从IFN-γ／IL-33表达变化探讨EAN中的Th1／Th2细胞极化

目的探讨IFN-γ／和IL-33在实验性自身免疫性神经炎（EAN）发病机制中的作用及EAN中的Th1／Th2细胞极化。方法用P253-78肽段免疫Lewis大鼠,建立EAN模型,观察其发病情况和组织病理改变,并检测淋巴细胞增值反应,用RT-PCR技术检测干扰素γ（IFN-γ）和白介素33（IL-33）在大鼠发病高峰期脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达。结果EAN组大鼠临床表现明显,病理检查可见大量炎性细胞浸润;坐骨神经组织、淋巴结,脾脏中IFN-γ mRNA表达显著升高,IL-33mRNA表达明显减少,其引流淋巴结淋巴细胞对P253-78aa的刺激发生强烈的淋巴细胞增殖反应。结论IFN-γ对EAN发病起促进作用,IL-33对EAN大鼠起保护作用;EAN中Th0细胞向Th1的转化明显增强而向Th2细胞的转化则受到抵制。     

丙戊酸对实验性自身免疫性神经炎大鼠保护作用的机制

目的观察丙戊酸(VAP)对实验性自身免疫性神经炎(EAN)大鼠的保护作用及其机制。方法实验大鼠随机分为VAP高剂量组、VAP低剂量组、EAN模型组、正常组,应用P2 57-81多肽与完全弗氏佐剂的混合液诱导EAN模型。VAP于免疫当天至第15d每天腹腔内注射。观察各组大鼠发病情况和坐骨神经组织病理学变化,检测外周血中Th17细胞和Foxp3+Treg细胞含量,检测淋巴结中TNF-α、IFN-γ、IL-17、TGF-βmRNA表达。结果 VAP高剂量组的最初发病时间迟于EAN组(P<0.05),其高峰期临床评分显著低于EAN组(P<0.05),坐骨神经炎性细胞浸润较EAN组明显减少;VAP高剂量组和低剂量组外周血中Th17细胞比例较EAN组显著减少(P<0.05),Foxp3+Treg细胞比例较EAN组显著增加(P<0.05),淋巴结中促炎细胞因子TNF-α、IFN-γ及IL-17mRNA表达与EAN组比较明显下降(P<0.05),VAP高剂量组抑炎细胞因子TGF-βmRNA表达与EAN组比较明显升高(P<0.05)。结论 VAP对EAN有治疗作用,这种作用可能与其能够增加Foxp3+Treg细胞和抑炎细胞因子TGF-β含量、减少TH17细胞含量和促炎细胞因子的表达有关。     

IL-17、RORγt在实验性自身免疫性神经炎中的表达

目的 观察Th17型细胞因子IL-17和Th17细胞特异性转录因子维甲酸受体相关孤儿受体γ的胸腺异构体(RORγt) mRNA在实验性自身免疫性神经炎(EAN)模型中的表达,以探讨Th17细胞在EAN中的作用.方法 用P253-78aa肽段免疫Lewis大鼠,建立EAN模型,观察大鼠发病情况和组织病理改变,并检测淋巴细胞增殖反应,用RT-PCR技术检测IL-17和RORγt在大鼠发病高峰期脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达.结果 EAN组大鼠在第14-16天发病高峰期时平均临床评分为(7.5±1.2),病理学检查可见明显炎性细胞浸润,对P253-78aa的刺激产生强烈淋巴细胞增殖反应,与对照组相比,IL-17和RORγt mRNA在脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达均显著升高(P<0.001).结论 IL-17和RORγt表达上调与EAN的发病相关.     

从Th1、Th17细胞除极探讨丙戊酸干预实验性自身免疫性神经炎的机制

目的从Ⅰ型辅助T细胞(Th1)、17型辅助T细胞(Th17)细胞除极角度探讨丙戊酸(VPA)干预实验性自身免疫性神经炎(EAN)的机制。方法实验大鼠随机分为VPA治疗组、EAN组、正常组,应用周围神经髓鞘抗原(P257-81)多肽与完全弗氏佐剂的混合液免疫VPA治疗组和EAN组大鼠。VPA治疗组大鼠于免疫当天至第15天每天腹腔内注射300mg·kg-1丙戊酸钠。观察发病情况,坐骨神经电生理改变及组织病理学变化,检测腹股沟淋巴结中IFN-γ、IL-17 mRNA水平。结果 VPA治疗组的最初发病时间迟于EAN组(P<0.05),其高峰期临床评分显著低于EAN组(P<0.05),坐骨神经复合肌肉动作电位(CMAP)的波幅较EAN组明显升高,潜伏期和时限显著缩短(P<0.05)。髓鞘脱失和炎性细胞浸润较EAN组明显减少(P<0.05)。淋巴结中IFN-γ、IL-17mRNA表达明显下降(P<0.05)。结论 VPA通过影响Th1、Th17细胞除极,使IFN-γ、IL-17分泌下降,从而抑制EAN大鼠的自身免疫反应。     

干扰素-β对实验性自身免疫性神经炎治疗作用的组织病理学和免疫学研究

目的:探讨干扰素β-(interferonβ-,IFNβ-)对实验性自身免疫性神经炎(experimentalautoimmuneneuritis,EAN)的治疗作用。方法:从牛坐骨神经提取髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)制备免疫原注射入豚鼠双后足垫诱导EAN模型。将90只健康、成年、雄性豚鼠随机分为正常对照组、IFN-β治疗EAN组、磷酸盐缓冲生理盐水(phosphatebuffedsaline,PBS)治疗EAN组,每组30只。免疫后第12天给予IFN-β或PBS腹腔注射,分别在治疗后7和14d对各组大鼠进行组织病理学和免疫学指标的检测。结果:与PBS治疗组相比,接受IFN-β治疗的豚鼠临床评分较低,坐骨神经干脱髓鞘程度轻,炎细胞浸润减少;脾脏单个核细胞IFN-γ、TNF-α的分泌量减少,IL-4、TGF-β的分泌增多。结论:IFN-β能改善EAN临床症状,促进疾病恢复,具有一定的治疗作用。     

趋化因子在实验性自身免疫性神经炎中的动态表达

目的 探讨趋化因子在实验性自身免疫性神经炎（EAN）中的作用。方法 用兔坐骨神经匀浆免疫Wistgr大鼠．观察免疫后大鼠的发病情况和病理改变，通过免疫组化测定趋化因子在坐骨神经中的动态表达。结果 EAN大鼠于免疫后第9天开始出现症状．第15天症状达高峰，病理表现为炎性细胞浸润和脱髓鞘。趋化因子MCP-1表达在第9天达高峰，随后逐渐下降．前后时相点相比差异均有显著性（P〈0．05），且与对照组相比差异也有显著性（P〈0．001）。趋化因子MIP—1α和RANTES的表达有着相似的动态变化，在第15天疾病高峰期表达最高．随后逐渐下降，且与对照组相比差异有显著性（P〈0．001）。结论 趋化因子MCP-1在EAN发病早期可能起一定作用，MIP-1α和RANTES可能与EAN的病情进展有关。     

豚鼠实验性变态反应性神经炎模型的建立及电生理,免疫等…

实验以牛的坐骨神经为原料，提取并鉴定碱性髓鞘蛋白，并以此为免疫原，免疫豚鼠诱发出实验性变态反应性神经炎，发病率达７８％，动物发病后运动迟缓，肢体瘫痪，病理显示外周神经组织淋巴及单核细胞浸润，有髓纤维节段性脱髓鞘，电生理检查显示复合肌电幅度减小，运动神经传导速度减慢，免疫功能检查显示特异及非特异的细胞免疫功能增强。，血清中出现特异的抗ＭＢＰ－ＩｇＧ抗体。     

豚鼠实验性变态反应性神经炎模型的建立及电生理、免疫等指标的观察

实验以牛的坐骨神经为原料，提取并鉴定了碱性髓鞘蛋白（ＭＢＰ），并以此为免疫原，免疫豚鼠诱发出实验性变态反应性神经炎（ＥＡＮ），发病率达７８％，动物发病后运动迟缓、肢体瘫痪，病理显示外周神经组织淋巴及单核细胞浸润，有髓纤维节段性脱髓鞘，电生理检查显示复合肌电幅度减小，运动神经传导速度减慢，免疫功能检查显示特异及非特异的细胞免疫功能增强，血清中出现特异的抗ＭＢＰ－ＩｇＧ抗体。实验结果提示从牛坐骨神经组织中提取的ＭＢＰ能够在豚鼠身上建立较稳定的、典型的ＥＡＮ模型。     

Th1/Th2型细胞因子在实验性自身免疫性神经炎发病机制中的作用

目的 建立P2多肽诱导的实验性自身免疫性神经炎(EAN)大鼠模型,探讨Th1/Th2型细胞因子在EAN发病机制中的作用.方法 实验组用100 μg或200 μg P257-81多肽加完全弗氏佐剂(FCA)免疫Lewis大鼠,对照组单用FCA免疫,致敏后每日对大鼠进行临床评分,比较高峰期最高评分.致敏第14天测定淋巴结细胞培养液上清干扰素(IFN)-γ、IL-4及IL-10的含量,并进行坐骨神经病理学检查.结果 实验大鼠瘫痪高峰期最高评分P257-81 200 μg组(3.6±0.3)显著高于100 μg组(2.2±0.6,P＜0.01);P257-81 200 μg组大鼠病程显著长于100 μg组;IFN-γ含量,两组实验大鼠均显著高于对照组[分别为(530.6±91.7)、(806.3±132.4)和(35.0±5.9)pg/ml,均P＜0.01],而P257-81 200 μg组显著高于100 μg组(P＜0.01);IL-4和IL-10含量,P257-81 100 μg组均显著高于对照组(均P＜0.01),P257-81 200 μg组显著低于对照组(P＜0.05,P＜0.01);坐骨神经病理可见EAN急性期以炎性细胞浸润为主,P257-81 200 μg组慢性期无炎性细胞浸润,而表现为多发性局灶性脱髓鞘和神经纤维崩解未恢复.结论 EAN临床表现随致敏原P257-81多肽剂量增加而加重;在EAN急性期,IFN-γ水平与EAN临床表现大致平行;EAN疾病具有自限性可能与IL-4和IL-10水平增高有关,而疾病迁延可能与IL-4和IL-10水平降低有关.     

实验性自身免疫性神经炎相关细胞的免疫机制

目的 建立P2或P0多肽诱导的实验性自身免疫性神经炎（EAN）大鼠模型，确定诱导EAN的优选抗原和剂量，探讨EAN相关细胞免疫机制。方法 实验组用P2 57-81或P0 180-190多肽加完全弗氏佐剂（FCA）免疫Lewis大鼠，对照组单用FCA免疫，致敏后每日对大鼠进行临床评分，比较高峰期最大评分，致敏第14天进行淋巴细胞增殖试验，测定CD4^＋T／淋巴结单个核细胞（MNC）和CD4^＋CD25^＋T／CD4^＋T细胞百分比，并进行坐骨神经病理检查。结果实验大鼠瘫痪高峰期最大评分，P2 57-81200μg组显著高于P2 57-81 100μg组和P0 180-199 200μg组（均P〈0．01），P2 57-81 100μg组与P0 180-199 200μg组差异无统计学意义；P2 57-81 100μg组和P2 57-81 200μg组对P2 27-81多肽刺激反应性显著高于对照组（均P〈0．01），P0 180-199 200μg组对P0 180-199多肽刺激反应性显著高于对照组（P〈0．01），P2 57-81 100μg组和P0 180-199 200μg组对相应致敏多肽刺激反应性显著低于P2 57-81 200μg组（均P〈0．05）；CD4^＋T／淋巴结MNC百分比在各组间差异无统计学意义；CD4^＋CD25^＋T／CD4^＋T细胞百分比，P2 57-81 200μg组显著低于P2 57-81 100μg组、P0 180-199 200μg组和对照组（均P〈0．01），P2 57-81 100μg组和P0 2180-199 200μg组显著低于对照组（均P〈0．01），P0 180-199 200μg组显著低于P2 57-81 100μg组（P〈0．01）；EAN急性期坐骨神经以炎性细胞浸润为主，P257-81 200μg组重于其他实验组（均P〈0．01），P257-81 200μg组慢性期无炎性细胞浸润，而表现多发性局灶性脱髓鞘和神经纤维崩解未恢复。结论 200μgP257-81多肽是诱导EAN的优选抗原，EAN致病与CD4^＋T细胞数量无关，而与致病性T细胞活性增强及CD4^＋CD25^＋T细胞减少有关。