例常规R显带显示伴vPh的CML以双色双融合FISH技术检测其染色体标本。对于间期细胞中仅有单个融合信号的标本，观察其中期细胞，以确定是否为衍生9号染色体[der（9）]缺失。同时对这10例CML进行M—FISH技术检测。结果FISH技术在10例伴vPh的CML中检测到5例存在der（9）缺失。M—FISH检测到除22号染色体外，1、3、5、6、8、10、11和17号染色体也参与vPh，发现了常规细胞遗传学未发现的异常，包括2种未见报道的异常。结论对伴vPh的CML联合使用常规细胞遗传学、FISH、M—FISH技术可使遗传学诊断更加完善。     

应用组合荧光原位杂交技术检测慢性淋巴细胞白血病的基因组异常

目的 探讨应用组合荧光原位杂交(panel fluorescence in situ hybridization，panel FISH)技术对慢性淋巴细胞性白血病(chronic lymphocytic leukaemia，CLL)基因组异常检测的价值。方法 分别应用3号、12号、18号的着丝粒探针和序列探针D13S272(13q14．3)、ATM(11q23)等5种荧光素标记的DNA探针，对22例CLL患者进行FISH检测，并和常规细胞遗传学检测结果进行比较，以确定何种方法对检测CLL的染色体和基因组异常更为敏感可靠。结果 22例CLL患者中，常规细胞遗传学检测出8例(36．3％)有染色体异常，包括单纯 123例； 3、 12l例； 3、 12、 18 1例；t(5；15)1例；13q-1例；3q-、18p 1例；4q 和13q-1例；组合FISH检测出15例(68，1％)有染色体异常，包括 34例、 126例、 18l例、11q-6例、13q-8例。结论组合。FISH技术是检测CLL患者染色体基因组异常的有效手段，与常规细胞遗传学方法相结合则可明显提高CLL染色体异常的检出率。