牙本质涎蛋白转基因小鼠的构建

目的 构建小鼠牙本质涎蛋白（DSP）转基因小鼠。方法 将pcDNA3．1载体中的CMV启动子替换为启动子cβ-actin，构建戴体pcDNA3．1-Cx。然后将PCR获得的DSP基因编码序列克隆到pcDNA3．1-Cx中。构建DSP转基因戴体peDNA3．1-Cx-dsp；将线性化的载体DNA注射到小鼠受精卵的雄原核，受精卵移植到假孕母鼠的输卵管。仔鼠出生后，用PCR及Southernblot检测阳性小鼠。结果 共移植717枚注射过的受精卵至29只受体鼠，移卵后产仔67只，阳性4只。阳性鼠分别传代。开始建系。结论 通过显微注射的方法成功获得了DSP转基因小鼠。     

小鼠牙本质涎蛋白成熟肽编码区cDNA克隆和部分序列分析

目的：克隆小鼠牙本质涎蛋白（ＤＳＰ）成熟肽编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨牙牙胚组织中抽提总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ,然后利用ＰＣＲ方法,从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠ＤＳＰ成熟区的基因片段（约１．４ｋｂｐ）,将所得基因片段插入ｐＢＳ质粒载体,转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ后挑选阳性克隆,提取重组质粒ＤＮＡ,通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：重组质粒ｐＢＳ－ＤＳＰ的酶切图谱和部分序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到小鼠ＤＳＰ成熟肽编码区基因,正在进行该基因的表达和活性鉴定。     

小鼠牙本质涎蛋白成熟肽编码区cDNA 隆和部分序列分析

目的：克隆小鼠牙本质涎蛋白（ＤＳＰ）成熟肽编码区基因。方法：用异硫氰酸胍一步法从昆明新生小鼠磨睡胚组织中抽提总ＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙胚ｃＤＮＡ，然后利用ＰＣＲ方法，从ｃＤＮＡ中扩增出小鼠ＤＳＰ成熟区的基因片段（约１．４ｋｂｐ），将所得基因片段插入ｐＢＳ质粒载体，转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ后挑选阳性克隆，提取重组质粒ＤＮＡ，通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果     

牙本质涎磷蛋白在小鼠牙齿发育中的表达

目的：通过检测牙胚发育不同阶段牙本质涎磷蛋白（ｄｅｎｔｉｎ ｓｉａｌｏｐｈｏｐｒｏｔｉｅｎ,ＤＳＰＰ）的表达情况,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法：采用免疫组织化学染色技术,上鼠牙齿发育各阶段标本中ＤＳＰＰ的表达。结果：ＤＳＰＰ的蛋白表达始于钟状中期,在内釉细胞和正在极化的成牙本质细胞中表达,牙体组织形成开始,则转至成牙本质细胞下至牙冠硬组织完全形成。此阶段在成釉细胞有反复表达。牙齿萌发时,该蛋     

牙本质涎蛋白在牙齿发育、牙本质疾病中的表达和作用

牙本质基质是由胶原和非胶原蛋白组成,其中非胶原蛋白又包含了一组牙本质特异性蛋白,它们在牙胚发育,矿化过程中起重要作用.该文就牙本质特异性蛋白中的牙本质涎蛋白在牙齿发育和牙本质疾病中的表达和作用作一综述.     

正畸牙根吸收与龈沟液中牙本质涎磷蛋白和牙本质涎蛋白相关性的实验研究

目的 探讨大鼠龈沟液中牙本质涎磷蛋白(DSPP)和牙本质涎蛋白(DSP)的表达与实验性牙移动所致牙根吸收的关系.方法 36只健康Wistardd大鼠随机分成3组:对照组、轻力组、重力组.以上颌切牙为支抗,轻力组和重力组分别以0.392、0.98 N力拉右侧上颌第一磨牙向近中移动.加力7 d后,提取龈沟液,制备实验牙及其...     

小鼠牙本质涎磷蛋白(DSPP)特异性启动子的克隆和序列分析

目的 :获得小鼠牙本质涎磷蛋白 (DSPP)编码序列上游约 1.6kb的特异性启动子。方法 :按Mac Dougall报道设计一对引物 ,提取小鼠胚胎干细胞基因组DNA作为模板 ,PCR获得大小约为 1.6kb的DNA片段 ,将该片段克隆并进行序列分析。结果 :所得到的片段是DSPP的特异性启动子 ,其序列与文献报道有一定差异 ,但转录因子的结合位点均未发生突变。结论 :成功获得小鼠DSPP的特异性启动子 ,为进一步的研究打下基础。     

短期高浓度氟对小鼠磨牙胚中牙本质涎蛋白表达的影响

目的:研究短期高浓度氟对小鼠磨牙成牙本质细胞形态及牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein, DSP)表达的影响,探讨氟对牙本质发育的作用机制.方法:选择4 d龄的ICR小鼠共32 只,随机分为2 组,每组16 只,各组中实验动物和对照动物各半.实验动物单次腹腔注射剂量分别为10 mg/kg体重和20 mg/kg体重的NaF,对照动物单次腹腔注射等剂量的NaCl,注射量均为10 μl/g, 24 h后处死动物.采用HE染色、免疫组化染色观察高浓度氟对小鼠磨牙不同分化阶段成牙本质细胞形态及DSP的表达,采用SPSS 13.0软件对数据进行分析.结果:实验组分泌期成牙本质细胞形态紊乱,正常的高柱状形态丧失,DSP的表达明显强于对照动物,差异有统计学意义(P<0.01),而成熟期成牙本质细胞未见明显变化.结论:短期高浓度氟能增强分泌期成牙本质细胞中DSP的表达,抑制成牙本质细胞的增殖分化及随后的基质合成与分泌,从而影响牙本质的发育.     

牙本质涎磷蛋白的研究进展

牙本质涎磷蛋白及其蛋白剪切产物—牙本质涎蛋白和牙本质磷蛋白是在牙本质发育、矿化中起重要作用的非胶原蛋白.关于牙本质涎磷蛋白的结构、功能、表达以及翻译后修饰等均有大量的研究,使之对牙本质涎磷蛋白的认识不断深入.本文就近年来关于牙本质涎磷蛋白的研究现状作一综述.     

牙本质涎磷蛋白在小鼠体外培养软骨细胞中的表达

目的:探讨牙本质涎磷蛋白(DentinSialophosphoprotein ,DSPP)在体外培养的软骨细胞中的表达。方法:采用免疫组化方法,检测培养的第3代小鼠鼻软骨细胞中DSPP的表达。结果:培养细胞胞浆呈阳性着色。结论:DSPP可在体外培养的软骨细胞中表达。     

dspp-LacZ转基因小鼠G0代的制备和鉴定

目的：构建小鼠牙本质涎磷蛋白(DSPP)特异性启动子启动LacZ表达的转基因小鼠G0代。方法：用PCR方法获得DSPP编码序列上游约1．6kb的启动子序列,测序确认后,通过亚克隆方法将其与LacZ编码序列连接到同一个质粒中,构建转基因载体pTN-DPM-LacZ;将线性化的载体DNA注射到小鼠受精卵的雄原核,移植到假孕母鼠的输卵管;仔鼠出生后4周,用PCR检测阳性小鼠。结果：注射的受精卵共503个,移卵后产仔89只,阳性12只,阳性鼠分别传代开始建系。结论：通过显微注射方法获得12只G0代dspp-LacZ转基因小鼠,正在建立中的转基因小鼠系将来可以用作研究DSPP确切表达谱的工具。     

DSP基因编码区序列的多态性研究

目的:分析中国人群中牙本质涎蛋白基因编码区序列的多态性。方法:采用聚合酶链式反应-单链构象多态(PCR-SSCP)分析方法,并结合DNA直接测序方法对牙本质涎蛋白基因编码区的核苷酸序列进行分析。结果:在牙本质涎蛋白基因编码区序列中发现了3个单核苷酸多态(cSNP),其中2个为同义cSNP,编码的氨基酸未变,1个为非同义cSNP,编码的氨基酸分别为天冬氨酸和天冬酰氨。结论:中国人群中牙本质涎蛋白基因编码区序列中存在单核苷酸多态。     

牙本质涎蛋白在氟中毒大鼠牙髓组织和牙本质中的表达和意义

目的:研究氟中毒对大鼠牙髓及牙本质表达DSP的影响。方法:选择20只Wistar大鼠,随机分为对照组(饮用自来水,水氟浓度0.16 mg/L)和给氟组(水氟浓度100 mg/L)。3个月后处死大鼠,利用HE染色、免疫组化染色观察氟中毒对牙本质结构和DSP表达的影响。结果:100 mg/L组牙本质生长线明显加重,出现大量球间牙本质。DSP蛋白在牙本质、成牙本质细胞、牙髓细胞中均有不同程度的表达,在牙本质层内侧的成牙本质细胞和牙髓细胞的染色强度2组间无明显区别(P>0.05)。在给氟组,强烈的DSP染色持续出现在前期牙本质层和矿化的牙本质层(P<0.05),表现为加重的生长线。结论:DSP在氟中毒组牙本质中表达明显增强,推测氟可能影响DSP蛋白的降解,影响牙本质的正常矿化。     

The dentin sialoprotein (DSP) expression in rat tooth germs following fluoride treatment: an immunohistochemical study

Fluoride is known to alter expression of dentin matrix proteins and affect their posttranslational modifications. OBJECTIVE: The objective of our study was to examine dentin sialoprotein (DSP) expression in the early and late bell stages of development of the first molar tooth germs in rats treated with fluoride. DESIGN AND METHODS: Pregnant dumps were divided into three groups. They were fed a standard diet and from the fifth day of pregnancy, each group received either tap water (with trace amounts of fluoride), tap water with a low concentration of fluoride, or tap water with a high concentration of fluoride. Changes in DSP expression and distribution were visualized by immunohistochemistry. RESULTS: Immunoreactivity for DSP was detected in the cervical regions of the early bell stage in tooth germs of the 1-day-old animals. The earliest reaction was visible in the control group and the group supplemented with the low fluoride concentration (F(L)) but not in the group supplemented with the high fluoride concentration (F(H)). In early bell stages across all experimental groups, the immunoreactivity to DSP was observed in the cusp tip regions and was localized to preameloblasts, young and mature odontoblasts, dental pulp cells, predentin, and dentin. Generally, more intense positive staining for DSP was detected in animals supplemented with the high fluoride concentration. In the late bell stage found in the 4-day-old control group and the group supplemented with the low fluoride concentration, immunoreactivity for DSP was less intense compared with younger animals. However, immunoreactivity was greater in the group treated with the high dose of fluoride. In this group, the positive immunostaining for DSP, especially in young ameloblasts, was prolonged and relatively strong. CONCLUSIONS: Fluoride supplementation causes changes in the developmental pattern of DSP expression and its distribution in rat tooth germs.     

人牙本质涎蛋白在人牙胚发育过程中的表达和意义

目的：探讨人牙本质涎蛋白(human dentin sialoprotein，hDSP)在人牙胚发育过程中的表达和意义。方法：用免疫组化方法检测人牙本质涎蛋白在人牙胚不同发育阶段中的表达。结果：hDSP在蕾状期、帽状期釉上皮以及钟状早期内釉上皮有弱阳性表达，钟状中期正在分泌基质的成牙本质细胞、牙本质小管有强阳性表达，钟状晚期，牙本质小管仍有强阳性表达，而成牙本质细胞转为弱阳性表达。前成釉细胞、成釉细胞有一过性表达。前期牙本质始终无阳性表达。牙胚周围骨组织、软骨组织和口腔软组织无阳性表达。结论：提示hDSP可能参与了牙本质的形成。另外前期牙本质阴性表达，表明hDSP蛋白由成牙本质细胞分泌后，可能通过成牙本质细胞突起穿过前期牙本质分泌至矿化前沿，参与牙本质的形成。     

维甲酸体外诱导鼠磨牙牙胚骨涎蛋白基因表达的研究

目的 :观察维甲酸 (RA)对小鼠磨牙牙胚BSPmRNA表达的影响 ,探讨RA在牙胚早期发育中的作用。方法 :将 16d胎龄的鼠胎下颌第一磨牙牙胚置于含外源性RA(5× 10 -8mol/L)的RPMI16 40半固态培养基表面 ,分别培养 4、5、6d。培养结束后提取总RNA ,经RT -PCR扩增 30循环后 ,采用Southern印迹法检测BSPmRNA在牙胚组织中的表达。结果 :体外培养 4d后 ,实验组 (含外源性RA )和对照组 (不含外源性RA)的牙胚组织中BSPmRNA的表达均为阴性。培养 5d后 ,实验组的牙胚开始表达BSPmRNA ,对照组的牙胚仍为阴性。培养 6d后 ,实验组牙胚BSPmRNA的表达明显增强 ,对照组的牙胚也开始表达BSPmRNA ,但表达强度明显低于实验组的牙胚。结论 :RA具有诱导牙胚组织细胞分化的功能     

Dentin sialoprotein isoforms: detection and characterization of a high molecular weight dentin sialoprotein

Dentin sialoprotein (DSP) is a glycoprotein accounting for 5–8% of the dentin non-collagenous proteins. The cDNA sequence predicts that rat DSP has 13 potential casein kinase phosphorylation sites and six potential N -linked glycosylation sites. However, its total phosphorylation level, as well as the nature and locations of the carbohydrate moieties, are unknown. Our findings in the present study show that rat DSP has 6.2 phosphates per molecule and that the majority of carbohydrates are attached to the protein through N -linked glycosylations. During our separation of dentin non-collagenous proteins with ion-exchange chromatography, we observed high molecular weight components eluting late in the salt gradient that were recognized by anti-DSP antibodies. We have purified these high molecular weight components using a monoclonal anti-DSP antibody affinity column. Data from amino acid analysis, phosphate level measurements and Edman degradation of tryptic peptides unequivocally proved that the very acidic, high molecular weight components are isoforms of DSP (designated HMW-DSP). Deglycosylation analysis indicates that the slower migration rate of HMW-DSP on SDS-PAGE results from its higher level of carbohydrate modifications.