bax加强表达对Raji细胞程序性死亡效应

研究ｂａｘ过量表达对Ｂｕｒｋｉｔｔ淋巴瘤细胞株细胞程序性死亡的效应及其机理。方法；亚克隆构建可以过量表达ｂａｘ ａ的真核表达载体，通过脂 转染法导入Ｒａｊｉ细胞株中。ＰＣＲ及免疫荧光定量鉴定ｂａｘ ａ在Ｒａｊｉ细胞株中的表达；流式细胞仪检测凋亡率。     

PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2表达下调

目的 探讨PTEN基因对人脑胶质瘤SHG－44细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达的影响,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法PTEN基因体外转染SHG－44细胞,筛选阳性细胞克隆,以原位杂、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况;采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况;以免疫荧光法检测bcl-2基因的表达。结果 PTEN基因转染的SHG－44细胞有PTEN蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞质浓缩、核破裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现;流式细胞仪显示细胞周期从G1期到S期发生抑制,并且在G1期峰前出现一明显的凋亡峰（15．9％）;细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带;bcl-2的表达也显著下调。结论 PTEN基因可诱导SHG－44细胞凋亡,并下调bcl-2蛋白的表达,这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一。     

鼻咽癌中p53、bcl-2、bax、Fas的表达及其相互关系的研究

目的　了解凋亡相关基因 p53、bcl 2、bax、Fas在鼻咽癌 (NPC)中的表达及相互关系。方法　在 67例NPC、5例癌旁组织中用免疫组化技术标记bcl 2、p53、bax、Fas ;用免疫双标技术同时标记 p53与bcl 2 ;从中选取 15例NPC用DNA原位杂交技术检测bcl 2基因扩增情况。结果　① 67例NPC中 p53蛋白阳性 38例 (56 7% ) ,bcl 2蛋白阳性 4 8例(71 6% ) ,bax蛋白阳性 2 8例 (4 1 8% ) ,Fas蛋白阳性 2 9例 (4 3 3% )。②NPC中 ,p53蛋白与bcl 2蛋白的阳性率显著高于癌旁组织 ,而bax蛋白与Fas蛋白的阳性率却显著低于癌旁组织。③ p53蛋白与bcl 2蛋白阳性表达间呈正相关。④bcl 2 /bcl 2同二聚体在NPC中占优势 ;p53蛋白表达在bcl 2 /bcl 2同二聚体占优势的肿瘤中显著高于bax/bax同二聚体占优势的肿瘤中。结论　①p53、bcl 2、bax、Fas在NPC中有较高的阳性表达率 ,与NPC的发生、发展关系密切。②NPC中 p53与bcl 2蛋白表达呈正相关 ,提示NPC中 p53蛋白主要不是突变型 ,有异于其它肿瘤。③抑制细胞凋亡的bcl 2 /bcl 2同二聚体在NPC中占优势 ,尤其是泡状核细胞癌中。提示其与NPC的发生及分化有关。     

齐墩果酸对HL60细胞bcl-2和bax表达的影响

目的探讨齐墩果酸（OA）对人急性早幼粒细胞白血病HL60细胞bcl-2和bax基因表达的影响。方法采用光学显微镜观察OA对体外培养HL60细胞的增殖抑制情况；并用RT-PCR法检测bcl-2和bax mRNA的表达。结果与空白组和二甲基亚砜（DMSO）对照组比较，80μmol／L OA处理细胞后，细胞增殖受抑制；OA用药组bax基因mRNA含量增加，bcl-2基因mRNA含量减少。结论OA可以诱导HL-60细胞凋亡，其机制可能与bax基因表达增加及bcl-2基因表达降低有关。     

bcl-2核酶对SMMC7721细胞端粒酶活性的影响作用

目的 观察bcl-2核酶对SMMC-7721细胞的作用,探讨bcl-2表达水平的改变对细胞端粒酶活性的影响。方法 经脂质体介导的方法将PMTr-neo（下向bcl-2核酶真核表达载体）导入SMMC7721细胞中,细胞克隆转移扩大培养后,采用TUNEL,TRAP-PCR-ELISA,免疫组化技术结合图像分析技术检测SMMC7721/PMTr-neo细胞凋亡=细胞端粒酶活性及P16,P12的改变。结果 较对照组SMMC7721/PMTr-neo细胞Bcl-2表达水平显著下降,伴有显著细胞凋亡现象;同时端粒酶活性下降,P16,P21表达水平显著增加。结论 bcl-2核酶可促进SMMC7721细胞发生凋亡,并降低细胞端粒酶活性,提示Bcl-2表达水平的改变对细胞端粒酶活性有一定的影响。     

Gadd45表达对肿瘤细胞HCT116生长的抑制作用及其机理

目的利用Gadd45可诱导细胞系探讨Gadd45对肿瘤细胞生长抑制作用的分子机理。方法用四环素撤除表达系统以及克隆形成实验、流式细胞检测、TUNEL法检测、Western印迹检测等方法研究Gadd45表达对肿瘤细胞HCT116生长的抑制作用及其机理。结果用四环素撤除表达系统,建立了稳定传代的Gadd45可诱导细胞系HCT116。撤除四环素,HCT116细胞的Gadd45能够被诱导高表达。实验结果证实,在我们建立的细胞系中,Gadd45诱导高表达对细胞生长的抑制率高于85％。流式细胞检测表明,Gadd45高表达有细胞G2-M期阻滞作用。同时,TUNEL法检测到Gadd45诱导的细胞凋亡,Western印迹检测观察到PARP和半胱氨蛋白水解酶3蛋白质剪切激活。结论Gadd45高表达可以抑制HCT116细胞生长,其机理主要是通过Gadd45诱导细胞G2-M期阻滞和激活细胞凋亡途径起作用。     

重离子对人肝癌细胞细胞凋亡及bcl-2/bax基因表达的研究

目的 探讨重离子诱导人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡及bal-2／bax的表达在重离子治癌中的作用。方法 应用流式细胞技术、MTT法及免疫组化法,观察重离子诱导人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡和bal-2／bax表达的情况,并应用AO／BE荧光染色,在荧光显微镜下,观察各组织细胞凋亡的形态学变化。结果 经MTT比色法测定细胞增殖能力,可见随辐射剂量的增加,细胞存活率逐渐降低。流式细胞仪检测重离子对SMMC-7721细胞的DNA含量变化,结果显示2．0、3．0Gy组的SMMC-7721细胞在G2／M期所占细胞比率较对照组及1．0、1．5Gy组增高（P〈0．01）。免疫组化法观察随辐射剂量的增加,bax的表达显著上调,而bcl-2的表达则受抑制。结论 重离子能在体外诱导SMMC-7721细胞凋亡,且具有剂量依赖性;重离子在一定剂量时,使细胞增殖能力降低;重离子能诱导SMMC-7721细胞bax蛋白表达上调。而bcl-2表达降低,从而诱导细胞凋亡。     

鼻咽癌中p53、bcl-2、bax、Fas的表达及其相互关系的研究

目的　了解凋亡相关基因p53、bcl2、bax、Fas在鼻咽癌(NPC)中的表达及相互关系。方法　在67例NPC、15例癌旁组织中用免疫组化技术标记bcl2、p53、bax、Fas;用免疫双标记技术同时标记p53与bcl2;从中选取15例NPC用DNA原位杂交技术检测bcl2基因扩增情况。结果　①67例NPC中p53蛋白阳性38例(567%),bcl2蛋白阳性48例(716%),bax蛋白阳性28例(418%),Fas蛋白阳性29例(433%);②NPC中,p53蛋白与bcl2蛋白的阳性率显著高于癌旁组织,而bax蛋白与Fas蛋白的阳性率却显著低于癌旁组织;③p53蛋白与bcl2蛋白阳性表达间呈正相关。④bcl2/bcl2同二聚体在NPC中占优势;p53蛋白表达在bcl2/bcl2同二聚体占优势的肿瘤中显著高于在bax/bax同二聚体占优势的肿瘤中。结论　①p53、bcl2、bax、Fas在NPC中有较高的阳性表达率,与NPC的发生、发展关系密切;②NPC中p53与bcl2蛋白表达呈正相关,提示NPC中p53蛋白主要不是突变型,有异于其它肿瘤。③抑制细胞凋亡的bcl2/bcl2同二聚体在NPC中占优势,尤其是在泡状核细胞癌中,提示其与NPC的发生及分化有关。     

过氧化物诱导LO2细胞凋亡时Fas mRNA表达及Ca^2＋流变化的单 …

探讨过氧化物所致肝细胞凋亡时Ｆａｓ基因表达与Ｃａ＾２＋流变化的相互关系。方法应用全细胞膜片错单细胞逆转录聚合酶链反应技术进行Ｈ２Ｏ２诱导人类正常肝细胞ＬＯ２细胞ＦａｓｍＲＮＡ表达的单细胞分析,应用全细胞膜片错显微荧光单细胞胞浆游离钙浓度测量技术、流式细胞术、扫描电镜观察同期瞬时Ｃａ＾２＋流变化及早期凋亡（Ａｎｎｅｘｉｎ－Ｖ）细胞指数和细胞膜变化。结果Ｈ２Ｏ２作用２ｈ单个ＬＯ２细胞电泳图分析可见Ｆａ     

凋亡蛋白Bax在肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导恶性淋巴瘤细胞耐药中的调节作用

目的探讨凋亡蛋白Bax在恶性淋巴瘤细胞对肿瘤坏死因子凋亡诱导配体（TRAIL）凋亡抵抗中的调节作用,为临床克服肿瘤耐药提供治疗靶点。方法分别采用500彬LTRAIL和／或10nmol／L蛋白酶体抑制剂PS-341处理恶性淋巴瘤细胞（CRL）和正常对照细胞（HRC）。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。荧光显色技术检测细胞半胱氨酸蛋白水解酶-8酶活性。Western印迹检测细胞中Bax蛋白表达水平。免疫沉淀技术（IP）检测Bax蛋白的活性及构象变化。结果与HRC细胞比较,CRL细胞对TRAIL存在显著抵抗,24h凋亡指数仅为21％,前者为32％,两者比较差异有统计学意义（P〈0．01）;同时在TRAIL作用过程中CRL细胞中Bax表达呈下降趋势,24h表达量仅为正常量的5／17。当联合使用PS-341后,可有效抑制Bax蛋白降解,6h表达量为正常量的1．2倍,显著增加活性;同时增加半胱氨酸蛋白酶．8酶活性,6h为26．5μmol·L^-1·h^-1·mg^-1蛋白,从而增加细胞凋亡,6h凋亡指数达54％,与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论促凋亡蛋白Bax的下调表达参与恶性淋巴瘤细胞对TRAIL耐药性。合理的使用蛋白酶体抑制剂可通过抑制蛋白降解,增加其活性来有效克服肿瘤耐药。     

同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响

目的　观察同型半胱氨酸 (Hcy) 对人血管平滑肌细胞 (VSMCs) 凋亡以及bax、bcl-2表达的影响。方法　采用组织贴块法体外培养人VSMCs; 采用流式细胞仪检测细胞凋亡率; 逆转录 -聚合酶链反应法检测Bax、bcl-2mRNA的表达。结果　体外培养的人VSMCs在终浓度为 0 (对照组)、100、200、500、1 000μmol/LHcy的培养液中孵育 24h后的细胞凋亡率分别为 ( 2. 68±0. 23 )%、 ( 2. 79±0 .12 )%、( 8. 45±2. 41 )%、 ( 13. 37±4 .71 )%、(23. 75±5 .56)%, 表明Hcy诱导人VSMCs细胞凋亡呈浓度依赖性; baxmRNA相对表达量分别为 0 .86±0. 01、0 .92±0 .03、1. 51±0 .02、1. 82±0 .03、1 .91±0 .02, bcl-2mRNA相对表达量分别为 1. 38±0 .04、1. 32±0 .03、1. 28±0 .03、1 .21±0. 02、1 .09±0. 02, 表明Hcy呈浓度依赖性诱导人VSMCsbax基因表达显著上调, bcl-2基因表达轻度下调, bax/bcl-2比值升高。结论　Hcy诱导人VSMCs凋亡可能是通过上调bax基因表达来实现的, 诱导人VSMCs凋亡可能是Hcy致动脉粥样硬化作用的机制之一。     

过氧化物诱导LO2细胞凋亡时Fas mRNA表达及Ca 2+ / 流变化的单细胞分析

目的　探讨过氧化物所致肝细胞凋亡时Fas基因表达与Ca2 流变化的相互关系。方法　应用全细胞膜片钳单细胞逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术进行H2 O2 诱导人类正常肝细胞LO2细胞FasmRNA表达的单细胞分析 ,应用全细胞膜片钳显微荧光单细胞胞浆游离钙浓度 ([Ca2 ]i)测量技术、流式细胞术、扫描电镜观察同期瞬时Ca2 流变化及早期凋亡 (Annexin V )细胞指数和细胞膜变化。结果　H2 O2 作用 2h单个LO2 细胞电泳图分析可见Fas1mRNA特异性扩增条带 ;单细胞Ca2 流测定R值明显增强 (P <0 .0 1,t=2 2 .2 42 4) ,[Ca2 ]i骤升为 1115nmol/L± 2 2 7nmol/L ,与对照组的149nmol/L± 2 3nmol/L比较差异有显著性意义 (P <0 .0 1,t=13.37) ,Annexin V 细胞指数亦明显上升 (P <0 .0 1,t=48.41) ,细胞膜起泡。结论　H2 O2 诱导LO2 细胞凋亡时细胞内Ca2 失衡可能导致Fas死亡基因的活化。     

CD40-CD40L配基化下调人伯基特淋巴瘤细胞生存素表达和介导细胞凋亡

目的探讨srhCD40L介导CIM0配基化对人类伯基特（Burkitt）淋巴瘤CA46细胞生物学行为影响及其可能的分子机制。方法应用四甲基偶氮唑盐比色法、细胞周期分析法、膜联蛋白．V凋亡检测法（Annexin—V）、TDT酶介导的缺口末端标记法（terminal deoxynucleotide mediated nick end labeling,TUNEL）,检测srhCD40L介导CD40配基化,对人类Burkitt淋巴瘤CA46细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡等细胞生物学行为的影响;应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹法检测srhCD40L介导CD40配基化对人类Burkitt淋巴瘤CA46细胞的生存素基因和蛋白表达的影响。结果CD40在人类Burkitt淋巴瘤CA46细胞中高表达;srhCD40L介导CIMO配基化诱导CA46细胞发生同型聚集生长、抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。对细胞周期的影响为s期进入G,／M期受阻。srhCIMOL介导CIM0配基化作用可引起CA46细胞的生存素基因和蛋白表达下调。结论srhCD40L介导CD40配基化可抑制Burkitt淋巴瘤CA46细胞增殖、诱导其凋亡;生存素基因与蛋白可能是参与srhCD40L介导CD40配基化抑制CA46细胞增殖和诱导凋亡的分子机制之一。     

雷公藤红素对HMC-1细胞凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨雷公藤红素诱导人肥大细胞系HMC-1细胞凋亡的基因调节机制。方法：雷公藤红素(0.5umol/L）与HMC-1细胞共育不同时间（4、8或12h）后,用RT-PCR、免疫组化方法检测bcl-2家庭、c-myc、白细胞介素1β转换酶（ICE）基因在mRNA和蛋白质水平表达的变化,并分析它们在细胞凋亡中的作用。结果：HMC-1细胞本已存在Bcl-2、Bax、C-myc蛋白表达;雷公藤红素作用后,Bcl-2蛋白表达受到抑制,Bax、C-myc蛋白表达增加。HMC-1细胞能自发表达bcl-2、bax、bcl-XL和ICE的mRNA,在雷公藤红素作用下,bcl-2、bax、bcl-XL的mRNA表达水平均下降（以bcl-2下降最为明显）,而ICE mRNA3次检测2次上升,1次下降。结论：雷公藤红素诱导HMC-1细胞凋亡可能与其上调促凋亡基因和下调抑凋亡基因的表达有关。     

细胞凋亡调节基因蛋白表达与前列腺癌的预后

目的 :探讨细胞凋亡调节基因蛋白表达与前列腺癌临床预后的关系。方法 :采用免疫组化染色方法 ,检测 5 7例前列腺癌中Fas及其配体 (FasL)、bcl 2、bax的表达 ,并同前列腺癌临床和病理特征一起 ,先后进行单因素和多因素分析。结果 :bax在前列腺癌低分化肿瘤中的表达强于在高分化肿瘤中的表达 (P <0 0 5 ) ;FasL表达可能对生存预后有一定影响 ,而肿瘤分化程度与临床分期仍是重要的预后指标。结论 :FasL表达可能与前列腺癌预后有关。     

确炎舒松对增生性瘢痕PCNA、bcl-2表达的影响

目的观察局部注射确炎舒松后增生性瘢痕(HS)中增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2的表达水平变化,探讨糖皮质激素治疗瘢痕的机制.方法用免疫组织化学SP法检测比较42例HS激素注射前后PCNA、bcl-2表达水平变化.结果HS中PCNA、bcl-2阳性细胞均较正常皮肤显著增多,注药组PCNA及bcl-2阳性细胞率均较对照组明显减少,两者差异有显著性(P＜0.05).结论成纤维细胞增殖过度、凋亡不足是HS形成的重要原因,激素可通过抑制PCNA基因的表达来抑制HS成纤维细胞增殖;激素可能通过抑制bcl-2基因的表达而诱导成纤维细胞凋亡.     

低表达bcl-2对神经酰胺诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的观察无血清条件下bcl-2对神经酰胺诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法通过脂质体介导的基因转染，建立稳定转染表达反义bcl-2 mRNA的cDNA片段的真核表达质粒的人肝癌细胞HepG2（HepG2—anti-bcl-2）并鉴定，采用AO-EB荧光染色、流式细胞术DNA倍体分析和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡，分光光度法测定Caspase-3活性。结果终浓度50μmol／L C2-神经酰胺作用24h，可诱导无血清培养的HepG2细胞、HepG2-vector细胞及HepG2-anti—bcl-2细胞发生凋亡。AO-EB染色可见典型的细胞凋亡表现。流式细胞仪检测显示C2-神经酰胺作用12，18，24h，HepG2—anti—bcl-2细胞凋亡率较同时间HepG2细胞及HepG2—vector细胞凋亡率显著增加（P〈0．05）。终浓度50μmol／L C2-神经酰胺作用12h，HepG2—anti—bcl-2细胞DNA凝胶电泳呈现梯状条带，而HepG2细胞及HepG2—vector细胞作用24h出现DNA梯状条带。HepG2细胞和HepG2-vector细胞Caspase-3活性随C2-神经酰胺（50μmol／L）作用时间延长而增强，HepG2-anti—bcl-2细胞Caspase-3活性始终维持较高水平。结论低表达bcl-2可通过增加Caspase-3活性从而促进C2-神经酰胺诱导的HepG2细胞凋亡。     

肝细胞癌组织Bcl-2和Bax蛋白的表达（英文）

目的　探讨原发性肝细胞癌 (简称肝癌 )细胞凋亡相关蛋白 Bcl- 2和 Bax的表达及其意义 .方法　采用免疫组化ABC法检测 Bcl- 2和 Bax蛋白在 66例人肝癌组织和 2 4例人正常肝组织 ,以及 3株人肝癌细胞系 HCC- 92 0 4 ,SMMC-772 1 ,HHCC和 1株永生化的人正常肝细胞系 QZG的表达情况 ,并分析肝癌组织的 Bcl- 2和 Bax阳性率与其病理分级之间的关系 .结果　 Bcl- 2在正常肝组织的阳性率只有 4.2 % ,而在肝癌组织为 2 5.8%差异显著 (P<0 .0 5) .Bax在正常肝组织的阳性率为 70 .8% ,在肝癌组织为 43.9% ,差异显著 (P<0 .0 5) .肝癌组织的 Bcl- 2和 Bax阳性率与其病理分级之间均未见明显的相关性 (P>0 .0 5) .在正常肝和肝癌组织中 ,Bcl- 2阳性率均明显低于 Bax(P<0 .0 1 ,P<0 .0 5) .在QZG细胞中未见明显的 Bcl- 2阳性信号 ,Bax阳性细胞计数率为 61 % .SMMC- 772 1细胞和 HHCC细胞的 Bcl- 2阳性细胞计数率分别为 1 4 .3%和 1 1 .8% ,Bax阳性细胞计数率分别为 58.3%和 47.1 % .HCC- 92 0 4细胞中未见明显的 Bcl- 2阳性信号 ,Bax阳性细胞计数率为 43.2 % .结论　与正常肝组织相比 ,肝癌组织的 Bcl- 2蛋白低度升高 ,Bax蛋白下降 .正常肝和肝癌组织的 Bcl- 2水平均低于 Bax.肝癌和正常肝细胞系的 Bcl- 2蛋白水平均很     

Fas基因在卵巢癌细胞凋亡中的作用

目的 :检测Fas基因表达并观察转染Fas基因对卵巢癌细胞凋亡的影响 ,探讨其在卵巢癌发生、发展中的作用。方法 :经流式细胞术、RT PCR方法检测 6种卵巢癌细胞Fas的表达水平。构建pcDNA3 Fas真核表达载体 ,经脂质体转染细胞 ,通过流式细胞仪检测Fas基因表达变化。应用PI染色经流式细胞术检测观察转染Fas基因对3AO细胞凋亡的影响。结果 :6种卵巢癌细胞均表达Fas,均属中低表达。经 pcDNA3 Fas真核表达载体转染的卵巢癌细胞Fas基因表达及对Fas单抗诱导凋亡的敏感性均有不同程度提高。结论 :Fas基因低表达及对Fas介导凋亡的抵抗可能与卵巢癌发生、发展有关 ;转染Fas基因可提高Fas基因表达 ,可促进卵巢癌细胞凋亡     

细胞凋亡相关基因bcl-2与bax在胃癌组织中表达探讨

目的:探讨凋亡相关基因bcl-2和bax在人胃癌组织中蛋白的表达情况及其与胃癌的各种临床病理特征和预后的关系。方法:用免疫组织化学SABC法检测经手术治疗的72例胃癌患者的病理标本,用TUNEL法检测其中的细胞凋亡情况。同时检测13例正常胃组织作为对照。结果:bcl-2蛋白在胃癌组织中的阳性表达率为36.11%,bax为52.78%,两者与正常胃组织比较差异均有统计学意义(P<0.05和<0.01)。结论:bcl-2和bax蛋白的表达与胃癌的lauren分型、分化程度及淋巴结转移相关,并通过对细胞凋亡的调控参与了胃癌的发生、发展,和预后密切相关。