决明子总蒽醌对脂多糖诱导大鼠急性 肝损伤的作用及其机制探讨

目的 观察决明子总蒽醌对脂多糖（LPS）诱导的急性肝损伤（ALI）大鼠的作用及对HMGB1/ TLR4/NF-κB 信号通路的影响。方法 将60 只大鼠随机分为对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高 剂量组，除对照组外其余大鼠给予尾部静脉注射LPS（5 mg/kg）复制ALI 模型，对照组给予等体积的生理盐 水。低、中、高剂量组在模型复制后每日分别给予大鼠灌胃1 次10 mg/kg、20 mg/kg 及40 mg/kg 的决明子 总蒽醌，灌胃剂量5 ml，连续给药14 d ；对照组和模型组给予同等体积生理盐水。检测大鼠丙氨酸氨基转移 酶（ALT）、总胆红素（TBIL）及天门冬氨酸基转移酶（AST），HE 染色观察肝组织病理变化，TUNEL 染色 检测各组大鼠肝组织中的细胞凋亡，ELISA 法检测肝组织中的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6 （IL-6）及白细胞介素-1β（IL-1β），Western blotting 检测高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、Toll 样受体4（TLR4） 及核因子κB（NF-κB）蛋白表达量。结果 模型组ALT、AST 及TBIL 水平较对照组升高（P <0.05），中、 高剂量组较模型组下降（P <0.05）。模型组肝细胞凋亡率较对照组升高（P <0.05），中、高剂量组较模型组下 降（P <0.05）。模型组肝组织中IL-6、IL-1β 和TNF-α 水平较对照组升高（P <0.05），中剂量组、高剂量 组较模型组下降（P <0.05）。模型组HMGB1、TLR4 及NF-κB 蛋白相对表达量较对照组升高（P <0.05）， 中、高剂量组较模型组下降（P <0.05）。结论 决明子总蒽醌可以抑制LPS 诱导ALI 大鼠的HMGB1/TLR4/ NF-κB 信号通路的激活，从而减轻炎症反应，发挥对肝脏的保护作用。     

不同剂量甲泼尼龙对肺炎支原体肺炎模型小鼠肺组织TLR4/NF-κB通路的影响

目的 探究不同剂量甲泼尼龙对肺炎支原体肺炎模型小鼠肺组织Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）/核因子κB（nuclear factor κB ,NF-κB）通路的影响。 方法 选取40只SD健康雄性小鼠,随机选取10只为正常小鼠组,其余30只建立肺炎支原体肺炎小鼠模型,建模成功后随机选取10只做模型组,其余20只分别为低剂量干预组、高剂量干预组,其中低剂量干预组小鼠以低剂量甲泼尼龙进行注射,高剂量干预组小鼠以高剂量甲泼尼龙进行注射。比较各组间TLR4、NF-κB表达,免疫组织化学法检测TLR4、NF-κB水平,酶联免疫法检测及肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素1β（interleukin-1β,IL-1β）水平,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）,硫代巴比妥酸法检测丙二醛（malondialdehyde,MDA）。 结果 相比正常小鼠组,模型组、低剂量干预组与高剂量干预组TLR4、NF-κB表达均较高,低剂量干预组与高剂量干预组TLR4、NF-κB表达低于模型组,且高剂量干预组TLR4、NF-κB表达低于低剂量干预组（P＜0.05）;相比正常小鼠组,模型组、低剂量干预组与高剂量干预组TLR4、NF-κB水平均较高,低剂量干预组与高剂量干预组TLR4、NF-κB水平低于模型组,且高剂量干预组TLR4、NF-κB水平低于低剂量干预组（P＜0.05）;相比正常小鼠组,模型组、低剂量干预组与高剂量干预组TNF-α、IL-1β水平均较高,低剂量干预组与高剂量干预组TNF-α、IL-1β水平低于模型组,且高剂量干预组TNF-α、IL-1β水平低于低剂量干预组（P＜0.05）;相比正常小鼠组,模型组、低剂量干预组与高剂量干预组MDA水平较高、SOD水平均较低,与模型组相比,低剂量干预组与高剂量干预组MDA水平较低、SOD水平较高,且高剂量干预组MDA水平低于、SOD水平高于低剂量干预组（P＜0.05）。 结论 在肺炎支原体肺炎模型小鼠中,应用甲泼尼龙能够显著改善出现的肺组织损伤,抑制TLR4/NF-κB通路表达,降低炎症反应程度,改善氧化应激,且高剂量效果较为显著。     

大鼠膝骨关节炎模型中高迁移率族蛋白1的高表达机制

目的 研究膝骨关节炎病理进程中滑膜成纤维细胞（FLSs）焦亡与其释放高迁移率族蛋白1（HMGB1）的分子机制。方法在动物实验中,将SD大鼠利用随机数字表法分为2 组,6只/组,空白对照组（无任何处理）,膝骨关节炎组（膝骨关节炎模型）,使用前交叉韧带切断法（ACLT）建立大鼠膝骨关节炎模型,通过HE染色及Mankin'评分观察大鼠膝关节软骨的破坏情况,通过蛋白免疫印迹法检测膝关节滑膜组织中细胞焦亡相关的蛋白和HMGB1蛋白的表达情况。在细胞实验中,将细胞随机分为3组,空白对照组（等量的PBS处理）,细胞焦亡组（LPS+ATP处理）,小干扰RNA转染组（LPS+ATP+siRNA处理）。使用脂多糖+三磷酸腺苷（LPS+ATP）诱导滑膜成纤维细胞发生焦亡,分别使用不同的小干扰RNA抑制滑膜成纤维细胞发生焦亡,使用RT-qPCR验证不同的小干扰RNA抑制NLRP1、NLRP3 、ASC和caspase-1的转染效果,通过Western blot检测滑膜成纤维细胞中细胞焦亡相关的蛋白和HMGB1蛋白的表达情况;使用ELISA检测细胞上清中HMGB1的蛋白水平。结果 动物实验中,与空白对照组相比,膝骨关节炎组滑膜组织中焦亡相关的蛋白及HMGB1蛋白表达明显升高（P<0.05）,软骨组织Mankin'评分明显升高（P<0.05）;细胞实验中,小干扰RNA能够明显抑制NLRP1、NLRP3、ASC和caspase-1的mRNA表达（P<0.05）,细胞焦亡组中细胞焦亡相关的蛋白及HMGB1蛋白表达明显高于空白对照组和小干扰RNA转染组（P<0.05）,各细胞焦亡组细胞上清中HMGB1的蛋白水平明显高于空白对照组和小干扰RNA转染组（P<0.05）。结论 在膝骨关节炎病理进程中,NLRPs炎性小体介导的滑膜成纤维细胞焦亡可促进HMGB1的大量释放,这与细胞焦亡下游因子caspase-1蛋白的活化有关。     

基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨参芪调肾方改善CSE诱导小鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制

目的：基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨参芪调肾方（SQTS）改善香烟烟雾提取物（Cigarette smoking extract, CSE）诱导小鼠肺泡巨噬细胞（MH-S）炎症反应的作用机制。方法：以MH-S细胞为研究对象，通过CCK-8法分析SQTS对MH-S细胞的安全性及药效浓度；随后MH-S分为空白组、模型组（8%CSE）和SQTS低、中、高剂量组（40、80、160 mg/L）。ELISA检测细胞上清TNF-α、IL-1β和IL-6含量；DCFH-DA荧光探针法检测细胞中ROS水平；Westernblot检测TLR4/NF-κB/NLRP3通路蛋白的表达，使用TLR4抑制剂TAK-242验证SQTS在TLR4/NF-κB/NLRP3通路上的作用。结果：与空白组比较，CSE组细胞活力降低，炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量增加（P<0.05）,ROS荧光表达水平显著升高（P<0.01）,TLR4/NF-κB/NLRP3通路蛋白表达明显增加（P<0.05）；与模型组比较，参芪调肾方各剂量组细胞活力升高，以上各指标表达水平均有所降低（P&l...     

虎杖苷通过调控HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对脓毒症急性肺损伤的保护作用

[目的]观察虎杖苷(polydatin,PD)对脓毒症急性肺损伤大鼠的保护作用,并探究其作用机制。[方法]将50只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级SD大鼠随机分为假手术组、模型组和PD高、中、低剂量组,每组10只。模型组和PD高、中、低剂量组大鼠采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症急性肺损伤模型,假手术组打开腹腔翻动盲肠后缝合。PD高、中、低剂量组大鼠分别予100、50、25mg·kg-1PD灌胃,假手术组和模型组大鼠予等量0.5%羧甲基纤维素钠(carboxymethyl cellulose sodium,CMC-Na)灌胃,1次/d,连续7d。实验结束检测各组大鼠肺组织湿干重比(wet-to-dry weight ratio,W/D)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肺组织病理变化;酶联免疫吸附检测(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;实时定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Realtime qPCR)法和Western blot法检测肺组织高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65 mRNA和蛋白表达水平。[结果]与假手术组比较,模型组TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平升高,SOD活力降低,W/D值显著升高(P0.05);与模型组比较,PD高、中剂量组TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平降低,SOD活力升高,W/D值显著降低(P0.05),而PD低剂量组TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平,SOD活力及W/D值差异无统计学意义(P0.05);PD中剂量组TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平和W/D值高于PD高剂量组,低于PD低剂量组,SOD活力低于PD高剂量组,高于PD低剂量组(P0.05)。HE染色显示,模型组大鼠肺泡壁增厚水肿,有大量炎性细胞浸润;与模型组比较,PD高、中剂量可显著改善大鼠肺损伤,减轻肺泡壁增厚、水肿及炎性细胞浸润。Real-time qPCR和Western blot检测显示,与假手术组比较,模型组HMGB1、TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达均增加(P0.05);与模型组比较,PD高、中剂量组HMGB1、TLR4、NF-κB p65 m RNA和蛋白表达降低(P0.05),PD低剂量组HMGB1、TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P0.05);与PD高剂量组比较,PD中、低剂量组HMGB1、TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达增高,其中PD中剂量组HMGB1、TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达低于PD低剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。[结论]PD对大鼠脓毒症相关急性肺损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的活化有关。     

红花黄色素调节NF-κB/NLRP3信号通路对心肌梗死大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的影响

目的:探究红花黄色素(CY)调节核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对心肌梗死(MI)大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的影响。方法:通过冠状动脉左前降支结扎法建立大鼠MI模型。并将72只SPF级雄性大鼠分为：对照组(Control组)、假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、低剂量CY组(CY-L组,20mg/kg)、高剂量CY组(CY-H组,40mg/kg)和高剂量CY+NF-κB激活剂组(CY-H+LPS组,CY 40mg/kg+LPS 10mg/kg),每组12只。造模后腹腔注射给药,1次/d,共28d。给药结束后对各组大鼠进行超声心电图检查,检测心功能变化情况。2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)-伊文斯蓝(EB)法和免疫荧光法检测各组大鼠心肌梗死面积和心肌细胞焦亡比例。苏木素伊红(HE)和马松(Masson)染色观察心肌组织病理学变化。试剂盒检测大鼠心肌中白细胞介素(IL)-1β、IL-18和乳酸脱氢酶(LDH)水平。Western Blot检测心肌组织中NF-κB、NLRP3、cleaved-caspase1、胃泌素D-N(GSDMD-N...     

TLR4/MyD88/NF-κB 信号通路对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马的影响

  目的  研究TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对甲基苯丙胺（methamphetamine,MA）依赖的条件性位置偏好（conditioned place preference,CPP）大鼠海马的影响,同时采用特异性抑制剂TAK-242抑制Toll样4受体（Toll-like receptor 4,TLR4）,减轻MA依赖诱导的海马神经炎症。  方法  建立MA（10 mg/kg,ip,14 d）依赖大鼠CPP模型,分别为生理盐水组、MA组、TAK-242组、MA+TAK-242组。TAK-242组和MA+TAK-242组先分别腹腔注射抑制剂TAK-242（3 mg/kg）,1h后MA+TAK-242组再腹腔注射MA（10 mg/kg）。采用Western Blot实验和采用荧光定量PCR实验检测MA依赖CPP大鼠海马中TLR4、MyD88、TRAF6、IκB-α、p-IκB-α、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白的表达和mRNA表达。  结果  与生理盐水组相比,MA组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均升高（P < 0.001或P < 0.01）,IκB-α的蛋白和mRNA表达下降（P < 0.01）,p-IκB-α、p-NF-κBp65的表达升高（P < 0.01或P < 0.05）;与MA组相比,MA+TAK-242组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均下降（P < 0.001、P<0.01或P < 0.05）,IκB-α的蛋白和mRNA表达升高（P < 0.01）,p-IκB-α、p-NF-κBp65表达下降（P < 0.01或P < 0.05）。  结论  MA依赖可通过激活TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,诱导CPP大鼠海马神经炎症的发生,采用特异性TLR4抑制剂可以减轻MA诱导的神经炎症。     

TLR4在脓毒症中对调节性T细胞功能活性的影响

目的:探讨脓毒症中TLR4 （TLR4）对调节性T细胞功能及活性的影响,并探讨其作用机制。方法:SPF级C57/BL6雄性小鼠（wild type,WT）40只,C57BL/10ScNJNJU（TLR4-/-）小鼠40只,随机均分为4组,WTSham组,WTCLP组,TLR4-/-Sham组和TLR4-/-CLP。CLP组用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型。造模后24 h,FCM检测脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量、凋亡率及Foxp3和TLR4表达情况, RT-PCR检测Foxp3+mRNA和TLR4mRNA的表达,Western Blot检测Treg细胞内NF-κB、p-NF-κB蛋白表达情况。结果:（1） TLR4-/-CLP组Treg细胞凋亡率较WTCLP组明显增多,而细胞数量显著降低（P<0.05）。（2）WT CLP组Treg中Foxp3mRNA及蛋白表达、TLR4mRNA及蛋白水平显著升高（P<0.05）,而在TLR4-/-CLP组中该表达较WT CLP组均显著降低（P<0.05）。（3） WT CLP组Treg细胞NF-κB、p-NF-κB的表达水平明显升高（P<0.05）,而TLR4-/-CLP组较WT CLP组明显降低（P<0.05）。结论:在脓毒症中TLR4可显著影响Treg的功能及其活性,这可能通过TLR4/NF-κB信号通路介导有关。     

阿米福汀对小鼠放射性肺损伤的防护作用研究

目的 探讨阿米福汀（Amifostine,AMI）对小鼠放射性肺损伤（RILI）的防护作用机制。方法 将24 只雌性C57BL/6J 小鼠随机分为对照组、单纯照射组、AMI 组。用直线加速器6MV-X 射线单次12Gy 照射小鼠全肺,照射前30 min 腹腔注射AMI,对照组和单纯照射组注射同等剂量的生理盐水。照射14 d 后,留取小鼠肺组织标本,采用苏木精- 伊红染色法（HE）观察病理改变;酶联免疫吸附法（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液中白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β1（TGF-β1）表达水平;凝胶电泳迁移实验检测核转录因子-κB（NF-κB）活性;免疫组织化学法观察NLRP3 蛋白的表达和定位;实时荧光定量聚合酶链反应检测肺组织中NLRP 3 和IL-1β mRNA 的表达;Western blot 检测NF-κB p65、NLRP3、IL-1β 蛋白的表达。结果 照射后第14 天,AMI 组与单纯照射组比较,AMI 组肺组织急性炎症反应减轻;AMI 组支气管肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α 水平下降,TGF-β1 水平升高（P <0.05）;AMI 组肺组织中NF-κB 活性下降（P <0.05）;AMI 组肺组织中NLRP3 蛋白表达下降（P <0.05）;AMI 组NLRP3 和IL-1β mRNA 表达下降（P <0.05）;AMI 组NF-κB p65、NLRP3、IL-1β 蛋白表达下降（P <0.05）。结论 AMI 可能通过抑制辐射引起的NF-κB 激活,进而抑制NLRP 3 基因的转录和表达,抑制炎症因子的释放,减轻RILI。     

丹酚酸B对急性脑缺血小鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨丹酚酸B对急性脑缺血小鼠的抗炎作用及Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的影响。方法:建立小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。造模后阳性组(尼莫地平30μg/kg)、丹酚酸B低剂量组(丹酚酸B 11.25 mg/kg)、丹酚酸B高剂量组(丹酚酸B 22.5 mg/kg)分别尾静脉注射给药1次,模型组和假手术组给予同等体积的生理盐水。造模后6 h,分别采用酶联免疫吸附法测定脑组织中IL-1β及TNF-α的含量,采用实时定量PCR法检测缺血侧脑皮层TLR4、NF-κBp65 mRNA的表达,采用Western blot法检测缺血侧脑皮层TLR4、NF-κBp65蛋白的表达。结果:与模型组比较,丹酚酸B高、低剂量组均能显著降低小鼠脑组织中IL-1β、TNF-α含量(P0.01,P0.05);丹酚酸B高、低剂量组小鼠缺血侧脑皮层TLR4 mRNA、NF-κBp65 mRNA表达显著降低(P0.01,P0.05);丹酚酸B高剂量组小鼠缺血侧脑皮层TLR4、NF-κB蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:丹酚酸B可通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低TLR4和NF-κB相关基因蛋白的表达,减少炎症因子IL-lβ和TNF-α的含量,进而发挥抗脑缺血的作用。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB通路异甘草素对大鼠颅脑外伤后炎症反应及Th1/Th2失衡的影响

【摘要】 目的 探讨异甘草素（ISL)通过介导Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB (NF-κB)通路对大鼠颅脑外伤 （TBI)炎症反应及Th1/Th2细胞失衡的影响。方法将SPF级大鼠随机分为模型组、ISL低剂量组（20 mg·kg-1）、ISL高剂量组（40 mg·kg-1）、阳性药物组（甘油果糖氯化钠,40 mg·kg-1）,每组10只,另设对照组。HE染色观察大鼠脑组织病理学变化;比较血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,脑组织TLR4、My D88、NF-κB p65 mRNA及TLR4、My D88、NF-κB p65、磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）蛋白表达。结果与对照组比较,模型组血清IL-1β、IL-4、TNF-α水平,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平升高,血清IFN-γ水平降低（均P＜0.05）;与模型组比较,ISL低剂量组、ISL高剂量组、阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）;与ISL低剂量组比较,ISL高剂量组、阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）;与ISL高剂量组比较,阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）。HE结果显示,ISL低剂量组、ISL高剂量组、阳性药物组脑组织病变较模型组出现不同程度改善,ISL高剂量组和阳性药物组改善尤为明显。结论ISL能有效改善大鼠TBI炎性反应、调节Th1/Th2细胞平衡,可能基于调控TLR4/MyD88/NF-κB通路相关mRNA和蛋白表达发挥作用。     

丹参酮ⅡA通过调控HMGB1表达抑制TLR4/My D88/NF-κB通路减轻大鼠脓毒症肺损伤机制研究

目的 探讨丹参酮ⅡA对脓毒症大鼠肺损伤中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路的影响。方法 20只清洁级健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠采用盲肠结扎穿孔法（CLP）造模，造模成功后随机分为四组，即模型组，低、中、高剂量治疗组，每组5只。模型组腹腔注射0.9%氯化钠注射液，低、中、高剂量治疗组腹腔注射不同剂量的丹参酮ⅡA(5、10、20 mg/kg)。另取5只SD大鼠作为假手术组，开腹翻动肠道后关闭腹腔并腹腔注射0.9%氯化钠注射液。各组大鼠干预完成后等待24 h处死。测定各组肺湿/干重比（W/D），观察光镜下各组肺组织结构变化，实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测肺组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κB)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA的表达。结果 与模型组比较，中、高剂量治疗组的肺组织W/D显著减小[（4.46±0.29）、（4.27±0.21）比（5.09±0.42）,P<0.05或P<0.0...     

三叶青黄酮通过TLR4/NF-κB通路调控NLRP3小体激活改善大鼠心肌细胞缺氧再复氧损伤的作用及机制

目的：探究三叶青黄酮（Radix Tetrastigma hemsleyani flavone,RTHF）对大鼠心肌细胞缺氧再复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）损伤的作用及其可能机制。 方法：以大鼠心肌细胞系H9C2为研究对象,分为对照组、H/R组、H/R+低浓度RTHF组（25μg/mL）、H/R+中浓度RTHF组（50μg/mL）、H/R+高浓度RTHF组（100μg/mL）。通过CCK-8法检测各组细胞活力;通过试剂盒检测各组细胞上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）含量;通过DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）和western blot检测各组细胞中NLRP3、Caspase-1、ASC、GSDMD-N、TLR4、p-NK-κB p65、NK-κB p65的蛋白和基因表达水平。 结果：与对照组比较,H/R组H9C2细胞的细胞活力、SOD水平降低,ROS、LDH、NLRP3、Caspase-1、ASC、GSDMD、TLR4、p-NK-κB p65水平升高;与H/R组比较,RTHF治疗组的细胞活力、SOD水平升高,ROS、LDH、NLRP3、Caspase-1、ASC、GSDMD、TLR4、p-NK-κB p65水平降低。且各RTHF组结果呈剂量依赖性,但低浓度组的差异不显著。 结论：在H/R诱导大鼠心肌细胞中,RTHF通过抑制ROS和TLR4/NF-κB通路调控NLRP3小体激活,进而抑制细胞焦亡。我们的研究结果为心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia/reperfusion injury,MIRI）的治疗和分子机制提供了新的见解。     

胆绿素对脂多糖诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞NLRP3炎性体激活的作用

目的 探讨胆绿素（biliverdin,BV）对脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞NLRP3炎性体激活的影响及其作用机制。方法 用不同浓度胆绿素（10、20、30μmol/L）处理小鼠RAW264.7巨噬细胞30min后再用LPS （1μg/ml）处理细胞6h,ELISA法检测培养上清液IL-β和IL-18中的分泌量。30μmol/L胆绿素处理细胞30min后再用LPS处理细胞6h,Western blot法检测胞内NLPR3、caspase-1、ASC和磷酸化IκB （p-IκB）的蛋白表达水平;NF-κB抑制剂BAY11-7082处理细胞1h后,然后给予细胞30μmol/L胆绿素孵育30min,经1μg/ml LPS孵育6h,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-β、IL-18的表达水平。结果 （1）在受到LPS作用后,RAW264.7巨噬细胞分泌IL-β、IL-18水平显著升高;而在预先给予胆绿素后,抑制了LPS诱导的IL-β、IL-18表达,并且呈剂量依赖性（P < 0.05）。（2）与空白对照组相比,LPS处理巨噬细胞6h后,NLRP3炎性体各组分蛋白和p-IκB蛋白表达明显上调（P均<0.05）,在同时间点,巨噬细胞在LPS处理前经过胆绿素预处理后,NLRP3炎性体各组分蛋白和p-IκB蛋白表达都显著降低（均P<0.05）。（3）与LPS组相比,BAY+胆绿素明显抑制了LPS诱导的IL-β、IL-18的表达（P<0.05）,并且BAY和胆绿素的对于LPS诱导炎性反应对的联合抑制作用显著的高于BAY或者胆绿素的单独作用（P<0.05）。结论 在RAW264.7巨噬细胞中,胆绿素可以通过抑制NF-κB的活性进而抑制NLRP3炎性体的形成,从而发挥抗炎作用。     

丙泊酚抑制内毒素血症中巨噬细胞发生焦亡的分子机制

目的 探讨丙泊酚抑制巨噬细胞发生焦亡的分子机制。方法 提取小鼠骨髓来源巨噬细胞,分为对照组、脂多糖（LPS）+三磷酸腺苷（ATP）刺激组以及丙泊酚+LPS+ATP组。对照组不给予任何处理;LPS+ATP组先给予脂多糖(LPS) 1 μg/mL刺激4 h,再加三磷酸腺苷（ATP）4 mmol/L刺激1 h;丙泊酚+LPS+ATP组先同时给予50 μmmol/L丙泊酚+LPS 1 μg/mL刺激4 h,再加ATP刺激1 h。处理完毕则收集细胞培养上清液和细胞。分别通过CCK8、流式分析检测细胞活力,酶联免疫吸附测定法法检测细胞上清炎症因子IL-1β、IL-18含量;用免疫印迹检测细胞caspase-1蛋白表达及细胞膜Toll样受体-4（TLR4）表达;流式分析及免疫组化荧光检测细胞焦亡情况。结果 LPS+ATP可导致小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）活力显著降低（P<0.05）;炎症因子IL-1β、IL-18升高（P<0.05）;活化的caspase-1蛋白增加,细胞膜表面TLR-4表达升高（P<0.05）;予丙泊酚处理后,可改善LPS+ATP诱导的上述指标变化。结论 LPS+ATP可诱导BMDM发生焦亡,丙泊酚有效抑制这种细胞死亡,提示丙泊酚麻醉有益于临床脓毒症患者的手术,有效调节患者免疫状态。     

丙酮酸乙酯对脓毒症急性肺损伤大鼠的 作用及其机制研究

目的 探讨丙酮酸乙酯（EP）对脓毒症急性肺损伤（ALI）大鼠的作用及其可能的作用机制。 方法 选取健康成年雄性SD 大鼠40 只,采用随机数字表法分为对照组、假手术组、ALI 组和EP 组,每组10 只。 ALI 组和EP 组采用盲肠结扎穿孔法复制大鼠脓毒症模型,假手术组仅翻动盲肠,不做结扎穿孔。EP 组术后 腹腔注射EP 溶液（40 mg/kg,间隔6 h）,对照组、假手术组和ALI 组腹腔注射等量乳酸林格液（间隔6 h）。 模型复制24 h 后心脏采血处死大鼠。酶联免疫吸附试验检测肺组织匀浆中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、 Toll 样受体4（TLR4）及核因子κB（NF-κB）的表达;计算肺组织湿干重比;HE 染色后光镜下观察肺组 织病理结构变化。结果 ALI 组、EP 组HMGB1、TLR4 及NF-κB 水平高于假手术组（P <0.05）,且EP 组 低于脓毒症ALI 组（P <0.05）;对照组与假手术组HMGB1、TLR4 及NF-κB 水平比较,差异无统计学意义 （P >0.05）。ALI 组、EP 组肺组织湿干重比高于假手术组（P <0.05）,且EP 组低于ALI 组（P <0.05）;对照 组与假手术组肺组织湿干重比比较,差异无统计学意义（P >0.05）。对照组和假手术组肺组织结构完整,肺泡 间隔无水肿、炎症;ALI 组肺泡结构破坏严重,肺泡间隔增宽,肺间质明显渗出、出血和大量炎症细胞浸润; EP 组肺泡结构较完整,与ALI 组相比,肺间质渗出、出血及炎症细胞浸润症状明显减轻。结论 EP 可能通过 抑制HMGB1/TLR4/NF-κB 信号通路,减轻肺组织炎症反应,改善肺损伤程度从而对脓毒症ALI 发挥保护作用。     

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨醒脑静改善反复缺血-再灌注脑损伤小鼠学习记忆能力的作用研究

目的:探讨醒脑静通过TLR4/NF-κB信号通路改善反复缺血-再灌注(I/R)脑损伤小鼠学习记忆能力的作用。方法:将50只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组,醒脑静低、中、高剂量组,制备大鼠脑反复I/R损伤模型。造模成功2 h后,醒脑静低、中、高剂量组分别给予醒脑静注射液1、5、10 mL/kg进行腹腔注射,1次/d,连续给药7 d。假手术组和模型组腹腔给予等容量生理盐水。用Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力,对脑组织进行TTC染色,检测脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、NF-κB和IκBα表达。结果:与假手术组相比,模型组小鼠逃避潜伏期的时间和脑梗死体积均显著升高,脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、NF-κB和IκBα表达均显著升高,穿越平台次数显著降低(P0.05);与模型组相比,各醒脑静治疗组小鼠逃避潜伏期的时间和脑梗死体积均显著降低,脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、NF-κB和IκBα表达均显著降低,穿越平台次数显著增加(P0.05),且随药物剂量增大而变化(P0.05)。结论:醒脑静能减小脑梗死体积,改善反复脑I/R损伤小鼠学习记忆能力,其机制可能与抑制脑组织中TLR4/NF-κB信号通路,减轻炎症刺激有关。     

不同剂量天麻素对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路的影响

目的 探讨不同剂量的天麻素（Gastrodin,Gas）对甲基苯丙胺（Methamphetamine,Meth）依赖条件性位置偏爱（Conditioned place preference,CPP）大鼠海马中TLR4/MyD88/NF-κB通路的作用。方法 建立Meth(10 mg/kg,ip,14 d)依赖大鼠CPP模型,采用低中高剂量的天麻素（10、30、100 mg/kg）干预14 d后,采用Western blotting和RT-qPCR方法检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中关键因子的蛋白和mRNA在海马中的表达水平。结果 天麻素干预后TLR4、MyD88、NF-κB p65、TRAF6的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性降低（P <0.001、P <0.01或P <0.05）、p-NF-κB p65的蛋白表达呈剂量依赖性降低（P <0.01或P <0.05）、IκB-α的蛋白和mRNA表达呈剂量依赖性升高（P <0.01或P <0.05）,天麻素干预后p-IκB-α的蛋白表达降低（P <0.01）。结论 天麻素干预对甲基...     

大豆异黄酮和法舒地尔联合应用对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨大豆异黄酮（SI）和法舒地尔（Fas）对大鼠脑缺血再灌注后脑组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）和核转录因子κB1（NF-κB1）表达的影响。方法:以体质量240~260 g雄性SD大鼠为实验对象,分为假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、IR+Fas组、IR+SI组和IR+Fas+SI组,HE染色法观察脑组织病理形态学改变,免疫组织化学法和Western blot法检测NF-κB1（p50）和HMGB1蛋白的定性和定量表达,荧光定量PCR测定脑组织HMGB1、NF-κB1和VCAM-1 mRNA的表达。结果:IR组脑神经细胞溶解性坏死,核固缩,组织间隙明显水肿增大;与IR组比较,各用药组脑组织损伤均有不同程度减轻,核固缩减少,组织间隙水肿改善。免疫组织化学法结果示,与S组比较,IR组NF-κB1和HMGB1的阳性细胞表达量均显著升高（P < 0.01）;与IR组比较,各用药组NF-κB1和HMGB1的阳性细胞数均明显降低（P < 0.01）,其中IR+Fas+SI组与单独用药组比较降低均更显著（P < 0.01）。与S组比较,IR组HMGB1蛋白及HMGB1、NF-κB1和VCAM-1 mRNA表达均显著升高（P < 0.01）;与IR组比较,各用药组HMGB1蛋白及HMGB1、NF-κB1和VCAM-1 mRNA表达均明显降低（P < 0.01）,其中IR+Fas+SI组与单独用药组比较下降均更显著（P < 0.01）。结论:SI和Fas对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用可能是通过抑制HMGB1、NF-κB1和VCAM-1的表达,从而抑制NF-κB信号通路,以减弱炎症反应对脑组织的损伤,且联合应用比单独应用效果更显著。     

降钙素基因相关肽对脂多糖诱导血管平滑肌细胞TLR4/NK-资B及炎症因子表达的影响

目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对脂多糖（LPS）诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）TLR4/NK-kB 及炎症因子表达的影响。方法贴壁法培养VSMCs,根据不同的处理方案,分为对照组、LPS 处理组、CGRP组、（LPS+CGRP）组及（LPS+CGRP+C8-37）组;ELISA 检测不同组VSMCs 中白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α ）和基因表达水平,免疫印迹法（Western blot）检测不同组VSMCs 中Toll 样受体4（TLR4）、I资Ba及p65蛋白表达水平。结果①LPS处理VSMCs后,随着LPS浓度的升高,IL-1β和TNF-α表达水平成梯度增加,并于1 000 ng/ml 时分泌水平最高（p <0.05）,在8 h时达到峰值（ p<0.05）;②CGRP 剂量依赖性降低LPS 诱导IL-1β和TNF-α的表达（p <0.05）,并于100 nmol/L 时达到低峰点（p <0.05）;③CGRP能抑制LPS 诱导的细胞TLR4 蛋白的积累（p <0.05）,抑制IkBa 与p65 蛋白的磷酸化水平（p <0.05）;④CGRP阻断剂C8-37可以逆转CGRP对LPS刺激的VSMCs中IL-1β和TNF-α表达（p <0.05）,拮抗CGRP对TLR4和NK-kB 的抑制（p <0.05）。结论CGRP 通过抑制TLR4 蛋白的积累,阻断NF-κB 信号蛋白IkBa 与p65的磷酸化,进而削弱LPS 诱导的细胞炎症因子IL-1β和TNF-α的激活,抑制LPS 诱导的VSMCs 炎症的激活。