二硫代氨基甲酸吡咯烷联合苦参碱对人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)抑制核因子-κ B(NF-κ B)活化后对苦参碱抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响.方法 建立人肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组(灭菌等渗盐水)、苦参碱组(35 mg/kg)、PDTC组(120 mg/kg)和PDTC(120 mg/kg)+苦参碱(35 mg/kg)联合组,腹腔注射用药.绘制肿瘤生长曲线,测定肿瘤生长抑制率;TdT介导的dUTP缺口末端标记法检测肿瘤细胞凋亡情况;电泳迁移率变动分析法检测细胞核内NF-κB的活化水平;免疫组织化学法检测肿瘤组织bcl-2和bax蛋白表达水平;RT-PCR法检测肿瘤细胞NF-κB、bcl-2和bax的mRNA表达水平.多组间比较用SNK-q检验,单独效应比较采用LSD法,相关分析采用Pearson法进行分析.结果 PDTC增强了苦参碱对肿瘤增殖的抑制作用(P＜0.05);苦参碱在诱导肿瘤细胞凋亡的同时激活NF-κB;PDTC能显著抑制苦参碱诱导的NF-κB活化,NF-κB活性的灰度值由93.64±2.95降至65.78±5.65(F=124.754,P＜0.01),同时促进苦参碱诱导肿瘤细胞凋亡,细胞凋亡指数由55.9%±2.8%升高至74.3%±4.8%(P＜0.05).NF-κB的mRNA表达水平与bcl-2的mRNA表达水平呈正相关(r=0.983,P＜0.01).结论苦参碱诱导皮下移植瘤细胞凋亡的同时激活NF-κB;PDTC可通过抑制NF-κB的活化而下调bcl-2的表达,改变bcl-2与bax的比值,增强苦参碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between activation of nuclear factor-κ-gene binding (NF-κ B) and apoptosis induced by matrine(MT) in transplanted tumor of human hepatocellular carcinoma in nude mouse. Methods Tumors were established by injection of hepatocellular carcinoma cell line HepG2 into the back of nude mice. The mice were divided randomly into four groups: Control group, MT group (35 mg/kg), PDTC group (120 mg/kg) and Combination group: PDTC+MT group (120 mg/kg+35 mg/kg), the reagents were injected peritoneally. The tumor growth curve of nude mice bearing transplanted tumor were observed and the inhibition ratios were evaluated. Apoptosis of carcinoma cells was analyzed by TUNEL. The DNA-bingding activity of NF-κ B was determined by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). Expression of bcl-2 and bax in carcinoma tissue were detected by immunohistochemical method.NF-κ B mRNA, bcl-2 mRNA and bax mRNA in carcinoma tissue were detected by RT-PCR. Results Pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) could enhance the inhibition of matrine on carcinoma proliferation (P＜0.05). The apoptosis and activation of NF-κB in carcinoma cells could be induced by matrine. PDTC significantly suppressed NF-κ B activation induced by matrine in carcinoma cells from 93.64±2.95 to 65.78±5.65 (F=124.754, P＜0.01). Meanwhile, PDTC increased the apoptosis induced by matrine from 55.9%±2.8%to 74.3%±4.8% (P＜0.05).A positive correlation observed between the expressions of NF-κ B and of bcl2 (Pearson correlation coefficient=0.983,P＜0.01). Conclusions Matrine could induce apoptosis and activation of NF-κ B in transplanted tumor. PDTC could increase apoptosis in hepatocellular carcinoma cells might be due to the suppression of NF-κ B activation and the enhancement of bcl-2 expression.     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对白介素18诱导肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响

目的观察吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对白介素18（IL-18）诱导肾小球系膜细胞（MC）增殖及细胞外基质（ECM）分泌的影响及机制。方法MTT法检测MC的增殖情况,ELISA检测Ⅳ型胶原蛋白（CO-Ⅳ）和层黏连蛋白（LN）,免疫细胞化学检测核转录因子-κB（NF-κB）P65的核易位。结果高糖环境下,25μg／L、50μg／L的IL-18作用48h能明显促进MC增殖、CO-Ⅳ和LN的分泌（P〈0．01）,使NF-κBP65激活,50κg／L组更为显著（P〈0．01）。100κmol／L的PDTC能显著抑制IL-18诱导MC增殖作用（P〈0．01）,CO-Ⅳ和LN的分泌以及P65核易位。结论PDTC可能通过NF-κBP65途径抑制IL-18诱导的MC增殖和细胞外基质分泌。     

siRNA抑制NF-kB p65对Bcl-2及肝癌细胞凋亡的影响

目的:研究siRNA抑制NF-KB p65后Bcl-2在肝癌细胞中的变化及对肝癌细胞凋亡的影响.方法:选择肝癌细胞HepG2、SMMC7721和人胚胎肝细胞LO2细胞株,应用Western blot法分别检测NF-KB p65、Bcl-2在不同细胞中的表达;应用siRNA方法抑制NF-KB p65在肝癌细胞中的表达,观...     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对大鼠急性坏死性胰腺炎肝损伤的保护作用

目的:探讨核因子KB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)的预防治疗作用。方法:大鼠80只随机分为正常对照组(Z)、胰腺炎组(Y)和干预纽.干预组又分为建模前1h PDTC干预组(A)、建模后1h PDTC干预组(B)和建模后6h干预组(C).干预组按不同时间ip PDTC.建模后6,12,24 h分批处死,临床全自动生化仪检测血清谷丙转氨酶(ALT)和淀粉酶(AMY),用凝胶迁移率改变分析法(EMSA)测定胰腺和肝脏中NF-κB的活性.同时观察胰腺和肝脏的病理改变.结果:正常大鼠组织中几乎测不到NF-κB的活性,与Z组比较,Y组胰腺和肝脏组织中6,12,24 h NF-κB活性分别明显增加(P<0.001).建模前1h,1h后使用PDTC,胰腺和肝脏组织中NF-κB活性均受到抑制(18.14±3.30,23.79±3.62 vs 24.82±4.57:10.68±2.51,13.83±2.70 vs 16.38±2.50;P<0.05),Y组血清ALT,AMY均高于对照组.病理学检查可以见到Y组和A,B,C组的胰腺和肝脏均有炎性改变,但A组较Y组明显为轻.结论:NF-κB的异常活化与SAP以及肝损伤有明显关系:PDTC对SAP时肝损伤的发生有一定的预防作用.     

二硫代氨基甲酸吡咯烷对大鼠心肌梗死后心肌细胞肥大的影响

目的:探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对大鼠心肌梗死后心肌细胞肥大的影响及机制。方法:制作大鼠心肌梗死模型,随机分为PDTC干预(PD)组和心肌梗死对照(MI)组,另设假手术(SH)组,每组大鼠6只。PD组于术后24h腹腔注射PDTC(80 mg.kg-1.d-1),MI组及SH组注射0.9%氯化钠液对照。连续给药28 d后处死动物,计算心肌细胞面积、周长、平均直径。RT-PCR和免疫组化分别检测核转录因子-κBp65(NF-κBp65)及白介素-1β(IL-1β)的mRNA和蛋白质表达量。结果:与SH组比较,PD组和MI组的心肌细胞的直径、周长和表面积明显增大,NF-κBp65和IL-1β的mRNA及蛋白质表达量明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。与MI组比较,PD组的心肌细胞的直径、周长和表面积改变明显减轻,NF-κBp65和IL-1β的mRNA及蛋白质表达量明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:PDTC能一定程度地改善大鼠心肌梗死后心肌细胞肥大,其机制可能与抑制NF-κB激活,下调炎性细胞因子如IL-1β表达有关。     

氧化苦参碱对肿瘤坏死因子诱导的人L02肝细胞凋亡的影响

观察氧化苦碱（Oxy）对rhTNF-a诱导的L02肝细胞凋亡的影响。体外培养人L02肝细胞,采用H^3-TdR法、台盼蓝染色及流式细胞仪观察Oxy对rhTNF-a引起的L02肝细胞的毒性作用影响。以rhTNF-a15ng/ml作用于细胞24h,细胞出现细胞核固缩,染色体凝集等凋亡样改变,台盼蓝染色阴性率在95%以上,应用流式细胞仪检测分析细胞周期,出现亚G1期峰（凋亡AP峰）,G2-M期细胞明显减少。同时加入Oxy时,细胞生长率明显高于rhTNF-a处理组,并呈剂量相关性,在细胞周期图上未出现明显亚G1期峰。Oxy对rhTNF-a诱导的细胞凋亡有抑制作用。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸对脂多糖致急性肺损伤大鼠NF-κB P65蛋白表达的影响

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对脂多糖(LPS)所致急性肺损伤(ALI)大鼠NF-κB P65蛋白表达的影响。方法雄性大鼠54只,随机分三组。对照组(N组)6只,腹腔注射生理盐水3 ml/kg。ALI组(L组)24只,腹腔注射LPS 3 mg/kg。PDTC干预组(P+L组)24只,先腹腔注射PDTC 120 mg/kg,0.5 h后再腹腔注射LPS 3 mg/kg。后两组分别于腹腔注射LPS后1、2、4、8 h作为观测时间点。观察肺组织胞质及胞核中NF-κB P65蛋白表达强度的变化。结果 ALI组各时相肺组织胞质中P65蛋白的表达强度较对照组显著降低(P<0.01),而胞核中P65蛋白表达强度较对照组显著升高(P<0.01),但PDTC干预组P65蛋白与ALT组比较,肺组织胞质中P65蛋白的表达强度较ALT组升高(P<0.05),而胞核中P65蛋白表达强度较ALT组降低(P<0.05)。结论 LPS引起肺组织NF-κB P65蛋白由胞质向胞核转移而活化,NF-κB参与炎症的调控,在ALI中发挥重要作用。而PDTC可抑制炎性介质的表达和释放,可有效地减轻LPS所致大鼠ALI。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对兔脑血管痉挛的作用

目的观察吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对兔蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血管痉挛的影响及NF—κBp65、ICAM-1在基底动脉的表达。方法新西兰大白兔48只（雌雄不限）。随机分为对照组（8只）、SAH组（20只）及PDTC组（20只）。SAH组和PDTC组又分为SAH后1、3、5、7、14d亚组,每组4只。采用枕大池二次注血法制作SAH模型。PDTC组在第2次注血后即脑池内注射PDTC,0．25ml／次,2次／d,连续2d。观察基底动脉管径和厚度、病理形态学改变;免疫组化检测NF—κBp65、细胞间黏附分子1（ICAM-1）的表达。结果①SAH组在第3天开始出现基底动脉管径变细、管壁增厚,第7天最明显,与第1天比较,差异有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）;PDTC组仅第7天与第1天比较有差异（P〈0．05）。在第3、5、7天时,SAH组与对照组及PDTC组比较上述指标,差异均有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）;PDTC组与对照组比较,差异均无统计学意义。（2）PDTC组与SAH组同时间点比较,病理形态损害、炎性细胞浸润程度减轻。③SAH组在第3天开始出现NF—κBp6、ICAM—1表达,第7天达高峰。第3、5、7d（ICAM-1包括第14d）,SAH组表达量均明显高于对照组和PDTC组（P〈0．01）。PDTC组与对照组比较亦增高,P〈0．05。结论PDTC对SAH后迟发性脑血管痉挛具有一定的预防作用。通过抑制NF—κBp65、ICAM-1的表达可能是其机制之一。     

氧化苦参碱及苦参碱对大鼠肝细胞凋亡的影响

随着对细胞凋亡研究的深入 ,人们认识到肝细胞的异常凋亡与各种急、慢性肝病的发生密切相关。尤其是病毒性肝炎 ,虽然其发病机制十分复杂 ,但是由病毒感染后所引起的肝细胞凋亡是不容忽视的一个重要因素。在多种细胞凋亡相关因子中肿瘤坏死因子 α(ＴＮＦ α)是一种重要的炎症介质。我们将临床上用于治疗肝病的氧化苦参碱 (Ｏｘｙ ｍａｔｒｉｎｅ)及苦参碱 (Ｍａｔｒｉｎｅ)应用于体外肝细胞培养体系 ,观察其对ＴＮＦ α及放线菌素Ｄ(ＡｃｔＤ)所诱导的肝细胞凋亡的影响 ,以期从肝细胞凋亡的角度探讨其保肝的作用机制是否与抑制肝细胞凋亡有…     

氟尿嘧啶对肝癌细胞凋亡的诱导

我们观察氟尿嘧啶（５—ＦＵ）是否能够诱导人肝癌细胞凋亡，进一步揭示５－ＦＵ的作用机制，同时寻找提高５—ＦＵ的临床疗效的辅剂。将人肝癌细胞ｂｅｌ ７４０２按常规条件培养于含１０％小牛血清的无Ｌ－精氨酸的ＤＭＥＭ培养液中。在５—ＦＵ作用下，用电镜观察凋亡细胞的形态，流式细胞仪进行凋亡细胞的定量。用免疫组织化学法观察５—ＦＵ诱导诱生型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）的表达情况，并在其底物Ｌ－精氨酸存在的前提下，用酶法测定硝酸盐、亚硝酸盐，反映一氧化氮（ＮＯ）的生成，并证明其作用。用Ｌ－精氨酸的竞争性拮抗剂Ｌ—…     

沉默热休克蛋白70-2基因经线粒体依赖通路介导肝癌细胞凋亡

目的 探讨沉默热休克蛋白(HSP)70-2对肝癌细胞生长、凋亡的影响,以及诱导肝癌细胞凋亡的详细作用机制. 方法 Westem blot、免疫细胞化学法检测HSP70-2在4种肝癌细胞和正常肝细胞中的表达.设计合成针对HSP70-2基因的特异性短发夹状RNA(shRNA),构建真核表达载体HSP70-2 shRNA1和HSP70-2 shRNA2.转染肝癌细胞后,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖,膜联蛋白/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡情况,罗丹明染色检测细胞线粒体跨膜电位变化,Western blot检测多聚ADP-核糖聚合酶、caspase-3、caspase-9蛋白切割情况,以及细胞色素C、Bax,Bcl-2蛋白的表达变化. 结果 HSP70-2在4种肝癌细胞中均高表达,在L02细胞中仅有微量表达.HSP70-2 shRNA1、shRNA2均能有效抑制肝癌细胞中HSP70-2的表达.沉默HSP70-2基因显著抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡,转染48 h后,shRNA1和shRNA2诱导HepG2细胞的凋亡指数分别为55.8%±1.8%和57.1%±1.6%,诱导Huh细胞凋亡指数分别为54.9%±1.1%和60.2%±2.6%,与对照组相比,差异均有统计学意义,P值均＜0.01.转染HSP70-2 shRNA 48 h后,肝癌细胞线粒体跨膜电位显著下降,细胞色素C从线粒体释放到胞质中,caspase-3、caspase-9激活,多聚ADP核糖聚合酶被剪切降解,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bax表达明显增加.结论 沉默HsP70-2能通过激活线粒体凋亡通路导致肝癌细胞凋亡.     

人端粒酶逆转录酶干扰对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)干扰对肝癌．HepG2、SMMC-7221细胞生物学形为的影响和对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡的影响。方法将HepG2细胞和SMMC-7721细胞分为转染组 (转染重组质粒真核表达载体)、对照组(转染空载体质粒)和未转染组。采用聚合酶链反应方法检测hTERT干扰序列, 逆转录聚合酶链反应方法检测hTERT表达,HE染色、生长曲线和流式细胞术方法分别检测细胞形态、增殖情况和细胞周期,β-半乳糖苷酶染色方法检测细胞状态,Armexin V／PI染色流式细胞术检测细胞凋亡。结果转染组细胞内均存在hTERT干扰序列,HepG2和SMMC 7221细胞hTERT干扰率分别为100％和43．3％;与未转染组细胞相比, 转染细胞核质比明显缩小,增殖率下降差异有统计学意义(P<0．05),老化细胞和G2-M期细胞明显增加(P<0．05)。细胞老化率分别由未转染组的0增加到转染组的20．4％,由3．60%,增加到10．O％;G2-M期分别由未转染组的7．1％、6．9％增加到转染组的10．6％、7．9％。hTERT干扰显著增加肝癌细胞凋亡和TRAIL诱导凋亡敏感性(P<0．05)。两株肝癌细胞凋亡率分别由未转染组的3．5％、4．8％增至转染组的5．2%、7．9％;100 ng／ml TRAIL作用24 h后两株肝癌细胞凋亡率分别由未转染组的5．3％、13．9％增加到转染组的10．4％、77．2％,而对照组细胞各指标均无显著变化。结论 hTERT干扰明显影响肝癌细胞的生物学行为,显著增加细胞凋亡和TRAIL诱导凋亡的敏感性。     

微小RNA-221对HepG2细胞增殖及其凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-221(miR-221)对肝癌细胞株HepG2细胞增殖与凋亡的影响.方法 将miR-221阻遏物及模拟物转染至HepG2后,用实时荧光定量RT-PCR检测miR-221的表达水平;用细胞增殖试剂盒、Hoechst 33342及碘化丙啶(PI)双重染色、流式细胞仪及caspase3/7活性试剂盒检测HepG2细胞增殖与凋亡情况.对数据进行多样本的单因素方差分析,两两比较采用LSD法;相关性比较用Pearson检验.结果 RT-PCR结果显示,转染miR-221阻遏物后其表达受到抑制,而转染miR-221模拟物可促进其表达.细胞增殖试剂盒及Hoechst 33342/PI染色结果显示,48 h后miR-221阻遏物明显抑制HepG2细胞增殖(P＜0.05),而miR-221模拟物促进HepG2细胞增殖(P＜0.05),两种方法结果呈正相关(r=0.993,P＜0.01).流式细胞仪检测细胞周期显示,miR-221模拟物组G1期细胞比例(47.6%±1.53%)明显低于空白对照组(59.00%±1.00%)及阴性对照组(58.00%±1.00%,F=81.77,P＜0.01); S期细胞比例(20.33%±1.15%)明显高于空白对照组(11.00%±1.00%)及阴性对照组(12.00%±1.00%,F=70.90,P＜0.01).Hoechst 33342/PI染色、流式细胞仪膜联蛋白V凋亡试剂盒检测均显示,转染miR-221阻遏物48 h后,细胞凋亡和坏死增加(P＜0.05),差异有统计学意义.Caspase-3/7试剂盒检测caspase-3/7活性变化结果显示,转染miR-221阻遏物24 h后,细胞caspase3/7活性明显增高(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 miR-221可促进肝癌细胞生长增殖,抑制miR-221表达可诱导细胞凋亡.miR-221有望成为治疗肝癌新的分子靶点之一.     

肝癌组织中核因子κB的表达与肿瘤坏死因子α的相关性分析

目的 探讨核因子κB(NF-κB)在肝癌组织中的表达特点及其与肿瘤坏死因子α(TNF α)、临床病理学特征的关系. 方法以自身配对法收集手术后肝癌及其癌周组织各30份,以免疫组织化学法和酶联免疫吸附法检测肝癌和癌周组织中NF-κB的定位和表达,并以酶联免疫吸附法定量分析肝癌和癌周组织中TNF α的水平.样本均数间的比较先进行方差齐性检验,方差相等时进行t检验或方差分析;样本率之间的比较采用x~2检验;等级资料的比较采用秩和检验;相关性分析采用Pearson相关分析.用Stata7.0统计软件包处理、分析数据.结果 NF-κB蛋白在肝癌组织的胞核和胞质中均有表达,而对应的癌周组织中仅在胞质中有表达;NF-κB表达的阳性率肝癌组织中为100.0%,癌周组织为63.3%,x~2=13.47,P<0.01,差异有统计学意义.NF一κB表达强度:肝癌组织(+)4例、(++)10例、(+++)16例,癌周组织(-)11例、(+)7例、(++)9例,(+++)3例,肝癌组织中NF-κB的表达强度明显高于其对应的癌周组织,u=4.44,P<0.01,差异有统计学意义.核蛋白NF-κB的表达水平.肝癌组织中大约是癌周组织的1.9倍,t=23.17,P<0.01,差异有统计学意义.TNF α的表达水平在肝癌组织中大约是癌周组织的2.3倍.t＝39.22,P<0.01,差异有统计学意义.核蛋白NF-κB及TNF α的表达呈显著正相关,r=0.964,t=19.31,P<0.01.肝癌组织中核蛋白NF-κB的表达水平与肿瘤的分化程度、肿瘤数目、肿瘤大小和HBsAg是否阳性未见明显的相关性,各组间的差异无统计学意义. 结论TNF α可诱导NF-κB活化,进入细胞核内参与肝癌的发生和发展.     

诱捕受体3中和性抗体在HepG2细胞凋亡中的作用

诱捕受体3(decoy receptor 3,DcR3)又称为TR6,在多种恶性肿瘤存在着过度表达[2].该基因表达产物可与相关配体结合,从而阻断由这些配体介导的细胞凋亡,而且还能调控免疫细胞的活性与分化,下调机体免疫系统,与肿瘤免疫逃逸密切相关131.我们在前期研究中发现,在原发性肝细胞癌(HCC)组织及非癌肝组织中DcR3阳性者的凋亡率均低于DcR3阴性者,DcR3表达与凋亡率呈负相关[4].     

乙型肝炎病毒导致的肝硬化伴肝癌患者血清中N糖组学改变

肝细胞癌（HCC）是最常见的肿瘤和最主要的死因之一，多发生于HBV和HCV感染导致的肝硬化患者，筛查肝硬化人群，早期诊断HCC可降低肿瘤的病死率。甲胎蛋白（AFP）是目前广泛应用的辅助诊断HCC的血清学指标，是对B超、CT等影像学诊断的有效补充。最近的荟萃分析表明，不同研究论文报道的AFP的灵敏度和特异度有很大的不同，这种现象不能完全用AFP的临界值不同解释。血清中的N糖蛋白主要由肝脏和B淋巴细胞合成，N糖成分的改变可反应肝脏或B淋巴细胞功能的改变，糖链的改变常常反应出机体的异常改变。糖组学在诊断领域的应用曾经因为缺少合适的分析技术而受限制，血清中N糖组学分析技术克服了这一屏障。本研究的目的是评价血清中N糖指纹图谱应用于乙型肝炎后肝硬化伴肝癌辅助诊断的意义。     

真核起始因子2α的磷酸化抑制顺铂介导的肝癌细胞凋亡

目的 探讨真核起始因子2α (eIF2α)的磷酸化对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响. 方法 将肝癌细胞随机分为对照组和实验组,在用突变载体eIF2αS51A转染和小分子抑制剂salubrinal 改变实验组细胞在顺铂作用条件下eIF2α磷酸化的基础上,用流式细胞和Western blot分别检测细胞凋亡的百分率和细胞凋亡的分子标志物.多组间比较采用方差分析,两组间比较采用t检验. 结果 顺铂诱导肝癌细胞eIF2 α发生51位丝氨酸磷酸化.在突变载体转染条件下,顺铂(10μg/m1)诱导对照组和实验组SMMC-7721细胞在24 h凋亡的平均百分率分别为21.7％±1.5％和50.7％±2.1％(t=19.454,P＜0.05);顺铂诱导对照组和实验组HepG2细胞在24h凋亡的百分率分别为21.0％±1.0％和57.3％±2.1％ (t=27.250,P＜0.05).在抑制剂作用条件下,顺铂(15 μ g/ml)诱导对照组和实验组SMMC-7721细胞在36 h凋亡的百分率分别为50.3％±2.5％和16.3％±2.1％ (t=18.031,P＜0.05);顺铂诱导对照组和实验组HepG2细胞在36 h凋亡的百分率分别为42.0％±2.6％和12.0％±2.0％ (t=15.667,P＜0.05).同时,Western blot检测显示eIF2α的磷酸化抑制顺铂诱导的凋亡蛋白抗多聚ADP-核糖聚合酶的剪切. 结论 eIF2α的磷酸化在肝癌细胞抵抗顺铂介导的凋亡中起重要作用.     

腺病毒介导多基因对肝癌细胞凋亡的诱导作用

目的 研究腺病毒介导的多基因（ｐ５３、Ｂ７－１、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２）对肝癌细胞系调亡的诱导,及对肝癌细胞系裸鼠体内成瘤性改变的影响。方法 应用光镜、电镜和ＴＵＮＥＬ法,检测肝癌细胞系感染腺病毒介导的多基因后凋亡的发生,检测ＨｅｐＧ２细胞导入腺病毒多基因后裸鼠体内的成瘤性改变。结果 肝癌细胞系导入多基因后发生凋亡,并对化疗药物顺铂的敏感性增加,册时给予１０ｍｇ／Ｌ的顺铂,可使近３０％的肝癌细胞发     

乙型肝炎病毒P22e蛋白经核因子-κB抑制HepG2细胞凋亡

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)在乙型肝炎病毒P22e蛋白抑制HepG2细胞凋亡中的作用.方法 用含HBV P22e基因的重组pEGFP-C2HBVP22e质粒的肝癌细胞HepG2,以放线菌素-D(Act-D)、肿瘤坏死因子(TNF)α诱导该细胞凋亡,采用激光共聚焦显微镜、核蛋白电泳迁移率等技术,观察在HBV P22e抑制TNFα诱导HepG2EGFP-C2HBVP22e细胞的凋亡过程中NF-κB的核转移、活化等情况.用NF-κB抑制剂ALLN抑制其信号通路,检测以Act-D、TNFα诱导的HepG2、HepG2EGFP-C2HBVP22e细胞凋亡率的变化.对实验结果的数据分析用秩和检验和t检验. 结果激光共聚焦显微镜及电泳迁移率实验观察到HepG2EGFP-C2HBVP22e细胞在发生凋亡前后,有明显的NF-κB向核内迁移活化现象.NF-κB抑制剂ALLN可使以Act-D、TNF α诱导HepG2EGFP-C2HBVP22e细胞的凋亡率明显升高(6.19%±1.58%与39.99%±7.620/0,t=7.515,P<0.01).结论 在HBV P22e蛋白抑制肝癌细胞凋亡过程中,NF-κB信号途径起着重要作用.