甲基化敏感性高分辨率熔解曲线检测结直肠癌组织及外周血MGMT基因甲基化

目的用甲基化敏感性高分辨率熔解曲线法(MS-HRM)定量检测结直肠癌组织及外周血中MGMT基因甲基化水平,并结合结直肠癌病理参数分析探讨MGMT基因甲基化的临床意义。方法以33例结直肠癌组织和配对的正常黏膜组织以及其中16例患者的外周血为研究对象,用MS-HRM进行MGMT基因甲基化检测,分析MGMT基因甲基化与结直肠癌临床病理特征的关系和MS-HRM的方法特点。结果 MS-HRM从33例结直肠癌患者的癌组织中检测到12例(36.4%)MGMT基因启动子不同程度的甲基化(甲基化5%1例,5%~10%3例,10%~25%3例,25%~50%2例,50%~75%3例),对应的正常结直肠组织中仅检测到甲基化5%1例(3.0%)。16例外周血中检测到甲基化小于5%3例(18.8%)。MGMT基因甲基化与患者的年龄、性别、肿瘤部位无相关性(P0.05),但与结直肠癌的病理分期和分化程度的相关性有统计学意义(P0.05)。结论 MS-HRM可定量检测结直肠癌MGMT甲基化水平。MGMT基因甲基化与结直肠癌的进展评估有关。     

粪便DNA甲基化分析在结直肠癌诊断中的应用价值

目的研究人粪便中分泌型卷曲相关蛋白2（SFRP2）、增生性息肉蛋白（HPPI）和O^6．甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因甲基化状态及其用于结直肠癌（CRC）筛查的可行性。方法从52例CRC患者、35例结直肠良性疾病患者和24名正常对照者粪便标本中提取DNA，采用甲基化特异性PCR（MSP）技术分析粪便DNA中SFRP2、HPPI和MGMT基因甲基化状态。结果CRC患者粪便SFRF2、HPP1和MGMT基因甲基化阳性率分别为94．2％、71．2％和48．1％;96.2％的CRC和81．8％的癌前病变患者中至少存在1个基因的过甲基化。1例正常粪便标本SFRP2甲基化阳性。联合3个基因诊断CRC和癌前病变的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为93．7％、77．1％、84．3％和90．2％。结论联合分析SFRP2、HPP1和MGMT基因甲基化是检测CRC及癌前病变的高敏感性方法。检测粪便基因甲基化有望成为CRC无创诊断或高风险人群筛查的一个新途径。     

粪便SDC2基因甲基化检测在结直肠癌辅助诊断中的价值

目的 探讨粪便黏结蛋白聚糖2(SDC2)基因甲基化检测在结直肠癌辅助诊断中的价值。方法选取结直肠癌患者51例（结直肠癌组）、结直肠腺瘤患者22例（腺瘤组）、健康体检者39名（正常对照组）,同时收集所有对象的粪便和血清样本,检测粪便SDC2基因甲基化和血清癌胚抗原（CEA）、糖类抗原19-9(CA19-9)水平;其中有26份粪便样本采用P12全自动样本预处理仪和手工法同时进行样本预处理,比较2种方法预处理后检测结果的相关性。采用Peason相关分析评估2种方法之间的相关性,采用kappa检验分析2种方法的一致性。结果 结直肠癌组粪便SDC2基因甲基化阳性率显著高于腺瘤组和正常对照组（P<0.01）。结直肠癌组粪便SDC2基因甲基化阳性率显著高于血清CEA和CA19-9的阳性率（P<0.01）。结直肠癌Ⅰ～Ⅳ期患者之间粪便SDC2基因甲基化阳性率差异均无统计学意义（P>0.05）。结直肠癌Ⅰ～Ⅲ期患者的粪便SDC2基因甲基化阳性率显著高于血清CEA和CA19-9的阳性率（P<0.01）。ROC曲线分析结果显示,粪便SDC2基因甲基化、血清CEA、CA19-9单项检测...     

血浆Septin9 甲基化检测在结直肠癌中的诊断价值

目的 探讨血浆游离DNA中Septin9 甲基化（mSEPT9) 检测在结直肠癌中的诊断意义。方法 收集2019 年6 ～ 11月在重庆医科大学附属第二医院接受肠镜检查的患者共100 例,包括确诊为结直肠癌的患者45 例,非结直肠癌对照组55 例,对其进行mSEPT9 检测、大便隐血试验（FOBT) 和癌胚蛋白（CEA）检测,评价其在结直肠癌中的应用价值。结果 ① mSEPT9 筛查结直肠癌的敏感度为82.22%（95%CI:70.60% ～ 93.83%）, 明显高于CEA（42.2%, 95%CI:27.22%~57.23%）, 特异度为89.09%（95%CI:80.58%~97.60%）, 高于FOBT（75%, 95%CI:60.98%~89.02%）。②结直肠癌组mSEPT9 阳性率为82.22%（37/45）, 非结直肠癌对照组mSEPT9 阳性率为10.91%（6/55）,结直肠癌组和非结直肠癌组相比,mSEPT9 检测结果差异有统计学意义（χ2=4.917, P<0.05）。③ mSEPT9 检测结果与患者性别、年龄、病例分化程度无相关性（χ2=0.020, 1.142, 1.649, P<0.05）。结论 mSEPT9 检测在结直肠癌诊断中有较高的敏感度和特异度,并且具有无创、采样方便、方法稳定等优势,可以作为临床诊断结直肠癌的辅助手段。     

NSCLC组织中MGMT过甲基化状况与临床病理特征的关系探讨

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中DNA修复酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）过甲基化状况与临床病理特征的关系。方法以2006年3月到2009年7月在河南省胸科医院胸外科手术治疗的77例NSCLC患者作为研究对象,另外选取20例肺良性病变患者作为对照组,采用甲基化特异性PCR（MSP）检测两组病例肺部病变组织中MGMT的甲基化状况。结果研究组有26例出现MGMT基因甲基化,发生率为33.8%,对照组无1例出现MGMT基因甲基化,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）;NSCLC中MGMT过甲基化状态与有吸烟史、有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ期和分化程度为低分化有关,与患者年龄、性别和组织学类型无关。结论 NSCLC组织中的MGMT过甲基化状况可能与肺癌的发生、发展相关。     

MGMT基因启动子甲基化与MGMT蛋白和NF-κB在脑胶质瘤的表达及意义

目的 探讨MGMT和NF-κB在脑胶质瘤中的表达及两者的相关性和MGMT基因启动子甲基化与其蛋白表达的相关性分析.方法 采用免疫组化EnVision法检测MGMT和NF-κB在42例不同级别脑胶质瘤石蜡标本中的表达,运用MSP方法检测MGMT基因启动子甲基化状况.结果 （1）MGMT在低级别组胶质瘤中的表达率为73.7％;在高级别组中其表达率为21.7％.（2） NF-κB在低级别组胶质瘤中的表达率为52.6％,在高级别组中的表达率为60.9％.（3）42例胶质瘤中MGMT基因启动子甲基化发生率为50％,其中MGMT蛋白阳性的胶质瘤,启动子甲基化发生率为26.3％;MGMT蛋白表达阴性的胶质瘤,启动子甲基化发生率为69.6％;MGMT蛋白表达阳性率与其基因启动子甲基化呈负相关.（4）MGMT与NF-κB两者表达无相关性.结论 MGMT蛋白表达随胶质瘤的级别增高而下降,NF-κB与MGMT与胶质瘤级别无相关性.     

MRI不同影像组学模型预测胶质瘤MGMT启动子甲基化状态的研究

目的 探讨MRI的不同影像组学模型预测术前脑胶质瘤O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)启动子甲基化状态的效能.材料与方法 回顾性分析经手术病理证实的114例大脑胶质瘤患者的MRI影像资料,包括T1WI、T2WI、ADC及T1WI增强...     

基于T1WI增强的MR纹理分析评价胶质母细胞瘤MGMT启动子甲基化的研究

目的 本研究主要是分析O⁶-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化状态与胶质母细胞瘤(GBM)磁共振纹理特征的相关性。方法 收集经本院病理诊断为GBM的患者128例,所有患者术前均行磁共振平扫及增强检查。利用3D Slicer软件提取4方面磁共振纹理特征,包括一阶数据、形态和形状、纹理：灰度共生矩阵、纹理：灰度运行长度矩阵。采用χ²检验分析MGMT启动子甲基化与GBM磁共振特征的关系;采用独立样本t检验以及Mann-Whitney U检验,分析MGMT启动子甲基化与磁共振纹理特征的关系。结果 MGMT启动子甲基化GBM与MGMT启动子未甲基化GBM的磁共振纹理特征相比较,有7种磁共振纹理特征差异显著(P<0.05),分别是能量(P=0.033)、熵(P=0.032)、一致性(P=0.030)、自相关(P=0.035)、方差：灰度共生矩阵(P=0.031)、灰度不均匀性(P=0.029)、群集阴影(P=0.032)。结论 MGMT启动子甲基化GBM与MGMT启动子未甲基化GBM的磁共振纹理特征相比较,有7种磁共振纹理特征可以...     

粪便SDC2基因甲基化检测在结直肠癌筛查中的应用价值

目的 探讨粪便硫酸类肝素蛋白多糖2(SDC2)基因甲基化检测在结直肠癌(CRC)筛查中的临床应用价值。方法 通过荧光聚合酶链反应(PCR)法检测在该院胃肠外科或消化内科就诊的96例患者粪便中SDC2基因甲基化情况,并收集其6种血清肿瘤标志物[血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)19-9、CA125、铁蛋白(SF)、细胞角蛋白19片段(CYFRA-21)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)]的联合检测结果及肠镜、病理检查结果,以肠镜及病理检查结果为“金标准”分析比较粪便SDC2基因甲基化与6种血清肿瘤标志物检测对CRC的诊断效能。同时分析粪便SDC2基因甲基化与TNM分期及癌变部位等临床病理特征的关系。结果 根据肠镜或病理检查结果,将96例就诊者分为CRC组(32例)和对照组(64例),CRC组中粪便SDC2基因甲基化检测阳性率为84%(27/32),6种血清肿瘤标志物联合检测阳性率为44%(14/32);对照组中粪便SDC2基因甲基化检测阳性率为3%(2/64),6种血清肿瘤标志物联合检测阳性率为20%(13/64)。粪便SDC2基因甲基化诊断CRC的特异度(97%)、灵敏度(84%...     

3种粪便隐血检测试剂在结直肠癌筛查中的性能评价与比较

目的：探讨检测粪便中血红蛋白（Hb）和转铁蛋白（TF）对诊断消化道出血性疾病及结直肠癌筛查中的临床应用价值。方法分别采用联合免疫法、单克隆抗体法和 Quick chaser 法对有消化道出血性疾病的患者粪便样本进行检测,同时结合患者临床资料,对检测结果的一致性程度进行综合分析,初步评估其临床应用价值。结果联合免疫法、单克隆抗体法和 Quick chaser 法检测血红蛋白的灵敏度分别为0．2、0．4和2μg/mL,单克隆抗体法仅对人的血红蛋白发生反应,联合免疫法和 Quick chaser 法对人和动物的铁蛋白和血红蛋白均发生反应。结论联合免疫法灵敏度高、特异性强,对于诊断消化道出血性疾病及结直肠癌的诊断具有重要的参考价值。     

MGMT基因siRNA质粒载体的构建及鉴定

目的 构建MGMT基因的siRNA（small interfering RNA）质粒载体pRNAT-H1.1/Neo-MGMT siRNA,为进一步研究siRNA对MGMT基因的抑制作用,探讨MGMT在胶质瘤的化疗耐药及逆转胶质瘤细胞耐药表型中的作用奠定基础.方法 针对MGMT的靶序列设计合成二三条shRNA（small hair RNA）的DNA模板单链,同时模板链两端分别设计BamHⅠ和Hind Ⅲ限制酶切位点.退火形成siRNA载体插入片断.用限制性内切酶将pRNAT-H1.1/Neo线性化,T4连接酶将插入片断插入pRNAT-H1.1/Neo中.重组质粒转化大肠杆菌DH5α后培养出阳性克隆,抽提质粒,经酶切、电泳和测序的方法鉴定质粒构建是否成功.结果 设计构建三条针对MGMT基因的siRNA质粒载体,经双酶切,在2%琼脂糖凝胶电泳结果显示：PCR产物大小76bp,产物大小与设计的完全相同.测序结果证明序列正确.结论 成功设计构建了三条针对MGMT基因的siRNA质粒载体,为研究RNA干扰逆转胶质瘤细胞的耐药表型提供了良好的实验材料.     

外周血Septin9基因甲基化和血清CA199联合检测在结直肠癌筛查中的诊断价值

目的 探讨外周血Septin9基因甲基化和血清糖类抗原199(CA199)联合检测在结直肠癌(CRC)筛查中的诊断价值。方法 选取2018年8月至2020年8月云南新昆华医院收治的202例结直肠病变患者为研究对象,其中CRC患者93例(CRC组),结直肠息肉患者109例(结直肠息肉组);同时选择同期体检健康者50例作为对照组。采用实时荧光PCR测定Septin9基因甲基化的情况,化学发光法测定CA199的水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Septin9基因甲基化和CA199对结直肠癌的诊断价值。结果 CRC组外周血Septin9基因甲基化和CA199阳性率显著高于结直肠息肉组和对照组(P<0.05),结直肠息肉组Septin9基因甲基化和CA199阳性率亦高于对照组(P<0.05)。Septin9基因甲基化诊断CRC的灵敏度为89.32%,约登指数为0.681 1,AUC为0.793,均高于CA199检测的结果,但CA199诊断CRC的特异度较外周血Septin9基因甲基化高;二者联合检测的灵敏度、约登指数和AUC均较单项检测高(P<0.05)。治疗后,CRC...     

两种粪便隐血联合检测在消化道出血诊断中的应用

目的 探讨粪便隐血试验化学法（匹拉米洞法）、免疫法（转铁蛋白胶体金法）以及两种方法联合检测在消化道出血性疾病诊断中的临床应用价值.方法 对2012年1月至2012年12月2 910例住院患者粪便隐血试验中查出阳性的590例的临床资料进行回顾性分析,计算两种方法单独应用和联合应用时诊断的灵敏度、特异性、阳性似然比、阴性似然比、阳性预测值和阴性预测值,比较两种方法单独应用和联合应用对消化道出血的诊断价值.结果 590例粪便隐血阳性患者中,消化道出血性疾病448例,非消化道出血疾病142例.化学法隐血试验对消化道出血性疾病诊断的灵敏度、特异性、阳性似然比、阴性似然比、阳性预测值和阴性预测值分别为96.0％、94.6％、17.9、0.04、0.82和0.99.免疫法分别为93.8％、99.2％、115.4、0.06、0.97和0.98.两种方法联合应用时分别为91.3％、99.7％、321.1、0.09、0.99、0.98.结论 匹拉米洞化学法敏感性高,但特异性差.阳性似然比和阳性预测值免疫法高于化学法,两种方法的阴性似然比和阴性预测值接近.总体评价,免疫法优于化学法.两种方法联合应用均为阳性时,对诊断消化道出血的特异性和确证价值最高.两种方法联合检测,能提高对消化道出血的诊断效率,减少误诊.且两种方法都简便易行,成本低廉.     

MGMT基因重组腺病毒载体的构建

目的:构建表达人O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因重组腺病毒载体.方法:提取人肝组织总RNA,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆人肝细胞MGMT基因,将PCR产物连接入pBS-T原核载体,阳性重组子以双酶切及PCR鉴定.将目的基因MGMT片段亚克隆至腺病毒质粒pacAd5 CMVmcsIRES eGFP pA.构建重组腺病毒载体pacAd5 CMVmcs IRES eGFP pA-MGMT.结果:构建了人MGMT基因的重组腺病毒载体.结论:本研究成功构建了含MGMT基因的重组腺病毒载体,为进一步研究耐药基因MGMT在烷化剂治疗中对真核细胞的保护作用提供了有力的工具.     

外周血SEPTIN9基因甲基化检测在结直肠癌诊断中的研究进展

结直肠癌(CRC)是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,早期筛查及诊断至关重要.SEPTIN9基因甲基化(mSEPT9)与CRC发生发展密切相关,外周血mSEPT9检测可指导CRC临床分期,预测CRC术后复发和治疗效果,适合于对易感人群进行CRC筛查.mSEPT9对含有绒毛成分和异型增生的腺瘤、息肉的诊断价值优于未含绒毛成分...     

多模态磁共振技术预测脑胶质瘤MGMT启动子甲基化状态的研究进展

胶质瘤是最常见的原发性中枢神经系统恶性肿瘤。O⁶-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）启动子甲基化是胶质瘤一个重要的分子特征,与烷化剂化疗敏感性、预后、风险分层、肿瘤复发等密切相关。当前仅使用手术标本通过基因检测分析来确定MGMT启动子甲基化状态,这一过程有局限性。MRI是目前应用最广泛的脑肿瘤非侵入性检查方法,近年来已有多种先进磁共振成像技术被用于术前无创性评估MGMT甲基化状态,这将有助于预测治疗反应和预后。本文就近几年化学交换饱和转移成像和酰胺质子转移成像、灌注加权成像（动态磁敏感对比增强成像、动态对比增强灌注成像、动脉自旋标记、基于流入的血管空间占位）、扩散成像（扩散张量成像、扩散峰度成像、体素内不相干运动、限制光谱成像）、磁敏感加权成像、波谱成像等磁共振成像技术预测MGMT甲基化状态的研究进展及MGMT甲基化临床意义进行综述,以期为患者个体化治疗方案的制定提供术前依据。     

粪便SDC2基因甲基化检测联合结肠镜在早期结直肠癌筛查中的意义

目的探讨粪便SDC2基因甲基化检测联合结肠镜在早期结直肠癌(CRC)筛查中的意义。方法选择2018年1月-2019年10月在深圳市宝安区中心医院体检的1 000例体检者作为研究对象,使用试剂盒分别检测粪便SDC2基因甲基化和血浆SEPT9基因甲基化,对两者任一结果为阳性者再行结肠镜检查。比较SDC2和SEPT9基因甲基化检测的阳性率以及两者联合结肠镜对进展性腺瘤和CRC的检出率。结果在1 000例筛查对象中,粪便SDC2基因甲基化检测阳性率明显高于血浆SEPT9基因甲基化〔18.10%(181/1 000)比9.80%(98/1 000)〕,差异有统计学意义(P<0.05);粪便SDC2基因甲基化检测联合结肠镜对进展性腺瘤和CRC的检出率均明显高于血浆SEPT9基因甲基化检测联合结肠镜筛查〔进展性腺瘤检出率:2.50%(25/1 000)比1.00%(10/1 000),CRC检出率:1.50%(15/1 000)比0.50%(5/1 000)〕,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论粪便SDC2基因甲基化检测是一种简单无创的CRC筛查新技术,患者接受程度更高,能够避免大规模肠镜筛查带来的弊端,联合结肠镜检测可作为CRC早期筛查的首选策略。     

结直肠癌基因粪便检测的研究现状

粪便中的肿瘤脱落细胞包含着与结、直肠癌发生发展关系密切的突变基因产物 ,通过对粪便肿瘤脱落细胞的基因检测 ,寻找一种早期诊断并筛选结、直肠癌的新途径具有重要的临床意义。现对结、直肠癌粪便的基因检测现状做一综述。     

分子诊断和粪便隐血试验在结直肠癌诊断中的意义

目的探讨联合检测粪便中肿瘤分子标志物和粪便隐血试验对结直肠癌早期诊断的敏感度和特异度。方法检测68例不同结直肠癌患者的粪便标本的粪便隐血和APC、K—ras及p533种肿瘤相关分子标记物的突变。同时检测43名健康体检者的粪便标本。结果35例癌症患者粪便隐血试验呈现阳性[51％；95％可信区间（95％CI）为37％-64％]。45例标本肿瘤分子标志物发生改变（66％；95％CI为51％-77％）。两种方式检测的一致性较弱（Kappa值为0．023），其联合应用的敏感度为94％（95％CI为83％-97％）；特异度为90％（95％CI为76％-95％）。结论粪便隐血试验和分子诊断联合应用的敏感度高于任何一种单独的非创伤性诊断方式，有利于对结直肠癌患者的早期诊断。     

Septin9基因及甲基化检测在结直肠癌中的研究进展

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)发病率高,致死性强,严重威胁人类健康。Septin9基因与CRC发生密切相关,其在癌组织中呈高度甲基化,是CRC的重要分子特征。检测Septin9基因在患者血浆中的甲基化水平对CRC筛查具有较为理想的效果。该法取样安全、方便,结果准确、稳定,有望取代传统的粪便潜血试验法与结肠镜检法。该文就近年来Septin9基因甲基化在CRC诊断中的研究进展作一综述。