PCR／DNA探针检测系统用于间日疟原虫检出及基因型检测？…

根据间日疟原虫环子孢子表面蛋白（ＣＳＰ）基因序列研制了ＰＣＲ／ＤＮＡ探针检测系统,试验证明该检测方法对间日疟原虫特异,检出原虫密度为０．２个／μｌ病人阳性检出率为９６．２％,试验中对不同ＰＣＲ操作过程及试验样本不同处理方法的检测结果进行了比较。     

PCR/DNA探针检测系统用于间日疟原虫检出及基因型检测的研究

根据间日疟原虫环子孢子表面蛋白（ＣＳＰ）基因序列研制了ＰＣＲ／ＤＮＡ探针检测系统。试验证明该检测方法对间日疟原虫特异,检出原虫密度为０．２个／μｌ,病人阳性检出率为９６．２％。试验中对不同ＰＣＲ操作过程及试验样本不同处理方法的检测结果进行了比较。在样本的原虫基因型检测分析中,基因优势型ＰＶ２１０阳性率为８８．５％,基因变异型ＰＶ２４７阳性率为１１．５％,混合型阳性率为３．８％,基因变异型均出现在云南省采集的血样中     

恶性疟原虫DNA探针检测血内恶性疟原虫的初步研究

从培养恶性疟原虫(Fcc-1)中分离纯化基因组DNA,用~(32)P标记,作为探针,按DNA斑点杂交法,检测血样。结果表明:该探针可检出9个恶性疟原虫感染红细胞/10_6红细胞;在现场应用时,与13例恶性疟阳性标本镜检符合率为92％:与1例间日疟原虫病例和正常人血、白细胞之间,未发现非特异性杂交。     

聚合酶链反应掺入法制备标记地高辛探针检测间日疟原虫感染的初步研究

根据间日疟原虫环子孢子蛋白基因设计合成特异性引物一对，采用ＰＣＲ技术，以Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ代替部分ｄＴＩＰ直接扩增并标记含间日疟原虫环子孢子蛋白基因中央重复序列的基因片段作为ＤＮＡ探针并用于检测间日疟原虫感染，结果表明：（１）采用ＰＣＲ法直接制备并标记地高辛探针的方法较ＰＣＲ扩增后再标记的方法更为快速、简便和经济；（２）探针只与间日疟患者血样核酸抽提物杂交阳性，而与其亲缘关系相近的三株恶性疟原虫、利什曼原虫、弓形虫及正常人血核酸抽提物杂交阴性，该探针可以检测出相当于１００μｌ感染血样中４４虫／μｌ的水平；（３）将该探针用于深圳地区及湖北随州地区收集的间日疟患者血样的检测，１４７份镜检阳性的血样中，１１３份杂交阳性，与镜检的符合率为７６．８７％，２０份正常人血杂交阴性。     

重组质粒DNA探针用于间日疟诊断的研究

用~(32)P标记含间日疟原虫DNA片段的重组质粒pVA1作为探针,通过DNA打点杂交试验检测红内期间日疟原虫。该探针检测间日疟原虫基因组DNA的敏感度达1ng;与现场采集的25份间日疟患者血样(原虫血症为0.003％～0.7％)的杂交阳性率为72％,与6例恶性疟和3例食蟹猴疟血样中各1例杂交阳性;与3例约氏疟和6例正常人血样均为阴性。     

不同DNA探针检测疟原虫的灵敏度比较

本文通过分子杂交技术,以恶性疟原虫为靶DNA,对从恶性疟基因文库中筛出的含有高度重复顺序的pBF_4DNA探针和含单考贝基因的pBF_(13)DNA探针以及恶性疟原虫全基因组DNA探针进行了杂交比较,结果pBF_(13)DNA探针比全基因组DNA探针敏感度低10倍,比pBF_4DNA探针敏感度低100倍,全基因组DNA探针可检到的DNA含量为100pg。     

重组质粒DNA探针用于间日疟诊断的研究

用＾３２Ｐ标记含间日疟原虫ＤＮＡ片段的重组质粒ｐＶＡ１作为探针，通过ＤＮＡ打点杂交试验检测红内期间日疟原虫。该探针检测间日疟原虫基因组ＤＮＡ的敏感度达１ｎｇ；与现场采集的２５份间日疟患者血样（原虫血症为０．００３％－０．７％）的杂交阳性率为７２％；与６例恶性疟和３例食蟹猴疟血样中各１例杂交阳性；与３例约氏疟和６例正常人血样均为阴性。     

应用DNA探针检测蚊体内疟原虫的研究

本文用生物素标记的克隆ＤＮＡ探针，以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时，在２５只蚊中有１只感染蚊即可检出，亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性，敏感性以及试剂的稳定性等表明，它可作一个适用的流行病学调查工具。     

基因组、克隆重组DNA探针平行检测恶性疟原虫的初步研究

本文报告实验室制备恶性疟原虫（Ｆｃｃ－１／ＨＮ分离株）基因组ＤＮＡ．酶切冻融回收克隆重组ｐＰＦ１４ＤＮＡ，经３２Ｐ缺口移位法标记作为探针，按ＤＮＡ—ＤＮＡ斑点杂交试验平行检测Ｐ．ｆ．ＤＮＡ及血样中恶性疟原虫的初步结果．两探针检测人工培养的恶性疟原虫（Ｆｃｃ－１／ＨＮ）敏感度，基因组探针为０．０００７８％原虫血症和７．８３ｐｇ原虫ＤＮＡ，ｐＰＦ１４探针为０．００７８％和１５．６３ｐｇ。镜检确诊并复核后的５６例云南恶性疟病人血样，基因组探针检出５３例（９４．６４％），ｐＰＦ１４探针检出５１例（９１．０７％）．９例间日疟病人血样，基因组探针阳性７例，ｐＰＦ１４探针均未显示杂交．２例伯氏鼠疟、１例刚地弓形虫阳性鼠及１０例正常人血样皆为阴性．结果揭示：这两种探针似可用于我国疟疾主要流行区恶性疟原虫检测。与基因组探针相比，ｐＰＦ１４探针似是发展适合于我因恶性疟原虫大规模核酸诊断技术中，比较经济、方便的探针来源。     

复式PCR检测恶性疟原虫与间日疟原虫的研究

目的： 建立在同一次扩增中即可鉴别患者感染的疟原虫虫种的复式ＰＣＲ检测方法。方法： 根据恶性疟原虫（Ｐ．ｆ．）中度重复基因序列ｐＢＲＫ１－１４ 和间日疟原虫（Ｐ．ｖ．）线粒体细胞色素Ｃ氧化酶基因ＣＯＩＩＩ合成引物,采用经优化的ＰＣＲ反应体系, 对疟原虫ＤＮＡ模板进行扩增。结果： Ｐ．ｆ．与Ｐ．ｖ．分别被扩增出２０６ 和３７０ ｂｐ 大小的ＤＮＡ片段,与人白细胞ＤＮＡ 无交叉;用该反应体系至少可检测出原虫血症为５×１０－ ７的Ｐ．ｆ．感染和１．０２×１０－ ６ Ｐ．ｖ．感染; 自云南疟疾流行区采集的７８３份滤纸干血滴样本中, 复式ＰＣＲ法阳性检出率为８５．８％ , 误诊率为０, 漏诊率为０．１％ , 而镜检法依次分别为８４．９％ 、３．１％ 和１．０％ , 两者符合率为９５．８％ 。结论： 本复式ＰＣＲ检测疟原虫较镜检敏感、特异, 适用于我国恶性疟与间日疟混合流行区的疟疾诊断、流行病学调查、药物的疗效考核和献血员的筛选等。     

聚合酶链反应掺入法制备标记地高辛探针检测间日疟原…

根据间日疟原虫环子孢子蛋白基因设计合成特异性引物一对，采用ＰＣＲ技术，以Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ代替部分ｄＴＩＰ直接扩增并标记含间日疟原虫环子孢子蛋白基因中央重复序列的基因片段作为ＤＮＡ探针并用于检测间日疟原虫感染，结果表明；（１）采用ＰＣＲ法直接制备并标记地高辛探针的方法较ＰＣＲ扩增后再标记的方法更为快速，简便和经济；（２）探针只与间日疟中层得血样核到抽提物杂交阳性，而与其亲缘关系相近的三株恶性疟     

应用DNA探针检测蚊体内疟原虫的研究

本文用生物素标记的克隆ＤＮＡ探针，以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时，在２５只蚊中有１只感染蚊即可检出，亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性、敏感性以及试剂的稳定性等表明，它可作为一个适用的流行病学调查工具。     

合成间日疟DNA探针在疟疾监测中的应用研究

本文报道了应用合成间日疟ＤＮＡ片段经同位素末端标记作为探针，检测了２１份经镜检确诊的产是日疟病人血样，结果全产啊阳性，敏感性可测出０．００１３３％的原虫病血症，与培养的恶性疟及正常人血没有交叉反应，随后将该探针应用到疟疾监测中，在山东采集的３１０份四热病人血和２４５份流动人口血，应用于探针检测，未出现阳性结果，经镜检复核，结果相符，在安徽省滁州市采集３５２份病灶点人群血，有２８份出现了阳性，阳性率     

恶性疟原虫特异的质粒型DNA探针的制备

恶性疟原虫 DNA 与 pBR_(322)质粒 DNA 体外重组后,导入 E.coli HB_(101)建成基因文库,用疟原虫全基因组 DNA 从文库中筛出了5个杂交信号特强的克隆 pBF_1,pBF_2,pBF_3,pBF_4和 pBF_5。克隆 pBF_4 DNA与 P.c DNA,P.b DNA,及人白细胞 DNA 均无交叉反应,与 P.f DNA 杂交时,可检出的最低 DNA 量为10pg。     

合成间日疟DNA探针在疟疾监测中的应用研究

本文报道了应用合成间日疟ＤＮＡ片段经同位素末端标记作为探针，检测了２ｌ份经镜检确诊的间日疟病人血样，结果全部阳性，敏感性可测出０．００１３３％的原虫血症，与培养的恶性疟及正常人血没有交叉反应。随后将该探针应用到疟疾监测中，在山东采集的３１０份四热病人血和２４５份流动人口血，应用本探针检测，未出现阳性结果，经镜检复核，结果相符。在安徽省滁州市采集３５２份病灶点人群血，有２８份出现了阳性，阳性率为７．９５％。对以上血样经ＩＦＡ方法进行抗体测定，显示合成间日疟ＤＮＡ探针杂交结果与抗体阳性率具有明显的一致性。结果表明本合成间日疟ＤＮＡ探针可应用于灭疟后期的疟疾监测，特别对流动人口集中检查和传染源侦查具有一定潜力。     

DNA探针诊断间日疟的进一步研究

对以间日疟原虫特异的0.24kb DNA探针用点杂交试验出现阳性反应的部分恶性疟患者血样和现场镜检阴性的发热病人血样用Southern blotting法加以甄别。结果显示,点杂交阳性反应者本试验亦呈阳性反应。证实在部分恶性疟患者及镜检阴性的发热病人中可能同时感染间日疟原虫。2份点杂交可疑阳性的上海献血员血样,本试验呈阴性。