高浓度葡萄糖对人肾间质成纤维细胞增殖及PAI-1基因表达的影响

目的：探讨高糖环境下成纤维细胞的增殖情况以及I型纤溶酶原激活物抑制物（PAI－1）在介导肾小管一间质损伤过程中的作用。方法：采用MTT方法分别检测正常糖浓度和高糖浓度下细胞的增殖，RT－PCR方法观察PAI－1mRNA的表达。同时将细胞培养于25mmol/L甘露醇中，观察高糖中渗透压所起的作用。结果：培养24h后，高糖以剂量依赖形式抑制细胞增殖，与正常对照组相比，高糖可以增加PAI－1的表达，甘露醇也抑制细胞增殖，同时对PAI－1的表达产生作用。结论：高糖可抑制成纤维细胞增殖，刺激PAI－1的表达。PAI－1在糖尿病肾病肾小管一间质纤维化过程中，可能具有主要的介导作用。     

PAI-1在糖尿病肾病患者中的变化

目的 探讨2型糖尿病（T2DM）患者血浆纤溶酶原激活物抑制物（PAI-1）和组织型纤溶酶原激活物（t-PA）活性水平的变化及其与糖尿病肾病（DN）的关系.方法 选择133例T2DM患者,根据尿蛋白排泄率（UAER）分为无DN组67例、DN微量白蛋白尿组51例、DN临床蛋白尿组15例,正常对照组27例.测定其血浆t-PA、PAI-1的活性水平.结果 T2DM各组患者血浆PAI-1水平均显著高于正常对照组,且随着UAER的增高而递增（P＜0.05,P＜0.01）;DN患者血浆PAI-1活性与UAER、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、空腹胰岛素（FINS）、胆固醇（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、甘油三酯（TC）、体重指数（BMI）呈显著正相关;t-PA活性在各组间差异无显著性.结论 DN患者血浆PAI-1活性增高;胰岛素抵抗、高TG、高LDL、高TC血症及肥胖等因素可能与PAI-1活性增高有关.     

氯沙坦对高糖诱导大鼠肾近端小管上皮细胞纤溶酶原激活物及其抑制物表达的影响

目的 研究高糖对正常大鼠肾近端小管上皮细胞纤溶酶原激活物(tPA和uPA)及其抑制物-1(PAI-1)表达的影响,并探讨血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂氯沙坦对其改善作用.方法 培养大鼠肾近端小管上皮细胞,并分组为正常对照组、甘露醇组(5 mmol/L D-葡萄糖 25 mmol/L 甘露醇)、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)、氯沙坦组(10-3 mmol/L氯沙坦)、高糖 氯沙坦组(30 mmol/L D-葡萄糖 10-3 mmol/L氯沙坦).RT-PCR法检测各组细胞tPA、uPA及PAI-1 mRNA表达. 结果与正常对照组比较,高糖组肾小管上皮细胞tPA和uPA mRNA表达下降(P＜0.01), PAI-1 mRNA表达增加(P＜0.01);氯沙坦可部分逆转高糖的作用,高糖加氯沙坦组tPA、uPA表达分别是高糖组的2.06倍、1.69倍(P＜0.01),PAI-1表达为高糖组的44% (P＜0.01). 结论高糖可使肾近端小管上皮细胞PA/PAI-1 mRNA异常表达, 氯沙坦可以在肾小管中通过维持PA/ PAI-1的平衡,对糖尿病肾病防治起一定的作用.     

橙皮苷对IgA肾病大鼠肾脏组织中PAI-1蛋白表达的影响

目的 探讨橙皮苷对IgA肾病大鼠纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)表达的影响.方法 60只雄性SD大鼠,随机分为正常组,模型组和橙皮苷治疗组,每组20只,模型建立成功后给予相应药物治疗,于治疗4、8周后处死大鼠各半,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),肾脏病理学,同时半定量PCR和Western Blot测定PAI-1蛋白和mRNA表达水平.结果 造模期间模型组、治疗组与正常组相比,大鼠第6周末开始出现镜下血尿(P<0.05),橙皮苷治疗后,有一定下降(P<0.05);与正常组相比,模型组血清24 h UP、Scr、BUN、IL-2和PAF明显升高(P<0.05),治疗组治疗4周后明显下降(P<0.05),治疗8周后进一步降低;PLT和PT在治疗前后没有明显变化;与正常组相比,模型组APTT明显降低(P<0.05),治疗4周后明显升高(P<0.05),治疗8周后进一步升高;光镜下正常组大鼠肾小球形态正常,模型组肾小球系膜细胞和系膜基质中重度增生,橙皮苷治疗后肾小球系膜细胞和系膜基质增生得到明显缓解;与正常组相比,模型组PAI-1蛋白和mRNA表达明显降低,橙皮苷治疗4周后明显升高(P<0.05),治疗8周后基本和治疗4周后一致.结论 橙皮苷可明显减少血尿、减轻病理改变,改善肾功能,其机制可能是橙皮苷通过增加PAI-1的产生而发挥作用的.     

螺内酯对大鼠肾间质纤维化的保护作用

目的观察螺内酯对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠的肾皮质纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)表达介导的肾间质纤维化的作用。方法UUO大鼠给予螺内酯20mg.kg-1.d-1灌胃,用RT-PCR方法检测术后7、14、21dPAI-1mRNA的表达。结果与假手术组相比,UUO组及药物治疗组的PAI-1mRNA表达水平均增高(P<0.05),但治疗组低于UUO组(P<0.05)。结论螺内酯可通过下调PAI-1减轻UUO术后肾组织间质纤维化。     

高糖对人近端肾小管上皮细胞TGF-β1、PAI-1基因表达的影响

目的观察高糖（HG）对人近端肾小管上皮细胞（HKC）分泌转化生长因子β1（TGF-β1）和纤溶酶原激活物抑制因子1（PAI-1）mRNA表达水平的影响。方法采用数字表法随机分为低糖组（5.5mmol／L,LG组）和HG组（25mmol／L）,分别培养于HKC中,于培养0、24和48h时收获细胞,并采用RT-PCR法检测两组HKC分泌TGF-β1和PAI-1 mRNA的表达水平。结果HG组培养24h和48h时的HKC分泌TGF-β1和PAI-1 mRNA表达水平均较LG组明显升高（均P〈0.01）。且两组培养48h时的上述指标均较24h时明显升高（均P〈0.O01）;经Spearman相关分析显示,HKC分泌PAI-1和TGF-β1 mRNA的表达水平之间存在正相关性（r=0.802,P〈0.01）。结论HG可刺激HKC分泌TGF-β1和PAI-1 mRNA表达水平的增高。     

螺内酯对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞PAI-1表达的抑制作用

目的 观察醛固酮拮抗剂--螺内酯对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)表达的影响.方法 采用正常糖(NG)、高糖(HG)及HG+不同浓度螺内酯体外培养大鼠系膜细胞.以RT-PCR检测PAI-1、醛固酮受体(MR)和保护其配体特异性的11β-羟类固醇脱氢酶2(11β-HSD2)的mRNA表达,采用ELISA检测培养细胞上清中PAI-1蛋白的浓度.结果肾小球系膜细胞表达MR和11β-HSD2 mRNA;高糖刺激系膜细胞后PAI-1 mRNA表达明显升高,培养上清液蛋白浓度增加,加入螺内酯干预后系膜细胞PAI-1 mRNA和蛋白表达明显下降,且随螺内酯浓度增大,作用更明显.结论 螺内酯可能通过降低高糖对系膜细胞PAI-1表达的刺激作用而发挥其肾脏保护作用.     

高血压性脑出血患者血浆t-PA和PAI-1动态变化及临床意义

目的　探讨高血压性脑出血 (HCH)患者血浆 t-PA和 PAI-1动态变化 ,寻找更有效的治疗方法。方法　采用发色底物法对 41例 HCH患者血浆 t-PA和 PAI-1活性动态监测 ,并与健康人相比较。结果　 HCH患者发病第 1d,t-PA活性较健康人明显低 ,以后开始升高 ,第 10 d达高峰 ,达健康人水平 ,而后又呈降低倾向。至 2 1d时明显低于健康人 ;PAI-1活性与之大致相反。结论　HCH患者发病后血浆纤溶活性呈规律性变化 ,2周后其活性呈降低倾向 ,为促进血肿吸收 ,可考虑使用缓和的纤溶激活剂     

妊娠高血压疾病患者t-PA和PAI-1水平变化及临床意义

目的探讨妊娠高血压疾病患者血浆中组织型纤溶酶原激活物（t-PA）及纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）水平变化与妊娠高血压疾病发病的关系及其临床意义。方法应用酶联免疫吸附法（ELISA）,分别检测非妊娠组（40例）、正常妊娠组（40例）及妊娠高血压疾病组（50例）血浆中t-PA和PAI-1水平。结果与非妊娠组比较,正常妊娠组和妊娠高血压疾病组t-PA、PAI-1均显著增高;与正常妊娠组比较,妊娠高血压疾病组t-PA无显著性改变,随病情变化不明显;与正常妊娠组比较,妊娠高血压疾病组PAI-1显著增高,并随病情加重而呈递增趋势。结论 孕妇血浆PAI-1水平是检测妊娠高血压疾病病情进展的重要指标,其水平变化对指导妊娠高血压疾病诊断及治疗有重要意义。     

益肾化浊注射液对高糖培养肾小球系膜细胞表达FN及PAI-1 mRNA的影响

观察高糖对体外培养肾小球系膜细胞表达纤维连接蛋自 (FN)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI 1)mRNA以及细胞增殖、分泌FN的影响 ,同时观察益肾化浊注射液对高糖引起上述各指标变化的影响。采用体外培养肾小球系膜细胞方法 ,用高糖及益肾化浊注射液作为刺激物 ,四甲基偶氮唑盐微量酶比色法 (MTT)检测细胞增殖 ,酶联免疫吸附测定法 (ELISA)测定细胞上清FN含量 ,Northem杂交检测FN、PAI 1mRNA表达水平。结果表明 ,高糖可促进分泌FN ,上调PAI 1mRNA的表达 ,明显抑制系膜细胞的增殖 ;而益肾化浊注射液可缓解高糖所引起的上述指标的改变 ,并可下调FNmRNA的表达。     

高浓度葡萄糖对培养血管内皮细胞活力和黏附分子表达的影响

目的探讨高浓度葡萄糖作用于脐静脉内皮细胞后,对脐静脉血管内皮细胞系的活力和白细胞黏附分子〔血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)〕表达的影响,为阐明高血糖在糖尿病血管病变的早期发病中作用与机制提供依据。方法采用胎盘蓝染色法及流式细胞仪检测细胞活力和黏附分子表达。结果高浓度葡萄糖可使内皮细胞的死亡率增加,ICAM-1表达显著上调,但VCAM-1表达无明显变化。结论减少高糖诱导的ICAM-1、VCAM-1表达增加,对减少糖尿病患者慢性并发症的发生概率是一条有益的途径。     

脂联素对高糖环境下人心肌细胞增生及caspase-3、T-钙黏蛋白表达的影响

目的研究脂联素（ADPN）对高糖环境下人心肌细胞（HCM）的增生及caspase-3、钙黏蛋白（T-cadherin）表达的影响。 方法①分为3组：对照组、高糖组、高糖＋脂联素组;②分别干预24h、48h、72h后用MTT法测定细胞增生,ELISA法测定上清液中caspase-3的含量,荧光定量PCR法测定T-钙黏蛋白的表达。 结果高糖的持续作用可以抑制细胞增生,增加caspase-3的表达;加入脂联素后促进细胞增生,同时减少caspase-3的表达。T-钙黏蛋白在高糖组表达较对照组减少,脂联素组表达较高糖组增加,且呈时间依赖性。 结论脂联素可以纠正高糖诱导的人心肌细胞凋亡,通过上调T-钙黏蛋白的表达发挥对心肌细胞的保护作用。     

高三尖杉酯碱对人眼球后成纤维细胞增殖的影响

为探讨高三尖杉酯碱对人眼球后成纤维细胞 (HROF) )增殖的影响 ,采用体外培养人眼球后成纤维细胞 ,用 MTT比色法测定人眼球后成纤维细胞的增殖程度 ,并观察高三尖杉酯碱对 HROFb生长和增殖的影响。结果显示 :MTT比色法能精确反映 HROFb的增殖程度 ,所测光吸收值与细胞数目成正相关 (r=0 .996 ,P<0 .0 0 1 )。高三尖杉酯碱可抑制 HROFb的增殖 ,细胞抑制率与高三尖杉酯碱浓度呈显著正相关 (r=0 .6 932 ,P<0 .0 0 1 )     

高浓度葡萄糖对小鼠表皮干细胞增殖的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖对小鼠表皮干细胞增殖的影响.方法 利用Ⅳ型胶原的快速黏附法分离培养小鼠表皮干细胞,观察其形态学;通过免疫荧光法检测表皮干细胞标志物β1整合素和K19来鉴定表皮干细胞;将小鼠表皮干细胞分别放在葡萄糖浓度为5.6、15和30mmol/L的培养基里培养;MTT法检测细胞增殖情况,免疫印迹法检测细胞凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达水平.结果 体外培养的小鼠表皮干细胞呈克隆样生长,增殖速度较快,细胞形态呈铺路石样,边缘细胞呈梭形,细胞核质比较大;免疫荧光法检测到培养的小鼠表皮干细胞β1整合素和K19呈阳性表达且阳性表达率均为100％;MTT法检测到与对照组（5.6mmol/L浓度葡萄糖）相比,15mmol/L浓度葡萄糖刺激72h后检测到细胞增殖速度无明显改变,而30mmol/L浓度葡萄糖刺激24、48和72h后检测到细胞增殖速度降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.Western blot法检测到与对照组相比,30mmol/L浓度葡萄糖刺激48h后凋亡蛋白Bax的蛋白表达量明显增加而抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）.结论 本研究结果表明较高浓度（30mmol/L）葡萄糖可以明显抑制小鼠表皮干细胞的增殖,从干细胞角度进一步为糖尿病创面难愈的原因提供了实验室依据.     

挤压伤大鼠血清促心脏成纤维细胞增殖作用

【目的】观察挤压伤大鼠血清对培养的心脏成纤维细胞的增殖作用。【方法】培养1～3d龄SD大鼠心脏成纤维细胞,观察挤压伤大鼠血清和正常大鼠血清对培养的心脏成纤维细胞数量、蛋白质含量、犤3H犦-胸腺嘧啶核苷(犤3H犦-TdR)和犤3H犦-脯氨酸(犤3H犦-Proline)掺入的影响。【结果】与正常大鼠血清组比较,挤压伤大鼠血清使培养的心脏成纤维细胞的数量(×109/L)、总蛋白含量(μg/2mL)分别由0.33±0.01、163.3±24.1增加至0.50±0.02和324.6±52.2,犤3H犦-Proline和犤3H犦-TdR掺入后测得的每分钟脉冲数则分别由1211.7±140.7、1104.8±113.9上升至2000.7±96.2和2066.2±223.5。【结论】肢体挤压伤大鼠血清可促进培养的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成。     

JNK1基因沉默对肺成纤维细胞增殖的影响

目的 研究C-Jun氨基末端激酶1(JNK1)基因表达沉默对肺成纤维细胞MRC-5增殖的影响.方法 设计针对JNK1基因的小RNA分子(siRNA),以脂质体转染法将双链siRNA转入MRC-5细胞后,采用流式细胞术检测最佳转染浓度,RT-PCR检测JNK1 mRNA表达变化,Western blot检测总JNK、磷酸化JNK(P-JNK)蛋白表达,用CCK-8法检测siRNA对MRC-5细胞增殖的影响.结果 siRNA转染MRC-5细胞的最佳浓度为50nmol/L;设计的两个靶位点siRNA,均可有效降低JNK1 mRNA表达,其中siRNA1抑制效果较siRNA2明显;siRNA1降低总JNK及P-JNK蛋白表达,有效抑制MRC-5细胞的增殖.结论 体外合成的siRNA可降低MRC-5细胞中JNK1基因的表达,降低JNK磷酸化水平,明显抑制细胞增殖.     

高浓度葡萄糖对晶状体上皮细胞形态及细胞周期的影响

目的：观察高浓度葡萄糖状态对培养的兔晶状体上皮细胞RNA、DNA、超微结构的影响，以探讨糖尿病性白内障的发病机理。方法：高浓度葡萄糖（4.5g/L）作用于培养的兔晶体上皮细胞24、72、144h后采用流式细胞仪检测晶体上皮细胞RNA、DNA、细胞周期、增殖指数。且以倒置显微镜、扫描电镜、透射电镜进行晶体上皮细胞形态学的研究。结果：高浓度葡萄糖作用于培养兔晶体上皮细胞24h各指标无明显变化，72hRNA量、S期细胞增加，G2/M期细胞减少，144G2/M期细胞增加，但分裂指数并未相应提高；形态学上可见实验组细胞微绒毛及细丝丢失，细胞膜破裂，细胞染色质分布不均，细胞器减少、肿胀，髓样体出现。结论：高浓度葡萄糖（4.5g/L）能诱导晶体上皮细胞进入有丝分裂，但又阻碍有丝分裂的完成；同时对细胞膜、细胞核、细胞器均产生有害影响，使晶体上皮细胞的形态结构发生改变，细胞更趋老化，为糖尿病性白内障的发生奠定了基础。     

AGEs与葡萄糖浓度对血管内皮细胞增生的影响

为研究非酶促糖化终末产物(AGEs)和不同浓度葡萄糖对血管内皮细胞增生的影响,用氚标记胸腺嘧啶(~3H-TdR)掺入法,测定不同浓度葡萄糖、AGEs以及抗氧化剂(维生素E)对血管内皮细胞增生的影响。结果:11mmol/L葡萄糖加AGEs(5 mg/L)、30 mmol/L葡萄糖、11 mmol/L葡萄糖+AGEs+维生素E组的血管内皮细胞的2 h~3H-TdR掺入量分别为对照组的4.69倍(P<0.01)、2.15倍(P<0.05)和1.46倍(P<0.05)。提示:高糖和AGEs均能直接刺激血管内皮细胞增生,高糖及AGEs同时存在时更为明显,而抗氧化剂维生素E则抑制内皮细胞增生。