复合神经营养因子应用于大鼠视神经损伤的研究

目的观察玻璃体腔注射复合神经营养因子(睫状神经营养因子,CNTF和脑源性神经营养因子,BDNF)对大鼠视神经损伤后视网膜神经节细胞存活的作用。方法60只健康成年大鼠、体重200～225g、雌性,随机分为对照组、CNTF治疗组、BDNF治疗组及复合神经营养因子(CNTF+BDNF)治疗组。各组又分为7、14、21d3个时间组,每组5只大鼠,每只动物进行单眼实验,另外一眼为正常对照。荧光金逆行标记视网膜神经节细胞(RGCs),7d后做成视神经损伤模型。4组术后分别向玻璃体腔内注射生理盐水、CNTF、BDNF、CNTF+BDNF。按视神经损伤后不同时间点,分别将动物灌注固定。做全视网膜铺片,荧光显微镜下观察,在每张视网膜距视乳头1mm部位随机取4个视野拍片,对每个视野中标记的RGCs进行计数,求平均值,计算视神经损伤后玻璃体腔内注射不同药物、不同时间所剩余的RGCs数。结果视神经夹伤后各组RGCs随时间推移逐渐减少。与对照组相比,CNTF治疗组、BDNF治疗组及CNTF+BDNF治疗组7、14、21d各组RGCs数均明显多于对照组(P<0.01),且CNTF+BDNF治疗组RGCs数亦明显多于单独应用一种神经营养因子的CNTF治疗组、BDNF治疗组(P<0.01)。结论在对大鼠视神经损伤的治疗中,应用CNTF+BDNF明显优于单独应用一种神经营养因子(CNTF或BDNF)。     

睫状神经营养因子对大鼠急性高眼压视神经损害的保护作用

目的观察睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)对大鼠急性高眼压视神经损害的保护作用。方法用平衡盐液前房加压灌注制成大鼠急性高眼压模型,造模前2 d玻璃体内注入CNTF,利用计算机图像分析技术,造模后不同时期观察视神经轴突面积占视神经横截面积百分比。结果CNTF治疗组较对照组视神经轴突面积占视神经横截面积百分比明显增加(P<0.01)。结论CNTF能对急性高眼压视神经损伤提供保护作用。     

大鼠视神经损伤及修复过程中睫状神经营养因子受体mRNA的表达

目的探讨大鼠视神经损伤及修复过程中睫状神经营养因子受体(CNTFR)mRNA在视神经上的表达及意义。方法135只健康雄性斯普拉-道来(SD)大鼠,随机取45只作为正常对照组;另两组为视神经单纯切断组和视神经-坐骨神经吻合组,每组各45只大鼠。建立大鼠视神经单纯切断和视神经-坐骨神经吻合模型,分别于建立模型后3、7、14 d取视神经组织,应用半定量逆转录-聚合酶链反应方法观察正常大鼠及各模型大鼠视神经上CNTFR mRNA的表达情况。结果正常大鼠视神经内CNTFR mRNA有少量表达。视神经单纯切断组,与正常对照组比较,其表达增加,有显著性差异。视神经剪断后桥接坐骨神经组,表达增加更明显,有显著性差异。结论视神经损伤后,可通过提高内源性CNTFR来应答轴索损伤,促进轴突再生,为外源性睫状神经营养因子(CNTF)的应用提供理论依据。     

CBD-BDNF诱导面神经损伤后面神经再生及功能恢复的作用

目的 探讨带有多肽胶原连接结构域(CBD)的脑源性神经生长因子(BDNF)(CBD-BDNF)诱导面神经再生及功能恢复的效应.方法 140只SD大鼠随机分为三组:对照组20只作为空白对照;A组40只,建立面神经损伤模型;B组40只,建模后在面神经挫伤处鞘内注入CBD-BDNF;C组建模后在面神经挫伤处鞘内注入BDNF治疗.分别于术后1、3d、1、2和4周观察面神经功能恢复、电生理检测、电镜观察神经轴突与髓鞘的变化.结果 B、C组治疗后神经功能恢复、电生理检测、神经轴突及髓鞘变化效果明显优于A组(P＜0.05),B组效果明显优于C组(P＜0.05).结论 神经营养因子能明显提高面神经功能的恢复;CBD-BDNF具有更好的神经修复及再生作用.     

CNTF与NGF对视神经损伤模型大鼠视网膜神经节细胞的影响

目的:本实验通过给视神经不全损伤模型大鼠玻璃体腔内注射外源性神经生长因子(NGF)及外源性睫状神经营养因子(CNTF),观察两种神经营养因子对视网膜神经节细胞是否具有一定的保护作用.方法:将30只Wistar大鼠随机分组,利用无创血管钳造成大鼠左眼视神经的不全损伤,右眼不予任何处理,作为正常对照组.并在造模成功后分别给予大鼠左眼玻璃体腔内注射NGF及CNTF各2μL,作为两组实验治疗组,实验对照组在相同时间给予大鼠左眼玻璃体腔内注射平衡盐溶液2μL.在大鼠视神经不全损伤后5d、10d时分别做RGC计数、光镜组织学观察及生长相关蛋白-43(growth associated pro-tein-43,GAP-43)免疫组织化学检测.结果:光镜下,伤后5d-10d光镜下观察实验组视网膜及视网膜神经节细胞均有不同程度水肿及肿胀,RGC数量明显比正常对照组下降,有明显的统计学差异(P＜0.01),两组实验治疗组视网膜神经节细胞数目明显高于实验对照组,具有明显统计学差异(P＜0.05).免疫组织化学染色结果,伤后5d实验组GCL层GAP-43表达均呈阳性,实验治疗组GAP-43的表达量明显高于实验对照组,具有明显统计学差异(P＜0.05).10d后实验治疗组GAP-43表达量达高峰,实验对照组GAP-43表达量明显减少,具有明显统计学差异(P＜0.05).结论:在视神经受损后NGF与CNTF能提高视网膜神经节细胞的存活率,延长GAP-43的表达时间并增加其表达量,对视网膜神经节细胞具有一定的保护作用.     

坐骨神经横断后远期体外培养的施万细胞形态及其分泌BDNF和NT3功能的变化

目的观察坐骨神经横断后体外培养的远端施万细胞(SCs)形态及其分泌脑源性神经营养因子(BDNF)和神经营养因子3(NT3)功能的变化。方法依据坐骨神经横断时间,16只SD大鼠分为横断后1个月组(A1组,3只)、2个月组(A2组,5只)和3个月组(A3组,6只);C组(2只)为正常对照组。取各组横断坐骨神经远端进行SCs培养。免疫荧光染色观察细胞形态;ELISA检测SCs分泌BDNF、NT3水平。结果坐骨神经横断后SCs形态均发生改变,以A1组最为明显。与C组比较,A1组SCs分泌的BDNF增多(P<0.05);A2、A3组BDNF和NT3均较A1、C组明显减少(P<0.05);但A2组与A3组间各指标无统计学差异(P>0.05)。结论坐骨神经横断损伤1个月后,其远端SCs形态发生改变;2个月后BDNF和NT3分泌量下降。     

神经生长因子和脑源性神经营养因子对神经干细胞迁移的影响

目的:探讨神经生长因子(nervegrowth factor,NGF)与脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)体外实验对神经干细胞迁移的影响.方法:体外应用半固体培养法连续14d观察不同浓度的NGF、BDNF及NGF +BDNF组合诱导神经干细胞迁移的情况.结果:体外条件下不同浓度的神经营养因子的组间和组内比较显示,100μg/L BDNF诱导神经干细胞迁移作用最明显.BDNF+NGF联合组在诱导神经干细胞迁移方面未见协同效应.结论:NGF、BDNF二者皆有诱导神经干细胞迁移的作用,100μ g/L BDNF组诱导迁移作用最明显.     

脊髓脑源性神经营养因子表达水平评估大鼠坐骨神经缺损修复程度

目的研究应用脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)表达程度评价大鼠坐骨神经缺损修复情况。方法取大鼠30只,随机分成正常组、自体神经组和硅胶管组,每组10只。自体神经组将剪断的10 mm神经缝合于原处,硅胶管组用10 mm医用硅胶管桥接神经缺损,正常组不手术。饲养4个月,于脊髓腰膨大处取材,切片,免疫荧光染色,荧光显微镜下观察。结果各组脊髓前角内均有BDNF表达,表现为点状红色荧光,均匀弥漫分布,胶质细胞内及周围均有分布,未染出神经元。光密度正常组>自体神经组>硅胶管组。结论应用脊髓脑源性神经营养因子表达程度可以评价周围神经损伤的修复情况。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后再修复作用的研究

目的探讨间充质干细胞（MSCS）移植对大鼠脊髓损伤后脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响。方法选取SD大鼠4只作骨髓间充质细胞的分离与培养，提取MSCS；制做脊髓横断损伤模型，细胞移植组24只，PBS（磷酸盐缓冲液）液组24只，空白对照组12只。于脊髓损伤后第7天，无菌条件下，细胞移植组以微量注射器缓慢注入含MSCS的培养液5μl，磷酸盐缓冲液组5μl，对照组未加任何干预因素。分别于术后7d、14d、28d麻醉下行心脏灌流固定取T10节段脊髓，细胞移植组与磷酸盐缓冲组取出损伤节段的脊髓，空白对照组于同一节段取出相应脊髓。应用免疫组化法观察MSCS移植后大鼠脊髓损伤区BDNF的表达变化。结果脑源性神经营养因子在正常大鼠脊髓组织中有一定表达，间充质干细胞移植术后7d、14d及28d，细胞移植组脑源性神经营养因子均高水平表达，与缓冲液组相比较差别明显，具有统计学意义。结论间充质干细胞在移植后通过上调脑源性神经营养因子的表达从而促进轴突的再生，可能是治疗脊髓损伤的重要机制。     

BMSCs靶向移植联合EPO法对脊髓损伤组织多因子表达水平的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)靶向移植联合促红细胞素(EPO)的综合治疗方法对脊髓损伤的修复效果.方法 采用Western blot法检测对照组、模型组、BMSCs治疗组、EPO治疗组和BMSCs联合EPO治疗组大鼠的神经生长因子(NGF)、神经营养因子(NT-3)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经胶质细胞源性神经营养因子(GD-NF)和睫状神经营养因子(CNTF)的表达情况.结果 BMSCs联合EPO综合治疗较BMSCs、EPO单纯治疗更能提高NGF、BDNF、GDNF和CNTF的表达水平.结论 BMSCs联合EPO综合治疗有利于脊髓损伤的修复,具有良好的应用前景.     

睫状神经营养因子对周围神经损伤后功能恢复的影响

目的：研究睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对受损周围神经功能恢复的影响。方法：将８０只大鼠左侧坐骨神经切断后行神经外膜吻合,随机分为两组。实验组腹腔内注入基因重组人ＣＮＴＦ,对照组注入等量生理盐水（ＮＳ）。术后行坐骨神经功能指数（ＳＦＩ）测定、电生理检测、轴突图像分析及霍乱毒素－辣根过氧化物酶（ＣＢ－ＨＲＰ）逆行追踪。结果：ＣＮＴＦ组ＳＦＩ恢复率、各项电生理及轴突图像分析指标、ＣＢ－ＨＲＰ标记的脊髓前     

色素上皮衍生因子对大鼠视神经夹伤模型视网膜组织中Caspase-3和Bax表达的影响

目的 探讨色素上皮衍生因子对大鼠视神经夹伤模型视网膜组织中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bax表达的影响.方法 90只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、色素上皮衍生因子(PEDF)组,每组30只.除空白对照组外,均建立视神经夹伤大鼠模型,均取左侧眼球为标本,造模成功后,模型组玻璃体腔内注射平衡盐溶液5μl,PEDF组玻璃体内注射PEDF 5μl(浓度0.2μg/μl),模型组和PEDF组1周、2周再分2次分别向玻璃体腔注射平衡盐溶液5μl和PEDF 5μl.3组大鼠均在第3周时取视网膜组织,电镜下观察视网膜组织超微结构的改变,采用免疫组化染色法观察Caspase-3、Bax表达情况,以及视网膜神经节细胞凋亡情况.结果 透射电镜观察模型组与PEDF组同空白对照组相比,均存在线粒体水肿、胞质浓缩轴突肿胀.同模型组相比,PEDF组胞质浓缩轴突肿胀轻,线粒体结构较完整.TUNEL法细胞凋亡监测:空白对照组染色阴性,模型组和PEDF组均可检测到染色阳性的RGCs,PEDF组TUNEL染色阳性的RGCs表达较模型组显著降低(P<0.05).PEDF组Caspase-3呈弱阳性表达,模型组呈强阳性表达,PEDF组Caspase-3光密度值显著低于模型组(P<0.05);模型组、PEDF组Bax表达高于空白对照组(P<0.05),PEDF组Bax表达又低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Caspase-3、Bax是诱导RGCs细胞凋亡的重要因子,采用PEDF干预治疗能够降低Caspase-3、Bax表达,减轻RGCs损伤.     

大鼠视神经损伤致视网膜病变的病理形态学定量分析

目的研究视神经损伤后视网膜的病理形态学变化。方法利用大鼠视神经钳夹伤模型,运用图像分析和形态计量技术对视神经损伤后视网膜中视神经神经元胞体的节细胞(RGCs)核体积密度进行了定量分析,对视网膜各层厚度进行了测量比较。结果①光镜下观察见正常对照组视网膜各层排列整齐而致密,RGC层胞核清晰,各层界限较为清楚,内核层和外核层细胞排列紧密而整齐。损伤后1d可见节细胞层有出血,损伤7d后,节细胞核明显稀疏,外核层及内核层细胞明显减少,核排列不整齐,内网状层亦变薄,视网膜总厚度变薄;②图像分析显示:视神经损伤后7、14、28d视网膜RGCs核体积密度明显下降(P<0.01),分别下降了27.5%、39.8%、49.0%;伤后28d视网膜节细胞层和内网状层厚度明显减少(P<0.05)结论视神经不全损伤导致了视网膜形态结构的变化,伤后7d节细胞明显丢失,28d视网膜出现了萎缩厚度变薄。     

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征老年患者神经营养因子水平与认知功能的相关性

目的 探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者血清神经营养因子水平的变化及其与认知功能间的相关性。方法 按顺序纳入该院2013年5月至2014年9月收治的患者77例,参照呼吸暂停低通气指数(AHI)标准分为轻度OSAHS组25例、中度OSAHS组25例和重度OSAHS组27例;同时选择25例体检者作为健康对照组;分别进行多导睡眠图(PSG)监测;采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)和简易智能状态量表(MMSE)对各组的认知功能进行评价;并检测血清神经生长因子(NGF),脑源性神经营养因子(BDNF),胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和睫状神经营养因子(CNTF)水平。分析以上参数间的相关性。结果与对照组比较,轻、中和重度OSAHS组患者的AHI、氧减指数(ODI)、呼吸相关微觉醒指数(RI)和脉氧饱和度低于90％的时间占总睡眠时间的百分比(TS90％)均明显升高(P＜0.01),且重度组较轻和中度组升高更明显(P＜0.01);而重度组患者的最低脉氧饱和度(LSaO₂)和平均脉氧饱和度(MSaO₂)较对照组明显降低(P＜0.01);与对照组比较,重度OSAHS组患者的MoCA、MMSE评分显著降低(P＜0.01);与轻、中度OSAHS组相比,重度OSAHS组MoCA评分显著降低(P＜0.01)。与对照组比较,轻、中和重度OSAHS组患者血清神经营养因子水平均减少;而重度OSAHS组患者血清营养因子较对照组、轻和中度OSAHS组患者明显减少,比较差异有统计学意义(P＜0.01)。血清营养因子水平与睡眠呼吸记录指标AHI、ODI、RI 和TS90％呈负相关,而与最低SaO₂和平均SaO₂呈正相关。血清营养因子水平与认知功能指标MoCA 和MMSE均呈正相关。结论 血清神经营养因子水平是反映OSAHS患者的重要指标,且与其认知功能障碍密切相关。     

高同型半胱氨酸血症对慢性应激模型大鼠行为学及神经生化的影响

目的研究高同型半胱氨酸血症(Hhcy)对慢性不可预见应激模型大鼠行为学、神经递质及神经营养因子水平的影响。方法以高蛋氨酸饮食喂养大鼠制作Hhcy模型(Hhcy组,12只);另选24只大鼠,均分为普食组和对照组,均给予普通饮食喂养;Hhcy组与普食组给予慢性不可预见性刺激。比较三组的学习记忆能力、海马组织5-羟色胺(5-HT)和5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)含量以及脑脊液中神经营养因子(BDNF)水平。结果水迷宫实验中,Hhcy组目的象限停留时间比普食组短(P<0.05);Hhcy组海马5-HIAA含量和脑脊液中BDNF含量均较普食组低(P<0.05)。结论Hhcy可致慢性应激模型大鼠学习记忆能力的下降,加重神经递质及生长因子水平的异常,可能为抑郁症的危险因素之一。     

地佐环平对兔视神经损伤后视网膜神经节细胞调节作用的研究

目的探讨地佐环平（Dizoclipine,MK-801）对兔视神经损伤后视网膜神经节细胞的保护作用。方法30只健康雄性日本大耳白家兔随机分为5组,双眼制作视神经损伤模型。5组动物左眼为治疗组,于玻璃体腔内注入MK-801溶液;右眼为对照组,同法注入等量0．9％氯化钠溶液。于1、3、7、14、28d各处死1组家兔,摘取双眼进行视网膜末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）,光镜下记数对应部位存活视网膜神经节细胞数及TUNEL染色阳性细胞数。结果治疗组各时段治疗组存活视网膜神经节细胞数与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;除视神经损伤1d外,余时间点治疗组TUNEL阳性细胞数与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论MK-801对兔视神经损伤后视网膜神经节细胞具有一定保护作用。     

注射用血栓通（冻干）对糖尿病大鼠海马损伤保护作用的研究

目的 研究注射用血栓通（冻干）（XST）减轻糖尿病大鼠海马神经损伤的作用。方法 ip链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病大鼠模型,随机分为模型组和XST（50 mg/kg）组,每组10只,另随机取10只SD大鼠为对照组。ip给药,每天给药1次,于屏障环境中连续给药60 d,对照组和模型组大鼠ip等量生理盐水。常规HE染色观察大鼠海马CA1区细胞的形态;采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术对海马Bax、Bcl-2、Bcl-xl、脑源性神经营养因子（BDNF）、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、神经突触素（Syn）mRNA水平进行检测;采用Western blotting法对3种紧密连接蛋白——海马闭锁小带蛋白1（ZO-1）、咬合蛋白（Occludin）、封闭蛋白5（Claudin-5）和BDNF蛋白表达水平进行检测。结果 与模型组比较,XST减轻糖尿病引起的海马神经细胞形态改变,显著增加细胞数目（P<0.05） ;显著升高抑凋亡基因Bcl-2、Bcl-xlmRNA的表达,降低促凋亡基因Bax mRNA的表达（P<0.05） ;XST组3种紧密连接蛋白的表达量均不同程度的升高,其中Occludin、Claudin-5差异有统计学意义（P<0.05、0.01）;XST组GDNF、BDNF mRNA表达、BDNF蛋白表达均显著升高（P<0.05）。结论 XST可以减轻糖尿病大鼠海马神经损伤,其机制可能与提高紧密连接蛋白及神经营养因子表达有关。