SARS患者特异性SARS-CoV抗体变化的观察

目的　研究SARS患者特异性SARS CoV抗体IgG、IgM动态变化规律 ,探讨机体感染SARS CoV后免疫应答的可能模式及流行病学意义 ,为科学的防治SARS提供理论依据。方法　ELISA测定北京地区最早感染SARS CoV的 3条传播链的SARS患者 4 7例 ,12 4份血清中SARS CoV特异性抗体IgG、IgM。其中 ,山西链 9人 ,13份血清 ;香港链 31人 ,84份血清 ;北京链 7人 ,2 7份血清。结果　 3条传播链SARS患者IgM阳性率 73% ,IgG阳性率 86 %。IgM最早于发病第 6天出现 ,阳性率高峰在病程 2～ 3周 ;持续时间短 ,1月后 6 0 %患者IgM逐渐阴转。IgG最早也可在发病第 6天出现 ,阳性率高峰在病程 3～ 4周 ,3月后IgG抗体阳性率减少。机体感染SARS CoV后 ,抗体出现有 3种模式。结论　机体感染SARS CoV后 ,近 90 %患者可出现特异性IgG ,病程 3～ 4周阳性率最高 ;特异性IgM抗体在病程2～ 3周阳性率最高 ,但多数只持续 2 0～ 30d。特异性IgG抗体表现 3种免疫应答模式。     

甘肃省SARS抗体血清流行病学调查

目的 了解甘肃省严重急性呼吸综合征(SARS)患者、密切接触者和正常人群血清SARS冠状病毒特异性IgG抗体水平。方法 利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测SARS病毒IgG抗体水平。检测对象包括甘肃省9例SARS患者的急性期和(或)恢复期系列血清，l109例直接护理SARS患者的医生、护士、实验室检测人员、疾控人员和曾与患者有接触的人员以及978例正常人血清。结果 9例临床诊断病例SARS冠状病毒特异性IgG抗体中6例为阳性，疾病恢复后12个月血清抗体仍为阳性；密切接触者1例特异性IgG抗体阳性；正常人3例特异性IgG抗体阳性。结论 病例抗体阳性符合临床诊断，密切接触者和正常人的抗体阳性数较低，提示可能不存在隐性感染。     

人类SARS病毒与感染果子狸的病毒不完全相同

中国南部地区常食用一种稀有动物———果子狸 ,作为药膳来抵抗风寒、感冒等冬季传染病。这种果子狸带有一种冠状病毒 ,中国大陆和香港科学家曾认为它可能是SARS的病源。但从数据表明人类SARS病毒基因序列与果子狸近似但存在基因缺失。从果子狸中发现的病毒于SARS病人身上发现的冠状病毒并不完全一致 ,人类的病毒N蛋白基因比它的少 2 9个核苷酸。此外 ,WHO网络机构发布了一个“可靠的信息”。 2 0 0 2年 11月广东省食品处理人员就出现了SARS ,用人SARS病毒抗体对他们进行检测 ,其中 5个有血清交叉反应 (他们已经带有此病毒的抗体 …     

激素应用与SARS-CoV在患者体内存留的相关性探讨

探讨糖皮质激素的应用及使用时间与剂量是否与SARS患者体内SARS CoV存留有关。对象和方法 :标本来源 :2 0 0 3年 3～ 5月发病的 177例恢复期 (发病 2 8d以上 )SARS患者 ,平均病程为 (37 3± 0 7)d ,SARS CoV抗体检测阳性。检测 :收集患者咽漱液、尿、粪便标本 ,使用达安基因股     

针对SARS⁃CoV2不同突变株广谱特异性中和抗体的筛选与鉴定

目的 筛选对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS?CoV2)不同突变株具有广谱特异性的、高亲和性中和抗体,并进行功能验证.方法 用脂质体包被的SARS?CoV2刺突蛋白(S蛋白)mRNA疫苗对Balb/c小鼠进行2次免疫,测定小鼠血清中特异性抗体含量,选取抗体含量较高的小鼠进行冲击免疫;取冲击免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤...     

不同人群血清SARS冠状病毒抗体检测及其意义

目的　通过对不同人群SARS冠状病毒IgG抗体 (SARSCoVIgG)检测 ,明确该抗体对SARS的诊断意义。方法　采用酶联免疫法 (EIA)、间接荧光法 (IFA)和免疫印迹法 (WB)检测抗 SARSCoVIgG。结果　对 117例临床确诊为SARS患者的 336份系列血清检测表明 ,SARS病人血清抗 SARSCoVIgG最早于发病后第 9天阳转 ,其阳性率随病程延长而上升 ,于发病后 5～ 9、10～ 14、15～ 19、2 0～2 4和 2 5d以上抗 SARSCoVIgG阳性率分别为 12 .5 % (1/8)、73.9% (17/2 3)、91.5 % (43/47)、96 .6 %(5 7/5 9)和 10 0 % (198/198)。应用EIA初筛 12 2 3名非SARS人群 (包括 36 7名在SARS病房工作 1个月以上的医务人员 ,4 3名在生活中与临床确诊的SARS病人有密切接触史者 ,以及 813例未暴露于SARSCoV人群 ) ,其中 2 8名为抗 SARSCoVIgG弱阳性 (A <0 .5 ) ,但用 2种IFA和WB检测均为阴性 ,说明EIA初筛为假阳性。结论　应用EIA检测抗SARSCoVIgG有助于中晚期SARS病人的诊断。对EIA初筛为抗 SARSCoVIgG弱阳性的标本 (A <0 .5 ) ,应用其他方法如IFA和WB检测 ,以排除假阳性。     

动态监测SARS患者SARS病毒IgG抗体及其意义

目的 :动态监测SARS患者SARS病毒IgG抗体并探讨其意义。方法 :采用间接酶联免疫吸附法检测早期、恢复期SARS患者以及出院后第一次和第二次SARS随访者 ,一线未患SARS医护人员 ,健康体检者血清中SARS病毒IgG抗体。结果 :SARS不同时期和不同人群IgG抗体阳性数有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。在疾病早期 ,IgG抗体阳性率 84.6% ,恢复期以后均为 10 0 % ;一线未患SARS医务人员阳性率 3 9.4% ,健康体检者无阳性。结论 :SARS病毒IgG抗体产生较早 ,可用于流行病学调查和血清学诊断     

科学家进一步证实SARS病毒来源于中华菊头蝠

近期中国科学院武汉病毒研究所石正丽研究员带领的国际研究团队分离到一株与 SARS（Severe acute respiratory syndrome coronavirus）病毒高度同源的 SARS 样冠状病毒（SARS-like CoV），进一步证实中华菊头蝠是 SARS 病毒的源头。
　　SARS 冠状病毒是造成2002-2003年 SARS 暴发的病原，造成全球8094人感染和774人死亡的重大疫情。已有的流行病学证据和生物信息学分析显示，野生动物市场上的果子狸是 SARS 冠状病毒的直接来源。虽然在世界各地包括非洲、欧洲和中国的蝙蝠体内均发现与 SARS 病毒相似的 SARS 样冠状病毒，但这些病毒均不能利用人和果子狸的 ACE2（即人SARS 病毒受体）作为受体，不是 SARS 病毒的近亲。该团队分离的 SARS 样冠状病毒可以利用人、果子狸和中华菊头蝠ACE2作为其功能受体，并且能感染人、猪、猴以及蝙蝠的多种细胞。这些实验结果为中华菊头蝠是 SARS 冠状病毒的自然宿主提供了更为直接的证据。这些最新结果发表在2013年国际著名学术期刊 Nature。这也是该团队继2005年在Science 上发表“蝙蝠是 SARS 样冠状病毒自然宿主”之后在此领域的又一项重大突破。该项目得到国家973和基金委重大项目等资助。     

SARS病毒的特征

WHO为应对SARS的爆发 ,WHO协调包括临床、流行病学和实验室研究的国际合作 ,努力控制SARS的传播。 2 0 0 3年 3月的第 3周 ,美国、加拿大、德国和香港的实验室分别独立地从SARS患者中分离出一种新的冠状病毒———SARS CoV。至此 ,试图分离鉴定SARS爆发病原学的努力取得成功。与其它的人类冠状病毒不同 ,可在vero细胞中分离出SARS CoV。现在 ,SARS患者中SARS CoV传染的证据已被来自世界各地提供的证据材料所证明。在呼吸系统采集的标本中 ,可频繁地检测到SARS CoVRNA ;恢复期SARS患者的血清标本中也含有与SARS Co…     

SARS-CoV核衣壳蛋白用于SARS血清学诊断的研究

目的　研究SARS患者血清中抗SARS冠状病毒 (SARS CoV)核衣壳 (N)蛋白特异性抗体的产生规律 ,评价N蛋白在SARS诊断中的作用。方法　采用间接ELISA法测定 2 5 0例临床确诊、1 88例临床疑似、6 2例临床排除SARS患者血清中针对N蛋白IgG抗体 ,并与其SARS CoVIgG总抗体水平进行比较。结果　临床确诊病例针对N蛋白和全病毒特异性抗体IgG的阳性率均随着病程的延长而增高。N IgG在发病第 1周检出阳性率为 3.4 5 %(4 1 1 6 ) ,第 2周为 6 1 .76 %(42 6 8) ,第 3周为81 .82 %(1 8 2 2 ) ,2 2～ 93d达到 1 0 0 %(44 4 4) ;SARS CoVIgG第 1周检出阳性率为 4 .31 %(5 1 1 6 ) ,第 2周为 5 5 .88%(38 6 8) ,第 3周为 77.2 7%(1 7 2 2 ) ,2 2～ 93d达到 1 0 0 %(44 4 4) ;临床疑似病例N IgG检出阳性率为 3.1 9%(6 1 88) ,SARS CoVIgG检出阳性率为 2 .6 6 %(5 1 88) ;临床排除病例N IgG和SARS CoVIgG检出阳性率均为 6 .4 5 %(4 6 2 )。两种方法检测阳性率差异无统计学意义 (χ2 =0 .1 80 ,P <0 .0 0 1 ) ;两者之间符合率为 98.2 0 %(491 5 0 0 ) ,正常人群SARS CoVN IgG阳性率为 1 .88%(1 4 74 5 )。结论　SARS CoVN重组蛋白对于SARS诊断试剂的研究具有重要价值。     

清远市无SARS病例地区人群SARS冠状病毒抗体血清流行病学调查

目的探讨清远市无SAILS病例地区人群SAILS冠状病毒（SARS-CoV）抗体水平。方法采集本地区各县区不同年龄、不同职业的人群血液，用酶联免疫法检测血清中SARS-CoV抗体IgG。结果共检测血清样本1484份，SAILS—CoV抗体IgG总阳性率为0．61％（9／1484），其中0—6岁和13—18岁年龄组SAILS．CoY抗体IgG均为阴性，7—12岁年龄组的阳性率为1．82％（8／439），19岁以上年龄组的阳性率为0．10％（1／1009）。在9份SAILS—CoV抗体IgG阳性的血清样本中，1份为饮食服务业从业人员，阳性率为0．39％（1／257）；其余8份为学生，阳性率为1．70％（8／471）。结论本地区人群SAILS-CoV抗体水平比较低，低龄组0—12岁人群SAILS-CoV抗体IgG阳性率高于高龄组13岁以上组人群的阳性率。提示SAILS-CoV可能存在隐性感染、隐性传播和隐性感染聚集性。     

传播链和非传播链SARS患者中SARS冠状病毒抗体的分布及变化规律

目的　探讨人体对SARS CoV血清抗体反应及分布规律。方法　对 30 1例临床诊断病例的血清标本 (其中传播链上的病例 15 8例 ,非传播链病例 14 3例 ) ;采用北京华大GBI生物技术有限公司生产的间接ELISA试剂 ,进行SARS CoVIgG抗体的检测 ,部分病例还进行了SARS CoVIgM的检测。结果　传播链涉及 15条 ,最多涉及 4代 ,各条链的SARSIgG抗体阳性率为 85 70 %～ 10 0 .0 0 % ,总阳性率为 94 30 % (14 9 15 8)。SARS病例数随代数增加而减少。但各代间IgG阳性率的差异无显著意义 ;χ2 =5 11,P >0 0 5。非传播链病例的血清抗体阳性率为 12 5 9% (18 14 3)。与传播链的阳性率比较 ,两者间的差异有显著意义 ;χ2 =199 6 4 ,P <0 0 0 1。在发病后的 0～ 7d、8～ 14d、15～ 2 1d、2 2～ 30d内 ,SARS CoVIgG的累计阳性率分别为 16 6 7%、4 0 0 0 %、70 0 0 %、93 10 % ;然后进入平台期 ,并可以维持 6个月以上。在发病 7d内 ,SARS CoVIgM的累计阳性率为 16 6 7% ,8～ 14d时 ,已有 5 5 17%的标本IgM抗体阳转 ,在 2 1～ 30d时 ,抗体阳性率达高峰 (86 96 % ) ,以后迅速下降。结论　SARS感染后 ,94 %的感染者可产生IgG抗体。检测该抗体可以作为临床核实诊断的依据。SARS CoVIgG抗体在 7d时可能检出 ,一般在 4周达     

SARS病毒核衣壳蛋白抗体消长规律

研究SARS病毒抗体的消长规律对于评价患者的愈后及SARS疫苗的使用效果具有重要意义。本项目选用了军事医学科学院生物工程研究所研制的双抗原夹心SARSN蛋白抗体ELISA诊断试剂。对2 79例临床确诊的、发病不同时间SARS患者的血清进行检测,并同时跟踪检测了4 1例SARS患者在不同发病时间(发病3d至16 0d)的血清标本,对抗体产生的时间规律进行了研究。材料和方法标本来源:所用的SARS病例标本为本院检验科从2 0 0 3年2月7日开始,从本院收治病人及广州市中山二院、177医院、广州市第八人民医院、北京小汤山医院收集的SARS病人血清标本…     

阜阳市职业暴露人群高致病性禽流感H5N1血清流行病学研究

目的对阜阳市职业暴露人群开展高致病性禽流感H5N1抗体调查,明确是否存在隐性感染,了解该病的流行病学规律。方法于2009年5月、12月,分别采集颖上县城乡活禽市场、家禽规模养殖场、家禽散养户集中的地区、家禽屠宰加工厂等地职业暴露人群血清100份和93份,利用单放射免疫扩散溶血技术检测H5N1抗体。结果5月份采集的100份标本中,H5N1抗体阳性3份,阳性率为3．00％;12月份采集的93份标本中,H5N1抗体阳性7份,阳性率为7．53％;两次调查总阳性率为5．18％,两个月份比较差异无统计学意义（χ^2=1．16,P〉0．1）。结论在禽流感职业暴露人群中,存在H5N1隐性感染,感染与季节分布无关。     

抗SARS-CoV抗原的人源Fab段噬菌体抗体库的构建

目的 :利用抗SARS冠状病毒IgG抗体阳性的SARS康复患者外周血淋巴细胞 ,构建人源Fab段抗体文库。方法 :制备外周血淋巴细胞总RNA ,逆转录成cDNA。以其为模板 ,利用针对家族特异性Ig基因的引物扩增重链Fd段和轻链基因 ,并重组到噬菌粒载体pComb3中 ,将重组噬菌粒载体电转化大肠杆菌XL 1Blue,酶切鉴定抗体库的重组率 ,并测定噬菌体抗体库的库容量。结果 :构建了源于SARS康复患者血清中抗Fab段的抗体文库 ,轻链、重链Fd段基因的重组率分别为91%和 75 % ,库容量为 7.2 3× 10 7。结论 :成功地构建了抗SARS CoV抗原的人源Fab段噬菌体抗体库     

SARS定点医院工作人员红细胞CR1数量及EIIAF的变化

对我院与SARS救治相关工作人员的红细胞天然免疫黏附功能和红细胞补体Ⅰ型受体的数量进行研究,同时设立院外教师及战士等非医务人员作为对照。结果发现,SARS病区及门诊、检验医务人员的红细胞天然免疫黏附功能(EIIAF)显著低于非SARS病区医护人员及机关工作人员,密切接触未被感染的医务人员的红细胞CR1数量全部显著高于正常人群平均水平,现将具体资料报告如下:研究对象和方法研究对象:选择解放军30 2医院在2 0 0 3年3月5日开始收治第一例SARS病人,至2 0 0 3年6月15日最后一例SARS病人出院期间在院的所有医务人员4 42人,男性197人,…     

SARS冠状病毒核壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒(CoV)核壳(N)蛋白单克隆抗体,为寻求SARS早期诊断的方法及深入研究SARS疾病提供有力的工具。方法以重组SARS—CoVN蛋白免疫小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法制备单克隆抗体。通过间接酶联免疫分析、间接免疫荧光、免疫双向扩散等方法鉴定抗体的特异性、亲和力、类型及亚类、配对效果等。结果共获得15个阳性克隆,其中10个与天然SARS-CoV呈阳性反应。10株单抗的相对亲和常数在108～109mol／L^-1之间;10株中有1株为IgG2b。、1株为IgG3,其余均为IgG1;10株单抗中有8株与12种肺炎相关的病原体无交叉反应,1株与流感病毒A、B,副流感病毒有交叉反应,1株与流感病毒A、B有交叉反应;10株单抗中的5株可形成5种配对,其中两种配对用于检测重组SARS病毒N蛋白,灵敏度可达1μg/L。结论获得了特异性针对SARS冠状病毒N蛋白的单克隆抗体,并初步建立了检测SARS-CoVN蛋白的酶联双抗体夹心法,为SARS的早期诊断、蛋白质组学的研究奠定了基础。     

一株变异SARS冠状病毒N蛋白的原核表达及活性测定

目的 :克隆编码严重急性呼吸综合征冠状病毒 (SARS CoV)N蛋白的DNA ,构建原核表达质粒pGEX 2T/N ,并诱导表达。方法 :采用RT PCR方法从病毒培养液中获得N基因片段 ,并克隆入T EASY载体中。经PCR、双酶切鉴定后 ,测序。将N蛋白基因序列定向插入原核表达载体pGEX 2T中 ,表达融合蛋白。用表达产物与抗SARS CoV抗体阳性血清做Westernblot。结果 :N蛋白DNA测序的结果与GenBank比对缺失 2 0个bp。GST N融合蛋白以可溶形式表达。Westernblot检测表明 ,其与抗SARS CoV抗体阳性血清的反应呈阳性。结论 :成功地构建原核表达质粒pGEX 2T/N ,并表达GST N融合蛋白 ,为下一步的研究奠定了基础。     

严重急性呼吸综合征自身免疫指标的初步研究

目的　探讨严重急性呼吸综合征(SARS)患者是否存在着自身免疫现象,寻找患者体内异常出现的抗自身组织器官的抗体。方法　随机选取2 7例SARS患者及18例健康献血员对照血清同时应用免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗线粒体抗体(AMA)、抗胃壁细胞抗体(PCA)、抗心肌抗体(HRA) ,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗肝肾微粒体抗体(LKM)及抗线粒体M2亚型抗体,同时利用猴肺组织基质片应用免疫荧光法定位血清中的SARS相关抗体的靶细胞。结果　2 7例SARS患者中有3例ANA阳性、1例SMA阳性、1例AMA阳性、1例LKM阳性、其余均为阴性;18例献血员中有1例ANA阳性、1例AMA阳性,其余均为阴性。统计分析表明SARS患者与献血员间各项自身抗体阳性率差异均不具有统计学意义。在2 7例SARS患者血清中有2 6例在肺组织细小支气管柱状上皮细胞的腔面尖端呈现强阳性荧光信号,献血员中有5例,统计分析表明两者阳性率差异有统计学意义。结论　SARS患者未出现抗肺外组织、器官的自身抗体。患者血清中出现了抗肺组织的自身抗体,定位于细小支气管柱状上皮细胞。     

抗SARS抗体独特型单链抗体的筛选及鉴定

目的从人源噬菌体抗体库中筛选抗SARS独特型抗体为SARS的诊断及疫苗的研究奠定基础。方法以混合SARS病人恢复期血清免疫球蛋白（Ig）作为筛选分子,从噬菌体抗体库中筛选出能与病人血清IgG（IgM）结合的抗体,并通过与混合正常人血清Ig作负性筛选,从而获得抗SARS病毒的独特型抗体（AId）。通过4轮“吸附-洗涤-扩增”,从最后一轮所得单克隆菌株中分别通过ELISA筛选出能和SARS病人恢复期血清Ig结合的菌株,提取质粒DNA,并对PCR扩增产物进行DNA序列测定,最后用所筛选的克隆通过与不同人群血清反应,证实其特异性。结果随机挑选经第4轮筛选后的200个单克隆菌落,其中有10个与SARS病人恢复期血清Ig结合的OD值明显高于其与正常人Ig结合的OD值;以上10个克隆经PCR扩增,其中有6个克隆于l000bp处有电泳条带;其DNA序列经与BLAST数据库和IMGT／QUEST软件比对有5个均与人的重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）高度同源,且与其同源性最高的人Ig的VH属VHI亚群,VL属k链,属VKⅡ亚群;最后确认有3个克隆其噬菌体抗体和SARS病人血清Ig结合的OD值均明显高于与正常人血清Ig结合的OD值。结论利用抗体库技术可不经免疫制备特异性抗SARS抗体独特型抗体,为SARS诊断及疫苗的研制奠定基础。