T-bet、GATA-3在慢性特发性血小板减少性紫癜患者外周血中的表达及意义

目的进一步探讨慢性特发性血小板减少性紫癜（CITP）的发病机制。方法选择25例CITP患者（CITP组）及25例健康体检者（正常对照组）,采用ELISA法检测外周血Th细胞因子IFN-γ、IL-10表达;采用RT—PCR检测外周血淋巴细胞中转录因子T-bet、GATA-3mRNA表达。结果与正常对照组相比,CITP组IFN—γ表达显著升高、IL-10表达显著降低（P〈0．01）,T—betmRNA表达明显升高、GATA-3mRNA表达明显下降（P〈0．05）。结论T-bet、GATA-3表达异常在CITP发生、发展过程中发挥重要作用,可能机制为增强TM细胞功能、抑制Th2细胞功能。     

实时定量PCR检测TRF1、TRF2和hRAP1基因在急性髓细胞性白血病中mRNA表达

目的：建立一种实时荧光RT—PCR方法,定量检测急性髓细胞性白血病（AML）患者外周血白细胞细胞TRF1、TRF2和hRAP1mRNA的表达水平及相互关系。方法：选取48例初治AML患者和21例健康志愿者,采用实时荧光RT—PCR与Lightcyeler荧光PCR仪定量检测TRFI、TRF2和hRAP1mRNA的表达水平;采用2^—△△Ct法处理实时荧光定量RT—PCR数据。结果：AML首治患者TRF1、TRF2和hRAP1mRNA表达水平较对照组健康志愿者分别下降了2．9倍,2．2倍和16．6倍,且差异有统计学意义;AML患者组TRF1和TRF2mR—NA的表达改变具有一定的相关性（r=0．57,P〈0．01）。结论：成功利用患者外周血检测出端粒结合蛋白TRF1,TRF2在白血病细胞中mRNA的表达水平下降,并首次检测发现hRAP1在AML患者细胞中存在表达下降,间接说明了hRAP1的表达下降也是白血病的发病原因之一。     

扩张型心肌病中嗜铬粒蛋白A的表达及其与心肌纤维化的关系

目的 观察嗜铬粒蛋白A(chromogranin A,CGA)在扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)患者中的表达、心肌纤维化程度及二者间的关系,初步探讨CGA在心肌纤维化进程中的作用.方法 取DCM心脏移植患者的心肌组织标本作为研究对象,排除心脏疾病的脑外伤尸检心肌组织标本作为对照.利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测心肌中CGA及Ⅰ型胶原纤维(COL Ⅰ)、Ⅲ型胶原纤维(COL Ⅲ)、ADAMTS-1的mRNA表达,并分析其基因学相关性.免疫组织化学技术鉴定心肌中CGA的分布位置及其表达强弱变化.运用苦味酸天狼猩红特异染色和偏振光显微镜显像,并辅以图像分析软件计算心肌胶原容积积分(CVF).并对CGA与心肌纤维化的相关性进行形态学上的比较.结果 real-time PCR证实心肌中CGA-mRNA和COL Ⅰ-mRNA、COLⅢ-mRNA、ADAMTS-1-mRNA三者均具有相关性,相关系数分别为0.729、0.95、0.665.免疫组织化学结果表明,DCM患者心肌中CGA表达增加(P<0.05).DCM患者心肌CVF高于正常心肌(P<0.001).形态学上,CGA呈现阳性的部位及其分布密集区域的附近,心肌纤维化明显.结论 DCM心肌中CGA的表达与心肌纤维化具有相关性,推测DCM患者心肌组织中CGA的表达水平影响着心肌纤维化的发展.     

STAT3及相关生长调控基因在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨转录信号传导子与激活子3（STAT3）及相关生长调控基因在胃癌发生发展中的作用及意义。方法应用RT—PCR检测STAT3基因及相关基因c—myc，p53，生存素（survivin），血管内皮生长因子（VEGF）的mRNA表达水平，应用Western印迹法及免疫组化法检测STAT3基因的蛋白水平及定位表达。结果胃癌组织及癌旁组织中STAT3 mRNA的表达均明显高于正常胃组织（P〈0．01），胃癌及癌旁组织中c—myc，surovivin，VEGF mRNA的表达上调（P〈0．01），p53 mRNA的表达下调（P〈0．01），胃癌组织及癌旁组织中STAT3蛋白水平的表达均高于正常胃组织（P〈0．01）。结论STAT3基因的持续激活在胃癌的发生发展中起重要作用，可作为早期诊断的指标及治疗的靶点。     

系统性红斑狼疮患者外周血中IFN-α、IL一10、TGF—β的表达变化及意义

目的观察系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血中α干扰素（IFN-α）、白介素10（IL—10）、转化生长因子B（TGF-B）的表达变化,并探讨其意义。方法采用双抗体夹心ELISA法检测98例SLE患者（SLE组）及55例健康人（对照组）血清中的IFN—α、IL-10、TGF—β,采用RT—PCR法检测外周血单个核细胞（PBMCs）中的IFN—α、IL-10、TGF-β mRNA。结果SLE组血清中的IFN-α、IL-10及PBMCs中的IFN—α、IL-10 mRNA均高于对照组（P〈0．05）,且活动期高于稳定期（P〈0．05）;SLE组血清中的TCF—β及PBMCs中的TGF-β mRNA低于对照组（P〈0．05）,且活动期低于稳定期（P〈0．05）;SLE组血清及PBMCs中的IFN-α、IL-10及其mRNA呈正相关（r=0．80、0．75,P均〈0．05）,IL-10、TGF-β及其mRNA呈负相关（r=-0．45、-0．25,P均〈0．05）,IFN-α、TCF-β及其mRNA无相关性。SLE组血清及PBMCs中IFN—α、IL-10、TGF-β与其相应的mRNA呈正相关（r=0．90、0．82、0．91,P均〈0．05）。结论SLE患者外周血中IFN-α、IL-10高表达,TGF—β低表达;三者相互作用参与SLE的发病。     

CEA mRNA在乳腺癌患者外周血中的表达及临床意义

目的以套式RT—PCR方法检测癌胚抗原（CEA）mRNA在乳腺癌患者外周血中的表达,并探讨其在乳腺癌诊断与治疗中的意义。方法收集乳腺癌患者52例（乳腺癌组）、乳腺增生性病变患者40例（增生组）、健康查体者20例（对照组）,采集外周血样本。分别用套式RT—PCR法检测其外周血中CEAmRNA的表达。结果乳腺癌组外周血CEAmRNA阳性率为40．4％,增生组及对照组分别为5．0%和0,两两比较均有显著差异（P均〈0．01）;乳腺癌组TNMⅢ期、Ⅳ期患者CEAmRNA阳性表达率明显高于Ⅰ期、Ⅱ期患者,外周血CEAmRNA阳性表达与淋巴结转移密切相关。结论外周血CEAmRNA表达可作为乳腺癌转移的一个辅助监测指标。     

福辛普利对糖尿病大鼠心肌血栓素蛋白1mRNA和蛋白质表达的影响

目的研究福辛普利对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠心肌组织血栓素蛋白1（TSP-1）表达的影响。方法30只13周龄健康雄性SD大鼠,腹腔注射1％链脲佐菌素（STZ）,随机区组法分为糖尿病组（无药物干预,其中8周末组10只,12周末组10只）和福辛普利组（蒙诺片,10mg·kg^-1·d^-1,10只）,另选8只健康雄性SD大鼠（等量蒸馏水腹腔注射）作为正常对照组。糖尿病组于8周末处理大鼠10只,余10只与福辛普利组及对照组于12周末时处理,免疫组化检测心肌间质Ⅰ、Ⅲ型胶原与转化生长因子-β1（TGF-β1）蛋白表达水平,心肌组织TSP-1蛋白表达和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平;RT．PCR检测心肌组织TSP-1mRNA表达水平。多个样本均数的比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验。结果与对照组比较,心肌细胞TSP-1阳性表达率增加（0．94±0．03VS0．15±0．02,P〈0．05）;AngⅡ水平增加（11．33±0．97VS6．11±0．48,P〈0．05）。心肌间微血管壁上TSP-1阳性表达光密度值与对照组比较无统计学差异。心肌细胞TSP-1表达阳性率低于12周末糖尿病组（0．30±0．02VS0．95±0．01,P〈0．05）。RT—PCR结果显示,心肌TSP-1mRNA水平在糖尿病组增加（2．01±0．41VS0．95±0．01,P〈0．05）,而在福辛普利组减轻（1．02±0．01VS2．25±0．21,P〈0．05）。结论糖尿病性大鼠心肌间质纤维化严重可能与心肌组织水平高表达AngII及过表达TSP-1有关;福辛普利通过降低AngⅡ及TSP-1水平,下调TGF—β1活性,抑制心肌纤维化进程。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-4在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-4（IGFBP-4）在食管鳞癌中的表达及其临床意义。方法应用RT—PCR及免疫组化方法检测23例食管鳞癌及正常组织IGFBP-4、基质金属蛋白酶-7（MMP-7）的表达情况。结果食管鳞癌IGFBP-4 mRNA表达高于正常组织（P〈0．01），但在肿瘤侵及外膜以上及有淋巴结转移者表达降低（P〈0．01），在不同年龄、性别及肿瘤大小间表达差异无统计学意义（P〉0．05）。癌组织IGFBP-4蛋白表达阳性率为60．9％，低于正常组织（91．3％）（P〈0．05）。MMP-7 mRNA在食管鳞癌组织的表达为100．0％，正常组织未见表达（P〈0．01），肿瘤侵及外膜以上及有淋巴结转移组表达上调更明显（P〈0．05）。IGFBP-4与MMP-7 mRNA表达呈负相关（P〈0．01）。结论IGFBP-4表达下调与食管鳞癌的浸润及转移有密切关系，并与MMP-7高表达负相关，IGFBP-4 mRNA检测对判断食管癌进展及预后有重要意义。     

糖尿病大鼠PAI-1 mRNA的表达与心肌微血管改变的相关性研究

目的通过研究老龄和青年糖尿病（DM）大鼠心肌微血管数目与心肌组织PAI-1mRNA表达的改变,探讨高血糖和增龄对心肌微血管数目及心肌组织PAI—1mRNA表达的影响。方法老龄和青年SD大鼠分别随机分为DM组和对照组,STZ液腹腔注射建立DM大鼠模型,喂养8周后,处死大鼠,取部分左心室组织进行免疫组化;剩余部分留做心肌组织PAI-1mRNA检测。采用EnVision免疫组化法,CD34抗体检测心肌微血管内皮细胞特异性抗原CD34。利用医学图像分析软件计数心肌微血管数目。实时荧光定量PCR法检测各组心肌组织PAI—1mRNA的表达。结果各年龄段大鼠,DM组心肌微血管数目显著低于同龄段对照组（P〈0．01）,DM组心肌组织PAI-1mRNA的表达与同龄对照组相比则显著增多（P〈0．01）;老龄DM组心肌微血管数目明显低于青年DM组及青年对照组（P〈0．01）,老龄对照组心肌微血管数目与青年对照组无明显统计学差异（P〉0．05）,而老龄DM组心肌组织PAI-1mRNA表达显著高于青年DM组及青年对照组（P〈0．01）;并且老龄对照组心肌PAI-1mRNA的表达也高于青年对照组（P〈0．05）。结论增龄对DM大鼠心肌微血管数目有影响,而对非DM大鼠无明显影响。增龄使大鼠心肌组织PAI-1mRNA表达增强。各年龄段DM大鼠心肌微血管数目减少,心肌组织PAI-1mRNA表达增强。     

血管紧张素Ⅱ与基质金属蛋白酶及其抑制剂在糖尿病大鼠心肌中的表达及影响

目的研究糖尿病（DM）大鼠心肌间质重构与血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、转化生长因子（TGF）-β1、基质金属蛋白酶（MMP）-1及其抑制剂（TIMP-1）的关系。方法20只sD大鼠分为正常对照组（10只），DM组（10只），用STZ法建立DM模型，10W时麻醉处死大鼠，免疫组化法检测Ⅰ和Ⅲ型胶原的表达，TGF—β1、MMP-1和TIMP-1蛋白的表达，RT—PCR法检测TIMP-1和MMP-1mRNA的表达。结果DM组心脏指数和左心室指数显著高于正常组（P〈0．05），I、Ⅲ型胶原的表达也增加，存在着心肌间质重构，同时AngⅡ，TGF—β1，TIMP-1蛋白及TIMP-1mRNA表达增高，MMP-1蛋白及mRNA表达减少（P〈0．05）。结论DM大鼠可能因肾素-血管紧张素系统（RAS）的激活，AngⅡ表达增加，直接或间接的影响TGF—β1及MMPs的表达，导致心肌间质重构。     

Ⅰ型AIH患者GRα、β mRNA的表达与糖皮质激素疗效的相关性

目的探讨Ⅰ型自身免疫性肝炎（AIH）患者外周血单个核细胞（PBMC）内糖皮质激素受体（GR）两种亚型GRα、GRβmRNA的表达与糖皮质激素（GC）治疗效应之间的关系。方法应用逆转录—聚合酶链反应法检测不同激素效应（激素敏感、激素亚敏感、激素抵抗）的Ⅰ型AIH患者及正常对照者的GRα、GRβmRNA的表达水平。结果Ⅰ型AIH患者及正常对照者均可检测到GRαmRNA,与正常对照相比,激素敏感、激素亚敏感、激素抵抗者的GRαmRNA的表达无统计学差异（P〉0.05）;GRβmRNA在激素抵抗组中高于其他各组（P〈0.01）。结论Ⅰ型AIH患者GRβmRNA的表达增多可能与GC治疗抵抗有关。     

共聚焦显微镜检测扩张型心肌病患者心肌连接蛋白43表达的研究

目的探讨激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）检测晚期扩张型心肌病（DCM）患者经心脏移植手术切除的心肌连接蛋白43（Cx43）表达变化及其意义。方法应用冰冻切片、免疫荧光和LSCM等技术,对3例DCM和1例室间隔缺损（对照组A）患者经心脏移植手术切除的心脏及3例颅脑损伤死者（对照组B）心肌Cx43蛋白表达情况进行定位和定量研究。结果心肌Cx43在镜下呈斑点状翠绿色荧光,DCM患者阳性着色斑点大小不一、强度不等、分布不均;对照组A阳性着色也呈大小不一的斑点状,但较DCM患者的斑点小,无明显强弱变化;对照组B阳性着色斑点分布较规则,大小及强弱较一致。定量检测发现DCM组与对照组B相比,差异有统计学意义（P〈0．01）;心脏移植患者（DCM组和对照组A）与颅脑损伤死者（对照组B）相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;而对照组A与B相比,差异无统计学意义（P〉0．05）;各组病例左、右心室的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论晚期DCM患者心肌Cx43蛋白表达的着色斑点大小不一、强度不等、分布不均,定量高于对照组;这些数量、强弱和分布的变化,很可能是DCM患者发生心律失常和心功能衰竭的病理基础。LSCM技术与免疫荧光技术相结合,能进行定位定量研究,较普通免疫组化更准确可靠。     

扩张型心肌病患者外周血CD4＋CD25＋T细胞变化及临床意义

目的探讨扩张型心肌病（DCM）患者外周血CD4＋CD2＋5T细胞变化及临床意义。方法采用流式细胞分析法检测30例DCM患者（DCM组）及20例健康者（对照组）的外周血CD4＋CD2＋5T细胞。结果外周血CD4＋CD2＋5T细胞占CD4＋T细胞的比例DCM组为（8.53±1.64）%,对照组为（11.4±2.17）%,两组比较有统计学差异（P〈0.01）;且DCM患者心功能越差,CD4＋CD2＋5T细胞占CD4＋T细胞的比例越低。结论DCM患者CD4＋CD2＋5T细胞比例减少,可能打破自身免疫耐受,发生针对心肌抗原的免疫反应,参与DCM发病。     

VDUP1基因表达水平与不稳定型心绞痛有关联

目的探讨维生素D3上调蛋白1（VDUPl）表达水平与不稳定型心绞痛的关系。方法：分别抽取120例不稳定型心绞痛患者和130例正常对照个体的外周静脉血,采用半定量逆转录多聚酶链反应（RT．PCR）方法,检测不稳定型心绞痛组和对照组外周血白细胞中VDUPl基因mRNA的表达水平;使用蛋白免疫印迹（Western blot）方法检测不稳定型心绞痛组和对照组VDUPl蛋白水平。结果：实验结果显示不稳定型心绞痛组VDUPl基因mRNA的水平显著低于对照组（P〈O．05）;Western blot结果显示不稳定型心绞痛组VDUPl蛋白水平显著低于对照组（P〈0．05）。结论：患者外周血白细胞中VDUPl基因的表达水平与不稳定型心绞痛有关联。     

CK19与CEA在非小细胞肺癌外周血微转移中的对比研究

目的检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血细胞角蛋白（CK19）及癌胚抗原（CEA）的表达,探讨对检测NSCLC微转移的可行性。方法应用RT—PCR技术检测48例NSCLC患者、15例肺良性疾病（BLD）患者和10例健康人外周血CK19及CEA mRNA的表达。结果NSCLC患者外周血中CK19及CEA mRNA的阳性表达率分别为68．75％、58．33％,在BLD组中表达率分别为13．33％、6．67％,而对照组外周血中均无表达,NSCLC组CK19及CEA表达均高于BLD组及对照组（P〈0．05）。外周血CK19及CEA的表达与临床分期及淋巴结转移密切相关,与病理类型及分化程度无关。结论CK19与CEA均可作为检测NSCLC患者外周血微转移较为合适的分子标志物,联合检测有助于提高检测的阳性率。     

糖尿病患者慢性并发症与外周血单核细胞血红素加氧酶1表达的相关性研究

目的探讨初诊2型糖尿病患者慢性并发症与外周血单核细胞血红素加氧酶1（HO-1）表达的相关性。方法初诊2型糖尿病36例分为并发症组和无并发症组,正常对照组（NC）10名,比较各组空腹血糖（FPG）、血清丙二醛（MDA）水平、外周血单核细胞活性氧（ROS）产量及HO-1表达水平,并分析其相关性。结果糖尿病各组的FPG、MDA、ROS和HO-1水平均显著高于NC组（P〈0．01）,有并发症组的上述各指标均显著高于无并发症组（P〈0．05）。HO-1 mRNA分别与HO-1蛋白、MDA、FPG水平显著正相关,HO-1蛋白水平与ROS、MDA显著正相关,MDA与ROS显著正相关（P〈0．05）。结论初诊2型糖尿病合并慢性并发症患者的高血糖引起氧化应激并诱导HO-1适应性和代偿性增高,将来有望通过适当诱导HO-1高表达以拮抗糖尿病氧化应激。     

糖尿病周围神经病变患者血清脑源性神经营养因子与高迁移率族蛋白B1水平相关性的研究

目的 探讨糖尿病周围神经病变（DPN）患者血清脑源性神经营养因子（BDNF）与高迁移率族蛋白B1（HMGB1）水平的相关性. 方法 将T2DM患者60例分为T2DM组和DPN组,每组各30例,另选取健康体检者30名作为对照（NC）组.ELISA检测血清BDNF及HMGB1含量,RT-PCR法检测其mRNA在外周血单个核细胞中的相对表达水平,分析DPN患者中BDNF与HMGB1相关性. 结果 DPN组和T2DM组血清BDNF含量及rnRNA表达水平均低于NC组（P＜0.05）,而HMGB1含量及mRNA表达水平高于NC组（P＜0.05）.DPN组血清BDNF含量及mRNA表达水平低于T2DM组,血清HMGB1含量及mRNA表达水平高于T2DM组（P＜0.05）.DPN组血清BDNF与HMGB1水平负相关（r=-0.425,P＜0.05）. 结论 DPN患者血清BDNF与HMGB1相关,二者可能共同参与了DPN的发病.     

EGFR在大鼠1型糖尿病心肌病纤维化作用的实验研究

目的:观察表皮生长因子受体(EGFR)在大鼠糖尿病性心肌病(DCM)纤维化中的作用。方法:将雄性Wistar大鼠25只随机分为正常对照组(n=10)和DCM组(建立的DCM大鼠模型,n=15),比较两组各指标的差异显著性。结果:造模2周后开始,与正常对照组相比,DCM组体重显著降低(P<0.05),空腹血糖水平明显升高(P<0.01);8周时超声心动图显示,与正常对照组相比,DCM组左室收缩末期内径(LVESd)[(3.23±0.19)mm比(3.65±0.26)mm]明显增加,左室舒张末期内径(LVEDd)[(7.07±0.43)mm比(6.21±0.25)mm]明显减小,左室射血分数(LVEF)值[(82.71±2.18)%比(72.5±3.02)%]明显降低(P均<0.05)。HE染色可见心肌细胞增生肥大、排列紊乱;Masson染色可见心肌纤维细胞增生明显,心肌胶原容积分数显著增大;Western blot方法检测EGFR表达水平显著高于正常对照组[光密度值(4.18±0.54)比(1.53±0.12)],P均<0.01。结论:表皮生长因子受体可加速糖尿病性心肌病大鼠心肌纤维化。     

神经内分泌因子在扩张型心肌病心室重构及心力衰竭中的表达

目的：观察神经内分泌因子对扩张型心肌病（DCM）心室重构及心力衰竭的影响。方法：DCM患者120例，按心功能分级分为3组，心功能Ⅱ级组34例，心功能Ⅲ级组45例，心功能Ⅳ级组41例。另选取80例心功能正常者作为对照组。所有患者人院第2天均检测去甲肾上腺素（NE）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、细胞肿瘤坏死因-α（TNT-α）、白介素-6（IL-6）、细胞可溶性凋亡因子（sFas）。结果：DCM心功能Ⅱ～Ⅳ级患者与正常组对照，NE，AngⅡ、TNF-α、IL-6、sFas水平明显升高，且随着心功能恶化逐渐增强（P〈0．01）。DCM组中不同功能级别者与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01〉。结论：DCM患者其NE，AngⅡ、TNF-α、IL-6、sFas常过度表达，通过影响心肌收缩力，引起心肌肥大，诱导心肌凋亡、纤维化，加重心室重构和心力衰竭发生、发展。