大黄不同炮制品指纹特征的识别研究

目的 建立大黄不同炮制品的HPLC指纹图谱,为大黄炮制品的质量评价和炮制机制研究提供依据.方法 采用梯度洗脱HPLC法,建立大黄不同炮制品指纹图谱,运用中药指纹图谱相似度评价方法 与样品聚类分析方法 ,对其指纹特征进行研究.结果 该方法 重复性良好,大黄不同炮制品指纹图谱共有峰特征明显,不同炮制品指纹特征存在差异,其化学成分发生了不同程度的变化.其中生大黄与酒大黄、醋大黄差异较小,与熟大黄、清宁片存在差异,与大黄炭差异明显.结论 建立的大黄不同炮制品的指纹图谱可以识别大黄不同炮制品的归属特征,可有效控制内在质量,探讨炮制机制,并可进一步进行大黄的安全性评价和指导临床合理用药.     

基于UPLC指纹图谱的市售大黄不同饮片品质研究

目的研究建立大黄不同饮片的UPLC指纹图谱测定方法并用于比较市售大黄不同饮片化学品质的差异及稳定性。方法采用超高效液相色谱仪,Waters Acquity BEH C18(50 mm×2.1mm,1.7μm)色谱柱,甲醇和0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长254 nm,流速0.4 ml.min-1,柱温35℃,以指纹图谱软件计算相似度,并进行图谱比较。结果生大黄样品的平均相似度较高(0.817),酒大黄样品间指纹图谱平均相似度较低(0.640),而熟大黄和大黄炭样品各自的指纹图谱平均相似度高于0.9。生大黄、酒大黄的指纹图谱基本一致,熟大黄、大黄炭与生品相比有较大差异。结论所建立的方法可以用于大黄不同饮片的指纹图谱测定,方法稳定性和重现好。市售生大黄、熟大黄、大黄炭饮片的化学品质较为稳定,而酒大黄饮片的差异较大,亟待进一步规范研究。     

大黄饮片炮制前后物质基础变化规律研究

目的:通过对大黄生、熟、炭等3种常用饮片化学成分及生物活性的比较研究,揭示饮片炮制前后物质基础的变化规律。方法:采用有机溶剂提取及多种柱色谱分离技术,对掌叶大黄进行系统的化学成分研究,在此基础上对大黄3种饮片进行HPLC指纹图谱定性和主要化学成分的定量分析,并以空白饮片为载体的组分填充模拟炮制方法,进行大黄饮片炮制前后物质基础变化规律的验证。结果:从掌叶大黄共分离鉴定34个化合物,其中4个为新化合物。2个检测波长HPLC指纹图谱及17个主要化学成分的含量比较结果证实,熟大黄、大黄炭与生大黄相比变化显著,泻下作用代表成分蒽醌苷总量分别降低了55%和95%,相反,蒽醌苷元总量分别增加了75%和46%。另外,熟大黄和大黄炭中没食子酸的含量显著增加,分别为生大黄2.4倍和1.3倍。泻下和解热药理实验结果显示生大黄作用最强,而熟大黄和大黄炭基本无泻下作用。结论:通过大黄饮片炮制前后化学成分变化规律的分析,结合饮片主要药理作用的比较,证实基于传统药性理论的苦寒药性是按照生大黄、熟大黄、大黄炭的顺序逐步减弱,基于现代药效学研究的泻下作用强度也按同样的顺序逐步降低。其变化规律与其缩合鞣质、蒽醌苷、苯丁酮苷类化合物含量的递减,没食子酸、蒽醌苷元类化合物含量的变化紧密相关,基本揭示了其药性变化与化学成分变化的相关性。     

大黄不同饮片大孔树脂分离部位的提取物总量及其HPLC比较研究

目的:通过对大黄不同饮片大孔树脂分离部位的提取物总量及其HPLC比较,确定饮片炮制前后成分变化明显的组分,探索导致大黄药性变化的药效物质基础。方法:以75%乙醇提取大黄各种饮片,提取物经大孔树脂D101分离,分别制备成水、20%乙醇、50%乙醇和95%乙醇部位,以HPLC对各部位进行比较。结果:饮片总提取物重量由高到低为生片、酒片>醋片>熟片>炭片。酒片、醋片及炭片均为50%乙醇洗脱物最多,生片和熟片均为H₂O洗脱物最多,但生片20%和50%乙醇洗脱物的重量基本一致,而熟片则呈依次递减趋势。各饮片4个洗脱部位中均为95%乙醇洗脱部位的洗脱物最少。HPLC比较结果显示,各组分分离良好,各饮片间的20%和50%及95%乙醇洗脱部位色谱峰变化显著。结论:随着炮制条件的加剧,各饮片化学成分的组成及含量发生了较明显的变化,提取物重量及HPLC比较结果提示,20%,50%及95%乙醇洗脱部位化学成分的变化可能是导致大黄不同饮片药性变化的物质基础。     

大黄生、熟饮片质量评价方法研究

目的:探讨建立具有生、熟大黄饮片专属性的质量评价方法。方法:以TLC及HPLC对生、熟大黄饮片进行定性、定量比较分析。结果:石油醚-乙酸乙酯-甲酸(15:5:1)和氯仿-甲醇-甲酸(6:1:0.2)2个展开系统的TLC鉴别和HPLC指纹图谱比较,均可以清晰地反映出2种饮片化学成分组成和含量上的变化。主要化学成分的含量测定显示,除苯丁酮及其苷类成分无明显变化外,其余成分的变化均较显著。结论:可将蒽醌苷及其苷元、二苯乙烯苷及鞣质单体的含量作为大黄生、熟饮片定量分析的指标,其中大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和儿茶素可作为生大黄饮片的特征指标成分。     

丹参酒炙前后HPLC指纹图谱色谱峰归属比较

目的:对丹参酒炙前后HPLC指纹图谱色谱峰进行成分归属比较,探讨丹参酒炙前后化学成分的变化规律。方法:采用HPLC法,以甲醇—0. 1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,比较丹参酒炙前后280 nm波长下指纹图谱变化,以已知对照品为参照,对各色谱峰进行归属比较。结果:在HPLC指纹图谱中,生品检出26个色谱峰,归属12个色谱峰,包括6个酚酸类成分,6个丹参酮类成分。酒炙丹参检出33个色谱峰,归属14个色谱峰,包括5-羟甲基糠醛,8个酚酸类成分,5个丹参酮类成分。结论:丹参酒炙后化学成分的种类及含量发生了量变和质变,具有一定规律性。进一步探寻这些变化规律与药效增强的相关性,有助于研究丹参酒炙增效的药效物质基础和揭示其酒炙增效的炮制原理。     

白芥子炒制前后HPLC指纹图谱的比较分析

目的:研究建立白芥子不同饮片的指纹图谱测定方法,指认主要色谱峰,分析白芥子炒制前后化学成分的变化情况。方法:采用HPLC,Agilent TC-C18(2)柱,乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脱,检测波长254 nm,流速1.0 mL.min-1,柱温35℃,以指纹图谱软件计算相似度,并进行图谱比较和指认。结果:各饮片10批次样品平均相似度大于0.96,确定了白芥子生品、炒制品的HPLC标准指纹图谱,并指认了5个主要色谱峰。结论:白芥子炒制前后的HPLC指纹图谱有明显差异,通过2种提取溶剂的比较分析结合色谱峰指认,为揭示白芥子的炒制原理提供了可靠线索。     

大黄煨制前后HPLC指纹图谱的比较研究

目的建立大黄煨制前后的高效液相(HPLC)指纹图谱,明确化学成分的差异。方法采用HPLC,色谱柱Agilent Eclipse Plus C_(18)(4.6mm×250mm,5μm);甲醇(A)-0.1%磷酸溶液(B)梯度洗脱;检测波长280nm;流速1.0ml·min~(-1);柱温20℃。通过镜像对比、偏最小二乘判别、相似度和聚类等分析方法对生、煨大黄饮片指纹图谱进行研究分析。结果煨制后的大黄HPLC指纹图谱与生品具有差异,在34个共有峰中,1号峰、2号峰、26号峰(芦荟大黄素)、32号峰(大黄酚)、33号峰(大黄素)、34号峰(大黄素甲醚)的峰面积有不同程度的增加,其他峰的峰面积均有不同程度的减少。对指纹图谱进行PLS-DA分析、聚类分析,生、煨大黄样品聚类良好,可分成大黄与煨大黄两大类。证实大黄与煨大黄在化学成分上存在一定差异。结论建立的HPLC指纹图谱具有较好的重现性,能反映大黄煨制前后成分的变化,可用于控制煨大黄饮片的质量。     

附子及大黄附子微波提取物的指纹图谱相关性研究

目的:以色谱指纹图谱为基础,研究复方有效部位与组方药材指纹图谱色谱峰相关性,对附子、大黄附子提取物指纹图谱中主要色谱峰进行归属和定性。方法:以附子、大黄附子HPLC指纹图谱为研究对象,通过比照混合对照品水解样品以及相对保留时间偏差和紫外光谱特征相似度为指标,对提取物指纹图谱各峰进行归属分析。结果:将附子、大黄附子HPLC指纹图谱的9个特征共有峰进行了明确的来源归属,并对大黄附子提取物中非相关峰进行了定性的初步研究。结论:该方法能较好地判别主要色谱峰与药材化学组分间的相关性,帮助确定复方中各指纹峰的归属,可应用于中药复方有效部位化学组成及来源分析。     

决明子炒制前后指纹图谱比较研究

目的:研究建立决明子不同饮片的HPLC指纹图谱鉴别方法,比较生、炒决明子化学成分的差别.方法:采用RP-HPLC,流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,研究生、炒决明子饮片指纹图谱的区别,作相似度分析,并对其主要色谱峰进行指认.结果:生、炒决明子饮片的HPLC指纹图谱有明显差异,并指认了12个主要色谱峰.结论:采用HPLC图谱比较法可作为生、炒决明子饮片的一项质控鉴别指标.     

中药炒焦物质基础及其质量评价研究思考与实践

中药炒焦后原有的有效或指标成分破坏或降低,但药理作用并不降低或有所增强,现有的有关物质基础的研究不能解释炒焦后药物的性味与功效等的变化。同时,对炒焦饮片的质量评价缺乏具有客观、专属性的评价指标,不能反映中药炒焦饮片的特点。因此如何打破炒焦研究的瓶颈,进一步创新、深入地研究中药炒焦物质基础,是业内学者面临的共同问题。笔者结合前期研究发现,提出通过对Maillard反应的研究来阐明炒焦物质基础及原理和建立适合炒焦饮片特点的专属质量评价指标的科学构想,并对此进行了相关研究。     

苦参汤黄酮类成分HPLC指纹图谱及其与组方药味黄芩和苦参的相关性研究

目的：建立苦参汤黄酮类成分的HPLC指纹图谱,研究该指纹图谱与组方药味黄芩和苦参的相关性。方法：采用HPLC方法,在检测波长280 nm 和365 nm下,建立苦参汤黄酮类成分的指纹图谱；通过分析苦参汤不同配伍的HPLC图谱,探讨全方指纹图谱共有指纹峰与处方药味的相关性；采用添加对照品分析方法对共有指纹峰进行化学成分确认。结果：在检测波长280 nm下,苦参汤黄酮类成分的HPLC指纹图谱有19个共有指纹峰,除2个峰来源于苦参外,其余峰均来源于黄芩,其中8个峰分别为黄芩苷/三叶豆紫檀苷、汉黄芩苷、木犀草素、黄芩素、千层纸素A、 5,8-二羟基-6,7-二甲氧基黄酮、汉黄芩素和芒柄花素/白杨素。在检测波长365 nm下,有22个共有指纹峰,13个峰来源于黄芩,6个峰来源于苦参,其中11个峰分别为黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、千层纸素A、 5,8-二羟基-6,7-二甲氧基黄酮、汉黄芩素、白杨素/7-甲氧基黄酮、2′,4-二羟基-4′,6′-二甲氧基查耳酮、4,4′-二甲氧基查耳酮、黄腐醇和苦参啶。结论：在检测波长280 nm 和365 nm下获得的苦参汤黄酮类成分的HPLC指纹图谱共有指纹峰来源于组成药味黄芩和苦参,其中以365 nm为检测波长,建立苦参汤黄酮类成分的HPLC指纹图谱,更具代表性和全面性。     

中药复方“松友饮”及其组方药材提取物高效液相指纹图谱研究

目的：分析中药复方＂松友饮＂及组方药材提取物指纹图谱用于质量控制。方法：采用高效液相色谱法（high-performance liquid chromatography,HPLC）研究中药指纹图谱。包括低压四元泵,自动进样器和二极管阵列检测器（DAD）,Agilent Zorbax RX-C8色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,柱温25℃,流动相为水-乙腈,进行梯度洗脱（流速,0.5 mL/min;洗脱时间,60 min;检测波长,280nm）。结果：成功构建＂松友饮＂及组方提取物高效液相指纹图谱,色谱保留时间稳定,各主要色谱峰偏移小于0.1 min。通过比对发现＂松友饮＂HPLC色谱峰来自组方药材成分。重复HPLC色谱相似度（90%,精密度、稳定性、重复性实验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积RSD（3%。结论：HPLC方法可靠、可行,指纹图谱重复性良好,为＂松友饮＂质控提供参考。     

应用HPLC指纹图谱技术确定熟地黄炮制终点

目的:研究熟地黄炮制过程中HPLC指纹图谱的变化及确定炮制终点。方法:用HPLC指纹图谱技术检测生地黄炮制成熟地黄过程中主要活性成分梓醇、5-羟甲基糠醛(5-HMF)、麦角甾苷等及指纹的变化,并通过与标准熟地黄指纹图谱的比较寻找最佳加工时间。结果:在炮制过程中梓醇快速下降至几乎消失,5-HMF呈直线上升趋势,而麦角甾苷变化不明显,生地黄在蒸制26h后所制样品与标准熟地黄相似性最大,因此26h是熟地黄清蒸蒸制的最佳时间。结论:指纹图谱有利于显示样品成分变化及精确控制加工过程,可有效用于熟地黄加工过程中的质量控制。     

采用色谱指纹图谱技术考察醋制对青皮的影响

目的:建立醋制青皮的指纹图谱测定条件,考察醋制对青皮的影响和工艺的稳定性。方法:采用HPLC,Chromasil C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温30℃;流动相A水-36%醋酸(200∶1),B甲醇-36%醋酸(200∶1),线性梯度洗脱,流速1 mL.min^-1;检测波长280 nm。结果:精密度、重复性和稳定性试验结果符合指纹图谱测定的要求。结论:醋制饮片与生品,同一批生品醋制的不同批次饮片HPLC指纹图谱差异不大,说明醋制对青皮50%乙醇提取物影响不大,且在此醋制工艺条件下生产的饮片比较稳定。个青皮和四花青皮指纹图谱有差别,但尚需做进一步研究。     

青皮饮片HPLC指纹图谱研究

目的：建立青皮饮片的高效液相色谱指纹图谱。方法采用Thermo C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.3%磷酸水溶液,梯度洗脱,柱温40℃,流速0.8 mL/min,检测波长280 nm。分别采用相似度评价、聚类分析和主成分分析等方法,对所收集的15批次青皮样品进行系统分析与归类。结果根据指纹图谱确定了8个共有峰,相似度均大于0.9。可将15批不同产地的青皮饮片分为3大类。结论该方法简便可靠,可为青皮饮片的质量控制和评价提供依据。     

河南连翘不同极性部位的HPLC指纹图谱

目的:建立河南连翘饮片不同极性部位的HPLC指纹图谱,比较不同提取部位化学成分之间的差异,为全面评价河南连翘饮片的质量提供参考。方法:将河南连翘饮片用75%乙醇制备总提取物后,分别用石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、正丁醇、水依次萃取,浓缩至浸膏,减压干燥制得粉末样品,建立HPLC指纹图谱,并采用相似度评价系统软件进行数据分析。结果:连翘饮片石油醚部位HPLC指纹图谱确定了18个共有峰,指认了3个指纹峰;三氯甲烷部位HPLC指纹图谱共确定了25个共有峰,指认了4个指纹峰;乙酸乙酯部位HPLC指纹图谱共确定了20个共有峰,指认了3个指纹峰;正丁醇部位HPLC指纹图谱共确定了17个共有峰,指认了3个指纹峰;水部位HPLC指纹图谱共确定了17个共有峰,指认了2个指纹峰。连翘饮片同一极性部位指纹图谱相似度较高,不同极性部位之间化学成分有明显差异。结论:该实验方法准确、可靠、重复性高,所建指纹图谱可以全面反映连翘饮片的化学成分分布,为连翘饮片的整体质量评价提供参考。     

乌药药材水提液的HPLC指纹图谱研究

目的:建立乌药水提液的HPLC指纹图谱.方法:采用水加热回流的方法制备供试品溶液,以乙腈-0,1％甲酸水溶液梯度洗脱,检测波长280 nm,建立乌药水提液的HPLC指纹图谱,对不同产地和不同采收期的乌药药材进行相似度评价、主成分分析和聚类分析.结果:方法学考察结果良好,确立了15个共有峰,17批样品指纹图谱中各共有峰的相对保留时间的相对标准偏差(RSD)均小于2％.结论:该方法稳定性、重复性好,建立的指纹图谱可为乌药的质量评价提供依据.