HSS促进人肝癌细胞凋亡的研究

目的：研究肝刺激物（hepatic stimulator substance,HSS)对人肝癌细胞凋亡的影响。方法：用无血清培养人肝癌细胞诱导典型的细胞凋亡，以此为模型应用流式细胞术及流式细胞免疫荧光技术，检测HSS作用不同时间后，对无血清培养人肝癌细胞诱导凋亡比率的影响，并观察HSS对常规培养人肝癌细胞的P53蛋白表达变化的影响。结果：HSS作用于无血清培养的人肝癌细胞，细胞凋亡比率随时间延长而增加；HSS作用于常规培养的人肝癌细胞，P53蛋白的表达随时间延长而减弱。结论：HSS对无血清培养人肝癌细胞凋亡有促进作用。     

无血清培养人肝癌细胞增生率的变化和bFGF在细胞中的表达

采用无血清培养体系 ,研究肿瘤细胞自分泌调控机制。将人肝癌细胞培养在无血清无外源分裂因子培养基中 ,采用细胞原位计数法和免疫组织化学染色法 ,观察不同时相人肝癌细胞增生率的变化以及碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的表达情况。结果 :人肝癌细胞生长良好 ,其增生速度与其分泌的bFGF量成正比。提示 :肝癌细胞在无外源生长因子的条件下通过分泌bFGF ,以自分泌和旁分泌的方式作用于自身和相邻细胞 ,促进细胞生长和增生。     

抗癌药莪棱舌草Ⅰ号诱导人肝癌细胞凋亡的研究

用流式细胞光度术检测细胞凋亡 ,运用细胞化学方法检测凋亡相关基因蛋白的表达 ,以及用Westernblot ting分析研究抗癌药莪棱舌草Ⅰ号对人肝癌细胞 (772 1细胞 )凋亡的诱导作用。结果表明药物能够诱导 772 1细胞发生凋亡 ,凋亡率可达 4 0 % ;药物作用可以使细胞中凋亡抑制基因bc1 2表达减少 ,凋亡促进基因Bax表达增加。提示诱导肿瘤细胞凋亡可能是莪棱舌草Ⅰ号抑制肝癌细胞的机制之一     

软脂酸诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡

目的探讨软脂酸(PA)对肝细胞的损害作用及其机制.方法采用人肝癌细胞系HepG2细胞为研究对象,观察PA对细胞生存力的影响.用Trypan blue法检测细胞死亡率;流式细胞记数仪检测细胞周期;AnnexinV和碘化丙啶双重染色定量检测早期凋亡及Bcl-2/Bax的表达.结果在人HepG2细胞系中PA诱导了时间相关性细胞死亡和剂量依赖性的细胞生存能力下降;PA诱导了HepG2细胞随处理时间而增加的早期凋亡,PA处理后HepG2细胞中Bcl-2/Bax的比值下降.结论PA能诱导肝细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2/Bax比值有关.     

重组人转化生长因子β1诱导人肝癌细胞SMMC—7721凋亡

用不同剂量的rhTGF－β1与人肝癌细胞SMMC－7721共同繁育不同时间后,用荧光显微镜进行形态学观察;提取细胞DNA经琼脂糖凝胶电泳分析电泳条带;用流式细胞仪分析细胞周期变化;用免疫组化法检测bcl－2、c－myc基因表达的变化。结果显示：细胞经rhTGF－β1作用后体积缩小、核染色质固缩或成碎片状;细胞DNA电泳呈典型的“阶梯状”条带;细胞周期分析显示rhTGF－β1先使SMMC－7721细胞停滞在G0／G1期,继而诱发细胞产生凋亡;免疫组化检测发现rhTGF－β1可下调bcl－2和c－myc蛋白的表达。研究表明：rhTGF－β1诱导人肝癌细胞凋亡与G0／G1期阻滞密切相关;bcl－2、c－myc基因产物的下调在rhTGF－β1诱导的细胞凋亡过程中可能起重要的调控作用。     

康莱特促进肝癌细胞凋亡相关分子的研究进展

近些年来，随着肿瘤细胞生物学和分子生物学的深入研究，人们已经认识到肿瘤的发生、发展不仅是细胞增殖失调、分化异常的结果，同时也是细胞凋亡异常的疾病。细胞凋亡不仅在肿瘤的发生、发展过程中起着重要作用，而且在肿瘤的治疗中也有重要的意义。因而诱导肿瘤细胞凋亡已成为当今研究治疗肿瘤的新靶点。     

丹皮酚诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制探讨

目的:探讨丹皮酚诱导人肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡作用及其分子机制。方法:噻唑蓝(MTT)法检测丹皮酚的增殖抑制作用;Hoechst-33258染色法、DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡;逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)法检测抑癌基因PTEN、致癌基因Akt mRNA表达水平。结果:丹皮酚在3.13~200.00 mg.L-1剂量之间均能抑制SMMC-7721的增殖;丹皮酚处理SMMC-7721后,光镜下可见明显的凋亡细胞;Hoches-33258染色、DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征;RT-PCR检测示丹皮酚可使PTEN mRNA表达升高,Akt1、Akt2 mRNA表达下降。结论:丹皮酚能显著抑制SMMC-7721增殖,诱导细胞凋亡,其作用可能是通过抑制PI3K通路来实现的。     

青蒿油诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 研究青蒿油是否能诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡。方法 用青蒿油作用于SMMC-7721细胞进行研究,以羟基喜树碱作为阳性对照。生理盐水作为阴性对照,采用Giemsa’s染色法、透射电镜检测细胞形态的改变、流式细胞仪检测细胞凋亡率及琼脂糖电泳检测DNA图谱。结果 100μg／ml青蒿油作用于肝癌细胞24h后,可见典型的细胞凋亡形态学改变即胞浆固缩、核染色质断裂、出现凋亡小体、DNA电泳呈梯形条带及流式细胞仪检测出现亚G1峰等。结论 青蒿油有诱导肝癌细胞凋亡的作用。     

甘草总黄酮诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的：观察甘草总黄酮是否能诱导人肝癌细胞株BEL-7404凋亡,探其作为肿瘤化学预防药物的可能性。方法：体外培养人肝癌细胞株BEL-7404,并用MTT法检测甘草总黄酮对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期,电子显微镜观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳检测DNA图谱的变化。结果：甘草总黄酮能显著地抑制人肝癌细胞株的生长,并且具有时间和计量的依赖性,发生作用后细胞生长有明显的凋亡特征性改变。流式细胞仪检测出现亚G1峰及DNA电泳呈梯形条带等。结论：甘草总黄酮具有抗增殖和诱导人肝癌细胞株BEL-7404发生凋亡的作用,并可导致细胞周期停滞于G1／M期,具有潜在的抗肿瘤价值,值得进一步研究。     

10羟基喜树碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其机制的初步研究

目的 :研究 10 羟基喜树碱 (10 HCPT)诱导人肝癌细胞凋亡的作用。方法 :用 10 HCPT以不同终浓度、不同作用时间诱导SMMC 772 1人肝癌细胞。分别以倒置相差显微镜、电镜、荧光显微镜观察其形态学改变 ,提取细胞内小分子DNA进行琼脂糖凝胶电泳 ,并对这些细胞的P5 3蛋白进行免疫组织化学染色。结果 :当 10 HCPT终浓度 >2 .0 μmol·L-1时 ,部分细胞可见典型的凋亡特征 :核固缩、凋亡小体、梯状电泳带。随着 10 HCPT浓度或作用时间增加 ,凋亡率逐渐升高。各组细胞P5 3蛋白免疫组化染色均为阴性。结论 :10 HCPT可诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,其作用效果呈剂量、时间依赖性     

肝刺激因子对人肝癌细胞EGFR/DNA表达的影响

目的检测肝刺激因子(HSS)对人肝癌细胞EGFR/DNA表达的影响.方法双参数流式细胞免疫荧光技术检测肝癌细胞EGFR/DNA的表达.结果 HSS下调肝癌细胞DNA表达,随时间延长下调程度逐渐增加,至24 h时DNA表达显著下降(P<0.05);HSS迅速下调EGFR表达,作用12 h即呈现显著差异(P<0.05).结论 EGFR/DNA表达的变化可能是HSS抑制肝癌细胞生长的原因之一.     

肝刺激因子对人肝癌细胞EGFR/DNA表达的影响

目的检测肝刺激因子 (HSS)对人肝癌细胞EGFR/DNA表达的影响。方法双参数流式细胞免疫荧光技术检测肝癌细胞EGFR/DNA的表达。结果HSS下调肝癌细胞DNA表达 ,随时间延长下调程度逐渐增加 ,至 2 4h时DNA表达显著下降(P <0 .0 5 ) ;HSS迅速下调EGFR表达 ,作用 12h即呈现显著差异 (P <0 .0 5 )。结论EGFR/DNA表达的变化可能是HSS抑制肝癌细胞生长的原因之一     

聚丙烯酰胺凝胶电泳部分纯化新生牛肝再生刺激因子

利用新生牛肝脏，采用改良Labrecque法提取肝再生刺激因子（HSS），并应用非解离聚丙烯酰胺凝胶电泳对其进行纯化，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证实其分子量约为15000道尔顿，经过弛化，其杂蛋白含量降低近950倍。     

人胎肝再生刺激因子治疗肝硬化的初步观察

采用改良Labrecque法，从人胎肝提取肝再生刺激因子（HSS），并运用于治疗肝硬化病人（15例），并设对照组（15例）予以比较。结果：治疗组病例在自觉症状、体征及生化指标（r-球蛋白、A/G比值）等方面的改善明显优于对照组。并对HSS的制备及应用作了介绍。     

人胎肝细胞生长刺激物质的分离纯化及活性测定

从人胎肝组织纯化肝细胞生长刺激物质（ｈＨＳＳ），经过匀浆、热处理、乙醇沉淀、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５凝胶过滤，聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳及ＩＳＣＯＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ转移浓缩电泳等步骤，分离出具有ＨＳＳ活性的蛋白质。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳显示５３ＫＤ与１８ＫＤ两条带。     

鲨肝刺激物质对四氧嘧啶诱发的小鼠糖尿病的保护作用

目的：研究鲨肝刺激物质对四氧嘧啶诱发的小鼠糖尿病的保护作用。方法：尾静脉注射四氧嘧啶造小鼠糖尿病模型,观察鲨肝刺激物质对糖尿病小鼠糖代谢(空腹血糖,糖化血红蛋白)、脂代谢(甘油三酯,胆固醇,游离脂肪酸)、抗氧化(超氧化物歧化酶,丙二醛)及胰岛损伤程度的影响。结果：鲨肝刺激物质显著降低糖尿病小鼠空腹血糖、糖化血红蛋白、甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸和丙二醛含量,提高超氧化物歧化酶活性,减轻四氧嘧啶对胰岛β细胞的损伤。结论：鲨肝刺激物质对四氧嘧啶诱发的小鼠糖尿病具有显著的保护作用。     

C2-神经酰胺诱导肝癌细胞凋亡

目的 观察无血清条件下神经酰胺对人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用。方法 采用AO-EB荧光染色、流式细胞术DNA倍体分析和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果 终浓度10μmol/L的C2-神经酰胺作用24h，可诱导无血清培养的SMMC-7721细胞发生凋亡，AO-EB染色可见典型的细胞凋亡表现，细胞核固缩、浓染、裂解，细胞质芽突脱落成为凋亡小体。经流式细胞仪检测可见典型的亚二倍体峰。DNA凝胶电泳呈现典型的180-200bp的DNA梯状条带。结论 C2-神经酰胺可诱导SMMC-7721细胞凋亡。     

肝细胞刺激因子对环磷酰胺致小鼠肝细胞损伤的保护作用

目的 研究环磷酰胺(CTX)对肝细胞的损伤及肝细胞刺激因子(HSS)对该损伤的保护作用。方法 应用原代小鼠肝细胞混悬培养，检测肝细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性和肝细胞谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量变化。结果 CTX可使LDH漏出增多，同时肝细胞GSH含量减少，MDA含量增加，HSS可部分逆转上述变化。结论 CTX可致肝细胞损伤，HSS降低肝细胞MDA含量可能是其保肝机制之一。     

褪黑素对小鼠肝癌细胞凋亡及自然杀伤细胞活性的影响

目的 探讨褪黑素(MLT)在体内对H22肝癌细胞凋亡及免疫调节作用的影响及其机制。方法 应用免疫组织化学染色方法及原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)对Bc1-2、Bax的表达及凋亡细胞进行检酗，MTT比色法检测脾细胞NK杀伤活性。结果 实验发现MLT治疗组、预防组及5-Fu组Bcl-2和Bax的表达及凋亡细胞数明显高于生理盐水组(P＜0．01)。Bax／Bcl-2比例在MLT预防组最大。NK杀伤活性在MLT治疗组、预防组较其它组明显增高(P＜0．05)。结论 MLT在体内有促进肿瘤细胞凋亡的作用，且可使NK杀伤活性增高，推测Bcl-2、Bax和机体的免疫系统参与了褪黑素的抗肿瘤作用。